miR-29b介导的TGF-β/Smad信号通路对大鼠肝纤维化进程的影响

目的:初步研究微小RNA-29b(mi R-29b)介导的TGF-β/Smad信号通路在肝星状细胞(HSC)活化中的作用及其对大鼠肝纤维化进程的影响。方法:构建肝纤维化大鼠模型并分离其HSC,同时通过体外获取并鉴定正常大鼠HSC。运用RT-qPCR和Western blot检测以上获取细胞中mi R-29b、TGF-β/Smad信号通路相关蛋白和肝纤维化标志蛋白的变化水平,并通过双萤光素酶报告基因检测系统鉴定mi R-29b对TGF-β1的直接靶向结合情况。结果:随着HSC活化加深,mi R-29b的表达量逐渐减少(P 0. 01),而HSC活性标志物I型胶原蛋白和α-平滑肌肌动蛋白的表达量逐渐增加(P 0. 01)。在TGF-β/Smad信号通路中,Smad2/3/4的表达显著增加,而Smad7的表达明显下降(P 0. 01)。双萤光素酶报告基因检测结果显示,mi R-29b可直接结合于TGF-β1 3’UTR的"UCUCUCCGU"序列,表明TGF-β1为mi R-29b的一个下游靶基因。结论:mi R-29b可参与抑制HSC的活化和迁移,进而抑制肝纤维化进程,而其生物学功能可能是通过直接靶向抑制TGF-β1进而调控TGF-β/Smad信号通路实现的。     

白屈菜红碱对肝纤维化小鼠TGF-β/Smads信号通路的影响

目的:探讨白屈菜红碱对四氯化碳(CCl_4)诱导的肝纤维化损伤小鼠的保护作用及对转化生长因子β(TGF-β)/Smads信号通路的影响。方法:50只C57BL/6N小鼠随机分成正常对照组、模型组及白屈菜红碱低剂量(10 mg·kg~(-1)·d~(-1))、中剂量(20 mg·kg~(-1)·d~(-1))和高剂量(40 mg·kg~(-1)·d~(-1))3个剂量组,每组10只。采用腹腔注射CCl_4和橄榄油混合液8周诱导小鼠肝纤维化模型,白屈菜红碱组于第5周开始灌胃给药。第14周后处死小鼠,观察白屈菜红碱各剂量组干预后小鼠的肝指数,苏木精-伊红染色和苦味酸-酸性品红染色法观察小鼠肝组织的病理改变及肝纤维化的程度;采用分光光度计和酶标仪测定血清中天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、透明质酸(HA)和肝组织中羟脯氨酸(Hyp)的含量;RT-q PCR检测TGF-β1、Smad3、Smad4和Smad7的mRNA表达;Western blot检测TGF-β1、Smad4和Smad7的蛋白表达。结果:与正常对照组比较,模型组肝纤维化的病理改变明显,肝指数、AST、ALT、HA和Hyp均显著升高(P0.05);TGF-β1、Smad3和Smad4的mRNA表达显著上调,Smad7的mRNA表达显著下调(P0.05);TGF-β1和Smad4的蛋白表达显著上调,Smad7的蛋白表达显著下调(P0.05);与模型组比较,白屈菜红碱不同剂量给药组均抑制上述指标的改变(P0.05)。结论:白屈菜红碱能够抑制CCl_4诱导的小鼠肝纤维化,其机制可能与TGF-β/Smads信号通路有关。     

