8例Rh Del型研究

目的了解常规血清学试验为　ＲｈＤ阴性者中　Ｒｈ　Ｄｅｌ（Ｄ极弱型）的情况，并探讨其临床价值。方法采用　ＰＣＲ－ＳＳＰ　　　　　　技术，检测３３例常规血清学试验为ＲｈＤ阴性，１８例为ＲｈＤ阳性样本的Ｄ基因外显子。并对３３例ＲｈＤ阴性样本进行　　　　　　吸收放散试验。结果３３例ＲｈＤ阴性样本Ｄ基因外显子有８例无缺失、５例部分缺失、２０例完全缺失，其中８例无缺失　　　　　　样本可以吸收并放散出Ｄ抗体，为ＲｈＤｅｌ型。１８例ＲｈＤ阳性样本Ｄ基因无缺失。结论ＲｈＤｅｌ型常规血清学试验易被　　　　　　误认为ＲｈＤ阴性，其Ｄ抗原虽然表达极弱，但外显子无缺失。提示凡常规血清学方法检测为ＲｈＤ阴性的供血者，必须　　　　　　进一步作吸收放散试验作Ｄｅｌ排除，以确保输血安全。     

Rh弱D、Del的检测及意义

目的：探讨初筛为Rh（D）阴性样本中弱D，Del的检测及临床意义。方法：采用常规血清学方法初筛Rh（D）血型，用微柱凝胶抗人球蛋白试验检测弱D，用吸收放散试验检测Del，用PCR—SSP法检测样本RhD基因8个外显子结构。结果：常规血清学初筛Rh（D）阴性60例中经微柱凝胶抗人球蛋白试验确认勾弱D4例，占6．67％：56例Rh（D）阴性标本经吸收放散试验后确认13例为Del，占21．67%：对其中2例弱D和5例Del标本的D基因8个外显子检测都完整存在，排除了弱D、Det的10例Rh（D）阴性标本其基因检测有完全缺失和部分缺失两种可能。结论：为了临床输血安全，常规血清学检测Rh（D）阴性者，应当再用抗人球蛋白试验或吸收放散试验检测是否为弱D或Del。     

中国人群真实RhD阴性个体和RhDel型RHD基因研究

为观察中国人群真实RhD阴性个体和RhD^el型RHD基因存在情况，采用常规盐水法和抗人球蛋白试验筛选RhD阴性捐血者，通过吸收放散试验性确定其中RhD^el和真实RhD阴性，并采用PCR技术检测RHD基因第4内含子，对吸收放散试验结果与基因检测结果不符的样本进一步采用序列特异性引物PCR(PCR-SSP)技术测定RHD基因第3，4，5，6，7，9和10个外显子，观察基因变异。筛选获得104名RhD阴性捐血者，吸收放散试验鉴定25名（24.0％）为RhD^el型，79名（76.0％）为真实RhD阴性；25例RhD^el全部检测到D基因exon4-intro4-exon5区域，79名真实RhD阴性个体中有5名（6.3％）个体（2名Ccdee，2名ccdEe）检测到D基因第4内含子；PCR-SSP结果显示5名个体中，4名存在全部被检测的D基因区域，1名个体（ccdEe）第5外显子检测阴性。结果表明抗人球蛋白试验确认的RhD阴性中国人存在高比率的RhD^el型，且均可检测出RHD基因第4内含子；若排除RhD^el，携带D基因的RhD阴性中国人的比率明显降低，且这些个体并非如经往报道的均为C抗原阳性。     

RhD阴性患者的弱D、DEL的分布及RhCE表型分析

目的:研究RhD阴性患者的弱D、DEL的分布比例,并对RhCE的表型进行分析。方法:选取常规血清学方法初筛RhD阴性的标本,用抗人球蛋白试验检测弱D,阴性情况下应用吸收放散试验检测DEL。结果:在129例RhD阴性患者标本中经抗人球蛋白试验确认为弱D型者9例(6.9%),其表型分别为ccDuee型5例,CcDuee型3例,ccDuEe型1例。经吸收放散试验确认为Del者24例(18.6%),其表型分别为CcDELee型12例,CcDELEe型7例,CCDELee型2例,CCDELEe型3例。结论:在采集的初筛为RhD阴性的标本中,DEL阳性标本所占的比例高,应引起重视,其RhCE表型比例符合相关文献报道。故于常规血清学检测RhD阴性者,应当再用抗人球蛋白试验及吸收放散试验检测是否为弱D及DEL。     

