Smad4 条件基因敲除小鼠前庭终器形态学研究

目的研究Smad4条件基因敲除小鼠前庭终器形忿改变，探讨Smad4基因对于前庭发育的作用。方法利用建立的Smad4条件基测敲除小鼠模型．通过光镜观察Smad4（＋／＋）、Smad4（＋／-）与Smad4（-／-）三种基因型小鼠（0．5、1．5月龄）的球囊及囊斑、椭圆囊及囊斑、半规管及壶腹嵴、前庭神经节、内淋巴管与囊的形态结构、毛细胞的形态及排列缺失情况。通过扫描电镜观察球囊斑、椭圆囊斑和壶腹嵴的形态结构、毛细胞及纤毛的排列缺失情况。结果Smad4（-／-）小鼠个体及内耳明显小于Smad4（＋／＋）和Smad4（＋／-），而后面二者区别不大。所有小鼠的球囊及囊斑、椭圆囊及囊斑、半规管、前庭神经节、内淋巴管与囊的大小和结构正常，淋巴囊腔饱满，囊斑处的感觉上皮、耳石、毛细胞及纤毛排列整齐，没有发现明显的病变．三个基因型间没有差异。Smad4（-／-）小鼠壶腹嵴囊性变多且严重、后半规管壶腹嵴出现明显的副嵴、偶尔可见壶腹嵴感觉上皮空泡样变。壶腹嵴的毛细胞和支持细胞排列整齐，形态无明显改变，未见缺失。扫描电镜示球囊斑、椭圆囊斑、后、外、上半规管壶腹嵴正常，三个基因型之间没有差异。结论Smad4（-／-）小鼠的前庭终器有轻微病理改变，Smad4（＋／＋）与Smad4（＋／-）小鼠的前庭终器形态结构基本正常．表明Smad4对于前庭终器的发育影响可能不明显。     

前庭毛细胞的反相激活模式

分布在内耳前庭各个终器的感觉毛细胞可分为两种类型,它们分别是I型毛细胞和II型毛细胞。这两种毛细胞无论是在静纤毛的长度,还是毛细胞细胞体的形状,或者神经末梢的连接方式以及与之相联系的前庭神经元都不一样。前庭毛细胞感受重力或体位改变刺激的机制是由于其插入到覆盖在其上方耳石膜或终帽内的纤毛随着这些辅助结构的惯性位移而发生弯曲,纤毛的弯曲引起毛细胞膜电位发生去极化或超极化改变,从而促使毛细胞的神经冲动信号发放增强或减弱。静纤毛朝着动纤毛的方向弯曲形成对毛细胞的兴奋性刺激,而静纤毛朝着背离动纤毛的方向弯曲则构成对毛细胞的抑制。球囊斑和椭圆囊斑都被从其中心穿越的一条狭窄的细胞带划分为两个区域,这条狭窄的细胞带被称之为微纹区,在椭圆囊斑微纹区两侧周边区毛细胞的动纤毛都排列在朝向微纹区的位置,而球囊斑微纹区两侧周边区毛细胞的动纤毛都排列在背离微纹区的位置,由此可见,每一个囊斑微纹区两侧毛细胞的极性正好完全相反。当机体沿着一个囊斑的平面从垂直于微纹区的方向产生一个加速运动时,该囊斑一侧周边区的毛细胞会因为静纤毛朝着动纤毛的方向弯曲使该侧毛细胞发生去极化而处于兴奋状态,而另一侧周边区的毛细胞却因静纤毛朝着离开动纤毛的方向弯曲使该侧毛细胞发生超极化而处于抑制状态。三个壶腹嵴上毛细胞的动纤毛都是朝着或背离椭圆囊的统一方向,其中外半规管壶腹嵴上每个毛细胞的动纤毛都是统一朝着椭圆囊,而上半规管和后半规管壶腹嵴上的每个毛细胞的动纤毛都是统一朝着半规管的方向。壶腹嵴是一个位于壶腹腔内的横位的马鞍形隆起,当其上方覆盖的胶状质终帽随着内淋巴液的流动发生相对位置移动时,壶腹嵴一侧的毛细胞纤毛必然会随着终帽顶部的偏移而发生方向一致的弯曲,从而使这半侧壶腹嵴毛细胞产生同步的去极化或超极化反应,然而壶腹嵴另外一侧毛细胞的纤毛却会因为内淋巴液在壶腹嵴上方推动终帽时在被壶腹嵴遮挡一侧的底部形成一个反方向的漩涡式回流使壶腹嵴另外一侧毛细胞的纤毛发生方向相反的弯曲,从而使壶腹嵴两侧毛细胞处于一侧兴奋而另一侧抑制的截然相反的不平衡状态。这意味着同样的加速运动方向对与之相对应的前庭终器两侧感觉上皮产生的是截然不同的刺激信号,从而造成该前庭终器两侧感觉上皮输入信号的不平衡。这种不平衡刺激模式经前庭周边神经元传入到前庭中枢神经系统,使整个从周边到中枢的前庭系统都是以这种不平衡刺激方式传递和感知机体的平衡状态。     

