RABIF促进肝癌细胞侵袭转移机制的研究

目的 探讨RABIF在肝癌细胞中的表达及其功能.方法 采用Real-time PCR检测30例肝癌组织以及相应正常肝组织中RABIF的表达水平,并检测RABIF在肝癌细胞系及正常肝细胞系中的表达情况.通过sh-RABIF转染肝癌细胞系HepG2敲低RABIF;采用CCK-8实验检测细胞增殖改变情况;采用Transwel...     

CMTM5在肝癌患者中的表达及其对肝癌细胞生长和侵袭性的调节作用

目的 探究CMTM5在肝癌患者中的表达及其对肝癌细胞生长和转移的调节作用.方法 免疫组织化学检测60例肝细胞癌患者癌组织及配对癌旁组织中的CMTM5表达.将SK-HEP-1细胞分为对照组、pLenti6.3组和CMTM5-pLenti6.3组.用携带CMTM5的重组慢病毒(CMTM5-pLenti6.3组)或阴性对照慢病毒(pLenti6.3组)转染SK-HEP-1细胞,未转染的细胞作为对照组.通过qRT-PCR和Western blot验证转染效率.细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭.Western blot检测PI3K-AKT信号通路及下游分子Bcl2、MMP9和p21的表达.通过皮下接种过表达CMTM5的SK-HEP-1细胞建立体内肿瘤异种移植模型.结果 癌组织中CMTM5的阳性染色评分显著低于癌旁组织(P＜0.05).CMTM5的表达水平与肿瘤分化程度和TNM分期有关(P＜0.05).与对照组相比,CMTM5-pLenti6.3组SK-HEP-1细胞的增殖、迁移和侵袭能力显著降低,细胞凋亡率显著升高(P＜0.05).与接种空载体转染的细胞的裸鼠相比,接种高表达CMTM5的细胞的裸鼠的肿瘤体积和肿瘤重量均明显降低(P＜0.05).与对照组相比,CMTM5-pLenti6.3组SK-HEP-1细胞中PI3K、p-AKT、Bc12和MMP9的蛋白表达水平显著降低,而p21的蛋白表达水平显著升高(P＜0.05).结论 上调CMTM5的表达可抑制肝癌细胞的生长和侵袭能力.     

Survivin-siRNA对前列腺癌DU145细胞的促凋亡作用

目的:探讨survivin-siRNA对前列腺癌细胞株DU145的促凋亡作用。方法:构建针对survivin的siRNA表达载体pSi-sur,与脂质体和scramble-siRNA(pSi-scrambled)对照组分别转染前列腺癌细胞DU145后,利用半定量RT-PCR和Western blotting分别检测细胞survivin mRNA及蛋白表达水平;吖啶橙染色、Annexin V-FITC流式细胞术和TUNEL法检测细胞凋亡情况。结果:转染72 h后,实验组细胞的survivin mRNA水平是脂质体组的0.28±0.07(n=3),蛋白表达水平是脂质体组的0.34±0.05(n=3),与对照组比较,差异显著(P0.05);吖啶橙染色、Annexin V-FITC和TUNEL法均观察到实验组细胞呈现明显的凋亡现象。结论:利用survivin-siRNA可明显抑制前列腺癌细胞DU145 survivin基因和蛋白表达,并诱导细胞凋亡,结果为进一步进行动物体内研究奠定了基础。     

miRNA在系统性红斑狼疮患者T细胞中的作用及机制研究

miRNA为内源性非编码RNA,具有调控基因表达的能力,参与疾病过程.系统性红斑狼疮(systemic lupus erythe-matosus,SLE)是一种女性多发的全身性自身免疫性疾病,具有先天性免疫异常和获得性免疫异常的特点,其中T细胞功能异常在SLE的发病机制中发挥重要作用.研究发现,miRNA在SLE患者T...     

