糖调节蛋白78在大鼠肠源性内毒素血症促进肝硬化形成中的作用

目的:探讨糖调节蛋白78(GRP78)在大鼠肠源性内毒素血症(IETM)促进肝硬化形成过程中的作用。方法:51只雄性Wistar大鼠随机分为肝硬化模型4周组、6周组、8周组及同期正常对照组。采用复合致病因素法诱导大鼠肝硬化,HE染色和VG染色分别观察肝损伤和肝纤维化情况;RT-PCR法和免疫组化法分别检测肝组织GRP78mRNA及蛋白表达;同时测定血浆中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、内毒素、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、同型半胱氨酸(HCY)以及肝组织匀浆中TNF-α、丙二醛(MDA)、Ⅲ型前胶原(PⅢP)水平。结果:(1)随病程进展,各模型组血浆中ALT、内毒素、TNF-α、HCY以及肝组织中GRP78mRNA、蛋白表达水平、MDA、TNF-α、PⅢP含量和肝组织纤维化指数均逐渐升高并显著高于正常对照组(P<0.05)。(2)血浆中升高的内毒素水平分别与GRP78蛋白、血浆MDA和HCY水平以及肝纤维化指数呈显著正相关(P<0.01);表达增高的GRP78蛋白分别与血浆MDA和HCY水平以及肝纤维化指数呈显著正相关(P<0.01)。结论:GRP78可能在肝硬化形成过程中发挥重要作用;内质网应激很可能是IETM促进肝纤维化乃至肝硬化发生的重要机制。     

内毒素血症在大鼠肝硬化发生发展中的作用

目的:探讨内毒素血症在大鼠肝硬化发生发展过程中的作用。方法:采用饮水中加入硫代乙酰胺(TAA),另一组同时小剂量注射脂多糖(LPS),以观察其对肝硬化形成的影响。结果:TAA可使动物血浆内毒素水平与肝脏胶原蛋白含量明显增高,且二者存在直线相关;血浆和肝组织中肿瘤坏死因子α(TNFα)、内皮素-1(ET-1)、一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)含量均增加,而且血浆中各成分含量均与内毒素血症呈正相关;在TAA+LPS组动物唯有TNFα浓度和胶原蛋白含量明显高于TAA组。结论:在肝硬化形成过程中内毒素可能主要通过激活枯否细胞分泌TNFα发挥其作用,但ET-1、NO和自由基也参与其中。     

外泌体在肝癌前病变发生发展中作用的研究进展

肝癌前病变阶段外泌体分泌增加,通过发挥其细胞间通讯作用,可以直接推动疾病从炎性反应发展成癌。外泌体通过影响血管生成、上皮细胞-间充质转化和免疫调节参与肝癌前病变的发生发展,可能成为肝癌前病变新的治疗靶点,为肝癌前病变的诊断和治疗提供新思路。     

巨噬细胞在肾脏损伤中的作用

Macrophages have been identified to play an important role in acute and chronic renal injury through exerting multiple biological effects. This review focus on the origin of macrophages in kidney, mechanism of renal injury and strategy of inhibiting macrophage infiltration.     

内毒素诱发肝硬化大鼠发生肝性脑病的实验研究

目的：观察外源性内毒素诱发肝硬化大鼠发生肝性脑病的可能性及可能机制。方法：采用腹腔内小剂量内毒素一次性注射（３００μｇ／１００ｇＢＷ）诱发肝硬化大鼠发生肝性脑病。结果：小剂量内毒素腹腔内注射可以诱发肝硬化大鼠发生肝性脑病。内毒素注射后,动物一般行为状态及脑电图皆有明显变化,与其他肝性脑病模型或肝性脑病病人类似。同时,血氨和胰高血糖素水平显著升高。血浆内毒素含量与血氨、血胰高血糖素含量之间及血氨与务     