应用实时荧光定量PCR检测母血浆胎儿DNA进行RhD基因型产前诊断

目的建立实时荧光定量PCR(real time PCR)技术检测RhD阴性孕妇血浆中游离胎儿DNA进行无创性产前诊断胎儿RhD基因型的方法。方法通过微量DNA抽提技术提取母血浆中胎儿游离DNA,利用Real time PCR检测22例妊娠15～40周的单胎RhD阴性孕妇血浆中胎儿游离DNA,进行男性性别决定基因(SRY)和RhD基因外显子7、10和内含子4的特异性扩增,基因型结果与血清学RhD定型结果对比,评价该技术方法的准确性。结果孕妇血浆中存在游离胎儿DNA。19例RhD真阴性孕妇血浆中,14例均检测到胎儿游离DNA的RhD基因外显子7、10和内含子4的特异性扩增,判断为RhD阳性,基因定型结果与血清学表型相符。3例未检测到胎儿游离DNA的RhD基因特异性扩增,结果与胎儿血清学表型相符。因此检测胎儿游离DNA的RhD基因型准确率达到89.5%。另外2例只检测到RhD基因外显子10扩增,通过新生儿脐血血清学吸收放散试验确定为RhDel型。3例RhDel型孕妇血浆中检测到RhD基因扩增,不适于胎儿RhD基因型的分型。结论实时荧光定量PCR方法检测RhD阴性孕妇血浆中游离胎儿DNA进行无创性诊断胎儿RhD基因型...     

长沙地区汉族RhD阴性个体RHD基因多态性研究

目的:研究长沙地区人群Rh阴性个体RHD基因多态性的分布及血清学表型与RH基因型之间的关系。方法:应用PCR-SSP技术检测长沙地区108名Rh阴性献血者的RHD基因和RHCE基因。结果:108例Rh阴性个体中,ccee表型66例、Ccee32例、CCee 7例、CcEe2例、ccEe1例;108例Rh阴性个体中68例RHD基因外显子完全缺失、24例完整、16例部分缺失。吸收放散试验检测出21例RhD放散型。结论:长沙汉族Rh阴性人群的RHD基因结构呈现多态性,常规血清学鉴定的RhD阴性者中存在较高比例的RhD放散型(Del型),且有可能带有完整的RHD基因。携带D基因的吸收放散试验阴性个体中具有C抗原者比例较高,但亦有cc表型存在,有别于文献中认为全属RhC抗原表达者的报告。     

人RHD基因外显子多态性研究

目的 研究人RHD基因外显子多态性，探讨中国人RhD阴性个体遗传学机制。方法 用PCR-SSP法检测40例RhD( )、120例RhD(-)和2例弱D型样本的10个外显子。结果 40例RhD阳性和2例弱D型样本均检出R}tD基因的10个外显子，120例RhD阴性样本中28例样本的10个外显子全存在(占23．33％)，19例样本10个外显子部分存在(占15．83％)，大部分为中间缺失型，73例样本10个外显子全缺失(占60．83／％)。从120例RhD阴性样本中检出的19例Del型样本均能检出RHD基因的10个外显子。结论 RhD表型阴性个体的RHD基因外显子结构具有多态性．主要表现为RHD基因全缺失、RHD基因部分缺失、RHD基因不缺失3种。     

RhDel表型与RHEC表型的相关性研究

目的分析广东汉族人群RhD阴性个体中,RhDel表型个体RHEC表型的分布情况和两者的相关性,以及PCR—SSP技术在RhDel基因检测中的应用价值。方法对400份广东汉族人群中血型血清学检测为RhD阴性的标本。采用血型血清学方法对RhDel表型和RHEC表型进行检测,并采用PCR—SSP方法进行RHD1227G〉A基因检测。结果在400份RhD阴性标本中,89例（22．25％）检测到RhDel表型,主要分布在CCee、CeEe和Ccee表型的个体,在CCEe、ccEE、ccEe和ccee表型中未发现。在RhDel表型的标本中,同时检测到RHD1227G〉A基因。结论RhDel表型与RHEC表型具有一定的相关性;应用PCR—SSP技术能够对RhDel基因进行检测;与传统的间接抗人球蛋白实验和吸收放散实验相比,PCR．SSP技术能够快速、便捷筛查RhDel献血者和受血者,避免抗．D抗体引发的同种免疫反应和RhD阴性血液的浪费。     