槲皮素通过TGF β1/Smad3信号通路改善慢性心衰大鼠心肌纤维化

目的观察槲皮素对慢性心力衰竭大鼠心功能的改善作用,探讨TGF β1/Smad3信号通路在其中的作用机制。方法 SD大鼠45只,采用随机数字表法将大鼠随机分为假手术组(Sham组)、心力衰竭模型组(CHF组)和槲皮素干预组(Qu组);采用腹主动脉缩窄法建立压力负荷型慢性心力衰竭大鼠模型,Qu组予以槲皮素100mg/kg灌胃,余组予以等量生理盐水,连续给药8w,超声心动图观察各组大鼠心脏结构参数,HE染色、Masson染色观察各组大鼠心脏组织病理学变化,Western blot、qPCR法检测心脏组织中TGF β1/Smad3信号通路相关因子collagen I、collagenIII、TGF-β1、smad3、p-smad3表达情况。结果槲皮素可以改善心衰大鼠心功能,大鼠LVDD、LVDS明显降低,LVEF、LVFS明显升高,Qu组大鼠心肌细胞肿胀明显改善,排列较规则,结构较完整,仅见少量炎性细胞浸润及胶原纤维蛋白沉积,纤维化程度明显减轻。同时,槲皮素可下调心衰大鼠心脏心脏组织中TGF-β1、Smad3、p-smad3、collagen I、collagen III表达水平。结论槲皮素明显改善慢性心力衰竭大鼠的心功能,减轻大鼠心室重构及心肌细胞损伤,与调控TGF β1/Smad3信号通路相关。     

IL-9通过TGF-β/Smad通路诱导胃癌MKN-45细胞上皮-间充质转化

目的:研究白细胞介素9(IL-9)通过激活转化生长因子β(TGF-β)/Smad信号通路促进人胃癌MKN-45细胞上皮-间充质转化(EMT)的机制。方法:将常规培养的MKN-45细胞分为对照组和IL-9刺激组,利用CCK-8检测细胞活力;光镜下观察细胞形态的变化; RT-qPCR和Western blot检测EMT相关蛋白、TGF-β、Smad3和Smad5 mRNA和蛋白表达的变化; Transwell法检测细胞侵袭能力;免疫荧光染色检测细胞中波形蛋白(vimentin)的表达。结果:IL-9可以提高MKN-45细胞的存活率,且具有时间依赖性; IL-9刺激组关键转录因子Snail与Slug的表达上调,EMT相关蛋白N-cadherin、fibronectin、collagen I和vimentin表达上调,E-cadherin表达下调(P 0. 05)。Transwell结果显示IL-9组细胞侵袭能力增强,镜下观察迁移运动的细胞形态呈长梭形,RT-qPCR和Western blot结果显示TGF-β、Smad3和Smad5表达升高(P 0. 05)。结论:IL-9可以促进MKN-45细胞EMT,其作用与TGF-β/Smad信号的激活有关。     

黄精通过TGF-β1/Smad信号通路对肝纤维化模型大鼠肝脏结构病理改善作用

目的 探讨关于黄精对大鼠肝脏纤维化的干预效果及对肝脏的保护作用.方法 研究对象来源选取Wistar大鼠,对实验动物血样及组织进行分析;样本总数45只;分为正常对照组、肝纤维化模型组以及黄精治疗干预组,每组15只.测定大鼠肝外周血TG F-β水平,使用ELISA法完成;使用免疫组化法对肝组织标本中的TGF-β1、Smad...     

Netrin-1通过DCC/ERK信号通路减缓心肌梗死大鼠心室重构

目的 探讨netrin-1对心肌梗死大鼠心室重构的影响及其作用机制。方法 32只SD大鼠随机分为假手术组、心肌梗死模型组、心肌梗死+netrin-1低剂量组(低剂量组),心肌梗死+netrin-1高剂量组(高剂量组),每组8只。成功建立急性心肌梗死大鼠模型后,腹腔注射netrin-1干预4周,小动物超声系统检测大鼠心脏功能指标变化;HE染色观察大鼠心肌组织病理学变化;Masson染色检测大鼠心肌纤维化情况;TUNEL染色检测心肌细胞凋亡情况;Western blot检测心肌组织DCC、ERK1/2及p-ERK1/2蛋白表达。结果 与模型组相比,netrin-1低、高剂量组大鼠左心室收缩压(LVSP)和左心室内压力的最大上升和下降速率(±dp/dtmax)值明显升高,左心室舒张末期压(LVEDP)值显著降低;大鼠心质量/体质量(HW/BW)、(左心室+室间隔)质量/体质量[(LV+S)/BW]和(左心室+室间隔)质量/心质量[(LV+S)/HW]均显著降低。心肌细胞坏死明显减少,炎症细胞浸润减轻,胶原沉积减少;凋亡心肌细胞数量明显减少;DCC与p-ERK1/2蛋白表达水平显著升高。结论 ...     

