锌指基因ZNF569的转录活性分析

目的构建GAL4-ZNF569和pCMV-Tag2C-ZNF569重组质粒。通过它控制报告基因的表达情况来确定它的转录激活/抑制活性以及它是否参与了细胞信号途径调控。结果GAL4-ZNF569和pCMV-Tag2C-ZNF569重组质粒转染细胞后发现ZNF569具有转录抑制活性并能抑制SRE和AP-1的转录活性。对ZNF569的分段结构域的转录活性分析表明ZNF569的KRAB结构域和C2H2锌指结构域都具有抑制转录因子转录活性的作用。结论由此笔者得出结论认为ZNF569的KRAB框和C2H2锌指都具有抑制因子作用,为进一步研究ZNF569在真核细胞中的信号调控奠定了一定的实验基础。     

白细胞介素—2基因在质粒pMAL—cR1中的克隆及其蛋白的表达与纯化

利用非抗体亲和层析，对白细胞介素－２基因在质粒ｐＭＡＬ－ｃＲ１中形成的克隆子表达的融合蛋白，进行分离纯化；并经特异性酶ｆａｃｔｏｒＸａ酶切，分离，得到纯度高达９８％的白细胞介素－２蛋白，收率为６９．７％，其比活为１０＾５Ｕ／ｍｇ。     

子宫内膜癌组织中C—erbB—2基因蛋白的表达及意义

目的 探讨子宫内膜癌的发生及发展与癌基因C-erbB-2表达的关系。方法 应用免疫组化法测定了58例子宫内膜癌组织中癌基因C-erbB-2的表达。结果 58例中阳性表达26例（44．8％）C-erbB-2阳性表达与组织学分级密切相关，而与分期，病理类型，肌层浸润无关。结论 C-erbB-2与子宫内膜癌的发生，发展及分化密切相关，可以作为评估其恶性生物学行为的指标。     

SOD基因的组织结构、表达与分子克隆

超氧化物歧化酶（SOD）是一种天然的含金属抗氧化酶，它具有抗衰老、抗辐射和消炎等多种疗效。SOD包括Cu/Zn-SOD、Mn-SOD和Fe-SOD三类，其中以Cu/Zn-SOD为最重要。SOD均由核内染色体上的基因编码，这类基因既有单拷贝序列，也有多基因家庭。线粒体和叶绿体内的SOD在核内合成后，再分泌到细胞器中。多数SOD基因的表达都具有组织特异性，并受许多环境因素的诱导，有关的分子机理正在研究中，并且正在尝试SOD基因的分子克隆以及重组SOD基因在培养细胞和转基因植物中的表达。     

小鼠H—2D^d基因的克隆及其逆转录病毒表达载体的构建

目的：构建BALB／c小鼠H－2D^d基因的逆转录病毒表达载体。方法：采用反转录PCR从BALB／c小鼠脾细胞基因组中，扩增H－2D^d的编码基因，插入克隆载体pGEM-T中。经EcoR I和Xho I双酶切后，亚克隆法于逆转录病毒载体pMSCV的相应酶切位点，构建pMSCV-H2D^d重组表达质粒，并经双酶切和序列测定鉴定。结果：用EcoR I和Xho I双酶切鉴定证实，克隆基因正确插入载体pMSCV。克隆H－2D^d的编码基因经序列测定证实，与献报道完全一致。结论：成功构建小鼠H－2D^d编码基因的逆转录病毒载体，为进一步研究MHC分子在移植免疫中的作用及临床移植的基因治疗应用奠定了基础。     

中国人群PRKAG2心脏综合征新突变的PRKAG2基因的功能分析

目的研究中国人群家族性传导系统异常伴心室预激及心肌肥厚患者新错义突变的PRKAG2基因表达和功能变化。方法利用PCR扩增其功能区外显子片段,双脱氧末段终止测序法来构建表达PRKAG2G100S、PRKAG2R302Q及野生型(WT)PRKAG2基因的慢病毒载体,并对其从细胞学水平进行体外实验研究。结果(1)PRKAG2 G100S和PRKAG2 R302Q突变对PRKAG2基因在CCL13细胞中的表达位置没有影响;(2)PRKAG2突变组CCL13/GS和CCL13/RQ与CCL13/WT组相比,PRKAG2蛋白表达量减少,且细胞质及胞核内有较多糖原沉积;(3)PRKAG2基因G100S和R302Q突变降低了CCL13细胞中的AMPK活性,而G100S突变降低AMPK活性的作用弱于R302Q突变(P<0.05或P<0.01)。结论 PRKAG2G100S突变是中国人PRKAG2心脏综合征家系的发病原因,初步证实了突变导致AMPK活性降低及糖原累积是家系的发病机制;G100S突变可能使PRKAG2基因Bateman结构域功能发生变化,但对Bateman结构域功能的影响弱于R302Q突变。     

