近红外光谱法在线质量监控白芍工业化提取

目的 利用近红外光谱（NIRS）技术研究并建立芍药苷的定量检测模型,实现产业化规模白芍醇提液浓缩过程的在线质量监控。方法 在线采集NIRS,同时进行芍药苷的HPLC检测,采用偏最小二乘法建立提取过程中芍药苷定量检测模型。结果 浓缩模型的最佳建模波段为5 187～7 065 cm^?1,模型相关系数为0.969 1,校正均方差为0.605。预测值与真实值的平均相对误差为4.9%。结论 利用NIRS技术能够实现白芍醇提液浓缩过程的在线质量监控。     

近红外光谱法快速测定制川乌提取浓缩过程中单酯型生物碱

目的 采用近红外光谱（NIR）法对制川乌提取、浓缩液中的单酯型生物碱类成分（MAs）进行快速定量分析。方法 应用近红外透射光谱法搜集103个制川乌样品的NIR数据,采用偏最小二乘回归（PLS）法建立NIR信息与MAs之间的定量分析模型。结果 制川乌提取、浓缩液中MAs的近红外透射光谱模型建模的光谱范围为9 264.35～7 274.11 cm^?1,校正模型的内部交叉验证均方根（RMSECV）为1.171,相关系数（r）为0.999 4;经外部验证,预测均方根误差（RMSEP）为1.321,r为0.992 1;经相关性统计学分析,MAs的预测值与HPLC参考值的r为0.999 0,P＜0.001,说明NIR法与HPLC法测定MAs相关性较好,可以较准确预测其覆盖范围的MAs的量。结论 本法具有方便、快速、准确、环保等特点,可用于制川乌提取、浓缩过程中MAs量的在线监测,进而较准确地判定提取、浓缩终点。     

三倍体丹参的培育及其可持续利用研究

目的 建立三倍体丹参培育及其可持续利用的方法。方法 应用“基因组多倍化与杂交相结合”的方法,将二倍体白花丹参人工诱变成同源四倍体（4x＝32）,然后与栽培或野生二倍体（2x＝16）丹参进行杂交,转育成三倍体（3x＝24）丹参。结果 4x♀×2x♂或2x♀×4x♂均能获得三倍体丹参,三倍体丹参具有多倍体和杂交种双重优势,根条数增加94.23%,根部鲜质量增加215.33%,主要药物成分隐丹参酮、丹参酮I、丹参酮II^A、丹酚酸B均达到或超过《中国药典》2010年版规定的水平。三倍体丹参杂交一代通过无性繁殖成为永久杂种,长期保持不变。结论 三倍体丹参的培育是我国丹参种质资源遗传改良、新品种选育和杂种优势可持续利用的重要途径。     

丹参注射液对急性心肌梗死犬血清微量元素和心肌形态学的影响

目的 观察丹参注射液对急性心肌梗死犬血清微量元素和心肌形态学的影响。方法 杂种犬24只随机分为4组（每组6只）,分别为模型组、刺五加注射液（10.0 mg/kg）阳性对照组、丹参注射液低剂量和高剂量（5.5、11.0 mg/kg）组。结扎犬左冠状动脉前降支,制备急性心肌梗死模型,观察丹参注射液对血清微量元素（Cu²⁺、Zn²⁺、Ca²⁺）水平的影响;通过HE染色,观察心肌细胞形态学的变化。结果 与模型组比较,丹参注射液组血清微量元素Cu²⁺的量明显降低（P＜0.05、0.01）,Zn²⁺、Ca²⁺的量明显增加（P＜0.05、0.01）,病理形态学观察可见缺血心肌细胞损伤程度明显减轻。结论 丹参注射液对心肌梗死犬的心肌具有明显的保护作用。     