柴胡疏肝汤对自发性高血压大鼠ROCK/JNK信号通路及动脉粥样硬化的影响

目的:观察柴胡疏肝汤(CHSGD)对自发性高血压大鼠(SHR)动脉粥样硬化的影响及其可能作用机制。方法:将50只雄性SHR随机分为模型组(生理盐水灌胃)、复方罗布麻(CKL)组(0.5 g/kg CKL灌胃)及CHSGD低、中、高剂量组(2.5、5和10 g/kg CHSGD分别灌胃),另选10只同源雄性Wistar大鼠为正常对照组(生理盐水灌胃)。智能无创血压计检测血压水平;全自动生化分析仪测定血脂水平;比色法检测血清中氧化应激相关指标一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)的水平;HE染色法检测动脉粥样硬化程度;Western blot法检测Rho相关激酶(ROCK)/c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路相关蛋白RhoA、ROCK1和JNK的表达。结果:治疗4周后,与正常对照组相比,模型组大鼠血压,血清中甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)和MDA水平,以及主动脉组织中RhoA、ROCK1和JNK蛋白表达水平显著升高(P<0.05),血清中高密度脂蛋白胆固醇、NO和SOD水平显著降低(P<0.05);HE染色可见大鼠...     

银杏素调节TGF-β1/Smad通路对ox-LDL诱导血管内皮细胞损伤的影响

目的 探讨银杏素调节转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad信号通路对ox-LDL诱导血管内皮细胞损伤的影响。方法 将人脐静脉血管内皮细胞HUVEC分为对照组（未处理的HUVEC细胞）、模型组（50μg/mL ox-LDL处理的HUVEC细胞）、银杏素组（50μg/mL ox-LDL+12.5μmol/L银杏素处理HUVEC细胞）、SRI-011381组（50μg/mL ox-LDL+10μmol/L的TGF-β1/Smad激活剂SRI-011381处理HUVEC细胞）、银杏素+SRI-011381组（50μg/mL ox-LDL+12.5μmol/L银杏素+10μmol/L的SRI-011381共同处理HUVEC细胞）。ELISA试剂盒检测HUVEC细胞丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）、超氧化物歧化酶（SOD）、IL-6、IL-1β、TNF-α水平;CCK-8法检测HUVEC细胞增殖;流式细胞术检测HUVEC细胞凋亡率;Western blot检测细胞上皮间质转化（EMT）、TGF-β1/Smad通路相关蛋白表达。结果 与对照组相比,模型组IL-1β、IL-6、TNF-α、M...     

自发性高血压大鼠肥大心室肌细胞膜离子流的研究

目的 研究自发性高血压大鼠肥大左心室肌细胞的膜离子流并探讨其意义。方法 选用自发性高血压大鼠，以正常血压Wistar大鼠左心室肌细胞作为对照，采用膜片钳全细胞记录技术记录膜离子流，观察除极电流（钠流和L型钙流）及复极电流（内向整流性钾流，延迟整流性钾流和瞬间外向性钾流），并比较其差异。结果 自发性高血压大鼠的心脏重量，心脏重量与体重比及平均细胞膜电容均显增大，钠流，L型钙流及延迟整流性钾流密度无改变，然而L型钙流慢失活时间常数显延长。内向整流性钾流的内向电流密度显降低，瞬间外向性钾流密度显降低但通道的激活和失活动力学无改变。结论 心脏肥大使左心室肌细胞的重要钾流和钙流发生重构引起复极延迟，此在室性心律失常的发生中具有重要意义。     