凋亡素基因的克隆及其原核表达

目的建立凋亡素基因克隆及原核表达的方法。方法根据已报道的鸡贫血病毒凋亡素基因设计合成一对引物 ,通过PCR扩增 ,构建重组质粒pUC18 VP3,将其与pET30质粒分别用限制性内切酶NdeⅠ、EcoRⅠ消化 ,构建原核表达载体pET30 VP3,用以转化感受态的E .coliDE3,经IPTG化学诱导表达 ,表达产物进行SDS PAGE电泳鉴定。结果凋亡素基因在E .coliDE3中获得了大量表达。结论该结果对凋亡素进一步开发为抗肿瘤新药具有重要意义。     

波形蛋白基因的构建、表达及鉴定

文章进行波形蛋白(VIM)基因重组质粒的构建,并进行表达与鉴定,为开辟新的肝癌诊断方法奠定基础。从人宫颈癌细胞(HELA)中提取总RNA并采用PR-PCR及PCR技术克隆VIM基因,经酶切连接等构建带有GST标签的PGEX-4T-1-VIM重组表达质粒,在大肠杆菌DH5α菌中扩增重组质粒,并在BL21菌中进行诱导表达,通过SDS-PAGE及Western blotting等进行鉴定。重组及表达蛋白Vimentin的融合蛋白,为建立一种新的肝癌早期诊断方法奠定基础。     

大鼠血栓调节蛋白基因的克隆及在原核细胞中的表达

目的研究大鼠血栓调节蛋白基因的扩增、克隆及在原核细胞中的表达。方法以大鼠基因组DNA为模板,进行PCR扩增,用pMD18-Tsimple vector进行T克隆并测序。经EcoRⅠ和SalⅠ双酶切,将目的基因克隆到pET-28a(+)表达载体质粒中,转化E.coliBL21(DE3)表达重组蛋白,通过SDS-PAGE分析表达产物。结果含有大鼠血栓调节蛋白基因的PCR产物约为1850bp。重组pMD18-Tsimple vector质粒和重组pET-28a(+)质粒经EcoRⅠ和SalⅠ双酶切后,有相应大小的目的片段,测序结果正确。经IPTG诱导,重组pET-28a(+)质粒在E.coliBL21(DE3)中有相对分子质量约为72000的融合蛋白表达。结论成功克隆了大鼠血栓调节蛋白基因,并成功表达了该基因编码的蛋白。     

心脏H2受体及甲氰味胍的心脏效应

心脏存在多种受种，其中Ｈ２受体对多种药物有效应。人们在天空甲氰咪胍时重点研究其对消化道的作用，本文重点研究其地心脏的作用．     

心脏型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)原核表达、纯化及多克隆抗体制备研究

目的构建H-FABP高效原核表达载体,并实现H-FABP的高效原核表达、纯化及多克隆抗体的制备。方法通过RT-PCR扩增人H-FABP的基因序列,将目的基因克隆入质粒pET28a构建原核表达重组质粒pET28a-H-FABP。将重组质粒转化入大肠杆菌BL21中,通过IPTG诱导H-FABP的表达,采用Q Sepharose F.F.阴离子层析柱等方法建立H-FABP的纯化工艺。用免疫胶体金法和Western blot鉴定纯化后重组蛋白免疫特异性,用重组表达蛋白制备兔抗H-FABP多克隆抗体。结果成功构建人H-FABP重组蛋白原核表达载体,重组蛋白以包涵体形式表达,其相对分子质量为15kD,与预期一致。亲和层析纯化产物的SDS-PAGE和Western blotting鉴定表明获得纯度>95%的目的重组蛋白。制备的抗H-FABP多克隆抗体的抗血清ELISA效价可达1∶512000。结论本研究在原核系统中成功表达了H-FABP重组蛋白,并制备多克隆抗体,为H-FABP的结构和功能研究及开发临床诊断试剂盒打下了基础。     