巨噬细胞极化在心血管疾病中的作用

心血管病,尤其是急性心肌梗死和收缩性心功能衰竭已成为西方国家患者死亡的主要原因,在发展中国家也呈明显上升趋势.缺血性的心脏病已经成为普遍现象,是引起病人死亡的主要原因.尽管早期血管再建和药物治疗能够明显提高心肌梗死后的生存率,但仍有大量病人发展成心力衰竭.巨噬细胞除了具有免疫防御和维持组织稳态功能,还在心肌梗死诱导的病理生理过程中发挥重要作用.巨噬细胞的亚群已被证实参与心血管疾病(动脉粥样硬化、心肌梗死、心肌缺血、心肌纤维化)的发生和发展,在心脏损伤和心肌重塑中有重要作用,研究基于巨噬细胞调控治疗心血管疾病的治疗策略很有价值.     

葡萄糖调节蛋白78在复合致病因素诱导的大鼠肝肺综合征中的作用

目的:探讨葡萄糖调节蛋白78(GRP78)在大鼠肝肺综合征发病中的作用及其与肠源性内毒素血症的关系。方法:Wistar大鼠被随机分为4周组、6周组和8周组3个时点,采用复合致病因素法制备大鼠肝硬化合并肝肺综合征(HPS)模型,并设标准饮食的正常大鼠作为对照组。采用HE染色观察肺组织病理变化;测定血浆中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、内毒素、TNF-α和肺组织匀浆中的TNF-α、丙二醛(MDA)的含量。Westernblotting和RT-PCR法检测肺组织标本中GRP78蛋白和mRNA表达水平。结果:模型组动物血浆内毒素含量随病程进展逐渐增高;肺组织中GRP78蛋白和mRNA的表达随HPS进展逐步增高,且各时点间的表达有显著差异(P<0.05);血浆内毒素与升高的GRP78蛋白水平间呈高度正相关(P<0.01)。血浆ALT和TNF-α含量以及肺组织匀浆中TNF-α和MDA含量随病程进展逐渐增高;血浆内毒素含量以及肺组织中GRP78蛋白分别与血浆TNF-α和肺组织中TNF-α、MDA的含量呈高度正相关(P<0.01)。在各时点,模型组动物血浆TNF-α含量、肺组织匀浆TNF-α、GRP78蛋白及mRNA均显著高于正常对照组(P<0.05)。在第6周和第8周,模型组动物血浆内毒素和ALT的含量以及肺组织匀浆中MDA的含量均显著高于正常对照组(P<0.05)。结论:肝硬化时形成的肠源性内毒素血症作为内质网应激的重要应激原,通过氧化应激激活肺组织的内质网应激反应导致GRP78表达增高,很可能是HPS发病的重要机制。     

葡萄糖调节蛋白78促进肝硬化大鼠心肌细胞凋亡及其机制

 目的： 探讨葡萄糖调节蛋白78/免疫球蛋白重链结合蛋白(GRP78/BiP)是否促进肝硬化大鼠心肌细胞凋亡及其发生机制。方法： 采用复合致病因素法建立肝硬化大鼠模型,在4周、6周和8周分别取材。实验1：取心脏称重并测量左室壁厚度,计算左室壁厚度与心脏重量比值及心脏指数。实验2： TUNEL法观察心肌细胞凋亡情况;免疫组化方法检测心肌组织中GRP78/BiP蛋白以及凋亡相关蛋白CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白/生长停滞及DNA诱导蛋白153（CHOP/GADD153）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12（caspase-12）、核转录因子κB p65（NF-κB p65）、B细胞淋巴瘤/白血病蛋白2（Bcl-2）的表达。结果： 随肝硬化病程进展,左室壁厚度与心脏重量比值以及心脏指数逐渐增加,8周组增加显著(P<0.05);心肌细胞凋亡指数、CHOP/GADD153和caspase-12阳性蛋白表达指数逐渐升高,8周组差异显著(P<0.05);NF-κB p65和Bcl-2阳性蛋白表达指数呈一致性变化,在4周组较其它组明显增高(P<0.05); GRP78/BiP蛋白阳性表达指数与心肌细胞凋亡指数、CHOP/GADD153、caspase-12蛋白阳性表达指数呈显著正相关,CHOP/GADD153与NF-κB p65、Bcl-2蛋白阳性表达指数呈显著负相关。结论： GRP78高表达在内质网应激介导的肝硬化心肌病发病中可能发挥重要作用。     