前庭学

990986人前庭感觉上皮扫描电镜观察/孙建和…//中华耳鼻咽喉科杂志一1998,33(增刊)(英文版)一31一33 目的:了解人前庭器官的超微结构。方法:借助扫描电镜技术观察了5人(10耳)的前庭感觉上皮。结果:①球囊斑呈“L”形,椭圆囊斑形如打开的贝壳;②I形感觉细胞呈烧瓶样,l形感觉细胞呈试管状;③感觉细胞纤毛排列呈阶梯状,动纤毛最长,且位于最长的静纤毛一侧,椭圆囊斑最长的静纤毛和动纤毛靠近微纹,其极性也向微纹,球囊斑则背离微纹,水平半规管壶腹峙的动纤毛朝向椭圆囊侧,上、后半规管壶腹峙则朝向半规管侧;①耳石形状大小不一致,呈现两端为锥形…     

人前庭感觉上皮扫描电镜观察

为了解人前庭器官的超微结构，借助扫描电镜技术观察了５人（１０耳）的前庭感觉上皮。结果显示：①球囊斑呈“Ｌ”形，椭圆囊斑形如打开的贝壳；②Ⅰ型感觉细胞呈烧瓶样，Ⅱ型感觉细胞呈试管状；③感觉细胞纤毛排列呈阶梯状，动纤毛最长，且位于最长的静纤毛一侧，椭圆囊斑最长的静纤毛和动纤毛靠近微纹，其极性也向微纹，球囊斑则背离微纹，水平半规管壶腹嵴的动纤毛朝向椭圆囊侧，上、后半规管壶腹嵴则朝向半规管侧；④耳石形状大小不一致，呈现两端为锥形的圆柱状晶体。     

人前庭感觉上皮扫描电镜观察

为了解人前庭器官的超微结构，借助扫描电镜技术观察了５人（１０耳）的前庭感觉上皮。结果显示：①球囊斑呈“Ｌ”形，椭圆囊斑形如打开的贝壳；②Ｉ型感觉细胞呈烧瓶样，Ⅱ型感觉细胞呈试管状；③感觉细胞纤毛排列呈阶梯状，动纤毛最长，且位于最长的静纤毛一侧，椭圆囊斑最长的静纤毛和动纤毛造近微纹，其极性也向微纹，球囊斑则背离微纹，水平半规管壶腹嵴的动纤毛朝向椭圆囊侧，上、后半规管过来腹嵴则朝向半规管侧；④耳右形状     

豚鼠全内耳膜迷路取材术

本文介绍一种能完整取出同一内耳基底膜、血管纹、球囊斑、椭圆囊斑和膜半规管的取材方法,此法便于同时对耳蜗和前庭终器进行光镜和电镜观察。     

实验动物标准颞骨切片规范

颞骨切片技术是观察和评估实验性内耳病理学改变的重要手段。由于内耳复杂的迷宫式立体结构,从不同方向和角度获取的颞骨切片很难进行相互间的组织病理学比较。因此,统一颞骨标准切片技术规范,对于评判内耳听觉感受器和前庭各个平衡感受器以及耳蜗和前庭周边神经元的病变部位和病变程度十分重要,因为只有统一了规范的颞骨样品制备和切片角度,才有可能对实验性内耳病变做出正确的比较和评判。颞骨切片的标准方向是将切片平面平行于外耳道和内听道的水平面,从上鼓室向下鼓室方向依次收集到的需要进行重点评估的切片层次分别为上半规管壶腹嵴和外半规管壶腹嵴、椭圆囊斑和球囊斑及前庭上神经元、球囊斑和前庭下神经元、耳蜗中轴、内淋巴管及内淋巴囊、以及后半规管壶腹嵴。本文还根据作者的实践经验讨论了颞骨切片样品制备过程中有关样品固定、脱钙、颞骨整体染色、渗透和定向包埋等技术细节,期望能对从事内耳病理学研究的同道有所帮助。     