Regulation of the Rat Glutathione S-Transferase A2 Gene by Glucocorticoids: Crosstalk Through C/EBPs

Regulation of the rat glutathione S-transferase A2 (GSTA2) gene by glucocorticoids is biphasic in its concentration dependence to glucocorticoids, with concentrations of 10–100 nM repressing gene activity (GR-dependent), and concentrations above 1 μM increasing transactivation (PXR-dependent) in adult rat hepatocytes or transient transfection assays. Over-expression of either C/EBPα or β negatively regulates basal and inducible expression of a 1.65 Kb GSTA2 luciferase reporter, and synergizes the response to glucocorticoids (GC). C/EBP responsive elements have been identified in the GSTA2 5′-flanking sequence, associated with the palindrominic Glucocorticoid Responsive Element (GRE), the Ah receptor response elements, and the antioxidant response element. In reporters lacking the palindromic GRE, negative regulation by GC is observed only when C/EBPα is co-expressed. Co-transfection of C/EBPα/β induced gene expression of the GSTA2 XRE reporter, but negatively regulated the GSTA2 ARE-reporter. In contrast, the ARE from the rat NAD(P)H quinone oxidoreductase gene was induced by co-transfection of C/EBPs, but was still negatively regulated by GC. PXR-induction of the GSTA2 reporter was partially ablated by co-transfection of C/EBPα and enhanced by co-transfection of C/EBPβ. We conclude that C/EBPα and β are involved in GC-dependent repression of GSTA2 gene expression and ARE sequences that bind C/EBPs appears to be critical for these responses.     

人内皮抑素基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

目的 :克隆人内皮抑素 (hES)全长cDNA ,并进行其在大肠杆菌表达的研究。方法 :用RT PCR从胎肝RNA中扩增hEScDNA片段 ,构建重组其克隆和融合蛋白表达载体 ,并进行克隆基因的DNA序列分析。结果 :克隆了hEScDNA ,其序列和国外报道一致 ;构建了重组hES融合蛋白表达菌株 ,表达目的蛋白达菌体总蛋白的5 0 %以上。结论 :通过hES基因克隆和表达的研究 ,获得了hES的基因克隆和高效表达菌株     

新型甘露聚糖酶基因的克隆及在毕赤酵母中的表达

构建土壤基因组文库,通过功能筛选得到一水解底物魔芋粉的阳性克隆,测序后,序列分析表明:该基因全长为1 530 bp,包含一个糖基水解家族26结构域,编码510个氨基酸,相对分子质量为56 438。此基因推导的氨基酸序列与Cellulomonas fimi的Man26A和Cellvibrio japonicus的mannanase A氨基酸序列同源性分别为64.3%、38%。将此基因的成熟肽的编码序列克隆到表达载体pHBM905上,得到重组质粒pHBM730,将pHBM730经SalI酶切线性化后转化3株毕赤酵母GS115、KM71、SMD1168,该甘露聚糖酶基因在这3种毕赤酵母中均实现分泌表达。将此3种重组毕赤酵母GS115(pHBM730)、KM71(pHBM730)、SMD1168(pHBM730)诱导产酶,对这3种重组酶进行相关的酶学性质研究。分析表明,在KM71中表达量最高,其最适反应pH值均约为6.6,最适反应温度均约为45℃。在最适反应条件下测得其酶活力为19.64 U。此结果为瓜尔豆胶降解产物的工业化应用提供了参考。     

重组人血管内皮生长因子(hVEGF121)工程菌的发酵及表达产物的分离纯化

该研究优化了重组人血管内皮生长因子hVEGF121工程菌的发酵条件，考察乳糖诱导浓度和时间对目的蛋白表达量的影响。经乳糖诱导，目的蛋白以包涵体形式存在。通过菌体裂解、包涵体洗涤、裂解等初步纯化后，再经过DEAECellulose离子交换柱纯化和复性，经SDS-PAGE分析显示得到电泳纯的hVEGF121。     

