长链非编码RNA GASL1在乳腺癌组织及细胞系中的表达及作用

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA) GASL1在乳腺癌中的表达及其对乳腺癌癌细胞增殖和凋亡的影响。方法RT-qPCR检测癌组织、癌旁组织、多个乳腺癌细胞系(MDA-MB-231、MDA-MB-468和SK-BR-3)及正常乳腺细胞HBL-100中lncRNA GASL1的表达水平。MCF-7细胞经pc DNA3. 1质粒过表达lncRNA GASL1,或siRNA干扰lncRNA GASL1表达后,运用MTT法检测细胞增殖; caspase-3活力检测试剂盒检测caspase-3活力; Western blot检测Bax和Bcl-2蛋白表达。结果 LncRNA GASL1在乳腺癌组织和乳腺癌细胞中表达水平降低(P 0. 05);过表达lncRNA GASL1可抑制MCF-7的增殖,促进其凋亡(P0. 05);干扰lncRNA GASL1表达可促进MCF-7的增殖,抑制其凋亡(P0. 05)。结论 lncRNA GASL1在乳腺癌中表达水平降低,通过调节乳腺癌细胞增殖和凋亡参与乳腺癌的发生发展。     

磷脂酶C δ1(PLCD1)抑制CAPAN-1和BXPC-3胰腺癌细胞增殖和侵袭迁移

目的探讨转染磷脂酶Cδ1(PLCD1)对胰腺癌细胞生物学行为的影响。方法培养HPDE6C7人正常胰腺导管上皮细胞和CAPAN-1、PANC-1、ASPC-1及BXPC-3胰腺癌细胞,反转录PCR筛选出低表达PLCD1的胰腺癌细胞;将挑选出的CAPAN-1和BXPC-3胰腺癌细胞转染pc DNA3.1-PLCD1,并设置空载体pc DNA3.1转染组。反转录PCR检测CAPAN-1和BXPC-3细胞PLCD1 mRNA的表达水平,Western blot法检测其PLCD1蛋白水平。CAPAN-1和BXPC-3细胞转染PLCD1后,CCK-8法检测细胞增殖活性,流式细胞术分析细胞周期和凋亡情况,Transwell~(TM)法检测细胞的侵袭和迁移能力。结果筛选出低表达PLCD1的CAPAN-1和BXPC-3细胞,转染pc DNA3.1-PLCD1的CAPAN-1和BXPC-3细胞PLCD1 mRNA和PLCD1蛋白水平明显增加;细胞增殖、侵袭和迁移受到抑制;细胞周期阻滞于G0/G1期,细胞凋亡增加。结论转入PLCD1促进CAPAN-1和BXPC-3胰腺癌细胞凋亡并使细胞周期阻滞于G0/G1期,同时抑制其增殖、侵袭和迁移。     

cyclin G2在乳腺病变组织中表达及其对MCF-7细胞的作用

目的 研究细胞周期蛋白G2(cyclin G2)在乳腺病变中的表达及意义,探讨cyclin G2对乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响.方法 用免疫组化SP法检测cyclin G2在人乳腺不同病变中的蛋白表达,并进行显微图像分析;利用阳离子介导的脂质体法转染pDsRed2-cyclin G2融合基因至人乳腺癌细胞系MCF-7细胞中,流式细胞术检测MCF-7细胞的凋亡率.结果 (1)cyclin G2在乳腺增生症中的阳性表达率及表达强度与正常乳腺组织相当,而在导管原位癌(ductal carcinoma in situ,DCIS)以及浸润性导管癌(invasive ductal carcinoma,IDC)中表达逐渐下降,差异有统计学意义(P<0.05).(2)转染了重组质粒pDsRed2-cyclin G2的MCF-7细胞凋亡率明显增高(P<0.01).结论 cyclin G2蛋白表达随着乳腺疾病恶性程度增加而降低,外源性转染cyclin G2至MCF-7细胞中可促进其凋亡,抑制细胞增殖.     