丹酚酸B及其活性代谢产物在大鼠体内药动学研究

目的 建立了灵敏快速的同时测定大鼠血浆中丹酚酸B及其主要代谢产物丹参素的LC-MS/MS方法。方法 以氯霉素为内标,用醋酸乙酯萃取,色谱柱为Symmetry C₁₈柱,流动相为甲醇-乙腈-0.5%甲酸（55︰5︰40）,体积流量为0.4 mL/min。选用电喷雾电离（ESI）三重四极杆串联质谱仪,在负离子模式下以选择反应监测（SRM）方式进行检测,用于定量分析的离子反应分别为m/z 717→519（丹酚酸B）、m/z 197→135（丹参素）和m/z 321→152（氯霉素）。结果 在该测定条件下丹酚酸B、丹参素和内标物的保留时间分别为3.12、2.60、3.98 min。丹酚酸B的线性范围为10～5 000 ng/mL,r＞0.995;丹参素的线性范围为5～5 000 ng/mL,r＞0.995,丹酚酸B和丹参素定量限分别为10、5 ng/mL。批内、批间精密度（RSD）均小于12.6%。大鼠ig给予丹酚酸B后,迅速吸收并逐渐转化成丹参素,丹酚酸B和丹参素的C_max分别为（1.21±0.31）、（0.27±0.05）μg/mL,t_max分别为（0.50±0.00）、（0.56±0.18）h,t_1/2分别为（1.20±0.11）、（1.57±0.16）h,AUC_0～t分别为（1.31±0.30）、（0.39±0.05）μg·mL^?1·h。结论 本方法可用于大鼠ig丹酚酸B后的血浆中丹酚酸B及其代谢产物丹参素药动学研究。     

一种基于声光可调滤光器-近红外光谱技术建立的心通口服液的分析研究

目的 应用声光可调滤光器（AOTF）-近红外（NIR）光谱技术和化学计量学方法建立一种用于心通口服液快速定性、定量分析的新方法。方法 采用主成分分析（PCA）和偏最小二乘法（PLS1）分别建立心通口服液的定性定量分析模型,并以此进行快速分析。结果 建立的心通口服液定性分析模型（XT-C）可正确判断心通口服液;以葛根素为指标成分建立的心通口服液定量分析模型准确性好,葛根素的内部交叉验证均方差是RMSEP=0.137 1,决定系数R²=0.984 5,经对外部验正集样品进行外部验证,葛根素预测值与真值的相关系数是r ²=0.996 4,预测值的平均回收率为101.9%,方法精密度RSD为1.98%,稳定性RSD为1.57%。结论 该方法是一种简便、快速、低耗的新型分析技术,可用于心通口服液的快速定性定量分析。     

内异消复方缓释滴丸同步释药的处方优化及其释药机制研究

目的 优化内异消复方缓释滴丸各组分同步释药的处方,探讨其释药机制。方法 以药载比（X₁）、乙基纤维素质量分数（X₂）、PEG 6000质量分数（X₃）和硬脂酸质量分数（X₄）为考察因素,以“释放区间”值为指标,采用Doehlert设计-响应曲面优化法对内异消复方缓释滴丸的处方进行优化。用DDsolver软件拟合体外释药规律。结果 优化处方：X₁为1∶12,X₂为12%,X₃为30%,X₄为20%。模拟的胃肠道环境下,阿魏酸与川芎嗪、阿魏酸与延胡索乙素和川芎嗪与延胡索乙素的相似因子（f₂^*）值分别为53.37、56.17、57.85。阿魏酸的释放符合一级动力学方程和Higuchi方程,川芎嗪和延胡索乙素符合Baker-Lonsdale方程和Ritger-Peppas方程。结论 优化的内异消复方缓释滴丸能实现各组分的同步缓慢释放,其释放机制以扩散为主。     

猪毛菜的化学成分与药理作用研究进展

目的：建立体外抗癌天然药物筛选模型,评价丹参素的抗癌活性。方法：以遗传物质DNA为靶标,溴化乙锭（EB）为致癌物质,丹参素为试药,利用荧光光谱检测丹参素对EB-DNA体系的荧光猝灭效应;利用圆二色谱技术检测丹参素对EB-DNA体系的干扰作用。结果：丹参素能明显抑制EB-DNA体系的荧光强度,且具有浓度依赖性;丹参素能够有效阻断EB嵌入DNA的碱基对中,维持DNA分子的正常构象。结论：丹参素抑制致癌剂对DNA链的嵌合,从而起抗癌活性。该模型可应用于抗癌功效的天然药物的筛选中。     

