缺血后适应对脑缺血树鼩海马TLR4表达的影响

目的: 观察血栓性脑缺血树鼩海马Toll 样受体4(TLR4)表达的改变,进一步探讨缺血后适应对海马TLR4表达的影响。方法: 用光化学法建立血栓性脑缺血模型;并于缺血4 h夹闭缺血侧颈总动脉5 min,再通5 min,重复3个循环,实施后适应处理。用HE染色观察海马组织学改变,Western blotting测定海马TLR4蛋白表达,RT-PCR测定海马TLR4 mRNA。结果: 脑缺血4、24、72 h海马神经元损伤进行性加重,24 h达高峰,后适应后损伤减轻。脑缺血海马TLR4蛋白表达明显增强(P＜0.05)。与脑缺血组比较,后适应4 h及24 h TLR4蛋白表达减少 (P＜0.05),后适应72 h TLR4蛋白表达增加(P＜0.05)。海马TLR4 mRNA的表达趋势与蛋白表达基本一致。结论: 脑缺血时海马TLR4表达明显增强,缺血后适应的脑保护机制可能与调控TLR4表达有关。     

缺血后适应对树鼩脑缺血信号转导及转录激活因子3过磷酸化的调控作用

目的观察信号转导及转录激活因子3(STAT3)磷酸化在树鼩脑缺血后适应(PC)神经保护中的作用,并探讨其可能机制。方法将50只健康成年树鼩随机分为对照组、脑缺血4 h组、脑缺血24 h组、后适应4 h组和后适应24 h组(每组n=5),其中10只动物做HE染色(n=5)及电子显微镜观察(n=5)。本实验通过光化学反应建立树鼩血栓性脑缺血模型;于缺血后4 h夹闭患侧颈总动脉3次(每次5 min)实施缺血PC。采用TTC染色观察树鼩脑梗死面积的变化,通过HE和电子显微镜观察脑皮质和海马组织学改变及其超微结构变化,应用Western blotting检测皮层总STAT3(t-STAT3)及磷酸化STAT3(p-STAT3)蛋白表达变化。结果脑缺血后皮层血管内皮细胞肿胀,皮层及海马神经元损伤,线粒体肿胀、嵴溶解,以缺血24 h损伤最为明显,脑梗死面积达到(24.78±2.06)%。而皮层p-STAT3蛋白表达随缺血时间延长呈增高趋势,缺血4 h p-STAT3蛋白表达明显增高(0.24±0.1,P<0.01),缺血24 h p-STAT3蛋白表达则持续增高(0.32±0.1,P<0.01)。缺血PC处理后皮层血管内皮细胞水肿好转,皮层及海马神经元损伤减轻,脑梗死面积减小为(17.67±1.90)%(P<0.01)。与缺血组相比,缺血PC 4 h p-STAT3蛋白表达进一步升高(0.41±0.09,P<0.01),缺血PC 24 h p-STAT3蛋白表达增高更加显著(0.70±0.11,P<0.01)。结论树鼩脑缺血可导致STAT3磷酸化代偿性增强,缺血PC的脑保护作用可能与其促进STAT3过磷酸化有关。     

缺血后适应减轻树鼩缺血性脑水肿及脑梗死的机制

目的 观察缺血后适应对树鼩血栓性脑缺血时大脑皮层脑水含量、局部脑血流、梗塞面积及神经元超微结构的影响,探讨其对树鼩脑缺血时神经保护的可能机制。 方法 将88只健康成年树鼩随机分为对照组、脑缺血4 h组、脑缺血24 h组、后适应4 h组及后适应24 h组（每组n=8）,另取8只动物做HE染色（n=3）及电子显微镜观察（n=5）。本实验采用光化学反应诱导树鼩血栓性脑缺血而建立脑缺血动物模型,在脑缺血模型建成后4 h夹闭缺血侧颈总动脉5 min,再灌注5 min,如此交替进行3个循环以建立缺血后适应模型。测定大脑皮层局部脑血流,脑组织含水量,脑梗死范围,并观察皮层及海马CA1区神经元超微结构改变。 结果 脑缺血时神经元固缩,线粒体肿胀,嵴溶解或形成空泡,内质网肿胀,内质网池形成。缺血后适应能使海马CA1区神经元固缩减少,线粒体和内质网的病理改变减轻,细胞水肿改善。随着缺血时间的延长,缺血24h组脑水含量明显增加86.81%±1.08%,此时脑梗塞面积明显扩大33.00%±3.03%,局部脑血流明显降低（134.27±28.75）ml/min。缺血后适应24h组脑组织含水量明显减少（81.04%±1.04%,P＜0.01）;脑梗塞面积缩小（16.79%±1.29%,P＜0.01）;而局部脑血流明显增加［（195.25±21.18）ml/min,P＜0.01］。 结论 缺血后适应可缓解树鼩缺血性脑水肿并缩小梗死范围,其机制可能与改善局部脑血流有关。     