半规管开窗放置链霉素对正常和膜迷路积水耳的内耳功能和形态学影响

为探索临床应用氨基甙类药物治疗病的途径和可行性，对豚鼠正常耳和人工造成膜迷路积水耳行外半规管开窗放置硫酸链霉素后的内耳功能和形态进行观察。结果表明开窗放药后正常耳耳蜗电图（ＥＣｏｃｈＧ）动作电位（ＡＰ）阈值无变化，积水耳ＡＰ阈值升高，正常耳和积水耳冰水试验眼震消失。光镜下正常耳给药后三个半规管壶腹嵴和椭圆囊斑前庭上皮严重受损，耳蜗毛细胞正常；积水耳用药后前庭上皮受损更重，部分变性、萎缩，耳蜗底回及部分第二回毛细胞亦受损。揭示在膜迷路积水状态下对链霉素的耳毒敏感性增加。     

前庭学

911323 半规管与囊斑教学用立体纸膜的制作/王有祥…∥中华耳鼻咽喉科杂志.-1991,25(2).-122 介绍制作的半规管与囊斑的纸膜,基本上能表示三个半规管壶腹嵴,椭圆囊斑及球囊斑的解剖位置,具立体感。详述制作方法。图2(本刊)     

半规管开窗放置链霉素对正常的膜迷路积水耳的内耳功能…

为探索临床应用氨基甙类药物治疗Ｍｅｎｉｅｒｅ病的途径和可行性，对豚鼠正常耳和人工造成膜迷路积水耳行外半规管开窗放置硫酸链霉素后的内耳功能和形态进行观察。结果表明开窗放药后正常耳耳蜗电图（ＥＣｏｃｈＧ）动作电位（ＡＰ）阈值无变化，积水耳ＡＰ阈值升高，正常耳和积水耳冰水试验眼震消失。光镜下正常耳给药后三个半规管壶腹嵴和椭圆囊斑前庭上皮严重受损，耳蜗毛细胞正常；积水耳用药后前庭上皮受损更重，部分变性、萎     

听力学

87020535 豚鼠全内耳膜迷路取材术/丁大连…∥临床耳鼻咽喉科杂志。-1987,1(1).-9～11 本文介绍一种能完整取出同一内耳基底膜血管纹、球囊斑、椭圆囊斑和膜半规管的取材方法,此法便于同时对耳蜗和前庭终器进行光镜和电镜观察。图7参3(原提要)     