一氧化氮对人甲状腺细胞钠/碘转运体基因的调节作用

目的:研究一氧化氮(NO)供体硝普钠(SNP)对体外培养人甲状腺细胞膜上钠/碘转运体(NIS)基因表达的影响,阐明NO抑制甲状腺细胞碘摄取的分子机制。方法:采用细胞培养方法及半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法,以NIS/β-actin光密度比值为指标观察不同浓度SNP(0、10-6、10-5、10-4、10-3mmol·L-1)对甲状腺细胞NISmRNA表达的影响。结果:SNP(0、10-6、10-5、10-4、10-3mmol·L-1)作用后各组NIS/β-actin光密度比值依次降低(P<0.05或P<0.01),呈浓度依赖性抑制NISmRNA的表达。结论:NO抑制甲状腺细胞碘摄取可能与其抑制NISmRNA表达有关。     

替米沙坦对心力衰竭合并2型糖尿病患者心率变异性的影响

目的：探讨心力衰竭合并2型糖尿病患者24 h心率变异性（HRV）的特点及替米沙坦对其的影响。方法：首先,67例不同程度的心力衰竭合并2型糖尿病的患者与70例健康成年人的24 h心率变异性指标进行比较;其次,前者被随机分为2组,替米沙坦组（34例）和常规治疗组（33例）,疗程为16周,分别测定治疗前后24 h的心率变异性及左室功能。结果：前者的HRV各项指标均明显低于后者（P〈0.01）,说明心率变异性小,HRV昼夜节律消失;替米沙坦组治疗前后24 h的心率变异性及左室收缩功能明显改善（P〈0.01,P〈0.05）,与常规治疗组比较SDNN、SDANN、SDNN-index均有提高（P〈0.05）。结论：心力衰竭合并2型糖尿病患者的HRV明显下降,替米沙坦对该类患者的心脏自主神经系统及左室收缩功能产生有益的影响。     

The ZNF804A Gene: Characterization of a Novel Neural Risk Mechanism for the Major Psychoses

Schizophrenia and bipolar disorder share genetic risk, brain vulnerability, and clinical symptoms. The ZNF804A risk variant, rs1344706, confers susceptibility for both disorders. This study aimed to identify neural mechanisms common to both schizophrenia and bipolar disorder through this variant''s potential effects on cortical thickness, white matter tract integrity, and cognitive function. Imaging, genetics, and cognitive measures were ascertained in 62 healthy adults aged between 18 and 59 years. High-resolution multimodal MRI/DTI imaging was used to measure cortical thickness and major frontotemporal and interhemispheric white matter tracts. The general linear model was used to examine the influence of the ZNF804A rs1344706 risk variant on cortical thickness, white matter tract integrity, and cognitive measures. Individuals homozygous for the risk variant (‘A'' allele) demonstrated reduced cortical gray matter thickness in the superior temporal gyrus, and in the anterior and posterior cingulate cortices compared with C-allele carriers. No effect of the risk variant on microstructural integrity of white matter tracts was found. Reduced attention control was found in risk allele homozygotes, aligning with findings in the anterior cingulate cortex. Our data provide a novel, genetically based neural risk mechanism for the major psychoses by effects of the ZNF804A risk variant on neural structures and cognitive function susceptible in both disorders. Our findings link genetic, imaging, and cognitive susceptibility relevant to both schizophrenia and bipolar disorder.     

Persephin基因克隆及在大肠杆菌中的表达

目的 :获取Persephin(PSP)基因并实现其高效表达。 方法 :利用PCR方法以染色体DNA为模板 ,扩增编码人PSP成熟蛋白的基因片段 ,将其克隆于 pUC19质粒 ,进行序列分析 ,将基因重组于硫氧还蛋白融合表达载体pThioHisA并进行表达。结果 :序列分析结果与文献报道一致 ,表达的hPSP占菌体总蛋白质 15 %左右。结论 :人PSP基因在大肠杆菌Top10中获得了高效、稳定表达 ,为进一步的基础研究与临床应用奠定了基础。     

注射用重组人白细胞介素-11致急性心力衰竭1例

1例62岁右肺腺癌男性患者二线化疗后出现Ⅱ级血小板减少,给予重组人白细胞介素-11皮下注射,3 mg·d-1.首次用药后第7 d,患者出现胸闷、憋气,不能平卧,NT-proBNP急剧升高至21383 pg·mL-1,诊断为重组人白细胞介素-11导致的急性心力衰竭.停用重组人白细胞介素-11,给予西地兰、呋塞米治疗后,患...