mTOR信号通路在克唑替尼诱导的EML4-ALK融合基因阳性肺癌细胞株H2228凋亡中的作用

 目的：探讨以磷脂酰肌醇3-激酶相关激酶蛋白家族成员哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 (mTOR)为中心的信号通路在克唑替尼（crizotinib）诱导的棘皮动物微管结合蛋白样蛋白4-间变性淋巴瘤激酶（EML4-ALK）融合基因阳性的非小细胞肺癌细胞株H2228凋亡中的作用。方法：根据不同的实验目的处理H2228细胞后,荧光定量PCR检测基因状态,MTT法检测细胞抑制率;流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期;Western blotting检测细胞mTOR信号通路中关键蛋白的表达及活化水平。结果：Crizotinib对H2228细胞有促凋亡作用,呈时间和剂量依赖性,且能使H2228细胞阻滞在G1期。在使用crizotinib处理的凋亡细胞株中发现mTOR活化水平降低,mTOR上、下游关键蛋白的活化水平都呈下降趋势,肺癌细胞株H2228中特殊表达的融合蛋白EML4-ALK变异体3表达量未受影响,但其活化形式p-ALK明显受到抑制。结论：初步证实mTOR信号通路在crizotinib诱导含有EML4-ALK融合基因的肺癌细胞H2228凋亡中有一定作用,为crizotinib的作用机制提供了依据。     

榄香烯通过c-Met信号通路逆转由肝细胞生长因子诱导的吉非替尼耐药作用

目的:研究肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)诱导肺癌PC-9细胞对吉非替尼耐药的作用,并探讨榄香烯逆转此耐药作用的可能机制。方法:应用不同浓度的吉非替尼和榄香烯单独或联合作用于HGF诱导的PC-9细胞株。MTT法检测细胞活力,并计算吉非替尼的半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50);Transwell小室实验检测榄香烯对HGF诱导的吉非替尼耐药PC-9细胞侵袭能力的影响;Western blot检测PC-9细胞中c-Met、AKT及其磷酸化蛋白的水平。结果:榄香烯可以显著抑制肺癌PC-9细胞的活力(P0.05),随着药物剂量的增加,榄香烯对PC-9细胞的生长抑制率显著上升,在给药24 h后,其IC50为169.31 mg/L。肺癌PC-9细胞对吉非替尼敏感,随着吉非替尼浓度的增加,其对PC-9细胞生长的抑制作用不断增强,IC50为0.30μmol/L;外源性HGF(50μg/L)对肺癌PC-9细胞的生长有明显的促进作用,并诱导吉非替尼耐药。同时,使用cMet抑制剂SU11274联合吉非替尼作用于HGF诱导的PC-9细胞时,其存活率比吉非替尼单独作用于HGF诱导的PC-9细胞明显降低(P0.05)。Transwell小室结果显示,与对照组相比,HGF能显著提高肺癌PC-9细胞的侵袭能力;与HGF联合吉非替尼组相比,榄香烯、HGF联合吉非替尼作用能明显抑制肺癌PC-9细胞的侵袭能力。Western blot结果显示,与对照组相比,HGF可显著上调p-Met和p-AKT的蛋白水平;与HGF联合吉非替尼组相比,榄香烯、HGF联合吉非替尼作用能明显下调p-Met和p-AKT的蛋白水平(P0.01)。结论:榄香烯可逆转HGF诱导的肺癌PC-9细胞对吉非替尼耐药,其机制可能与抑制HGF活化的c-Met及其下游信号通路有关。     