巨噬细胞极化及其在感染性疾病中的作用

巨噬细胞作为重要的固有免疫细胞和抗原提呈细胞,在机体抗感染免疫中发挥着重要作用.在不同的微环境下,巨噬细胞可发生表型和功能极化从而呈现出不同的功能,一般将经典途径和替代途径活化的巨噬细胞(M1型和M2型)作为巨噬细胞功能可塑性调变的两个极端.随着研究的深入,巨噬细胞极化类型的诱导及特点也逐渐被揭示,其在微生物感染免疫中的作用日益受到重视.     

巨噬细胞极化在过敏性哮喘中的作用

过敏性哮喘(allergic asthma,AA)是常见的慢性呼吸道疾病,严重危害人们的身体健康.巨噬细胞是存在于肺组织中最丰富的免疫细胞群,参与了过敏性哮喘的发病过程.在受到不同变应原刺激后,巨噬细胞表现出不同的活化状态,并发挥不同的免疫功能,这一过程称之为巨噬细胞极化(mac-rophge polarization).这里主要讨论巨噬细胞及巨噬细胞极化在过敏性哮喘发病过程中的作用,以及巨噬细胞极化过程中表观遗传学变化的新概念,包括miRNAs、DNA甲基化和组蛋白修饰等,它们可能通过调节细胞信号和标志基因的表达来调控巨噬细胞极化,从而影响了过敏性哮喘发病过程,为过敏性哮喘的免疫治疗策略提供了新的见解.     

肝纤维化大鼠肝细胞内质网形态及GRP78表达的研究

目的:观察四氯化碳(CCl4)致大鼠肝纤维化过程中内质网形态及内质网应激标志性蛋白——葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的表达变化,探讨内质网应激在肝纤维化发病机制中可能的作用。方法:雄性Wistar大鼠皮下注射CCl4制备肝纤维化模型,分别在4周及8周处死大鼠测定肝脏指数、血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)活性,观察肝组织病理改变和肝细胞内质网形态,免疫组化和real-timePCR分别检测肝组织GRP78蛋白及mRNA表达变化。结果:肝纤维化组大鼠肝脏指数、血清ALT和AST活性显著高于正常对照组(P<0.01),肝纤维化明显,电镜下见肝细胞内质网扩张,数量明显减少;肝细胞胞浆中GRP78蛋白表达量及mRNA表达量较正常组显著增加(P<0.01)。结论:在CCl4诱导的肝纤维化发生过程中肝细胞内质网形态有明显损伤性变化,内质网应激蛋白GRP78蛋白及基因表达水平明显增加,提示内质网应激参与肝纤维化发生发展。     

Trimethylamine-N-oxide,as a risk factor for atherosclerosis,induces stress in J774A.1 murine macrophages

Purpose

Trimethylamine N-oxide (TMAO) is a biomarker for kidney problems. It has also been introduced as a risk factor for atherosclerosis. The classic risk factors for atherosclerosis trigger cellular and humeral immunoreaction in macrophages through induction of heat shock protein expressions and increased levels of GRP94 and HSP70 are associated with increased atherosclerosis risk. The present study evaluated the possible effect(s) of TMAO on the expression of GRP94 and HSP70 at protein levels.

