脑缺血时的星形胶质细胞反应

星形胶质细胞(Astroglia)是中枢神经系统中数量最多的细胞。具有多方面的功能：构成神经组织的网架而起支持作用；与神经元的解剖位置关系紧密，包围除少；具有抗原呈递作用，参与中枢神经系统的免疫反应；参与构成血脑屏障(Blood-Brain Barrier，BBB)。研究发现。脑缺血时星形胶质细胞异常活跃，通过合成多种蛋白质、细胞因子和神经营养因子等对神经元起保护或毒性作用，对缺血性脑损伤的发展和转归具有重要意义。     

活化小胶质细胞致星形胶质细胞激活

目的探讨活化小胶质细胞培养液对星形胶质细胞的影响。方法 LPS激活原代培养小胶质细胞,采用活化的小胶质细胞条件培养液刺激星形胶质细胞,观察星形胶质细胞GFAP及IL-1β和TNFα的表达。结果 LPS刺激后,小胶质细胞OX42表达量上升,IL-1β和TNFα的表达量增高;小胶质细胞条件培养液可致星形胶质细胞激活,GFAP表达量上升,IL-1β和TNFα的表达量增加。结论活化小胶质细胞的条件培养液可致星形胶质细胞激活,激活的小胶质细胞和星形胶质细胞表达前炎症介质IL-1β和TNFα。     

IL-1β影响大鼠星形胶质细胞中SSeCKS表达的研究

目的:研究Src抑制的蛋白激酶C的底物(SSeCKS)在IL-1β激活的星形胶质细胞中的表达.方法:以炎性因子IL-1β刺激大鼠体外培养的星形胶质细胞,观察细胞中SSeCKS的表达及其细胞内的亚定位的改变.结果:IL-1β可上调大鼠原代培养星形胶质细胞中SSeCKS的表达,诱导其丝氨酸磷酸化.在亚细胞水平,IL-1β还能引起SSeCKS向核周、细胞星状突起聚集,而蛋白激酶C(PKC)抑制剂Ro-31-8220能抑制IL-1β对细胞中SSeCKS亚细胞定位及磷酸化水平的影响.结论:在IL-1β的影响下,大鼠星形胶质细胞中SSeCKS的表达增加,磷酸化水平增强,细胞内定位发生改变,这种改变与PKC的功能相关,提示SSeCKS可能作为PKC的下游分子参与到炎性因子引起的星形胶质细胞活化的过程中.     

低氧诱导体外培养大鼠星形胶质细胞VEGF的表达

目的　血管内皮细胞生长因子 (VEGF)是一种高度特异性的促血管内皮细胞生长的因子 ,探讨其在低氧情况下缺血组织血管形成的影响。方法　用免疫组织化学法和RT RCR法检测了正常培养和低氧复氧诱导情况下体外培养大鼠星形胶质细胞中VEGF蛋白及VEGFmRNA表达。结果　正常培养的大鼠星形胶质细胞中有VEGF表达 ,但表达量较低 ,低氧复氧诱导后星形胶质细胞中VEGF表达量会增加 ,且随着复氧时间延长表达量增加 ,6h到达高峰 ,以后又逐渐降低。结论　低氧复氧可能诱导大鼠星形胶质细胞代偿性增生 ,使VEGFmRNA表达上调而促进血管再生 ,这在一定程度上可减少缺血对神经元的影响。     

氨对星形胶质细胞超微结构的影响

目的：在体外实验条件下观察氨对星状胶质细胞超微结构的影响。材料与方法：用ＮＨ４Ｃｌ造成高高ＮＨ４环境，对体外培养之星形胶质细胞的形态变化进行了超微结构观察。结果：高ＮＨ４环境下，星菜胶质细胞首先表现出损伤性变化，细胞电子密度降低，线粒体、内质网等细胞器肿胀，在胞质内形成许多单位膜包绕的电子密度降低的空泡区域，以后随着氨浓度加大或／和氨作用的时间延长，细胞内成份开始出现增生修复现象，次级溶酶体数量增     

一氧化氮对星形胶质细胞轴突生长因子-1表达及迁移的影响

目的 探讨一氧化氮(NO)对星形胶质细胞中轴突生长因子-1(netri-1)的表达变化以及对细胞迁移的影响。方法 采用硝普钠（SNP）作为NO供体处理星形胶质细胞,通过振荡培养和差速贴壁法分离纯化新生SD大鼠星形胶质细胞,接种至培养板,分为实验组和对照组,每组6个样本,实验组用50μmol/L SNP处理星形胶质细胞,通过划痕法观察细胞的迁移,并采用Western blotting 和免疫细胞化学方法分别检测处理前后的星形胶质细胞中netrin-1蛋白的表达变化。 结果 SNP处理后,实验组的星形胶质细胞与对照组相比,划痕区细胞明显增多,星形胶质细胞netrin-1表达随着时间的推移出现先升高后降低趋势,于48 h达到峰值 (P<0.01)。 结论 SNP使星形胶质细胞netrin-1表达水平发生变化和影响星形胶质细胞迁移,提示netrin-1可能通过NO的调控而影响星形胶质细胞迁移。     