树鼩脑缺血后适应升高海马区rCBF及VEGF的变化

目 的：研究树鼩局部脑缺血海马rCBF与血管内皮生长因子（VEGF）间的关系，探讨缺血后适应（PC）对rCBF与VEGF表达的改变及其机制。方 法：建立树鼩血栓性局部脑缺血及缺血PC模型，通过激光多普勒血流计测量脑缺血后4、8、12、24及72h海马CA1区rCBF的改变；用免疫组化法测定脑缺血上述时间海马VEGF的表达，并用图像分析系统测定其平均灰度值。于脑缺血后4h重复3次夹闭缺血侧颈总动脉实施缺血PC，并观察其对海马CA1区rCBF及VEGF表达的影响。结 果：树鼩脑缺血后4h海马CA1区VEGF阳性细胞数增多，以12h表达最强（P＜0.01），72h表达最低（P＞0.05）。脑缺血时海马rCBF逐渐降低，以24h的改变最显著（为2.55±0.28PU，P＜0.01）；72h时海马rCBF略有增加，为9.84±1.22 PU。实施缺血PC后，海马CA1区rCBF逐渐增加，72h最显著（P＜0.01）与此同时VEGF的表达除8h（P＞0.05）外，其余各组均比血栓性缺血组增强（P＜0.01），以12h组最明显；电镜显示缺血24h血栓性缺血组的海马线粒体应激及内质网池形成最明显，给予PC后得以缓减。结 论：树鼩脑缺血时海马CA1区rCBF减少的程度与VEGF表达增加具有密切联系；缺血PC可延长治疗的时间窗；缺血12h内VEGF表达的明显增强可能与rCBF改善有关；PC对海马rCBF的影响可能是神经元保护的关键所在。     

树鼩脑缺血后适应升高海马区rCBF及VEGF的变化

目的 探讨缺血后适应(PC)缓解海马rCBF与血管内皮生长因子(VEGF)的变化及其机制.方法 建立树鼩血栓性局部脑缺血模型,通过激光多普勒血流计测量海马CA1区rCBF含量;用免疫组化法测定海马VEGF的表达.结果 树鼩脑缺血时海马rCBF逐渐降低,以24 h的改变最显著,脑缺血后海马CA1区VEGF阳性细胞数增多,12 h表达最强(P<0.01);缺血PC可显著影响缺血所致的改变:rCBF逐渐增加,72 h最显著(P<0.01),与此同时VEGF的表达除8 h外均比血栓性缺血组增强(P<0.01),12 h组最明显;电镜显示缺血24 h血栓性缺血组的海马线粒体应激及内质网池形成最明显,给予PC后得以缓解.结论 缺血12 h内PC通过明显增强VEGF的表达可能与其改善rCBF有关,从而延长治疗的时间窗.     

bFGF对局灶性脑缺血大鼠脑组织GRP78表达的影响

目的研究大鼠脑缺血再灌注后对葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein78,GRP78)表达的影响,探讨碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)对脑组织缺血再灌注神经元GRP78的调节作用及机制。方法应用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,大脑中动脉阻塞2h再灌注损伤12h,采用TUNEL法、免疫组化检测海马及皮质内神经元凋亡和GRP78的表达。结果 sham组,海马及皮质偶见凋亡细胞,皮质及海马神经元内少见GRP78免疫反应阳性细胞;I/R组,海马及皮质神经元凋亡增加,缺血再灌注损伤后皮质及海马神经元内GRP78阳性表达明显高于假手术组。bFGF组,海马及皮质神经元凋亡减少,皮质及海马神经元内GRP78表达较I/R组明显增加。结论 bFGF显著减少缺血神经元凋亡,上调脑缺血诱导的GRP78表达,对脑缺血再灌注海马及皮质神经元的具有保护作用。     