扶正固表方对免疫低下小鼠免疫功能的实验研究

[目的] 研究扶正固表方对环磷酰胺诱导免疫低下小鼠的免疫调节作用。[方法] 48 只 Balb/c 小鼠随机分为对照组、模型组、扶正固表方组（7.15 g/kg）和西药组（盐酸左旋咪唑,30 mg/kg）,除对照组外,其他各组小鼠腹腔注射环磷酰胺制备免疫低下小鼠模型。造模成功后,扶正固表方组和西药组分别给予灌胃干预 7 d。观察各组小鼠的一般状态和体质量变化,检测免疫器官指数;酶联免疫吸附法测定血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-4（IL-4）和干扰素-γ（IFN-γ）的水平;苏木素-伊红染色法观察脾脏病理变化;流式细胞术检测脾淋巴细胞亚群 CD4⁺ T 淋巴细胞、CD8⁺ T 淋巴细胞及 CD4⁺/CD8⁺的分布与比例;实时荧光定量聚合酶链反应法与蛋白免疫印迹法检测脾脏组织中 NF-κB p65 和 IκBα mRNA 与蛋白的表达水平。[结果] 与对照组相比,模型组小鼠出现精神萎靡,毛发黯淡等体征,伴随体质量、脾脏指数和胸腺指数降低（P<0.01）;血清 TNF-α 水平升高（P<0.01）,而 IL-4 和 IFN-γ 水平降低（P<0.01）;脾组织红、白髓界限不清,伴有红细胞和炎性细胞浸润;脾 CD4⁺淋巴细胞数下降（P<0.01）,CD8⁺淋巴细胞数升高（P<0.01）,CD4⁺/CD8⁺比例降低（P<0.01）;脾组织中 NF-κB p65 mRNA 与蛋白表达降低（P<0.01）,IκBα mRNA和蛋白表达升高（P<0.01）。与模型组相比,扶正固表方组一般状态有所改善,体质量升高,脾脏指数和胸腺指数提升（P<0.01）,血清 TNF-α 水平降低（P<0.01）,IL-4 和 IFN-γ 水平升高（P<0.01）,脾组织红、白髓界线逐渐清晰,脾CD4⁺淋巴细胞数增多,CD8⁺淋巴细胞数降低,CD4⁺/CD8⁺比例上升; 脾组织中 NF-κB p65 mRNA 与蛋白的表达水平上升（P<0.05）,IκBα mRNA 和蛋白表达降低（P<0.05）。[结论] 扶正固表方可以调节免疫低下小鼠的免疫状态,增强机体的免疫功能。     

牡荆素对大鼠实验性心肌缺血损伤的保护作用及其机制

目的 研究牡荆素对实验性心肌缺血大鼠心肌损伤的保护作用及对其能量代谢的影响。方法 采用在体结扎大鼠心脏冠状动脉前降支法及舌下iv给予垂体后叶素（Pit）法建立大鼠心肌缺血损伤模型。在体大鼠缺血再灌注模型上,TTC染色法检测大鼠心肌梗死面积,并测定大鼠血清乳酸脱氢酶（LDH）和肌酸激酶（CK）活性;Pit致大鼠心肌缺血损伤模型上,检测大鼠心电图（ECG）、血清中LDH、CK、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性及大鼠心肌组织中ATP酶活性,并观察大鼠心肌组织病理学改变。结果 牡荆素6、3、1.5 mg/kg可显著降低大鼠心肌梗死面积（P＜0.05、0.01）,并能不同程度地降低血清中LDH和CK的活性。注射Pit后,模型组大鼠各时间点ECG的ST段变化值与对照组比较显著升高（P＜0.01）;葛根素与牡荆素（6、3 mg/kg）能显著降低Pit致大鼠心肌缺血升高的ST段（P＜0.05、0.01）。牡荆素（6、3 mg/kg）降低血清中LDH和CK的活性（P＜0.05、0.01）,同时升高血清中SOD及GSH-Px的活性（P＜0.05、0.01）;牡荆素6、3、1.5 mg/kg和葛根素能明显升高缺血心肌组织中Na⁺, K^＋-ATP酶,Ca²⁺, Mg²⁺-ATP酶及总ATP酶的活性（P＜0.05、0.01）。牡荆素（6、3 mg/kg）可明显改善缺血心肌的病理损伤程度。结论 牡荆素对大鼠急性心肌缺血损伤具有明显保护作用,其作用与提高心肌组织抗氧化能力,改善心肌能量代谢有关。     