人RHD基因外显子多态性研究

目的 研究人RHD基因外显子多态性,探讨中国人RhD阴性个体遗传学机制。方法 用PCR-SSP法检测40例RhD(+)、120例RhD(-) 和2例弱D型样本的10个外显子。结果 40例RhD阳性和2例弱D型样本均检出RHD 基因的10个外显子,120例RhD阴性样本中28例样本的10个外显子全存在(占23.33%),19例样本10个外显子部分存在(占15.83%),大部分为中间缺失型,73例样本10个外显子全缺失(占60.83/%)。从120例RhD阴性样本中检出的19例Del型样本均能检出RHD 基因的10个外显子。结论 RhD表型阴性个体的RHD基因外显子结构具有多态性,主要表现为RHD基因全缺失、RHD基因部分缺失、RHD基因不缺失3种。     

等候肾移植患者中RHD阴性血液样品的基因分型及意义

目的 探讨等候肾移植患者中RHD阴性血型基因血清学与分子生物学的差异.方法 收集2006年1月~2016年1月广州市各器官移植中心等候肾移植的患者中经血清学检测为RhD阴性的血样103例,采用分子生物学方法(定量PCR-测序技术)进行RHD基因分型.血清学与分子生物学两种方法对RhD假阴性检出率行χ2检验.结果 103例血样中,RhD真阴性(即10个外显子全部缺失)56例(54.5%),RhD假阴性(即RhD阳性,但是10个外显子中有部分缺失、重复、错义突变)47例(45.6%).在47例RhD假阴性中,弱D(weak D)1例(2.1%)、部分D(partial D)13例(27.7%)、放散D(D-elution)33例(70.2%).血清学与分子生物学对RhD阴性识别的差异呈统计学显著性(P<0.05).结论 103例血清学检测出的RhD阴性中有45.6%通过分子生物学方法检测实际为RhD阳性变异体,说明血清学技术对识别RhD阴性呈较高错误率.利用分子生物学技术进行受者和供者RHD血型基因分型,对于精确肾移植配型具有重要的临床意义.     

PCR-SSP RHD基因定型方法的初步应用

目的采用序列特异性引物PCR技术(PCR-SSP)进行RHD基因定型.方法采用新近报道的PCR-SSP RHD定型方法检测10例RhD阳性个体,包括2例哈萨克族人、2例蒙古族人、2例藏族人和4例维吾尔族人,以及11例RhD阴性个体(汉族10例、维吾尔族人1例),并通过测序和内含子检测分析1例汉族个体的RHD基因型.结果全部样品的PCR-SSP检测结果与血清学表型相符,1例汉族RhD阴性个体鉴定为D放散型,携带RHD1227A等位基因,1例个体的检测结果提示携带融合RHD基因.测序分析显示该融合基因的第1、2和第10外显子序列与正常RHD基因相应外显子相同,而缺失其余外显子,由于RHD基因和RHCE(e)基因的第2外显子序列相同,笔者采用PCR方法检测RHD基因第2内含子,结果为阴性,说明该个体携带的融合基因为RHD-CE(2-9)-D2等位基因.结论 PCR-SSP可用于中国人Rh血型D抗原基因定型.     