亚低温后适应对树鼩局部脑缺血海马CA1区神经元的保护机制

目的： 观察亚低温后处理(HPC)对树鼩局部脑缺血后不同时间海马CA1区血管内皮生长因子（VEGF）表达及神经元缺失的影响,探讨亚低温后适应保护脑缺血后海马CA1区神经元的可能机制。方法：建立光化学诱导树鼩脑缺血模型,于缺血后6h采用局部恒温控温装置使脑温降低并维持亚低温(31-32 ℃)状态1 h。用免疫组化法及图像分析仪测定海马CA1区VEGF表达的改变;计数海马神经元并观察其超微结构变化。结果：与常温组相比,亚低温后适应组海马CA1区VEGF表达在24 h时增加而72 h时明显下降（P＜0.01）;24 h时神经元坏死减少,72 h时坏死细胞增多,缺血侧超微结构呈现相同变化。结论：在脑缺血后早期VEGF的表达可能与其直接发挥对神经元细胞的保护作用有关,亚低温后适应对脑缺血的保护作用在脑缺血的早期有明显意义,而在缺血的晚期则可能加重脑缺血的损伤,低温后适应脑保护的意义在于延长脑缺血治疗时间窗。     

后适应对树鼩不同脑缺血模型同一"时间窗"海马神经元保护的比较

目的: 观察缺血后适应(PC)对血栓性脑缺血(TC)及大脑中动脉闭塞(MCAO)2种脑缺血模型同一"时间窗"的脑保护效果,并探讨其可能机制。方法: 建立树鼩TC及MCAO脑缺血模型,于脑缺血后4 h夹闭同侧颈总动脉实施缺血PC。用TTC染色显示皮层梗塞面积,采用电镜及激光多普勒(LD)技术分别观察脑缺血后4 h、24 h及72 h海马CA1区神经元超微结构及局部脑血流(rCBF)的变化,比较PC对2种中风模型海马 rCBF和神经元超微结构的影响。结果: 脑缺血后海马CA1区神经元的超微结构改变以线粒体肿胀、嵴断裂以及内质网扩张为主,MCAO的梗塞面积和细胞损伤程度明显高于TC组,且PC缓减TC组海马线粒体损伤的作用较MCAO的明显。TC和MCAO后海马rCBF明显降低,TC组rCBF的降低以24 h明显(P＜0.01),而MCAO组rCBF的降低则以72 h明显(P＜0.01)。脑缺血后4 h实施PC可改善TC组海马rCBF(P＜0.01)和减轻线粒体损伤,而MCAO组rCBF及神经元形态学改善不明显。结论: 脑缺血后4 h实施缺血PC能有效对抗缺血性脑损伤,其脑保护效果与rCBF的增加有关。缺血PC对TC组的脑保护作用较MCAO组明显。     

高血糖和脑缺血对树鼩皮层不同区域VEGF表达的影响

目的：研究高血糖及局灶性脑缺血条件下,树鼩皮层不同区域VEGF表达的变化,探讨脑缺血、高血糖与VEGF之间的相互关系。方法：用链脲佐菌素复制树鼩高血糖模型,并建立光化学诱导皮层局灶性脑缺血,观察缺血4 h、24 h及72 h的病理形态学改变并计数海马神经元密度,用免疫组化法测定上述时间树鼩缺血中心区、半暗带、对侧皮层VEGF表达的动态变化。结果：形态学观察显示,光化学反应后4 h照射区皮层可见梗塞灶;24 h病损达高峰;72 h伴随胶质细胞增生等修复性反应。相应时点高血糖加缺血组的损伤大于缺血组,以缺血后24 h(P<0.01)和72 h(P<0.05)尤为显著。免疫组化染色表明,缺血后4 h皮层缺血半暗区可见VEGF表达增加, 24 h达高峰,72 h减弱;单纯高血糖也使VEGF表达上调;高血糖加缺血组VEGF表达强于单纯高血糖组(P<0.05),但高血糖加缺血组与缺血组的同期值比较,无显著差异。结论：(1)在低等灵长类动物树鼩体内注射链脲佐菌素,并结合血栓性局部脑缺血方法学的应用能成功复制出实验性高血糖及脑缺血模型;(2)实验证明高血糖对局灶性脑缺血有恶化加重作用;(3)脑缺血及高血糖均可分别作为独立因素诱导VEGF的表达;但缺血与高血糖相加对VEGF表达未显示出叠加效应。     