雷公藤红素对前列腺癌DU-145细胞生物学行为的影响及机制研究

目的 探讨雷公藤红素对前列腺癌DU-145细胞生物学行为的影响及可能机制.方法 体外培养DU-145细胞,分别以2.5、5.0、10.0μmol/L雷公藤红素处理,对照组细胞以等量0.9％NaCl处理.给药48 h后,MTT实验与平板克隆实验检测DU-145细胞增殖能力;Transwell实验检测DU-145细胞迁移和...     

miR-141表达异常对人肝癌细胞恶性生物学表型的影响

 目的: 研究微小RNA-141(miR-141)在人肝癌细胞和正常胎肝细胞中的表达,同时分析miR-141表达异常对人肝癌细胞恶性生物学表型的影响。方法: 分别提取人肝癌细胞SMMC-7721和正常肝细胞HL-7702的总RNA,采用实时荧光定量PCR法检测miR-141的表达。采用脂质体介导的转染方法分别将miR-141 mimic转染SMMC-7721细胞,将miR-141 inhibitor转染HL-7702细胞;MTS试剂盒和BrdU-ELISA检测细胞增殖能力,流式细胞术检测转染前后细胞周期和凋亡率的变化。Transwell实验检测miR-141表达变化对细胞体外迁移能力的影响。结果: miR-141在SMMC-7721细胞中的表达较HL-7702细胞明显下降。与空白组、脂质体组和阴性对照组相比,转染25 nmol/L miR-141 mimic的SMMC-7721细胞中,细胞增殖速度减慢,S期细胞比例降低,凋亡细胞比例上升,细胞体外迁移能力下降;转染50 nmol/L miR-141 inhibitor的HL-7702细胞中,细胞增殖速度加快,S期细胞比例上升,凋亡细胞比例下降,细胞体外迁移能力增强。结论: miR-141在人肝癌细胞中表达下降,上调miR-141表达可抑制肝癌细胞体外增殖活性和迁移能力,影响细胞周期和凋亡。在肝癌发病进程中,miR-141可能扮演抑癌基因的角色。     

FERMT2在肝癌组织中的表达及其对肝癌细胞生长的调控

目的:观察fermitin家族同源蛋白2(FERMT2)在肝细胞癌(HCC)组织中的表达,并以体外实验分析FERMT2基因敲除对肝癌细胞生长及相关调控分子表达的影响。方法:采用real-time PCR及免疫组化实验检测FERMT2在HCC及癌旁正常肝组织中的表达情况;采用CRISPR/Cas9技术构建FERMT2基因敲除的稳定MHCC97H细胞系,通过WST-1法和流式细胞术比较其与野生型MHCC97H细胞活力、细胞周期和凋亡状态的改变,并采用Western blot检测相关调控蛋白的表达变化。结果:FERMT2在HCC组织中的mRNA和蛋白表达水平均显著高于癌旁组织,且FERMT2蛋白的高表达与HCC患者术后复发有关(P0.05);成功构建了FERMT2基因敲除的稳定MHCC97H细胞系;与野生型细胞相比,FERMT2基因敲除后细胞活力明显减弱,S期细胞数量明显减少,细胞凋亡增加,且细胞内增殖细胞核抗原、细胞周期蛋白及细胞周期蛋白依赖性激酶2的表达均显著降低(P0.05);细胞凋亡抑制因子survivin及Bcl2的表达也明显下降(P0.05),并可检测到cleaved caspase-3。结论:FERMT2在肝癌组织中呈高表达,它可能通过调控细胞周期调节蛋白及抗凋亡蛋白的表达影响肝癌细胞的活力、细胞周期及凋亡,进而在肝癌形成及发展过程中发挥促癌作用。     

miRNA与肿瘤的研究进展

微小RNA(microRNA, miRNA)是一种长度约为22 nt的非编码RNA,它们通过miRNA介导的特异性的基因沉默导致靶mRNA降解及抑制蛋白质的合成调控转录后基因表达水平。miRNA对细胞的增殖、分化和凋亡有重要的调节作用,在正常组织和肿瘤组织中的表达显著不同,参与了肿瘤的发生、发展。本文主要讨论miRNA在肿瘤方面的研究进展。     