CBA小鼠内耳感觉上皮的参考数据

目的测量成年CBA小鼠耳蜗和前庭的有关数据,为内耳感受器定量分析提供参考依据。方法将6只出生后3个月左右的成年CBA小鼠(12耳)的耳蜗和前庭各终器取出并制备成全耳蜗基底膜铺片和全前庭终器铺片。测量全耳蜗基底膜的总长度,以及基底膜和Corti器在耳蜗不同部位的宽度。观察并记录全耳蜗毛细胞的总数和基底膜上不同区间的毛细胞密度。观察并记录椭圆囊斑和球囊斑毛细胞的总数及其微纹区和周边区的毛细胞密度,记录壶腹嵴上的毛细胞密度。结果正常成年CBA小鼠的耳蜗基底膜长度为(5.76±0.196)毫米(平均数±标准差,下同),基底膜的宽度在耳蜗底部距起始端约1.5毫米处为(339.1±9.87)微米,在耳蜗中部距起始端约3毫米处为(304.5±11.82)微米,在耳蜗顶部距起始端约5毫米处为(300.1±7.22)微米,说明小鼠耳蜗基底膜的宽度从底回到顶回逐渐变窄。Corti器的宽度在耳蜗底部距起始端1.5毫米处为(37.80±2.24)微米,在耳蜗中部距起始端约3毫米处为(45.00±2.67)微米,在耳蜗顶部距起始端约5毫米处为(52.20±3.16)微米,可见Corti器的宽度从底回到顶回逐渐变宽。CBA小鼠全耳蜗毛细胞的总数为(3116.41±151.91)个,其中内毛细胞总数为(680.67±17.50)个,而外毛细胞的总数是(2435.8±143.46)个。耳蜗内、外毛细胞的平均密度为(541.1±9.36)个/毫米,其中内毛细胞的平均密度为(118.3±2.68)个/毫米,外毛细胞的平均密度为(422.8±11.87)个/毫米,耳蜗毛细胞在耳蜗基底膜上不同区间的毛细胞密度无明显差异(P>0.05)。小鼠椭圆囊斑上的毛细胞总数为(3300±177.51)个,球囊斑上的毛细胞总数为(3045±361.57)个。前庭球囊斑和椭圆囊斑微纹区和周边区的毛细胞密度基本相同(P>0.05),两个囊斑微纹区的平均毛细胞密度为(40.2±6.59)个/0.0025mm2,两个囊斑周边区的平均毛细胞密度为(53.2±7.18)个/0.0025mm2,可见囊斑微纹区的毛细胞密度低于周边区。尽管小鼠上半规管和后半规管壶腹嵴的毛细胞区被位于嵴中央的上皮细胞分隔为两个区域,但三个壶腹嵴上的毛细胞密度基本相同,其平均密度为(44.7±7.15)个/0.0025mm2。结论本实验所得CBA小鼠耳蜗和前庭测量数据,为进一步定量观察CBA小鼠内耳病理学改变提供了重要的参考依据。     

前庭学

20030936胚胎期豚鼠前庭终器细胞凋亡的检测/胡金玮…刀第四军医大学学报一2002,23(16)一1 514一1517 目的:研究豚鼠胚胎正常发育期前庭终器形态变化及细胞凋亡,探讨细胞凋亡在前庭终器发育中的作用。方法:选用胚胎40d和50d正常豚鼠,光镜观察其前庭终器发育形态变化.末端脱氧核昔酸转移酶介导的生物dUTP缺口末端标记技术(TUNEI矛)测定毛细胞和支持细胞凋亡,并以电镜观察凋亡细胞胞核变化。结果:胚胎40d,豚鼠前庭壶腹、椭圆囊斑及球囊斑已分化,前庭上皮出现一层毛细胞及多层支持细胞;胚胎50d,支持细胞层数减少,毛细胞数目增加,伴有神经纤…     

外周前庭疾病听功能检查临床分析

外周前庭系统包括膜迷路、骨迷路及前庭系统的运动感受器——毛细胞。外周前庭系统位于内耳,外侧与中耳腔毗邻,内侧与颞骨毗邻[1]。前庭是内耳器官之一,由3个半规管和球囊、椭圆囊组成。它和耳蜗紧密相连,总称位听器官。上述任何地方发生病变均可影响前庭功能的改变。目前临床     

Otoconin 90蛋白在豚鼠内耳的表达

目的观察Otoconin 90蛋白在内耳的表达情况,探讨其在耳石代谢中的意义。方法采用免疫组织化学SP方法 (streptavidin-perosidase,链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法)检测正常豚鼠内耳切片各主要部位Otoconin 90表达情况。结果 Otoconin 90蛋白不只在椭圆囊和球囊囊斑的感觉上皮有表达,在与其临近和相对位置的非感觉上皮,以及壶腹、半规管和耳蜗等多个部位均有丰富表达,在椭圆囊和球囊囊腔、半规管内等也有染色阳性物质出现。结论 Otoconin 90蛋白在内耳呈现出"多点"表达的特点,提示内耳多处产生Otoconin 90,可能最后转运至椭圆囊和球囊囊斑,在此与钙离子相互作用形成耳石。     

小鼠前庭器官的形态发生

目的了解小鼠前庭器官发育的形态学特征及演变规律.方法利用光镜、扫描电镜、透射电镜观察C57BL/6小鼠从胚胎第8天到刚出生期间前庭器官发育过程中的形态变化.结果 C57BL/6小鼠的前庭器官在胚胎第10.5天开始发育,胚胎第11.5天形成上、后半规管始基,到胚胎第12天水平半规管始基才逐渐形成,椭圆囊已出现许多原始的感觉纤毛,而到胚胎第13天,球囊才开始发育;到胚胎第15天,椭圆囊、球囊、壶腹嵴初具成熟形态,毛细胞和支持细胞也初具雏形,到出生时,前庭器官已基本发育成熟.结论 C57BL/6小鼠前庭感觉细胞在胚胎第12天开始分化,感觉上皮的形态从胚胎第12天至第18天变化最明显.椭圆囊、壶腹嵴的发生较早,随后才形成球囊,到出生时前庭感觉器官已基本发育成熟.     