慢性乙肝肝纤维化不同分期TNF-α、NO和内毒素水平变化

探讨慢性乙肝肝纤维化不同分期TNF-α、NO和内毒素水平变化及其对肝纤维化的影响.经肝穿刺活检证实慢性乙肝肝纤维化患者100例,其中按S期又分为S1 20例、S2 25例、S3 30例、S4 25例;或按G期又分为G1 20例、G2 30例、G3 25例、G4 25例.对照组为20名健康人.所有患者肝穿刺的同时,取血清测NO、TNF-α和内毒素.结果表明:TNF-α随肝炎程度及肝纤维化程度加重而升高,相关r分别为0.623(P＜0.05)、0.649(P＜0.01),NO为0.328(P＞0.05),内毒素在肝纤维化阶段尚无明显增高.结论:TNF-α在慢性乙肝发展至肝硬化过程中,始终起着重要作用;NO早期未参与肝硬化的形成与发展.     

内质网自噬与内质网稳态

内质网(endoplasmic reticulum,ER)是真核细胞中最大的膜状细胞器,由跨越细胞质的连续片状或管状结构组成,参与蛋白质合成、修饰和转运,脂质和类固醇合成,Ca2+平衡及分泌的调节等[1].ER是一种高度动态化的细胞器,其膜蛋白及脂质的半衰期约为3～5 d,需要经过不断地翻新以维持其结构和功能的完整性....     

自噬通过抑制C/EBP同源蛋白表达减轻氧化低密度脂蛋白诱导的巨噬细胞凋亡

目的：研究自噬对氧化低密度脂蛋白（oxidizedlow-densitylipoprotein,ox-LDL）所致巨噬细胞凋亡的影响,并探讨可能的分子机制。方法：体外培养RAW264.7巨噬细胞,分别给予3-甲基腺嘌呤（3-methyladenine,3-MA;3mmol/L）、雷帕霉素（rapamycin,Rap;1μmol/L）或4-苯丁酸（4-phenylbutyricacid,PBA;4mmol/L）预处理1h,再加入ox-LDL（100mg/L）继续培养12h。分别采用MTT法和AnnexinV-FITC双染法检测细胞活力和凋亡情况;相应试剂盒测定培养液乳酸脱氢酶（lacticdehydrogenase,LDH）和细胞内caspase-3活性;采用Westernblot法检测自噬标志分子beclin-1和内质网应激标志分子葡萄糖调节蛋白78（glucose-regulatedprotein78,GRP78）及促凋亡蛋白C/EBP同源蛋白（C/EBPhomologousprotein,CHOP）表达的变化;采用激光共聚焦显微镜观测细胞内微管相关蛋白1轻链3（microtubule-associatedprotein1lightchain3,LC3）的变化。结果：ox-LDL处理可显著降低巨噬细胞活力,并增加LDH漏出、凋亡率及caspase-3活性;ox-LDL对细胞的上述损伤作用可被自噬抑制剂3-MA促进而被自噬诱导剂雷帕霉素拮抗。ox-LDL诱导巨噬细胞自噬反应,表现为beclin-1表达上调,LC3颗粒化显著;ox-LDL对自噬的诱导作用可被3-MA抑制而被Rap增强。另外,3-MA可促进ox-LDL所诱导的CHOP进一步上调,而Rap可明显拮抗ox-LDL对CHOP的诱导作用。PBA可显著抑制ox-LDL所诱导的GRP78上调,且明显减轻ox-LDL所诱导的自噬反应,表现为beclin-1表达下调,LC3颗粒化程度减弱。结论：内质网应激介导ox-LDL对巨噬细胞自噬的诱导作用,而一定程度的自噬可通过抑制CHOP表达从而减轻ox-LDL所诱导的巨噬细胞凋亡。     