BANCR 对肝癌细胞HepG2 增殖、侵袭和血管新生的促进作用

目的:探索BANCR 对人肝癌细胞HepG2 的增殖、凋亡、侵袭和血管新生的影响。方法:实时定量PCR (qRT-PCR)检测BANCR 的表达。BANCR siRNA 和Scramble 分别转染HepG2 细胞,利用CCK-8 检测细胞增殖情况,流式细胞术分析细胞凋亡,Transwell 测试细胞侵袭能力,管腔形成实验分析血管新生能力,免疫印迹分析增殖细胞核抗原(PCNA)、Caspase-3 和基质金属蛋白酶9(MMP-9),血管内皮细胞生长因子VEGF、酸性成纤维细胞生长因子bFGF 和干扰素IFN-酌的蛋白表达。结果:肝癌细胞(HepG2)中BANCR 的表达高于正常干细胞L02(P<0.05)。与对照组相比,BANCR siRNA 组的细胞增殖倍数明显降低,且BANCR siRNA 组具有更高的细胞凋亡率和较低的侵袭细胞数(P<0.05)。免疫印迹结果显示,与对照组相比,BANCR siRNA 组细胞凋亡标记蛋白Caspase-3 和IFN-酌的表达明显上升(P<0.05),细胞增殖和侵袭标记蛋白PCNA、MMP-9、Fn、Vimentin 以及VEGF、bFGF 的表达都明显受到抑制(P<0.05)。结论:siRNA 干扰BANCR 后大大促进人肝癌细胞HepG2 的凋亡,严重抑制了细胞增殖、侵袭以及血管新生。     

肝细胞癌中DcR3表达与癌细胞凋亡的关系研究

目的探讨诱捕受体3（decoy receptor 3,DcR3）蛋白在原发性肝细胞癌（HCC）中的表达及其与癌细胞凋亡和HCC预后的关系。方法应用免疫组织化学（EnVision法）及和脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记（TUNEL）技术检测43例HCC,16例非癌肝组织（单纯性肝硬化及肝血管瘤周围正常肝组织）中DcR3蛋白的表达及凋亡情况,并分析其与临床病理参数的关系。结果DcR3明确定位于肝细胞胞质内;HCC组织中的DcR3蛋白的阳性率为74．42％（32／43）,明显高于非癌肝组织43．75％（7／16,P〈0．05）;HCC中有转移癌组DcR3阳性率为100％（22／22）,明显高于无转移组52．94％（9／17,P〈0．01）;DcR3蛋白的表达与AFP水平（r=0．444,P〈0．01）、门静脉癌栓（r=0．414,P〈0．01）有关,与年龄、性别、有无肝硬化、包膜浸润、肿瘤结节数及分化程度无关（P〉0．05）。HCC中细胞凋亡指数[AI（0．78±0．64）％]明显低于非癌肝组织[（3．32±1,81）％,P〈0．01];HCC临床TNM分期Ⅰ、Ⅱ期AI（1．03±0．69）％高于Ⅲ、Ⅳ期[（0．52±0．48）％,P〈0．01];HCC无转移组AI（1．10±0．72）％高于转移组[（0．44±0．27）％,P〈0．01];AI与AFP水平（r=-0．468,P〈0．01）、门静脉癌栓（r=-0．434,P〈0．01）、包膜浸润（r=-0,331,P〈0．05）有关,与年龄、性别、有无肝硬化、肿瘤结节数及分化程度无关（P〉0．05）。在HCC和非癌肝组织中,DcR3阳性者的AI均分别低于阴性者的AI（均P〈0．01）。结论DcR3表达可影响凋亡并在HCC的发生发展中起重要作用;检测DcR3蛋白与AI有助于判断HCC患者预后。     