自发性高血压大鼠心肌组织microRNA-133a与TGF-β1蛋白表达的改变及意义

 目的：观察microRNA-133a（miR-133a）与转化生长因子-β1（transforming growth factor β1,TGF-β1）蛋白在自发性高血压大鼠（spontaneously hypertensive rats,SHR）心肌组织中的表达改变和关系。方法：取12只18周龄雄性自发性高血压大鼠为SHR组,12只18周龄雄性Wistar-Kyoto （WKY）大鼠为对照组,通过无创血压测量分析系统测大鼠尾动脉血压,Masson染色检测心肌胶原容积分数（collagen volume fraction,CVF）和血管周围胶原面积比率（perivascular collagen area ratio, PVCA）,实时荧光定量PCR检测miR-133a表达水平,免疫组化和Western blotting法检测心肌TGF-β1蛋白表达。结果：与对照组比较,SHR组的收缩压和舒张压明显升高（P<0.01）,心肌CVF和PVCA明显升高（P<0.01）,TGF-β1蛋白表达水平明显升高（P＜0.01）,miR-133a表达水平明显降低（P<0.01）,SHR组心肌miR-133a表达水平为对照组的（23.9±4.6）%;SHR组心肌组织miR-133a与TGF-β1蛋白表达水平呈负相关（r=-0.791, P<0.01）。结论：SHR心肌组织miR-133a表达下调,伴随TGF-β1蛋白表达升高和胶原合成增加。miR-133a与TGF-β1可能参与SHR大鼠的心肌纤维化。     

安体舒通改善自发性高血压大鼠心肌纤维化

目的：观察安体舒通对自发性高血压大鼠（spontaneously hypertensive rats,SHR）心肌纤维化的影响及可能机制。方法:将16只14周龄雄性SHR随机分为安体舒通组和对照组,每组8只，分别以安体舒通30 mg·kg-1·d-1 及等量生理盐水灌胃12周，同时取8只同龄雄性SD大鼠作为正常对照组，用免疫组化的方法对结缔组织生长因子（connective tissue growth factor,CTGF）、转化生长因子β1（transforming growth factors beta-1,TGFβ1）、 胶原Ⅰ和 Ⅲ（collagenⅠand Ⅲ）在大鼠左室心肌的分布及表达进行半定量分析；用RT-PCR的方法检测TGFβ1、CTGF mRNA在心肌表达水平；用Masson染色法观察左室心肌胶原形态，图像分析测量胶原容积分数（collagen volume fraction,CVF）；用碱水解法测定左室心肌羟脯氨酸(hydroxyproline,Hypro)含量。结果:（1）SHR对照组左室重量指数（left ventricular index,LVI）、CVF、Hypro、collagenⅠ和Ⅲ、CTGF、TGFβ1蛋白及mRNA表达明显高于SD大鼠组（P<0.01）；相对于SHR对照组，安体舒通组则显著降低（P<0.05）；（2）相关分析表明：CTGF与TGFβ1、CVF、Hypro和LVI呈高度正相关（P<0.01）。结论:安体舒通能明显改善SHR心肌纤维化，其作用可能是通过阻断盐皮质激素受体和抑制CTGF的表达而实现的。     

2-Methoxyestradiol attenuates hypertension and coronary vascular remodeling in spontaneously hypertensive rats

Objectives

Accumulating data provide evidence that some metabolites of 17β-estradiol are biologically active and mediate multiple effects on the cardiovascular and renal systems. We investigated the effect of 2-methoxyestradiol (an active metabolite of estradiol with non-feminizing activity) on the development of hypertension and myocardial vascular remodeling in male and female ovarectomized SHR.

Methods

Rats were divided into five groups: intact females, ovarectomized (OVX), OVX+ 2-methoxyestradiol (2ME), control males, and male + 2ME. Systolic blood pressure was determined from 10 to 18 weeks. Structural changes in coronary vessels were quantified by an image analyzer. Immunoblotting of phosphorylated ERK1/2 and NADPH oxidase activity were performed on mesenteric arteries.

Results

Treatment with 2ME reduced the increase in systolic blood pressure in male and ovarectomized rats to values not different from those obtained in intact females. Myocardial arterioles and small arteries showed significant increases in wall-to-lumen ratio and perivascular fibrosis in male and ovarectomized rats when compared with intact females. NADPH oxidase activity was increased in mesenteric arteries from males and ovarectomized females as compared with intact females. Finally, the expression of phosphorilated ERK1/2 were significantly higher in mesenteric arteries from male and ovariectomized animals than in those from intact females. Those effects of ovarectomy and gender differences were totally or partially prevented by treatment with 2-methoxyestradiol.

Conclusions

These data demonstrate that 2-methoxyestradiol protects the vasculature from hypertension-induced myocardial arterial remodeling in male and ovarectomized SHR, and that might be in part related to decreased superoxide generation and ERK1/2 activation.     