卡博替尼、克唑替尼和奥西替尼 对小鼠髓源抑制性细胞亚型和凋亡的影响

目的探讨卡博替尼、克唑替尼和奥斯替尼(AZD9291)对小鼠骨髓或脾脏源性抑制细胞(MDSCs)亚群比例、凋亡及增殖的影响。方法免疫磁珠法分离BALB/c小鼠(雄性)骨髓G-MDSCs和M-MDSCs,分别加入卡博替尼(0.01、0.1、0.3和0.9μmol/L)、克唑替尼(0.2、2、20和200μg/mL)或AZD9291(0.01、0.1、1和10μmol/L)培养24 h,采用流式细胞术(FCM)检测3种靶向药物对MDSCs亚型的影响,CCK-8法检测MDSCs增殖;流式细胞分选仪分选小鼠骨髓Gr-1~+CD11b~+细胞,检测Gr-1~+CD11b~+细胞凋亡。结果克唑替尼处理组骨髓粒细胞型MDSCs(G-MDSCs)、单核细胞型MDSCs(M-MDSCs)比例均下降(P0.05);卡博替尼处理组脾脏G-MDSCs比例下降(P0.05);卡博替尼、克唑替尼处理骨髓MDSCs后早期凋亡比例增加(P0.05),AZD9291处理的MDSCs凋亡比例无明显变化。结论卡博替尼和克唑替尼可能通过诱导MDSCs凋亡降低MDSCs比例。     

克唑替尼在ALK阳性中晚期非小细胞肺癌中的疗效观察

目的：探讨克唑替尼治疗晚期间变淋巴瘤激酶(anaplastic lymphoma kinase,ALK)融合基因阳性中晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的近期疗效及毒副反应。方法：回顾性分析43例ALK阳性的中晚期NSCLC患者,服用克唑替尼治疗,服用至病情进展或出现不可耐受的毒副反应,随访12个月,观察疗效。结果：克唑替尼治疗ALK阳性NSCLC的疾病控制率(disease control rate,DCR)为93%(3/43),客观缓解率(objective response rate,ORR)为62%(26/43),中位无进展生存时间(progression free survival,PFS)为7.0个月(95% CI,6.0~8.0月),不良反应主要为消化道症状,其次是谷丙转氨酶升高,视觉障碍,大部分为1~2级。结论：克唑替尼作为NSCLC患者的多靶点靶向治疗,具有良好的疗效及安全性,不良反应轻微。     

克唑替尼治疗非小细胞肺癌的研究

非小细胞肺癌（NSCLC）是肺癌常见类型,早期诊断难度较大,5年生存率低。克唑替尼作为抑制Met/ALK/ROS的ATP竞争性的多靶点蛋白激酶抑制剂,是治疗NSCLC的分子靶向药物,在控制变性淋巴瘤激酶（ALK）阳性NSCLC患者疾病发展中具有重要意义,可有效延长患者无进展生存期,且较化疗毒副反应更小,患者耐受性高,但克唑替尼的耐药性也是临床关注重点。本文主要对克唑替尼治疗NSCLC、克唑替尼药理作用及其临床效果、耐药后治疗等进行综述,旨在为更好的发挥该药治疗效果,为临床治疗NSCLC提供参考依据。     

盐霉素增强吉非替尼诱导人肺腺癌细胞株A549凋亡的作用

 目的：探讨盐霉素联合吉非替尼诱导人肺腺癌细胞株A549凋亡的协同作用。方法：采用MTT的方法检测盐霉素对A549细胞生长的抑制作用;流式细胞术检测盐霉素对A549细胞凋亡和线粒体膜电位的影响;比色法检测caspase-3、-8和-9活性;Western bloting 分析细胞色素C、Bcl-2、p-EGFR、p-Akt和p-ERK蛋白水平。结果：盐霉素与吉非替尼单用均出现不同程度的细胞增殖抑制作用和诱导细胞凋亡作用;而盐霉素与吉非替尼联合作用,能更显著地抑制细胞增殖,且凋亡细胞显著增加（P<0.05）。盐霉素单独作用A549细胞,线粒体膜电位显著下降,细胞内活性氧和Ca2+在短期内显著升高,胞浆细胞色素C含量以及caspase-3、-8和-9活性均显著增加,与对照组比较差异均有统计学意义;吉非替尼单用则主要表现为对p-EGFR、p-Akt和p-ERK蛋白表达的抑制作用,而对胞浆细胞色素C含量以及caspase-3、-8和-9活性影响较少。Western blotting检测发现,联合用药组的Bcl- 2、p-EGFR、p-Akt和p-ERK蛋白表达量明显减少,但是对EGFR、Akt和ERK总蛋白水平无显著影响。结论：盐霉素与吉非替尼联用具有较好的协同作用,可能通过Bcl-2途径及线粒体凋亡途径诱导人肺腺癌A549细胞凋亡,提高A549细胞对吉非替尼的敏感性。     