内质网应激相关分子葡萄糖调节蛋白78及增强子结合蛋白同源蛋白在高血压大鼠全脑缺血海马区的表达变化

目的:观察血压正常大鼠和高血压大鼠全脑缺血再灌注后海马区CAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的表达变化,探讨内质网应激在高血压增加脑缺血再灌注神经易损性中的作用.方法:60只雄性血压正常Wistar-Kyoto(WKY)大鼠随机分为假手术组(Sham)和全脑缺血再灌注组(I/R);另取30只雄性自发性高血压大鼠为高血压全脑缺血再灌注组(SHR+I/R).应用改良的Pulsineli 4血管阻断(4-VO)法制作全脑缺血再灌注模型.各组分别在术后6、24、48 h,H-E染色观察海马区神经细胞形态变化;免疫组织化学和免疫印迹检测海马区CHOP、GRP78的表达;48 h八臂迷宫检测动物行为学变化.结果:与Sham组比较,I/R组各时间点存活神经元数量降低;GRP78表达增高,24 h达高峰;CHOP表达增高,24 h达高峰,高表达持续至48 h;与I/R组比较,SHR+ IR组各时间点存活神经细胞数量降低;GPR78表达6h增高,24、48h显著减少;6、24 h CHOP表达增高,48 h明显减少;八臂迷宫结果显示SHR+I/R组与I/R组比较,各检测指标变化差异有统计学意义.结论:高血压可增加脑缺血再灌注神经易损性,与加重缺血再灌注后GRP78表达下降、CHOP活体表达增高有关.     

PERK介导的内质网应激参与血管紧张素Ⅱ诱导心肌肥大的机制

目的: 研究蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)介导的内质网应激(ERS)反应在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导心肌细胞肥大中的作用。方法: 在AngⅡ诱导原代培养的乳大鼠心肌细胞肥大模型上,采用[³H]-亮氨酸掺入、心肌细胞表面积测定等评估心肌细胞肥大程度;以实时定量PCR、RT-PCR和Western blotting检测ERS标志性分子葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、钙网蛋白(CRT)、蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、真核细胞翻译起始因子2α(eIF2α)和C/EBP同源蛋白(CHOP)mRNA和蛋白表达变化。结果: 与正常对照组比较,AngⅡ组CRT mRNA和蛋白表达分别高146.4%和125.3%(P<0.05),GRP78 mRNA和蛋白的表达分别高84.0%和77.6% (P<0.05),PERK mRNA和蛋白表达分别高165.4%和132.1%(P<0.05),eIF2α mRNA和蛋白表达分别高110.9%和46.5%(P<0.05),CHOP mRNA和蛋白表达分别高117.7%和63.3%(P<0.05)。结论: PERK介导的内质网应激反应参与了AngⅡ诱导的心肌细胞肥大。     

黄芪与葛根素联用对KKA~y小鼠肾脏内质网应激相关PERK通路的影响

目的:研究黄芪注射液与葛根素注射液合用对小鼠糖尿病肾病内质网应激中蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)通路相关因子的影响。方法:将12周龄的雄性KKAy小鼠随机分成模型组和治疗组,每组14只,分别注射生理盐水或黄芪、葛根素注射液合剂,14只同龄雄性C57BL/6J小鼠为正常组。于16周龄时处死小鼠,电镜观察各组小鼠肾脏形态改变,通过real-time PCR和Western blot法检测PERK、真核起始因子2α(e IF2α)和葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的mRNA及蛋白表达。结果:模型组及治疗组小鼠肾小管上皮细胞细胞核、内质网和线粒体肿胀。模型组PERK、e IF2α及GRP78的mRNA及蛋白表达均高于正常组(P0.05),治疗组较模型组下降。结论:黄芪注射液同葛根素注射液联用可能通过减少PERK、e IF2α及GRP78的表达降低2型糖尿病KKAy小鼠肾脏过强的内质网应激。     