复方丹参缓释胶囊在犬体内的药动学研究

目的 考察复方丹参缓释胶囊在犬体内的药效动力学。方法 采用多元定时释药技术制备复方丹参缓释胶囊,以血小板聚集抑制率为评价指标,以市售复方丹参片为参比制剂,对自制复方丹参缓释胶囊进行犬体内药效动力学研究。结果 犬单剂量口服给药后,复方丹参缓释胶囊的效应峰值(E_max)为18.62％,效应达峰时间(t_max)为8 h,效应半衰期(t_1/2)为2.40 h,平均效应滞留时间（MRT）为8.11 h;而市售复方丹参片的E_max为44.34％,t_max为3.5 h,t_1/2为1.54 h,MRT为4.57 h。结论 与复方丹参片相比,复方丹参缓释胶囊的药效更加温和而持久,达到了预期的缓释效果。     

黄芪提取过程总皂苷质量浓度的在线监测

目的 利用近红外光谱分析技术对黄芪提取过程进行在线监测,实时反映药效成分的溶出信息。方法 利用远程光纤流通池在线采集黄芪提取过程中提取液的近红外光谱,同时采集提取液样品,利用HPLC-MS方法测得提取液中黄芪皂苷II、异黄芪皂苷II、黄芪皂苷I和黄芪甲苷4种成分的质量浓度作为对照值,利用偏最小二乘法建立4种成分及黄芪总皂苷的定量分析模型,将所建的黄芪总皂苷定量分析模型用于黄芪提取过程的在线分析,实时反映提取液中黄芪总皂苷的质量浓度信息。结果 黄芪提取液中4种皂苷的近红外定量分析模型相关系数分别达到0.987 6、0.964 0、0.857 1、0.981 6,黄芪总皂苷定量分析模型的相关系数为0.993 2,校正均方差（RMSEC）为5.94,内部交叉验证的相关系数为0.976 6,交叉验证均方差（RMSECV）为11.1。将黄芪总皂苷定量分析模型用于3个批次提取过程的在线监测,能够及时准确地反映提取液中黄芪总皂苷的质量浓度信息。结论 利用本实验所建立的方法,可以实现以黄芪总皂苷为检测指标,对黄芪提取过程的在线监测,为黄芪提取过程的终点判断和工艺优化提供参考。     

Coq4基因全敲除小鼠胚胎发育的表型分析

目的：通过分析辅酶Q生物合成蛋白4同系物（coenzyme Q biosynthesis protein 4 homolog ,COQ4）的编码基因Coq4 敲除（Coq4^-/- ）小鼠表型,探讨Coq4在小鼠胚胎发育中的作用。方法：引进Coq4基因全身杂合（Coq4^+/- ）小鼠模型,利用基因组 PCR鉴定小鼠基因型。观察并记录Coq4^+/-小鼠后代出生情况;通过解剖、组织学和免疫荧光法,观察野生型（wild type,WT）和 Coq4^-/- 胚胎和胎盘组织的形态结构。结果：Coq4^-/- 小鼠在胚胎日（embryonic day,E）7.5 d（E7.5）出现原肠胚形成障碍,于E10.5死亡。组织形态分析显示,与WT相比,Coq4^-/-小鼠胚胎发育严重迟缓,胎盘结构缺陷。免疫荧光染色分析发现,Coq4^-/-小鼠胎盘滋养层细胞侵袭能力减弱。结论：Coq4基因敲除导致小鼠发生胎盘缺陷和原肠胚形成障碍,Coq4为小鼠胚胎发育所必需的基因。     