内质网应激前列腺癌细胞通过STAT3信号途径促进巨噬细胞M2极化的研究

目的 探讨前列腺癌细胞内质网应激相关外泌体能否通过STAT3调控巨噬细胞M2极化。方法 以有无毒胡萝卜素（TG）刺激,将前列腺癌细胞（PC3）细胞分为TG组和Con组。TG组分别以不同浓度TG同样时间和同样浓度TG不同时间刺激PC3细胞,通过观察ERS标志蛋白GRP78的表达,确定最佳刺激浓度与时间;Western blot检测Con组和TG组外泌体标志蛋白CD63和TSG101表达,透射电子显微镜鉴定外泌体;激光共聚焦显微镜观察巨噬细胞摄取外泌体;以Con组和TG组外泌体刺激巨噬细胞分为M-Con组和M-TG组,化学发光法检测M-TG组和M-Con组巨噬细胞炎症因子IL-1β、IL-6、IL-10与TNF-α表达情况;Western blot检测M-TG组和M-Con组巨噬细胞PD-L1表达及STAT3通路蛋白表达。结果 以TG刺激PC3细胞,结果显示当以3 μmol/L的TG刺激PC3细胞24 h,可明显升高GRP78蛋白的表达,可以构建较好的前列腺癌细胞ERS模型。Western blot及透视电镜结果证实成功分离PC3外泌体,且TG组外泌体表达CD63与TSG101多于Con组（P＜0.05）;激光共聚焦显微镜显示,外泌体能够被巨噬细胞所吞噬;化学发光结果显示,M-TG组分泌的炎症因子较M-Con组多（P＜0.05）,能够完成巨噬细胞的M2极化;与 M-Con组比较,M-TG组能增加巨噬细胞PD-L1蛋白表达,并且激活巨噬细胞STAT3通路（P＜0.05）。结论 内质网应激的前列腺癌细胞可能通过释放外泌体,激活巨噬细胞STAT3通路,上调巨噬细胞PD-L1蛋白表达,促进巨噬细胞M2极化。     

内质网应激与prion疾病

1 引言内质网(endoplasmic reticulum, ER)是真核细胞中钙离子贮存库,也是调节蛋白质合成及合成后加工、折叠和聚集的场所,是一种重要的细胞器.近年来,在生物医学研究领域中出现了一个新概念-\"内质网应激\"(ER stress),即:在饥饿、影响钙离子平衡的药物、影响蛋白质翻译后修饰、结构异常蛋白堆积以及一些有害因素等的诱发下,导致细胞内质网内稳态失衡、生理功能发生紊乱的一种亚细胞器的病理过程[1].     

肝纤维化大鼠肝脏中内质网应激相关分子CHOP和TRB3的表达变化

目的：观察内质网应激相关分子CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP）和Tribbles同源蛋白3（TRB3）在四氯化碳（CCl4）致大鼠肝纤维化过程中的表达变化,探讨其在肝纤维化过程中的可能作用。方法：体重180～200g的雄性Wistar大鼠随机分为正常4周组、正常8周组、肝纤维化4周组和肝纤维化8周组,肝纤维化组大鼠皮下注射40%CCl4制备肝纤维化模型,分别在4周和8周处死大鼠,观察肝组织病理改变,Westernblotting检测肝脏活化转录因子6（ATF6）蛋白,免疫组化、Westernblotting和real-timePCR分别检测肝脏CHOP和TRB3蛋白和mRNA表达变化,TUNEL法检测肝脏细胞凋亡。结果：肝纤维化组大鼠肝脏可见假小叶形成,p90ATF6蛋白表达量较正常组明显减少（P<0.01）,p50ATF6蛋白表达量较正常组明显增加（P<0.01）,肝细胞胞浆CHOP和TRB3蛋白及mRNA表达量较正常组显著增加（P<0.01）,细胞凋亡率较正常组显著增加（P<0.01）。结论：内质网应激相关分子CHOP和TRB3在CCl4致大鼠肝纤维化过程中蛋白及mRNA表达水平明显增加,其变化趋势与大鼠肝细胞凋亡率一致,提示内质网应激可能通过CHOP和TRB3促进肝细胞凋亡,参与肝纤维化发生发展。