IL-1β通过加重脂质诱导的内质网应激导致人系膜细胞损伤

 目的： 探讨白细胞介素1β（IL-1β）加重脂质诱导的内质网应激（ERS）而导致人肾小球系膜细胞（HMCs）损伤的分子机制。方法：将HMCs分为对照组、高脂组（LDL）、IL-1β+高脂组（IL-1β+LDL）及4-苯基丁酸(4-PBA)干预组（4-PBA+IL-1β+LDL）。油红O染色检测HMCs胞内脂质沉积;real-time PCR检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、蛋白激酶R样内质网激酶（PERK）和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA） mRNA水平;免疫细胞化学分析GRP78蛋白水平; Western blotting检测NF-κB p65水平;ELISA法测定细胞培养上清IL-6和TGF-β1含量。结果：与LDL组相比,IL-1β+LDL组胞内脂质沉积、GRP78 mRNA与蛋白水平、PERK mRNA水平、NF-κB p65水平及IL-6分泌量均显著增高（均P＜0.05）;4-PBA可减少胞内脂质沉积,降低GRP78 mRNA与蛋白及PERK mRNA水平,抑制NF-κB p65的表达,减少IL-6的分泌（均P＜0.05 vs IL-1β+LDL组）。与LDL组相比,IL-1β+LDL组α-SMA mRNA表达增高（P＜0.05）,4-PBA可显著降低其表达（P＜0.05 vs IL-1β+LDL组）。结论：IL-1β可加重脂质诱导的ERS,从而导致细胞损伤。     

内质网应激诱导的自噬对肝细胞凋亡的影响

目的:观察二硫苏糖醇(DTT)诱导人正常肝细胞LO2发生内质网应激的过程中自噬相关指标表达的变化及其对细胞凋亡的影响。方法:采用2.0 mmol/L DTT处理LO2细胞0、6、12和24 h,诱导细胞发生内质网应激;real-time PCR及Western blot检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、活化转录因子4(ATF4)、C/EBP同源蛋白(CHOP)、自噬相关基因12(Atg12)、自噬相关基因5(Atg5)和微管相关蛋白1轻链3(LC3) mRNA及蛋白水平的变化;流式细胞术检测细胞凋亡情况;透射电镜观察自噬小体的产生情况。采用400 nmol/L的雷帕霉素预处理LO2细胞1 h,再给予2.0 mmol/L的DTT处理24 h,观察雷帕霉素预处理对细胞凋亡的影响。结果:2.0 mmol/L DTT处理LO2细胞6、12和24 h后,细胞中GRP78、PERK、ATF4、CHOP、Atg12、Atg5和LC3的mRNA及蛋白水平较0 h组显著上调(P 0.05);同时LC3Ⅱ/LC3Ⅰ也较0 h组显著增高(P 0.05);透射电镜检测发现,DTT处理6、12和24 h后,细胞中均可见自噬小体的产生;流式细胞术检测发现,DTT处理细胞6、12和24 h后,细胞凋亡较0 h组显著增加;而经自噬诱导剂雷帕霉素预处理后,DTT诱导的细胞凋亡显著下降(P0.05)。结论:内质网应激可诱导自噬的发生,而雷帕霉素预处理可在一定程度上减轻内质网应激诱导的LO2细胞凋亡。     