福白菊化学成分LC-MSn定性分析及HPLC-UV法多成分含量测定

建立LC-MSⁿ法对福白菊化学成分进行定性研究,鉴定了22个化学成分,包括13个黄酮类成分和9个酚酸类成分;采用HPLC-UV法,同一色谱条件下测定福白菊中5种化学成分含量,包括:绿原酸(1)、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷(2)、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(3)、3,5-二咖啡酰基奎宁酸(4)、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷(5),建立5种化学成分的回归方程,线性关系均良好(r>0.999 9),加样回收率为98.72%~103.16%,采用此方法成功检测了10个福白菊样品中上述5种成分的含量。本文建立分析方法简便可靠,可定性及定量分析福白菊中的主要化学成分,适用于福白菊药材的质量分析。     

HPLC法同时测定心可舒丸中丹参素、原儿茶醛及葛根素

目的 建立HPLC法同时测定心可舒丸中丹参素、原儿茶醛及葛根素的方法。方法 采用HPLC法测定,色谱柱为Agilent Exlipce XDB-C₁₈柱（150 mm×4.6 mm,5 μm）,乙腈-0.3%磷酸溶液（12︰88）为流动相,体积流量1 mL/min,柱温35 ℃,检测波长269 nm。结果 丹参素在0.013～0.254 μg（r＝0.999 4）,原儿茶醛在0.021～0.414 μg（r＝0.999 8）,葛根素在0.100～2.000 μg（r＝0.999 9）与峰面积呈良好的线性关系;平均回收率分别为98.18%、97.39%、98.06%（n＝6）,RSD分别为0.9%、1.1%、1.4%（n＝6）。结论 本方法分析时间短且重复性和稳定性较好,可降低工作量,减少检验成本,为更好地控制心可舒丸的质量提供依据。     

骨碎补的木脂素和黄酮类成分研究

目的 研究骨碎补Drynaria fortunei的化学成分。方法 采用硅胶、ODS、Sephadex LH-20柱色谱及半制备液相色谱等技术分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定化合物的结构。结果 从骨碎补中分离得到14个化合物,包括3个木脂素类（1～3）和8个黄酮类化合物（4～11）,其结构经¹H-NMR、¹³C-NMR、2D-NMR、ESI-MS等波谱学方法分别鉴定为 (7′R,8′S)-二氢脱氢二松柏基醇4′-O-β-D-葡萄糖苷（1）、落叶松脂素4′-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（2）、(?)-secoisolariciresinol 4-O-β-D-gluco- pyranoside（3）、北美圣草素（4）、eriodictyol 7-O-β-D-glucopyranoside（5）、新北美圣草苷（6）、柚皮苷（7）、木犀草素（8）、木犀草素7-O-β-D-葡萄糖苷（9）、木犀草素8-C-β-D-葡萄糖苷（10）、2′,4′-二羟基二氢查耳酮（11）、麦芽酚3-O-β-D-葡萄糖苷（12）、β-谷甾醇（13）、β-胡萝卜苷（14）。结论 化合物1～3、11为首次从水龙骨科植物中分离得到,化合物5、8～10为首次从槲蕨属植物中分离得到,并发现化合物1在常温下存在旋转异构现象。     