克唑替尼对ALK阳性非小细胞肺癌脑转移的疗效分析

目的：非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)脑转移是影响NSCLC患者生存期及生存质量的重要因素,本研究将探讨克唑替尼在间变性淋巴瘤激酶(anaplastic lymphoma kinase, ALK)阳性NSCLC脑转移患者中的疗效。方法：筛选20例ALK阳性NSCLC脑转移患者,给予克唑替尼治疗,观察临床疗效。结果：克唑替尼治疗前基线有脑转移患者,颅内疗效部分缓解(partial response,PR)12例,疾病稳定(stable disease,SD)7例,疾病进展(progressive disease,PD)1例。客观缓解率(objective response rate,ORR)为60%,疾病控制率(disease control rate,DCR)为95%。中位无进展生存期(progression free survival,PFS)为6个月(95%CI：3.92~8.08)。结论：克唑替尼治疗ALK阳性NSCLC脑转移患者有效。     

SAPK/JNK信号通路在脑梗死后神经元凋亡中的作用

目的: 观察脑梗死后SAPK/JNK及Bcl-2/Bax信号途径中关键蛋白质的变化,以探寻各种病理因素引发神经元凋亡的分子机制。 方法: SD大鼠36只随机分为脑梗死组和假手术组。光化学法制作大脑皮层局灶缺血梗死模型, 称作光血栓皮层损伤(PCI)。7 d后取梗死灶同侧的大脑皮层行电镜检查,以Western blotting分析p-JNK1、p-JNK2、p-c-Jun、p-ATF-2、total JNK1、total JNK2、Bcl-2和Bax等关键蛋白的水平变化。结果: 光化学法可以成功复制大脑皮层局灶缺血梗死模型。在PCI后7 d,脑梗死组可见到神经元细胞凋亡和广泛的细胞器病变,p-JNK-1、p-JNK-2以及其下游的p-c-Jun、p-ATF-2的水平较假手术组显著升高,Bcl-2/Bax的比值显著降低 (P<0.05)。结论: 脑梗死发生后在较长的一段时间内都存在着以神经元凋亡为表现形式的迟发性神经细胞死亡,而这一过程可能与缺血缺氧性损伤激活了SAPK/JNK信号通路,及调节凋亡相关蛋白(如Bcl-2/Bax)等机制有关。     

纳扎替尼调控miR-940/JAK2/STAT3途径对肺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨纳扎替尼（nazartinib）对肺癌细胞NCI-H2170增殖和凋亡的影响及作用机制。方法：体外培养NCIH2170细胞,采用不同浓度的nazartinib作用于NCI-H2170细胞;转染miR-940抑制剂至NCI-H2170细胞;8 nmol/L的nazartinib作用于转染miR-940抑制剂的NCI-H2170细胞。CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测CyclinD1、Cleaved-caspase-3、p-JAK2和p-STAT3蛋白表达,RT-qPCR检测miR-940表达。结果：(1)1、2、4、8 nmol/L的nazartinib降低了NCI-H2170细胞OD值及细胞中CyclinD1、p-JAK2和p-STAT3蛋白表达（P<0.05）,提高细胞凋亡率及细胞中Cleaved-caspase-3蛋白和miR-940表达（P<0.05）;(2)敲减miR-940降低了NCI-H2170细胞OD值及细胞中CyclinD1、p-JAK2和p-STAT3蛋白表达升高（P<0.05）,而凋亡率及Cle...     