过表达人细胞S期激酶相关蛋白2(Skp2)促进MCF-7乳腺癌细胞生长及S期细胞增加

目的构建带FLAG标签的细胞S期激酶相关蛋白2(Skp2)基因真核表达载体pc DNA3-FLAG-Skp2并检测其对MCF-7乳腺癌细胞生长及细胞周期的影响。方法采用反转录PCR从MDA-MB-231乳腺癌细胞中扩增Skp2基因,构建重组真核表达载体pc DNA3-FLAG-Skp2。酶切及测序鉴定重组质粒正确后,脂质体介导转染至MCF-7乳腺癌细胞中。采用Western blot法检测FLAG-Skp2的表达,Alamar blue比色法绘制细胞生长曲线,流式细胞术检测细胞周期。结果 PCR扩增片段与预期片段大小相符,测序结果与Gen Bank结果一致。Western blot结果显示质粒转染48 h后,细胞成功表达融合蛋白FLAG-Skp2。过表达Skp2的MCF-7乳腺癌细胞较对照组生长速度明显加快,S期细胞显著增多。结论成功构建人Skp2真核表达载体pc DNA3-FLAG-Skp2。过表达Skp2的MCF-7细胞生长加快,S期细胞增多。     

原钙黏蛋白10(PCDH10)抑制BXPC-3胰腺癌细胞的增殖以及侵袭和迁移

目的探讨原钙黏蛋白10(PCDH10)在胰腺癌细胞株中的表达情况以及生物学功能。方法利用反转录PCR检测PCDH10在CAPAN-1、PANC-1、ASPC-1、BXPC-3胰腺癌细胞以及HPDE6-C7人正常胰腺导管上皮细胞的表达情况。将质粒pc DNA3.1-PCDH10与质粒pc DNA3.1-vector通过脂质体转染至BXPC-3人胰腺癌细胞,转染后通过反转录PCR检测BXPC-3细胞中PCDH10 mRNA的水平、Western blot法检测其蛋白水平;CCK-8法和克隆形成实验检测细胞增殖情况,膜联蛋白Ⅴ-碘化丙啶双标记结合流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell~(TM)侵袭和迁移实验、划痕实验检测BXPC-3细胞的侵袭和迁移。结果与正常胰腺导管上皮细胞相比较,PCDH10在CAPAN-1、PANC-1、BXPC-3胰腺癌细胞中表达明显下调。反转录PCR及Western blot法检测结果表明,转染pc DNA3.1-PCDH10的BXPC-3实验组细胞PCDH10表达明显高于转染pc DNA3.1-vector的对照组细胞。与对照组相比,过表达PCDH10后,BXPC-3细胞的增殖速度明显降低、克隆形成数明显减少;细胞凋亡率明显增加,细胞的侵袭、迁移能力明显降低。结论 PCDH10在胰腺癌细胞中表达下调,过表达PCDH10能够明显抑制BXPC-3胰腺癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力,并且诱导BXPC-3细胞凋亡。     

13-MTD通过激活MAPK途径和抑制Akt存活途径诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡

目的： 探讨侧链饱和脂肪酸13-甲基十四烷酸(13-MTD)诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的作用机制。方法：140 mg/L 13-MTD处理体外培养的人乳腺癌MCF-7细胞和人乳腺正常细胞,采用流式细胞仪检测技术观察13-MTD对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响,免疫印迹法检测13-MTD处理后细胞内c-Jun氨基末端激酶(JNK）,p38, Fas 相关死亡结构域蛋白(FADD)和丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Akt)等蛋白磷酸化变化。结果：流式细胞仪实验结果显示13-MTD能有效地诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡,但不引起正常人乳腺上皮细胞凋亡。免疫印迹检测显示经13-MTD处理后的人乳腺癌MCF-7细胞JNK和p38磷酸化蛋白明显增加,Akt磷酸化蛋白明显减少。结论：13-MTD是一个新的安全高效抗肿瘤药物,其作用机制可能是通过激活MAPK途径和抑制Akt存活途径来诱导肿瘤细胞凋亡。     