献血者Rh(D)阴性DEL表型调查研究

目的通过对Rh（D）阴性献血者的试验检测,了解DEL表型。方法用盐水法、木瓜酶法3家试剂检测RhD（-）及其RhCcDE4个因子;阴性者用谱细胞进行抗体筛查;红细胞用抗-D作吸收放散试验,观察试验结果;吸收前、后抗-D抗体检测其效价。结果无偿献血者16935例,其中Rh（D）阴性75例,占4．42％;吸收放散试验：75例经吸收放散试验检测,阳性标本47例、占62．67％,阴性28例;吸收前、后抗体效价比较：吸收后抗体效价不变的53例,效价下降的有22例。结论在鉴定Rh（D）阴性中,DEL表型应用血型血清学吸收放散的方法正确鉴定;在临床输血中,含有弱D与DEL的个体,反复多次输血后就有产生抗体的可能。含有弱D与DEL的个体,作为供者应该当成阳性．作为受者应该当成阴性,防止因输血产生免疫性抗体,引起输血反应。     

Rh弱D、Del的检测及临床意义探讨

目的探讨初筛为Rh（D）阴性样本中弱D、Del的检测及临床意义。方法采用常规血清学方法初筛Rh（D）血型,用间接抗人球蛋白试验检测弱D,应用三氯甲烷/三氯乙烯吸收放散法检测Del。结果我院2003年1月至2010年1月常规血清学初筛Rh（D）阴性341例,经确认Rh（D）阴性302例,占88.6%,弱D23例,占6.7%,Del16例,占4.7%。结论为了保证临床输血安全,常规血清学检测Rh（D）阴性者应再用间接抗球蛋白试验及吸收放散试验检测是否为弱D或Del,从而建立真正的Rh（D）阴性献血者库。对含有弱D或Del的个体,作为供血者应该当作阳性,作为受血者应该当作阴性。     

45例有生育史Rh阴性妇女抗-D抗体和RHD基因分析

目的 研究45例多次妊娠Rh阴性妇女产后半年免疫状况和RHD基因背景.方法 常规血清学方法检测Rh(D)抗原, 抗人球蛋白试验(IAT)对Rh(D)抗原确认和IgG抗-D筛查,热吸收放散确认D放散型(DEL); 先后采用商品化试剂盒、序列特异性引物PCR(sequence-specific primer-polymerase chain reaction,SSP-PCR)技术以及DNA序列分析技术,分析样本的RHD基因.结果 45例样本抗人球蛋白试验检测出IgG抗-D阳性5例占总数的11.1%,占真实Rh(D)阴性的16.1%.DEL检出14例(31.1%),抗-D抗体全部为阴性.D基因分析结果显示以DEL(1227A)等位基因为主,同时呈现多态性.结论 真实Rh(D)阴性妇女多次生育存在较高的同种免疫风险易导致新生儿溶血病,必须做好围生期胎-母免疫预防保护,但DEL型妇女或可免除防护.     

探讨RhD阴性表型中个体D基因多态性研究

目的:探讨RhD阴性表型中个体D基因的多态性.方法:随机抽取2014年11月至2015年10月采集的135例无亲缘关系的RhD阴性血液样本作为研究对象.采用抗人球蛋白试验(又称Coombs试验)来检测RhD阴性表型个体,并运用序列特异引物引导的PCR反应(简称PCR-SSP方法)对RhD阴性表型中个体基因结构特点进行分析与统计.结果:135例经Coombs试验检测为阴性表型个体中,检测结果显示为外显子完全缺失有75例,占比55.56%(75/135),外显子部分缺失29例,占比21.48%(29/135),外显子完整31例,占比22.96%(31/135);采用PCR-SSP法进行基因分型,RHD基因完整中RhD(1227A)占比16.30%(22/135),弱D15型占比0.74%(1/135),RHD阳性占比5.19%(7/135);检测RHD基因部分缺失中RHD-CE(2-9)-D占比5.93%(8/135),DVa(Has)占比0.741%(1/135),DVIⅢ占比0.74%(1/135).结论:我国RhD阴性人群的RhD基因基础结构呈现多态性特征,且不同地区的人群有着相同的Rh血型遗背景,今后可以尝试采用血清学与基因分型联合方法检测RhD阴性中的D抗原.     