肝细胞生长因子及其受体在肿瘤中的研究进展

肝细胞生长因子是一种多肽生长因子,与其受体结合后,具有强促分裂、组织成形、诱导肿瘤细胞迁移、侵袭以及诱导血管生成等作用。肝细胞生长因子受体c-Met广泛存在于多种正常组织细胞和体内外恶性肿瘤细胞内,肝细胞生长因子与其受体和肿瘤的发生、发展以及肿瘤新生血管形成有密切关系。     

H2S通过MAPK信号通路影响缺血再灌注损伤大鼠回肠上皮细胞凋亡

 目的: 建立大鼠肠缺血再灌注(I/R)损伤模型,研究H₂S对I/R损伤大鼠回肠上皮细胞凋亡、MAPK信号通路表达的影响。方法: 30只雄性Wistar大鼠随机分为假手术(sham)组、I/R组、I/R+NaHS组。建立大鼠肠I/R损伤模型。再灌注前10 min时经大鼠尾静脉注入100μmol/kg NaHS,随后按1 mg·kg^-1·h^-1输注直到再灌注2 h。RT-PCR检测回肠组织ERK、JNK和p38MAPK的mRNA表达,Western blot检测回肠组织p-ERK、p-JNK、p-p38MAPK、p-NF-κB P65的蛋白水平。TUNEL染色检测回肠上皮细胞凋亡。敏感硫电极法测定血、回肠组织匀浆中的H₂S浓度。结果: I/R组的H₂S浓度、ERK、mRNA、p-ERK均低于sham组和I/R+NaHS组,JNK mRNA、p38MAPK mRNA、p-JNK、p-p38MAPK、p-NF-κB P65和凋亡指数高于sham组和I/R+NaHS组。结论: H₂S通过下调ERK的mRNA表达及磷酸化,上调JNK、p38MAPK mRNA的表达,促进JNK、p38MAPK、NF-κB磷酸化,从而减轻I/R损伤大鼠的回肠上皮细胞凋亡。     

槲皮苷通过抑制PI3K/AKT信号通路诱导胃癌SGC7901细胞凋亡

目的:探讨槲皮苷是否通过抑制PI3K/AKT信号通路诱导人胃癌SGC7901细胞凋亡。方法:选取SGC7901细胞作为研究对象,采用MTT法检测槲皮苷对SGC7901细胞的毒性作用并测定IC50值。实验分为对照组(不加药处理)、槲皮苷组(采用200μmol/L槲皮苷处理)、PI3K/AKT通路激动剂胰岛素样生长因子1(IGF-1)组(采用100μg/L IGF-1处理)和槲皮苷+IGF-1组(采用200μmol/L槲皮苷+100μg/L IGF-1共处理)。处理48 h后,采用流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法检测cleaved caspase-3、p-AKT(Ser473)、AKT、p-PI3K(Tyr508)和PI3K的蛋白水平。结果:从100μmol/L开始,随着槲皮苷处理浓度的逐渐升高,SGC7901细胞活力显著降低(P 0. 05),槲皮苷作用48 h的IC50值为275. 40μmol/L。200μmol/L槲皮苷作用SGC7901细胞48 h后,与对照组比较,细胞凋亡率和cleaved caspase-3蛋白水平显著上升(P 0. 05),p-AKT和p-PI3K蛋白水平显著降低(P 0. 05),然而IGF-1与槲皮苷共同作用时,IGF-1可逆转槲皮苷对SGC7901细胞的作用效果。结论:槲皮苷能够诱导胃癌SGC7901细胞凋亡,其作用机制可能与抑制PI3K/AKT信号通路的激活有关。     