VEGF基因特异性siRNA转染后对人乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨利用干扰RNA（RNAi）抑制血管内皮生长因子（VEGF）基因表达对乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的影响。方法：设计针对VEGF基因的小干扰RNA（siRNA）,合成DNA模板,体外转录siRNA。以脂质体转染法将双链siRNA导入MCF-7细胞后,用MTT比色法检测siRNA对MCF-7细胞增殖的影响。通过Hoechst33258染色观察MCF-7细胞的凋亡。用流式细胞术检测细胞周期的改变,RT-PCR检测VEGF mRNA表达的变化,免疫细胞化学法检测VEGF蛋白的表达。结果：所设计的两个靶位点siRNA,均能有效地抑制MCF-7细胞的增殖,诱导细胞凋亡,使细胞周期阻滞于G0/G1期,VEGFmRNA及其蛋白的表达明显减少;而作为阴性对照的错义序列组siRNASCR则没有上述效应。结论：体外转录合成的siRNA可抑制MCF-7细胞中VEGF基因的表达,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。     

VDUP1对乳腺癌细胞MCF-7增殖及迁移的影响

目的:探讨过表达/沉默维生素D3上调蛋白1(vitamin D3 up-regulated protein 1,VDUP1)基因对人乳腺癌细胞系MCF-7增殖和迁移能力的影响及相关作用机制。方法:通过基因过表达/干扰技术上调/下调乳腺癌细胞系MCF-7中VDUP1基因的表达;实时荧光定量PCR检测细胞中VDUP1的mRNA表达水平;CCK-8法、Brd U实验和Transwell细胞迁移实验分别用于检测细胞增殖和迁移能力;Western blot检测细胞中Akt、p-Akt、GSK3β和p-GSK3β的蛋白水平。结果:基因过表达/干扰技术可上调/下调乳腺癌细胞系MCF-7中VDUP1基因的表达;过表达VDUP1基因后,MCF-7的细胞活力、DNA合成和细胞迁移能力显著降低(P0.05),而沉默VDUP1基因后,MCF-7的细胞活力、DNA合成和细胞迁移能力则显著升高(P0.05)。此外,过表达VDUP1基因可下调p-Akt和p-GSK3β的蛋白水平(P0.05),而沉默VDUP1基因的结果则相反。结论:改变VDUP1基因表达水平可影响MCF-7细胞的增殖和迁移能力,其作用机制可能与Akt/GSK3β信号通路有关。     

溶瘤性单纯疱疹病毒G47Δ调节HER2促进人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的机制研究

目的探讨溶瘤性单纯疱疹病毒G47Δ调节HER2促进人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的机制研究。方法用不同滴度G47(MOI=0.00,MOI=0.01,MOI=0.1)处理乳腺癌MCF-7/HER2过表达组(ER+,HER2-high)、MCF-7/HER2低表达组(ER+,HER2-low)和MCF-7对照组(ER+)细胞,CCK-8法检测检测细胞成活率;流式细胞术检测细胞凋亡率;Hoechst33258染色法检测乳腺癌细胞凋亡形态;Western blot检测溶瘤性单纯疱疹病毒G47Δ作用后乳腺癌细胞中HER2和Cleaved-caspase-3凋亡蛋白表达。结果随着溶瘤性单纯疱疹病毒G47Δ给药剂量的增大,MCF-7/HER2过表达组、MCF-7/HER2低表达组和MCF-7对照组细胞存活率明显降低,细胞凋亡率显著上升,HER2和Cleaved-caspase-3凋亡蛋白表达明显上升,差异有统计学意义(P0.05)。与病毒G47ΔMOI=0.01处理MCF-7对照组相比,MCF-7/HER2低表达组细胞存活率显著升高,细胞凋亡率显著下降,HER2和Cleaved-caspase-3凋亡蛋白表达明显下降;MCF-7/HER2过表达组存活率显著降低,细胞凋亡率显著上升,HER2和Cleaved-caspase-3凋亡蛋白表达明显上升;与病毒G47ΔMOI=0.1处理MCF-7对照组相比,MCF-7/HER2低表达组细胞存活率显著升高,细胞凋亡率显著下降,HER2和Cleaved-caspase-3凋亡蛋白表达明显下降;MCF-7/HER2过表达组存活率显著降低,细胞凋亡率显著上升,HER2和Cleaved-caspase-3凋亡蛋白表达明显上升,差异有统计学意义(P0.05)。结论溶瘤性单纯疱疹病毒G47Δ有效诱导HER2过表达乳腺癌MCF-7细胞发生细胞凋亡作用;溶瘤性单纯疱疹病毒G47Δ可以呈浓度依赖性地促进HER2蛋白降解,诱导乳腺癌MCF-7细胞发生凋亡。     