糖蛋白非转移性黑色素瘤蛋白B对人肝癌细胞增殖、凋亡和侵袭能力的影响及其分子机制

 目的：研究糖蛋白非转移性黑色素瘤蛋白B（glycoprotein nonmetastatic melanoma protein B,GPNMB）对肝癌细胞增殖、凋亡和侵袭能力的影响及其分子机制。方法：以人HepG2细胞为研究对象,构建GPNMB的小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）以及过表达载体,转染入细胞后分别采用MTT法、流式细胞术和Transwell小室法观察其对HepG2细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响。结果：增殖实验结果表明GPNMB可促进HepG2细胞的增殖;流式细胞术检测发现GPNMB对HepG2细胞凋亡几乎无影响;细胞侵袭结果表明GPNMB可促进HepG2细胞的侵袭;当整合素β1亚基基因被siRNA沉默后,GPNMB对HepG2细胞增殖和侵袭的促进作用均受到明显抑制。结论: GPNMB可能通过与整合素β1亚基相互作用促进肝癌细胞的增殖和侵袭能力,提示GPNMB可以作为治疗肝癌的潜在靶点。     

下调USP9X表达对胃癌AGS细胞凋亡和侵袭能力的影响

目的:探讨下调X染色体连锁的泛素特异性肽酶9(USP9X)表达对胃癌细胞凋亡和侵袭能力的影响,并探讨其可能的分子机制。方法:将USP9X小干扰RNA(siRNA)和对照siRNA转染胃癌AGS细胞,将细胞分为3组:未处理的AGS组、对照siRNA组和USP9X siRNA组。采用real-time PCR和Western blot检测不同处理组的胃癌AGS细胞中USP9X的mRNA和蛋白表达。CCK-8法检测细胞活力;流式细胞术和Boyden小室分别检测不同处理组胃癌AGS细胞的凋亡和侵袭能力;Western blot检测凋亡和侵袭相关蛋白的表达水平。结果:USP9X siRNA显著下调胃癌AGS细胞中USP9X的mRNA和蛋白表达水平。USP9X表达下调显著诱导胃癌细胞凋亡,并降低胃癌细胞的侵袭能力。USP9X表达下调显著降低Mcl-1和MMP-2的表达,但明显上调Bax蛋白的表达(P0.05)。结论:USP9X可能是胃癌细胞凋亡和侵袭的关键调控因子。     

HOXB7基因沉默对人胃癌细胞活力、迁移和侵袭的影响

目的:探讨靶向沉默HOXB7基因对人胃癌SGC-7901细胞活力、迁移和侵袭作用的影响及潜在机制。方法:设计靶向HOXB7的siRNA,然后瞬时转染胃癌SGC-7901细胞,实时荧光定量PCR和Western blot法检测siRNA靶向沉默的效果。MTT法检测细胞的活力,Western blot法检测细胞周期相关蛋白CDK4和cyclin D1蛋白的表达水平,Transwell小室侵袭实验检测SGC-7901细胞的侵袭能力,实时荧光定量PCR和Western blot法检测胃癌SGC-7901细胞PTEN和VEGF的表达水平以及p-AKT的蛋白水平。结果:胃癌组织中HOXB7基因在mRNA和蛋白水平的表达均显著高于对照组织。siRNA可有效靶向沉默SGC-7901细胞中HOXB7的表达,且沉默HOXB7表达后SGC-7901细胞活力明显下降,同时细胞周期相关蛋白CDK4和cyclin D1的表达亦下调。靶向沉默HOXB7可明显抑制SGC-7901细胞中AKT的磷酸化水平,抑制胃癌细胞的侵袭转移,同时下调VEGF的表达水平,抑制胃癌组织中的肿瘤血管生成。结论:HOXB7作为一个癌基因,可上调细胞周期相关蛋白CDK4、cyclin D1和侵袭相关分子VEGF的表达,上调AKT的磷酸化水平,进而抑制PTEN的功能,促进胃癌细胞SGC-7901的生长、迁移和侵袭能力。     