二硫苏糖醇通过激活calpain-2/caspase-12信号通路诱导BRL-3A细胞凋亡

目的:探讨二硫苏糖醇(DTT)诱导大鼠正常肝细胞株BRL-3A发生内质网应激时细胞内葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、钙蛋白酶2 (calpain-2)、caspase-12及caspase-3的表达变化及对细胞凋亡的影响。方法:采用2. 5 mmol/L DTT分别处理BRL-3A细胞12 h和24 h,应用real-time PCR检测细胞内GRP78、calpain-2、caspase-12及caspase-3的mRNA水平;采用细胞免疫荧光检测细胞内GRP78、calpain-2、caspase-12及caspase-3的蛋白表达;应用Western blot检测cleaved caspase-12及cleaved caspase-3的表达变化;采用流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果:BRL-3A细胞经DTT处理12 h及24 h后,GRP78、calpain-2及caspase-12的mRNA表达较正常对照组显著升高(P 0. 01),而caspase-3的mRNA水平与正常对照组比较无显著变化;细胞免疫荧光及Western blot检测发现,DTT处理细胞12 h及24 h后,BRL-3A细胞内GRP78、calpain-2、caspase-12及caspase-3的蛋白表达均较正常对照组显著增高,同时,cleaved caspase-12及cleaved caspase-3的表达也较正常对照组明显增多(P 0. 05);流式细胞术检测发现,经DTT处理后BRL-3A细胞的凋亡率较正常对照组显著增加(P 0. 05)。结论:二硫苏糖醇诱导BRL-3A细胞凋亡可能与calpain-2/caspase-12信号通路激活有关。     

高脂血症对大鼠肾脏内质网应激的影响及辛伐他汀的干预作用

目的： 探讨内质网应激在高脂血症引起的肾脏损伤中的作用及辛伐他汀的干预作用。方法: 30只雄性Wistar大鼠随机分为3组：正常对照组（n=10）给予普通饲料喂养;高脂组（n=10）给予高脂饲料喂养;辛伐他汀组（n=10）在高脂饲料喂养的基础上给予辛伐他汀10 mg·kg-1·d-1灌胃。18周后检测大鼠24 h尿蛋白及血清胆固醇、甘油三酯水平。光镜观察大鼠肾组织病理改变。免疫组化方法检测大鼠肾脏GRP78、p-JNK的表达。TUNEL检测肾组织凋亡细胞。RT-PCR检测肾组织GRP78 mRNA、CHOP mRNA的表达。结果: 18周时,高脂组大鼠24 h尿蛋白、血脂水平、GRP78及p-JNK蛋白的表达、GRP78及CHOP mRNA的表达、肾组织凋亡细胞均高于正常对照组（P<0.01）; 辛伐他汀组上述改变显著低于高脂组（均P<0.05）。结论: 内质网应激参与了高脂血症引起的肾脏损伤,辛伐他汀可以通过抑制肾脏的内质网应激反应而起肾脏保护作用。     

SET7/9介导的内质网应激对砷致肝细胞凋亡的影响

目的:通过研究SET7/9(SET domain containing 7/9)对内质网应激(ERS)的蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)信号通路的影响,探讨其在砷致肝细胞凋亡机制中的作用。方法:把人肝细胞LO2分为对照组、砷染毒模型组、阴性转染组和SET7/9 siRNA转染组。流式细胞术检测各组细胞凋亡的变化;Western blot方法观察各组LO2细胞SET7/9、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、PERK和p-PERK表达水平的变化。结果:抑制SET7/9表达可降低砷染毒LO2细胞的凋亡率(P 0.05)。砷染毒可以使LO2细胞SET7/9表达水平升高,上调LO2细胞GRP78和p-PERK的蛋白水平(P 0.05)。砷染毒LO2细胞经SET7/9 siRNA转染后可下调其GRP78和p-PERK的蛋白水平。结论:砷可以通过上调SET7/9激活了ERS的PERK信号通路,从而导致肝细胞凋亡。     

Ischemia induces endoplasmic reticulum stress and cell apoptosis in human brain

In animal models, endoplasmic reticulum (ER) stress and apoptosis take place around cerebral infarction areas during ischemia, which presumably protect tissues from necroses-induced injury as well as promote cells toward death. We examined whether these pathological changes, especially temporal occurrence, were present in patients who suffered from cerebral ischemia. The studies by immunohistochemistry show that ER chaperone glucose-regulated protein (GRP78) and caspase-9 elevate around infarction areas. The experiments by terminal deoxynucleotidy transferase-mediated 2′-deoxyuridine 5′-triphosphate-biotin nick-end labeling (TUNEL) illustrate that TUNEL-positive cells are higher around infarction tissues than controls. Moreover, GRP78, caspase-9 and TUNEL cells emerge one after another during ischemia. In conclusion, ER stress, apoptosis initiation and DNA fragment develop sequentially in ischemic human brain. ER stress during excessive ischemia stimulates apoptotic cell death beyond activating a defense for nerve cells being away from injury.