乳腺癌细胞中PELP1基因表达与启动子区CpG岛甲基化相关性

目的建立针对PELP1基因启动子区CpG岛的甲基化特异性PCR(Methylation specific PCR,MSP)检测方法,分析乳腺癌细胞中PELP1基因表达与启动区CpG岛甲基化的相关性。方法设计针对PELP1基因启动子区的MSP引物组,以甲基化和非甲基化DNA为模板验证MSP引物的特异性,建立针对PELP1基因启动子区的MSP检测方法。以DNA甲基转移酶抑制剂5'-氮杂-脱氧胞苷磷酸(5'-Aza-d C)分别处理MCF-7乳腺癌细胞、MCF-10正常乳腺导管上皮细胞,采用MSP检测PELP1基因启动子区甲基化状态变化,采用Western blot检测蛋白表达。结果针对PELP1基因启动子区设计的MSP引物组特异性良好,甲基化特异性引物仅在甲基化DNA模板获得阳性扩增条带,非甲基化引物仅在非甲基化DNA模板获得阳性条带。MCF-7乳腺癌细胞中PELP1基因启动子区呈非甲基化状态,MCF-10正常乳腺导管上皮细胞中PELP1基因启动子区呈甲基化状态,MCF-10细胞中PELP1蛋白表达水平为MCF-7细胞的1/16(P0.05)。采用5'-Aza-dC去除MCF-10细胞PELP1基因启动子区甲基化后,PELP1蛋白表达水平上升了9.7倍(P0.05)。结论所建立的PELP1基因启动子区MSP检测方法特异性良好,去甲基化可能是导致乳腺癌细胞中PELP1基因过表达的重要机制。     

Survivin-2B诱导人乳腺癌细胞凋亡的初步研究*

 目的：探讨存活蛋白2B (survivin-2B)在诱导肿瘤细胞凋亡中的分子机制。方法：将survivin-2B基因插入真核表达载体pCDNA3.1,得到重组载体pCDNA3.1-survivin-2B。将空载体pCDNA3.1及重组载体pCDNA3.1-survivin-2B分别转染人乳腺癌细胞株MCF7,转染后48 h,用annexin V/7-AAD染色法分析细胞凋亡情况,利用碘化丙啶染色法分析转染对细胞周期的影响;同时提取总RNA并反转录成cDNA,进行多重聚合酶链反应。利用GeXP多基因表达分析系统检测21个与肿瘤相关基因的表达情况。结果：过表达survivin-2B基因导致MCF7细胞凋亡与细胞周期阻滞,并引起8个基因表达上调,2个基因表达下调。变化最大的为醛脱氢酶4家族成员A1（ALDH4A1）,表达下降48%;变化最小的为胞质分裂调控蛋白1（PRC1）,上调1.08倍。结论：Survivin-2B能够诱导细胞凋亡与细胞周期G2/M期阻滞,并引起部分肿瘤相关基因的表达变化。     

ER-α36过表达促进人乳腺癌MCF-7细胞侵袭转移能力

 目的 探讨雌激素受体新亚型ER-α36过表达对人雌激素受体阳性乳腺癌细胞侵袭转移潜力的影响及其机制。方法 以野生型乳腺癌细胞系MCF-7/W、转染pcDNA3.1空载体的细胞系MCF-7/pcDNA3.1和转染重组载体pcDNA3.1/ER-α36的细胞系MCF-7/ER-α36为研究对象,分别用细胞粘附实验观测肿瘤细胞与细胞外基质的粘附能力、Transwell侵袭小室实验检测细胞侵袭转移能力,用Western blot法检测NF-κB P65、MMP-2、MMP-9和TIMP-1蛋白表达。结果 与MCF-7/W组细胞相比,MCF-7/ ER-α36细胞的2h细胞粘附率和24h穿膜细胞数显著增加(P<0.05)。NF-κB P65、MMP-2、MMP-9和TIMP-1蛋白的相对表达量及MMP-2/TIMP-1、MMP-9/TIMP-1显著增高（P<0.05）。结论 ER-α36过表达能促进ER-α66阳性乳腺癌细胞的体外粘附能力和侵袭转移潜力,其机制可能与通过NF-κ B途径提高MMP-2、MMP-9的表达水平及打破二者与TIMP-1之间的平衡有关。     