DEK表达下调通过抑制胃癌SGC-7901细胞中NF-κB信号途径诱导细胞凋亡

目的:研究DEK表达下调对胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响,并分析其与NF-κB信号途径及凋亡相关蛋白表达的关系。方法:将DEK siRNA和对照siRNA转染胃癌SGC-7901细胞,并将SGC-7901细胞分为未处理组、对照siRNA组及DEK siRNA组。采用实时荧光定量PCR和Western blot检测3组胃癌SGC-7901细胞中DEK mRNA和蛋白的表达;流式细胞术检测3组SGC-7901细胞凋亡的变化;Caspase-Glo-3/9试剂盒检测3组SGC-7901细胞中caspase-3和caspase-9的活性;Western blot技术检测3组SGC-7901细胞中NF-κB信号途径关键调控蛋白p65及凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达。结果:与未处理组和对照siRNA组相比,DEK siRNA组SGC-7901细胞中DEK的mRNA和蛋白表达水平显著下调(P0.05)。DEK siRNA组SGC-7901细胞的早期凋亡率和总凋亡率均显著高于未处理组和对照siRNA组(P0.05)。最为显著的是,DEK siRNA转染细胞后,p65和Bcl-2蛋白表达下调,Bax蛋白表达上调,并伴随caspase-3和caspase-9活性上升。结论:DEK表达下调介导的SGC-7901细胞凋亡可能与NF-κB信号途径密切相关。     

问号钩端螺旋体在体外诱导细胞凋亡及相关信号通路的研究

目的 了解问号钩端螺旋体诱导不同宿主细胞凋亡的作用及相关胞内信号传导通路.方法 建立问号钩体黄疸出血群赖型赖株小鼠单核-巨噬样细胞J774A.1、人脐静脉内皮细胞EVC304和人Ⅱ型肺泡上皮细胞A549感染模型.采用FITC-Annexin V/PI荧光标记流式细胞术检测细胞凋亡或坏死情况.分别采用荧光比色法和Western blot检测感染的J774A.1细胞caspase-3,-8,-9活性和凋亡相关蛋白FADD(Fas-associated death domain)表达水平.结果 问号钩体赖株感染1～6 h后,36.70%～63.70%的J774A.1细胞可H{现明显的早期凋亡,感染12 h时转变为晚期凋亡或坏死为主(53.68%).78.52%问号钩体赖株感染的A549细胞仪出现晚期凋亡或坏死.问号钩体赖株感染的EVC304细胞无细胞凋亡或坏死现象.感染的J774A.1细胞caspase-3和-8最大活性分别为(1453.41±36.07)和(1402.15±59.09)Fu,是未感染细胞的16.38和29.99倍.感染的J774A.1细胞caspase-9虽略有升高为(89.42±5.08)Fu,但明显低于caspase-3和-8(P<0.001).随着感染时间的延长,感染的J774A.1细胞FADD蛋白表达量逐步增加.结论 问号钩体诱导宿主细胞凋亡的效应町因细胞种类不同而有明显差异,FADD→caspase-8→caspase-3是介导问号钩体感染J774A.1细胞凋亡的主要信号通路.     

Wnt/β-catenin通路在动脉粥样硬化发生发展中的作用

Atherosclerosis is a multifactorial process associated with endothelial cell injury and dysfunction, inflammation, oxidative stress, cell proliferation, angiogenesis and so on, all of which play a crucial role in atherosclerosis. Wnt/β-catenin signaling pathway is highly conservative in the development of body, abnormal activation of which is related to types of diseases including cancer. Accumulating studies have shown that Wnt/β-catenin signaling pathway is involved in inflammation, oxidative stress and so on. This article would make a review about the role of Wnt/β-catenin signaling pathway in atherosclerosis based on the pathogenic mechanisms underlying atherosclerosis as mentioned above.     