芝麻素改善自发性高血压大鼠肾损伤的作用及与PI3K/AKT/mTOR信号通路的关系

 目的: 观察芝麻素对自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats,SHR)肾脏损伤的作用及与PI3K/AKT/mTOR信号通路之间的关系。方法: 雄性SHR随机分成模型组、芝麻素低剂量(80 mg/kg)、高剂量(160 mg/kg)组及卡托普利(30 mg/kg)组。同时选取同周龄WKY大鼠作为正常对照组。每日灌胃1次,模型组、正常对照组给予0.5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na),给药组给予CMC-Na溶解的上述剂量药物,给药前及给药后每隔2周测量1次血压。12周后,检测血尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)及尿微量白蛋白(U-mAlb)含量;测定肾脏丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)水平;HE、Masson染色观察肾组织病理学变化;TUNEL法检测肾组织细胞凋亡率;Western blot法检测肾脏p-AKT、p-mTOR、4EBP1、S6K1、Bcl-2和Bax的蛋白水平。结果: 芝麻素能降低SHR舒张压,明显改善肾组织的病理学变化,降低肾脏BUN、SCr、U-mAlb、MDA含量及细胞凋亡率,提高SOD活性,显著减少p-AKT、p-mTOR、4EBP1、S6K1和Bax的蛋白水平,增加Bcl-2的蛋白表达。结论: 芝麻素减轻SHR大鼠肾脏损伤的作用机制可能与降低血压、对抗氧化应激、抑制细胞凋亡、阻滞过度活化的PI3K/AKT/mTOR信号通路有关。     

葛根素对自发性高血压大鼠心肌纤维化的影响及其机制

 目的：观察葛根素对自发性高血压大鼠（SHR）心肌局部血管紧张素II (Ang II)、巨噬细胞及心肌组织形态学的影响,探讨其保护心肌的可能机制。方法：35只12周龄SHR随机分为葛根素高、中、低剂量组（100 mg/kg、50 mg/kg、25 mg/kg,腹腔注射）、卡托普利组（30 mg/kg灌胃）和SHR对照组（生理盐水腹腔注射）。另设WKY空白对照组（生理盐水腹腔注射）。每组7只,给药6周。给药6周后麻醉下迅速处死取出心脏,称量左心室湿重后,备做Masson染色、组织匀浆和RT-PCR。结果：与WKY大鼠相比,SHR左室质量指数增高（P<0.01）,心肌组织Ang II含量上升（P<0.01）,单核细胞趋化蛋白1 （MCP-1）和蛋白酶激活受体2（PAR2） mRNA表达增加（P<0.01）,巨噬细胞浸润明显（P<0.01）,间质纤维化严重（P<0.01）。高剂量葛根素和卡托普利明显降低左室质量指数（P<0.01）,降低心肌Ang II含量（P<0.01）,下调MCP-1和PAR2 mRNA表达（P<0.01）,减少巨噬细胞浸润（P<0.01或P<0.05）,减轻心肌间质纤维化（P<0.01）。结论:葛根素具有治疗自发性高血压大鼠心肌纤维化作用,其机制可能与降低心肌局部Ang II含量、下调MCP-1和PAR-2 mRNA表达及减少巨噬细胞浸润有关。     

自发性高血压大鼠主动脉结构重建

本文采用组织形态学方法和计算机图象分析,研究了４－５５周自发性高血压大鼠胸主动脉几何形态及显微结构成分的重建。结果显示：随着血压增高和年龄增长,ＳＨＲ主主显微结构成分的重均比ＷＫＹ大鼠显著,说明压力因素对血管重建起重要作用。ＳＨＲ主 动脉肥厚为研。高血压早期以血管平滑肌细胞肥大和ＶＳＭＣ面积增加为主,高血压老龄期则以胶原纤维积聚为特征。ＶＳＭＣ及细胞外基质的变化构成了ＳＨＲ主动脉重建的重要过程。     