冬凌草甲素对人肝癌MHCC-97H细胞系侵袭和迁移的作用

目的:探讨冬凌草甲素(oridonin)对肝癌细胞侵袭和迁移的影响及其机制。方法:采用细胞培养技术培养人肝细胞癌MHCC-97H细胞,用不同浓度的冬凌草甲素处理肝癌细胞,采用划痕实验检测细胞的迁移能力;Transwell实验测定细胞的侵袭能力;黏附实验评价细胞的黏附能力;Western blot法检测LIM激酶1(LIMK-1)、丝切蛋白(cofilin)和磷酸化cofilin(p-cofilin)蛋白水平的改变。结果:冬凌草甲素可明显降低肝癌细胞的体外侵袭、迁移及黏附能力(P0.05),且在一定浓度范围内具有明显的量效关系。冬凌草甲素干预处理细胞后,cofilin的蛋白水平无明显变化,LIMK-1和p-cofilin的蛋白水平明显下调。结论:冬凌草甲素体外具有抑制肝癌MHCC-97H细胞侵袭和迁移的作用,其机制可能与调控LIMK-1/cofilin信号通路有关。     

木犀草素对人肝癌HepG2细胞株侵袭、迁移和黏附能力的影响

目的:探讨木犀草素对人肝癌HepG2细胞株侵袭、迁移和黏附能力的影响及其作用机制。方法:采用不同浓度木犀草素处理体外培养的人肝癌HepG2细胞株,Transwell实验检测细胞的侵袭能力,划痕实验检测细胞的迁移能力,黏附实验评价细胞的黏附能力,Western blot检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)和Snai1蛋白的表达。结果:木犀草素可明显降低肝癌HepG2细胞的体外侵袭、迁移及黏附能力(P0.01),且在一定浓度范围内呈明显量效关系。木犀草素处理肝癌细胞后,上皮细胞标志蛋白E-cadherin表达明显上调,间质细胞标志蛋白N-cadherin和vimentin以及转录因子Snai1表达均明显下调,木犀草素对以上蛋白的调节呈明显浓度依赖性。结论:木犀草素体外具有抑制肝癌HepG2细胞株侵袭、迁移和黏附的作用,其作用机制可能与调控上皮-间质转化有关。     

E-cadherin的表达与肝细胞癌侵袭和转移的关系

目的研究上皮性钙黏蛋白（E-cadherin）在人肝细胞癌（HCC）中的表达情况,探讨其与肝癌的相关性。方法选择56例有完整随访资料的肝细胞癌及相应癌旁组织标本、20例正常肝组织标本,用RT-PCR方法检测E-cadherinmRNA的表达;用免疫组织化学方法检测E-cadherin的表达。结果①E-cadherin在肝细胞癌组织中的表达显著低于癌旁组织和正常组织（P〈0．05）,而在癌旁组织和正常组织中的表达无差异;②E-cadherin在肝癌组织中的表达与术后复发时间呈正相关（P〈0．05）,与病理分期呈负相关（P〈0．05）;③癌组织中E-cadherin表达与肝外转移呈负相关（P〈0．05）;④癌旁组织中E-cadherin表达与术后复发时间呈正相关（P〈0．05）。结论E-cadherin表达缺失或下调与肝癌的分化程度、侵袭转移能力和复发倾向相关,对肝癌临床转归的评估有一定指导意义。     

沉默TRIM27基因对鼻咽癌5-8F细胞增殖、侵袭与迁移的影响

目的:检测TRIM27蛋白在鼻咽癌组织和鼻咽部正常组织中的表达水平,观察沉默TRIM27对鼻咽癌5-8F细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。方法:通过免疫组化技术检测鼻咽癌组织和鼻咽部正常组织中TRIM27的表达水平,采用实时荧光定量PCR(real-time PCR)和Western blot法分别检测5-8F细胞和NP69细胞中TRIM27的mRNA和蛋白表达水平;利用脂质体2000将TRIM27干扰序列转入5-8F细胞中;采用real-time PCR检测转染后细胞中TRIM27 mRNA表达水平的变化,Western blot法检测转染后细胞中TRIM27蛋白水平的变化;CCK-8法检测细胞活力的变化;细胞平板集落形成实验观察转染后细胞增殖能力的变化;Transwell实验检测细胞侵袭能力的变化;划痕实验观察细胞迁移能力的变化。结果:免疫组化结果显示TRIM27在鼻咽癌组织中的表达率高于鼻咽部正常组织;TRIM27基因沉默后5-8F细胞增殖、侵袭和迁移能力均明显受到抑制(P0.05)。结论:TRIM27在鼻咽癌5-8F细胞中可能充当癌基因的角色。沉默TRIM27基因可以明显抑制鼻咽癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力。     