阿片类生长因子受体抑制雄激素依赖性前列腺癌LNCaP细胞的生长

目的:观察阿片类生长因子受体(opioid growth factor receptor,OGFr)对雄激素依赖性前列腺癌LNCaP细胞活力的影响.方法:将LNCaP细胞随机分为非转染组、空白质粒组(转染pcDNA3.1空白质粒)和OGFr质粒组(转染表达质粒pcDNA3.1-OGFr),RT-qPCR和Western...     

shRNA表达质粒抑制耐阿霉素的人乳腺癌细胞株(MCF-7/AdrR)绿色荧光蛋白表达的研究

目的：探讨靶向增强型绿色荧光蛋白（EGFP）小发夹结构RNA（Short hairpin RNA，shRNA）对耐阿霉素的人乳腺癌细胞（MCF-7／AdrR）中EGFP基因表达的抑制作用。方法：构建针对EGFP基因的shRNA表达载体，与pcDNA3．0 EGFP质粒共转染MCF-7／AdrR细胞，分别用激光共聚焦扫描显微镜（Laser confocal scanning microscope，LCSM）和流式细胞术检测干扰效果。结果：瞬时共转染pSilencer^TM3．1-H1 neo EGFP shBNA质粒和pcDNA3．0 EGFP质粒后，荧光显微镜观察结果显示MCF-7／AdrR细胞中发出荧光的细胞数量减少，荧光强度明显降低。流式细胞术检测阳性细胞百分率降低至35．6％，差异有显著性。结论：靶向EGFP的shRNA表达质粒能有效而特异抑制EGFP在MCF-7／AdrR中的表达，MCF-7／AdrR细胞中存在RNA干扰现象，为进一步利用RNA干扰技术逆转乳腺癌多药耐药性的研究奠定基础。     

KLF4对结直肠癌细胞生长抑制及化疗敏感性的影响

目的:探讨Krüppel样因子4(KLF4)对结直肠癌细胞活力、凋亡及顺铂化疗敏感性的影响。方法:Western blot法检测KLF4在结直肠癌Caco2、SW480和HCT116细胞中的表达。将SW480细胞分为pc DNA3. 1组(转染pc DNA3. 1空质粒)、pc DNA3. 1-KLF4组(转染构建的pc DNA3. 1-KLF4过表达质粒)和pc DNA3. 1-KLF4+顺铂组(转染pc DNA3. 1-KLF4 48 h后用1 mg/L顺铂处理细胞48 h),Western blot检测KLF4、p-IκBα、细胞周期素D1(cyclin D1)和生存素(survivin)的蛋白水平; CCK-8法检测各组细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡率; DCFH-DA探针检测活性氧簇(ROS)含量。结果:KLF4在结直肠癌细胞中的表达均显著低于在人结肠黏膜上皮NCM460细胞的表达(P 0. 05)。与pc DNA3. 1组相比,pc DNA3. 1-KLF4组的KLF4蛋白表达显著增高(P 0. 05),细胞活力及cyclin D1和survivin的蛋白表达均显著降低,细胞凋亡率、ROS含量及p-IκBα的蛋白表达均显著增高;而pc DNA3. 1-KLF4+顺铂组细胞活力及cyclin D1和survivin的蛋白表达均显著低于pc DNA3. 1-KLF4组,细胞凋亡率、ROS含量及p-IκBα的蛋白表达均显著高于pc DNA3. 1-KLF4组(P 0. 05)。结论:上调结直肠癌细胞KLF4基因表达可降低肿瘤细胞活力,诱导细胞凋亡,增强顺铂化疗敏感性,其机制可能与提高细胞内ROS含量及下调NF-κB信号关键分子IκBα的磷酸化水平有关。     