HGF/c-Met促进大鼠骨髓内皮祖细胞迁移能力

目的探讨肝细胞生长因子(HGF)及其受体c-Met对大鼠骨髓内皮祖细胞(EPCs)迁移能力的影响及其机制。方法提取、培养和鉴定大鼠骨髓EPCs;重组腺病毒载体介导c-Met基因转染EPCs,用real-time PCR、Western blot和CCK8分别检测c-Met的表达和细胞增殖;分别用0、5、10、20和50 ng/m L HGF处理Ad-c-Met-EPCs,并通过Transwell迁移系统检测Ad-c-Met-EPCs的迁移能力;选取适宜浓度的HGF处理EPCs、Ad-GFP-EPCs和Ad-c-MetEPCs,并设置PBS对照组和磷脂酰肌醇3-激酶抑制剂LY294002组(同时加入HGF和10 g/L的LY294002),通过Transwell迁移系统和Western blot分别检测各组细胞的迁移能力、Akt和P-Akt的表达。结果 1)Ad-c-Met-EPCs中c-Met基因与蛋白均为高表达(P0.05)。2)c-Met基因对EPCs的增殖无明显影响。3)HGF在0~50 ng/m L范围内呈浓度依赖性促进Ad-c-Met-EPCs迁移。4)HGF+Ad-c-Met-EPCs组的迁移能力和P-Akt的表达显著高于对照组、HGF+EPCs组、HGF+Ad-GFP-EPCs组和HGF+LY294002+Ad-c-Met-EPCs组(P0.05)。结论 HGF/c-Met能够显著提高EPCs的迁移能力;HGF/c-Met可能通过PI3K/Akt信号通路促进EPCs的迁移。     

干扰HDAC1通过调控STAT3信号通路影响皮肤鳞癌细胞凋亡

目的:探讨干扰组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)对皮肤鳞癌细胞凋亡的影响。方法:皮肤鳞癌细胞A431分别转染HDAC1小干扰RNA(HDAC1 si RNA)和小干扰RNA阴性对照(si RNA NC),RT-PCR和Western blot检测转染后细胞中HDAC1的表达水平,MTT检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测信号转导及转录激活因子3(STAT3)、磷酸化STAT3(p-STAT3)和cleaved caspase-3的蛋白水平。同时用STAT3信号通路抑制剂作用于转染HDAC1 si RNA的A431细胞,MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测STAT3、p-STAT3和cleaved caspase-3的蛋白水平。结果:HDAC1 si RNA能够抑制A431细胞中HDAC1的m RNA和蛋白表达。干扰HDAC1表达后细胞活力和细胞中p-STAT3水平下降,而细胞凋亡率和细胞中cleaved caspase-3水平升高。STAT3信号通路抑制剂作用后,转染HDAC1 si RNA的A431细胞活力及p-STAT3水平下降,细胞凋亡率及细胞中cleaved caspase-3水平升高。结论:干扰HDAC1表达可能通过调控STAT3信号通路抑制皮肤鳞癌细胞活力,促进皮肤鳞癌细胞凋亡。     

Disease-dependent reciprocal phosphorylation of serine and tyrosine residues of c-Met/HGF receptor contributes disease retardation of a transgenic mouse model of ALS

Amyotrophic lateral sclerosis (ALS) is a fatal disease characterized by progressive degeneration of motoneurons. We have demonstrated that hepatocyte growth factor (HGF) attenuates loss of both spinal and brainstem motoneurons of ALS model mice expressing mutated human SOD1^G93A (G93A). This study was designed to assess disease-dependent regulatory mechanisms of c-Met/HGF receptor (c-Met) activation in the facial motoneurons of G93A mice. Using double transgenic mice expressing HGF and mutated SOD1^G93A (G93A/HGF), we showed that phosphorylation of c-Met tyrosine residues at positions 1230, 1234 and 1235 (phospho-Tyr), and thereby its activation, was slightly evident in G93A and highly obvious in G93A/HGF mice (but absent in WT and HGF-Tg mice). Phosphorylation of the c-Met serine residue at position 985 (phospho-Ser), a residue involved in the negative regulation of its activation, was evident in WT and HGF-Tg mice. Protein phosphatase 2A (PP2A), which is capable of dephosphorylating c-Met phospho-serine, is upregulated in the facial motoneurons of G93A and G93A/HGF mice compared with WT and HGF-Tg mice. Thus, c-Met activation is reciprocally regulated by phosphorylation between c-Met serine and tyrosine residues through PP2A induction in the presence or absence of mutant SOD1 expression, and HGF functions more efficiently in ALS and ALS-related diseases.