miR-203在舌癌组织中的表达及其对Tca8113细胞活力和侵袭的影响

目的:研究舌癌组织中miR-203的表达,分析它与临床病理学参数之间的相关性,并探讨其与人舌癌Tca8113细胞活力及侵袭能力的关系。方法:收集28例舌癌手术标本,每例标本分别取癌灶及远端5 cm处正常黏膜组织(即远癌正常组织)2个部分。实时定量PCR检测舌癌患者肿瘤组织中miR-203的相对表达水平,分析其与临床病理特征之间的关系;脂质体2000介导miR-203 mimic和无关序列对照转染Tca8113细胞株,并通过CCK-8实验和Transwell小室侵袭实验检测上调miR-203对Tca8113细胞活力及侵袭能力的影响。结果:28例舌癌组织中miR-203表达水平与癌旁正常组织相比显著降低(P0.05),miR-203的表达与肿瘤TNM分期及淋巴结转移存在相关性(P0.05),而与患者的年龄和性别无关。Tca8113细胞转染miR-203 mimics上调miR-203表达可显著抑制Tca8113细胞株的活力及侵袭能力,与对照组比较差异有统计学显著性(P0.05)。结论:上调miR-203表达能有效抑制舌癌细胞的生长和侵袭,miR-203可能成为舌癌基因治疗的靶点。     

淫羊藿苷对前列腺癌细胞株活力、迁移与侵袭的作用

目的:探讨淫羊藿苷对前列腺癌细胞株Du145与PC3的存活、迁移与侵袭能力的影响,并初步研究其机制。方法:CCK-8法检测不同浓度淫羊藿苷(0、5、10、20、40和80μmol/L)对Du145细胞与PC3细胞活力的影响;Transwell小室实验检测细胞的迁移和侵袭能力;Western blot检测Notch-1、MMP-2、MMP-9和Hes-1蛋白水平。结果:MTT法检测结果显示淫羊藿苷呈浓度依赖性抑制Du145与PC3细胞的活力,当浓度到达40μmol/L时,抑制作用达到最大;经淫羊藿苷干预后,Du145和PC3细胞迁移和侵袭能力显著下降,Notch-1、MMP-2、MMP-9和Hes-1蛋白表达水平显著下降。结论:淫羊藿苷具有抑制前列腺癌细胞株Du145与PC3生长、迁移和侵袭的作用,其作用机制可能与淫羊藿苷抑制Notch-1、MMP-2、MMP-9和Hes-1蛋白的表达有关。     

SLeX对肝癌HepG2细胞迁移和侵袭的影响

目的:探讨唾液酸化路易斯寡糖X(sialyl Lewis X,SLeX)在肝癌HepG2细胞中的表达及其对HepG2细胞迁移能力和侵袭能力的影响。方法:实时荧光定量PCR和Western blot法检测α1,3-岩藻糖基转移酶Ⅶ(α1,3-fucosyltransferase Ⅶ,FUT7)在HepG2细胞和L-02细胞中的表达,Western blot及免疫细胞化学染色检测SLeX在HepG2细胞和L-02细胞中表达,应用Transwell小室检测SLeX单克隆抗体封闭后HepG2细胞侵袭和迁移能力的改变。结果:FUT7和SLeX在HepG2细胞中表达,而在L-02细胞中无表达;0.05、0.5和5 mg/L的SLeX单克隆抗体封闭后,HepG2细胞的迁移率逐渐下降,与对照组相比差异显著(P0.05),侵袭穿膜细胞数明显少于对照组(P0.05);SLeX单克隆抗体封闭组间两两比较迁移率与侵袭细胞数的差异均有统计学意义(P0.05)。结论:SLeX在肝癌HepG2细胞中高表达,与HepG2细胞迁移能力和侵袭能力密切相关。