昆明地区Rh阴性者RhD假基因（RhD ψ）和杂交RhD-CE-D基因的检测和医学应用

目的用PCR基因分型技术分析研究昆明地区常住人口Rh阴性血型的D基因多态性,建立和完善本地区Rh血型的PCRRhD基因检测方法。方法收集46例Rh阴性血型样本,首先采用外显子-SSP进行PCR扩增,筛选出5例D基因部分存在型,再采用内含子-SSP进行PCR扩增,扩增产物用于DNA测序。结果在46例Rh阴性血型样本中,D基因完整缺失者29例（63％）;D基因完整存在者12例（26．1％）,存在全部外显子;D基因部分存在者5例（10．9％）。DNA测序结果显示,2例仅存在D基因的第10外显子的样本均为RhD—CE（3—9）-D杂合基因,1例存在D基因的第4、6外显子为RhD—CE（2—3,5,7—9）-D杂合基因,是新发现的变异等位基因。结论（1）昆明地区常住人群存在高频率的RhD—CE（3—9）-D杂合基因。（2）在昆明人群发现一种新型D变异等位基因即RhD—CE（2—3,5,7—9）-D杂合基因。     

人RHD基因结构研究及意义

目的：研究RHD基因结构,重点检测启动子区,探究RHD基因的表达机制．方法：采用PCR—SSP方法,设计3对序列特异性引物,对60例无血源关系RhD( )汉族人样本、98例无血源关系RhD(-)汉族人样本和2例弱D型汉族人样本RHD基因启动子区约1000bp范围内的4个RHD基因特异性多态性位点进行检测．结果：RhD表型(-)／RHD基因型(一)个体启动子区全缺失,表型RhD阴性基因型为部分缺失或不缺失型个体启动子区都不缺失．结论：RhD表型(-)／RHD基因型(-)个体符合RhD阴性的普遍机制,表型RhD阴性基因型为部分缺失或不缺失型个体存在另一种RhD阴性机制。     

河南省部分RhD(一)献血者RhD基因多态性分析

目的：探讨RhD(-)本省无关供血者中RhD的构成情况。方法：采用PCR－SSP法对80名常规血清学RhD(-)本省供血者RhD基因外显子2、3、4、5、6、7、9、10和内含子4及RhCE内含子4的特异性片段进行扩增。结果：80名RhD(-)供血者中RhD基因完全缺失53例，占66.2%；RhD基因部分缺失7例，占8.7%，其中大部分为3－9外显子缺失；RhD基因完整存在20例，占25％。结论：本省常规血清学RhD(-)无关供血者RhD基因存在高度多态性，提示本省人群RhD（－）特征有多种遗传机制，目前在白种人群中使用的DNA鉴定Rh血型的方法不适合我国人群，临床上应采用适合我国人群的检测方法。     

山东临沂地区RhD阴性无偿献血人群中RHD基因变异体的分析

目的 探讨临沂地区RhD阴性无偿献血人群RHD基因的变异体及其分子背景。方法 2011年采集24875人份全血,获得RhD初筛阴性标本111例,提取DNA后,采用序列特异性引物-多聚酶链反应(SSP PCR),进行以下三步实验：① 检测出缺失RHD基因的RhD阴性、DEL1227G＞A突变以及其他变异体;② 鉴定其他变异体的具体类型;③ 对有突变位点未检出型别的变异体进行测序。结果 临沂地区无偿献血人群中RhD阴性比例为0.45%,在111例RhD初筛阴性标本中,检测到1～10外显子全缺失76例,2～9外显子缺失9例,845G＞A突变3例,3～6外显子缺失3例,1227G＞A 突变18例,RHD(711DELC) 1例,Dva(Hus)1例。结论 临沂地区常规血清学筛查RhD阴性无偿献血人群中RHD基因存在多态性。     

温自身抗体对血型检定干扰的研究

目的 研究自身抗体对自身免疫性溶血性贫血患者血型检定的干扰。方法 56例温抗体型自身免疫性溶血性贫血(AIHA)患者的直接抗球蛋白试验(DAT)阳性,采用常规血清学技术检定血型。结果 20／56例(35．7％)ABO血型检定受干扰,正定型均为“AB”型而血清中含ABO抗体,间接抗球蛋白试验(IAT)阳性者14／26例AB0正、反定型不一致：全部病例Rh血型均定为CcDEe。经氯奎放散试验后红细胞DAT阴性,再作血型检定,ABO正、反定型均一致,发现Rh血型误定者达34／56例(60．7％),其中2例RhD阴性误定为RhD阳性。结论 AIHA患者先经氯奎放散试验至红细胞DAT阴性后再作血型检定,才可避免误定ABO、Rh血型而确保安全输血。