心肌内向整流钾通道激动剂抑制异丙肾上腺素所致大鼠心室重构

目的:观察和探讨内向整流钾通道(Ⅰ_(K1))激动剂盐酸扎考必利(zacopride,Zac)对异丙肾上腺素(isoproterenol,Iso)所致心室重构的影响及作用机制。方法:SD大鼠随机分为正常对照组、Iso模型组、Zac干预组、Zac+氯喹干预组和卡托普利阳性对照组。腹腔注射异丙肾上腺素3 mg/kg,每天1次,连续给药10 d,观测各组全心质量/体质量比和左心室质量/体质量比。用全细胞膜片钳技术检测大鼠心室肌细胞电压门控钙电流(Ⅰ_(Ca-L))、静息膜电位(RMP)及动作电位时程(APD)的变化。选用新生1~3 d的SD乳鼠,用0.08%胰蛋白酶和0.04%Ⅱ型胶原酶消化心脏组织,经差速贴壁法和5-溴脱氧尿嘧啶核苷纯化心肌细胞后随机分成正常对照组、Iso模型组、Zac干预组、Zac+BaCl_2干预组和Zac+氯喹干预组,培养24 h后用激光共聚焦显微镜检测心肌细胞内游离钙离子浓度。结果:Iso模型组与正常对照组比较,全心肥厚指数、左心室肥厚指数明显增加,膜片钳结果提示RMP减小APD明显延长;Zac干预组明显抑制心肌肥大,并增大RMP,缩短APD。同时应用低剂量Ⅰ_(K1)抑制剂氯喹可明显抑制Zac的抗心室重构作用,并逆转Zac对RMP和APD影响。在乳鼠心肌细胞,Iso可使细胞表面积增大,细胞内[Ca~(2+)]_i增高;Zac干预后细胞形态恢复至正常或接近正常水平,并显著减轻钙超载。Ⅰ_(K1)阻断剂BaCl_2和氯喹可阻断Zac的效应。结论:Ⅰ_(K1)选择性激动剂Zac明显抑制异丙肾上腺素所致的心室重构,其机制可能为增强Ⅰ_(K1),进而增大RMP,缩短APD,从而阻断心肌细胞内钙超载依赖的信号通路。     

微粒化非诺贝特对高脂饲养SHR脂毒性及胰岛素敏感性的影响

目的：观察微粒化非诺贝特对高脂饲养自发性高血压大鼠(SHR) 脂毒性及胰岛素敏感性（IS）的影响。方法:将27只SHR随机分为3组，1组给予标准饲料，其余2组分别给予高脂饲料、高脂饲料+非诺贝特100 mg·kg-1·d-1灌胃。3个月后，观察比目鱼肌细胞内脂滴沉积情况，计算脂质沉积指数（LAI）；进行葡萄糖耐量试验及游离脂肪酸测定。结果:(1) 与标准饲料组比较，高脂饲料组SHR体重和血浆甘油三酯（TG）、胆固醇（TC）水平明显增高，高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）水平明显降低(P＜0.05)，而非诺贝特治疗组与标准饲料组比较血压明显下降，HDL-C明显升高，体重、TG及TC水平无明显差异。(2) 高脂饲料组空腹血糖、游离脂肪酸、葡萄糖曲线下面积明显高于标准饲料组，胰岛素敏感指数显著低于标准饲料组（0.0038±0.0007 vs 0.0053±0.0013, P＜0.05）。非诺贝特组各项指标与标准饲料组无明显差异（P＞0.05）。(3)与标准饲料组相比，高脂饲料组比目鱼肌细胞内有大量脂质沉积（LAI: 6.42±0.59 vs 1.98±0.97, P＜0.05），非诺贝特治疗组比目鱼肌细胞内脂质含量显著减少，与标准饲料组无明显差别（LAI: 3.32±0.77 vs 1.98±0.97, P＞0.05）。经协方差分析排除血糖、血压因素影响后，上述差别仍有意义（F=10.46, P＜0.05）。（4） 骨骼肌脂质沉积指数与胰岛素敏感指数呈负相关（r=-0.58, P＜0.05），与TG、FFA、体重、葡萄糖曲线下面积呈正相关。结论:非诺贝特除了调脂外，还具有降低高脂饲养SHR体重、血压、脂毒性和改善胰岛素敏感性多重效应。