前庭学

901218 压力波引起豚鼠前庭器损伤的电镜观察/王尔贵…//第四军医大学学报.-1990,11(1).-4～6 作者将豚鼠暴露于压力峰值为175.3dB(SPL)的压力波。爆震后行前庭功能检查及透射电镜观察。结果示前庭功能未发现异常。透射电镜发现半规管壶腹嵴和球囊斑、椭圆囊斑     

前庭分析器结构的年龄特点

人的一生中,机体的各器官、系统都会随年龄增长发生有规律的变化。有人发现,内耳道内很早就会出现骨性隆起压迫神经纤维并使其萎缩;随着年龄增长,前庭神经纤维数将会减少,直径缩小。神经上皮细胞数也有颇大程度的减少,球囊斑、有时椭圆囊斑也发生退化性变化,膜迷路出现变形。壶腹感受器毛细胞在40岁时已出现年龄性退行变化,70岁后毛细胞数仅有儿童和青年的40%。骨迷路中层和内软骨层在人的终身都有大束绺状结构,长久保持着胚胎期特征,直至很老之前都具有骨生成和代替的明显活性。故虽然迷路骨囊的发育在生后一年已基本完成,但个别部分随后仍有轻微变化,其最稳定部分是耳蜗,     

前庭器官超微结构研究及结构图构建

目的通过扫描电镜观察小鼠椭圆囊、球囊、壶腹超微结构,研究分析并据此构建前庭器官新的结构示意图。方法选取3个年龄段小白鼠各10只,分别是年轻组≤2个月、中年组2~12个月、老龄组>12个月。分离出椭圆囊、球囊、壶腹,采用扫描电镜技术样品制备方法制备样品,应用扫描电镜进行样品观察。结果扫描电镜下可以得到:①椭圆囊斑及球囊斑不同层面图片:表面为堆积并相互黏附的"表面耳石",表面耳石下是无结构胶状质;底层表面耳石深入到无结构胶质层里;无结构胶质层下面是毛细胞纤毛及"纤毛间耳石"层,不同纤毛束之间均有纤毛间耳石存在,立于支持细胞表面,表面平坦;蜂窝状胶质物质联接无结构胶质层、纤毛间耳石及毛细胞纤毛。②壶腹超微结构的图片:嵴帽是无结构的胶状质与壶腹外侧壁紧贴,但较易分离,嵴帽和壶腹外侧壁之间有纤细的晶状体物质,在壶腹嵴两侧壁上也有纤细晶体物质(壶腹嵴表面耳石);不同的毛细胞纤毛之间有耳石结构的存在(壶腹嵴纤毛间耳石)。结论通过对前庭器官扫描电镜的观察,发现了椭圆、球囊斑及壶腹的新结构成分,由此构建出新的前庭器官超微结构示意图。     

斑马鱼内耳感觉上皮分离术

目的 探索斑马鱼内耳感觉上皮的分离方法,为采用斑马鱼作为内耳发育及疾病研究的动物模型提供技术手段.方法 取4个月龄斑马鱼进行内耳组织冰冻切片,HE染色确定内耳感觉囊斑部位,并行免疫荧光染色观察毛细胞纤毛.在解剖显微镜下将斑马鱼内耳椭圆囊、球囊及听壶完整分离,取出内耳感觉囊斑平铺于载玻片中,进行免疫荧光染色,观察内耳感觉囊斑铺片的形态结构.结果 冰冻切片证实斑马鱼内耳感觉上皮位于囊斑内,并与耳石相对应.以耳石为标志分离出完整的内耳感觉囊斑组织,铺片免疫荧光染色后可观察到内耳感觉上皮形态结构完整,毛细胞纤毛显示清晰.结论 通过内耳感觉囊斑铺片技术可以完整分离出斑马鱼的内耳感觉上皮组织.