RNA干扰UBQLN1基因表达对乳腺癌细胞增殖、凋亡、侵袭的影响及机制研究

目的：观察抑制泛素1（UBQLN1）基因表达对乳腺癌细胞增殖、凋亡、侵袭的影响。方法： Western blot检测UBQLN1在乳腺癌T47D、BT549、MDA-MB-231、MCF7细胞中相对于正常乳腺上皮细胞MCF-10A的蛋白表达;用Lipofectamine^TM2000将干扰UBQLN1表达的siRNA（UBQLN1-siRNA）转染MDA-MB-231细胞,同时转染阴性对照组（NC组）,并设置空白对照组,收集转染48 h的细胞Western blot检测其UBQLN1的蛋白表达;CCK8法检测UBQLN1-siRNA转染24 h、48 h和72 h的细胞活力;流式细胞仪及Transwell小室分别检测UBQLN1-siRNA转染48 h的细胞凋亡率及侵袭能力;Western blot检测促凋亡蛋白p53和抑凋亡蛋白Survivin、侵袭相关蛋白基质金属蛋白酶2（MMP-2）和基质金属蛋白酶9（MMP-9）及STAT3和磷酸化的信号转导与转录因子3(p STAT3)的蛋白表达。结果：与MCF-10A细胞比较,UBQLN1在T47D、BT549、MDA-MB-231、MCF7乳腺癌细胞中的表达均显著升高（P<0.01）;与NC组比较,UBQLN1-siRNA组UBQLN1的蛋白表达显著降低,24 h、48 h和72 h的细胞活力均显著降低,细胞凋亡率显著升高,细胞侵袭能力显著降低,Survivin、MMP-2、MMP-9和p-STAT3的蛋白表达均显著降低,p53蛋白表达显著升高（P<0.01）,三组间STAT3的蛋白表达差异无统计学意义（P>0.05）。结论：抑制乳腺癌细胞中UBQLN1基因表达可降低乳腺癌细胞活力和侵袭能力,并诱导细胞凋亡和下调STAT3信号通路。     

欧前胡素通过上调细胞表面死亡受体5的数量增强TRAIL对乳腺癌细胞的杀伤活性

目的:探讨中药活性成分欧前胡素对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)的协同抗乳腺癌效应及分子机制。方法:将人乳腺癌细胞T-47D和MCF-7按对照组、欧前胡素组、TRAIL组、欧前胡素+TRAIL组及欧前胡素+TRAIL+死亡受体5(DR5)siRNA组进行分组,MTT法检测T-47D和MCF-7细胞活力,流式细胞术检测T-47D细胞凋亡和线粒体膜电位,Western blot实验和流式细胞术检测T-47D细胞表面DR5的表达水平及caspase-8、caspase-3的活化水平。结果:MTT实验结果显示,欧前胡素联合用药能显著提高各浓度TRAIL对T-47D和MCF-7细胞的杀伤活性;流式细胞术和Western blot结果显示欧前胡素处理能显著提高T-47D细胞DR5的表达水平和活性氧簇产生水平(P0.05)。另外,流式细胞术和Western blot结果还显示,欧前胡素联合用药能显著增强TRAIL促进T-47D细胞线粒体膜电位损伤、caspase-8和caspase-3活化及凋亡的作用。结论:欧前胡素通过上调乳腺癌细胞DR5的表达水平发挥对TRAIL的协同抗乳腺癌效应。     