近红外光谱分析技术用于硫酸羟氯喹原辅料混合均匀度在线定量监测

目的 建立在线监测硫酸羟氯喹原辅料混合均匀度的定量分析模型,以准确、快速判断混合终点。方法 制备硫酸羟氯喹标示百分含量为70%～130%的原辅料混合物。采集近红外光谱,对原始光谱进行标准正则变换、一阶导数和Norris平滑处理,建模波段为8 372～9 045 cm^-1、5 616～6 058 cm^-1,运用偏最小二乘回归建立定量分析模型。运用建立的定量分析模型预测硫酸羟氯喹在原辅料混合过程中的标示百分含量,以高效液相色谱法（HPLC）作为参考方法对混合终点进行验证。结果 建立模型所用主因子数为5;模型的校正误差均方根为0.96,校正集相关系数R_c为0.998;预测误差均方根为0.97,验证集相关系数R_p为0.998;交互验证的校正误差均方根为1.56,交互验证相关系数R_cv为0.995。近红外模型的预测结果与HPLC验证结果相符。结论 所建近红外定量分析模型可以用于硫酸羟氯喹原辅料混合均匀度的在线定量分析,能够准确、快速判断混合终点。     

HPLC法测定血压平喷雾剂中绿原酸、阿魏酸、芍药苷、肉桂酸

目的 建立HPLC双波长法同时测定血压平喷雾剂中绿原酸、阿魏酸、芍药苷、肉桂酸4种成分的方法。方法 采用Agilent C¹⁸柱,以乙腈-0.3%磷酸水为流动相,梯度洗脱,双波长检测（λ¹＝270 nm、λ²＝300 nm）,柱温30 ℃。结果 4种成分均能达到基线分离,各成分的平均回收率在97.32%～100.85%。结论 本检测方法简便、准确、重现性好。     

单向灌流法研究丹参中丹参素和原儿茶醛大鼠肠吸收特性

目的 研究丹参提取物中丹参素和原儿茶醛的大鼠在体肠吸收动力学特征。方法 采用大鼠在体肠单向灌流装置,并用质量法校正灌流液体积,考察灌流液体积流量、灌流液pH值、胆管结扎、丹参提取物质量浓度、吸收部位以及P-糖蛋白（P-gp）对丹参素和原儿茶醛吸收的影响,以HPLC法分别测定丹参素和原儿茶醛。结果 在灌流体积流量0.2～0.8 mL/min,随着灌流体积流量的增大,丹参素和原儿茶醛的吸收速率常数（K_a）和表观吸收系数（P_app）均呈线性增大;在考察pH值为7.4、6.8、5.5时,供试液的pH值对丹参素和原儿茶醛的吸收有显著影响（P＜0.05）,丹参素和原儿茶醛的K_a和P_app均随pH值的降低而升高,pH 5.5和pH 6.8的吸收无显著差异,而pH 5.5与pH 7.4吸收有显著差异（P＜0.05）;胆管结扎组与不结扎组的丹参素和原儿茶醛的K_a和P_app均无显著差异;在不同吸收部位,丹参素的K_a和P_app分别按照十二指肠、空肠、回肠和结肠的顺序依次下降,原儿茶醛则下降趋势不明显,全肠段都有很好的吸收;在丹参提取物质量浓度0.8、1.5、2.2 mg/mL时小肠中丹参素的K_a和P_app随质量浓度升高而降低,而原儿茶醛吸收参数则无明显变化;含P-gp抑制剂组与不含P-gp抑制剂组相比,丹参素和原儿茶醛的K_a和P_app均无显著差异。结论 灌流体积流量对丹参素和原儿茶醛的吸收有显著影响;随着pH值的降低,丹参素和原儿茶醛的吸收增加;胆管结扎与否对吸收没有显著影响;丹参素和原儿茶醛在整个肠段都有一定吸收,丹参素在肠上端吸收要比下端好;随着丹参提取物质量浓度的增大,原儿茶醛的K_a和P_app无明显变化,故其在肠道的吸收呈一级动力学过程,推测其吸收机制为被动扩散;而丹参素的K_a和P_app有明显减小的趋势,推测其吸收机制除被动扩散外,还可能有主动吸收或易化扩散;丹参素和原儿茶醛均不受P-gp的外排吸收影响。