STIM1 对乳腺癌细胞存活与增殖的影响及初步机制分析

目的：探讨STIM1对乳腺癌细胞存活与增殖的影响及初步机制分析。方法：以正常乳腺上皮细胞MCF-10A作为对照,Western blot检测乳腺癌 MCF7、HCC1569、MDA-MB-231、BT549细胞中STIM1的蛋白表达;将STIM1的靶向siRNA序列（STIM1-siRNA组）转染MDA-MB-231细胞,并设置阴性对照组和空白对照组,转染48 h后检测各组细胞STIM1的蛋白表达;MTT法检测转染24、48和72 h的细胞活力;流式细胞术检测转染48 h的细胞凋亡率;RT-PCR检测IL-6 和TNF-α 的mRNA表达;Western blot检测增殖相关蛋白细胞增殖核抗原（PCNA）、凋亡蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（Caspase3）及STAT3和磷酸化的信号转导与转录因子3(p-STAT3)的蛋白表达。结果：乳腺癌细胞中STIM1的蛋白表达均显著高于在MCF-10A细胞表达（P<0.05）;转染STIM1的siRNA后MDA-MB-231细胞中STIM1的蛋白表达显著低于空白对照组（P<0.05）;与空白对照组比较,STIM1-siRNA 组细胞在48 h和72 h的细胞活力显著降低,在48 h的细胞凋亡率显著升高,IL-6 和TNF-α 的mRNA表达显著降低,PCNA、Bcl-2和p-STAT3的蛋白表达显著降低,Bax和Caspase3蛋白表达显著升高。结论：STIM1基因在乳腺癌细胞高表达,通过RNA干扰抑制其表达可降低癌细胞活力,诱导细胞凋亡、提高免疫及下调STAT3信号。     

Differential regulation of WNT2 and WNT2B expression in human cancer.

WNT2 is one of proto-oncogenes to activate the beta-catenin - TCF signaling pathway. WNT2B is a paralogue of WNT2, which encodes WNT2B1 and WNT2B2 isoforms due to alternative splicing using alternative promoter. Here, regulation of WNT2, WNT2B1, and WNT2B2 mRNAs in MCF-7 cells (breast cancer), NT2 cells (teratocarcinoma), and MKN45 cells (gastric cancer) were investigated. WNT2B2, but not WNT2 and WNT2B1, was expressed in MCF-7 cells. beta-estradiol (100 nM) induced a transient up-regulation of WNT2 in MCF-7 cells, and also induced down-regulation of WNT2B2. WNT2B2, but not WNT2B1, was expressed in NT2 cells, and WNT2 was slightly expressed in NT2 cells. Retinoic acid (10 microM) induced a transient up-regulation of WNT2 in NT2 cells. WNT2B2, but not WNT2 and WNT2B1, was slightly expressed MKN45 cells, and tumor necrosis factor alpha did not affect expression of WNT2, WNT2B1, and WNT2B2 mRNAs in MKN45 cells. This is the first report on differential regulation of WNT2, WNT2B1, and WNT2B2 mRNAs in human cancer cell lines. Up-regulation of WNT2 mRNA by estrogen might play a key role in some cases of human breast cancer through activation of the beta-catenin - TCF signaling pathway.     

二甲双胍联合紫杉醇对人乳腺癌细胞凋亡及AMPK信号通路的影响

目的:探索二甲双胍联合紫杉醇对乳腺癌MCF-7细胞活力和凋亡的影响及其可能的机制。方法:采用不同浓度(2、5、10、20、40和80 mmol/L)二甲双胍作用于体外培养的MCF-7细胞,MTT法检测细胞的活力。采用2 mmol/L二甲双胍和2. 4 mg/L紫杉醇单独或联合处理细胞,并加入一磷酸腺苷活化的蛋白激酶(AMPK)信号转导通路抑制剂compound C。实验分为对照组、二甲双胍组、紫杉醇组、联合组和联合+compound C组;流式细胞术检测细胞的凋亡率,采用RT-qPCR和Western blot法检测Bax、Bcl-2和caspase-3的mRNA和蛋白表达量,Western blot检测AMPK和P21蛋白的表达量。结果:不同浓度二甲双胍(2、5、10、20、40和80 mmol/L)显著抑制乳腺癌细胞的活力(P 0. 05),且具有一定浓度依赖性。与对照组相比,2 mmol/L二甲双胍和2. 4 mg/L紫杉醇单独或联合均可显著抑制细胞活力并诱导其凋亡(P 0. 05),显著下调Bcl-2水平(P 0. 05),上调Bax和caspase-3水平(P 0. 05),促进AMPK和P21蛋白表达。联合使用的效果优于单独使用。加入AMPK抑制剂可削弱此作用。结论:二甲双胍联合紫杉醇可抑制乳腺癌MCF-7细胞活力,诱导其凋亡。此作用与激活AMPK信号转导通路并调节细胞凋亡信号通路有关。