炎性因子IL-1β对星形胶质细胞抗氧化应激能力的影响

目的:本研究应用原代培养星形胶质细胞,探讨炎症因子白细胞介素-1β(IL-1β)对星形胶质细胞抗氧化应激能力的影响。方法:在原代星形胶质细胞培养中分别加入1 ng/ml IL-1β,流式细胞仪检测不同作用时间(0、24、48、72 h)细胞线粒体膜电位改变,激光共聚焦显微镜观察活性氧(ROS)生成,分光光度法检测细胞内谷胱甘肽(GSH)含量,RT-PCR、Western Blot检测星形胶质细胞谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的表达变化。结果:1 ng/ml IL-1β处理原代培养星形胶质细胞24~72 h,细胞线粒体膜电位无明显改变,细胞未出现明显损伤。IL-1β孵育24 h,细胞内ROS生成减少,GSH生成增加;48 h细胞内ROS生成增加,GSH较24 h组减低(P0.05);72 h,原代培养星形胶质细胞内ROS生成明显增加,GSH较0 h组降低(P0.05)。1 ng/ml IL-1β处理原代培养星形胶质细胞24 h,细胞内GSH-Px mRNA及蛋白水平较0 h组升高(P0.05);但仅是一过性反应,IL-1β孵育72 h后,原代培养星形胶质细胞内GSH-Px mRNA及蛋白水平均较0 h组降低(P0.05)。结论:持续炎性因子刺激下,星形胶质细胞抗氧化应激能力呈现动态改变,并且细胞内抗氧化物参与此变化过程。     

星形胶质细胞谱系及星形细胞瘤起源的研究

各种神经胶质细胞中数目最多、分布最广的星形细胞担负了神经胶质细胞的大部分功能。根据对两种神经组织标志物─ＧＦＡＰ、Ａ－２Ｂ－５抗体的反应不同，将星形细胞分为１型（ＧＦＡＰ＋Ａ－２Ｂ－５－）和２型（ＧＦＡＰ＋、Ａ－２Ｂ－５＋）。研究指出两型星细胞来源于不同祖细胞，而存在两个谱系，星形细胞胶质瘤与星形细胞具有同样的谱系源。对小胶质细胞在星形细胞发生和分化中的作用亦予以阐述。     

星形胶质细胞的可塑性

星形胶质细胞具有可塑性 ,即指其在内外环境变化刺激下 ,在整个生命过程中 ,能改变其自身特性 ,而在表型上呈现出很大程度的可变性。主要表现为细胞大小、形态及数目的变化 ,其中以细胞突起变化最明显。不同发育阶段 ,不同区域的星形胶质细胞可塑性不同。星形胶质细胞可塑性的机制 ,目前认为主要是递质刺激相应的星形胶质细胞受体来实现的     

Egr-1基因转染对糖尿病小鼠肾脏炎症反应的影响

目的:观察Egr-1基因转染对糖尿病小鼠肾组织肿瘤坏死因子α(TNF-α)及细胞间黏附分子1(ICAM-1)表达的影响,探讨Egr-1在糖尿病肾病发病机制中的作用。方法:制备糖尿病小鼠模型,成模后随机选取10只作为糖尿病组,剩余40只每周1次经尾静脉分别注射空质粒、Egr-1表达质粒和Egr-1 siRNA质粒,并设立正常对照组。实验共4周,于第4周末收集各组小鼠肾组织标本,分别应用western blot和免疫组织化学染色测定肾组织中Egr-1、TNF-α和ICAM-1的表达;应用电镜观察肾小球超微结构的改变。结果:糖尿病小鼠肾组织Egr-1、TNF-α及ICAM-1表达增强,基底膜普遍增厚,系膜区基质增多,上皮细胞足突融合;Egr-1基因转染后上述变化趋势更加显著。siRNA质粒转染组上述变化较糖尿病组明显减轻。结论:Egr-1可上调TNF-α及ICAM-1表达,促进系膜细胞增殖及系膜外基质积聚,可能是加速肾小球硬化的可能机制之一。     

缺氧对星形胶质细胞表达P450 2C11 mRNA的影响

目的:观察缺氧和/或谷氨酸对星形胶质细胞细胞色素P4502C11mRNA表达的影响, 探讨大脑星形胶质细胞在缺氧性脑血管扩张反应中的作用。方法:取新生Wistar大鼠大脑皮层星形胶质细胞作原代、传代培养后, 分为4组:①对照组;②谷氨酸组;③缺氧组;④缺氧+谷氨酸组。每一组包括5个时点:0h、3h、6h、12h、24h(以缺氧后开始记时).于②和④组加入100μmol/L的L-谷氨酸。③和④组用95%N²/5%CO²的混合气体条件培养。提取总RNA, 用RT-PCR技术检测P4502C11mRNA的表达量。结果:①在静息状态下, 星形胶质细胞表达一定量的P4502C11mRNA;②对照组和缺氧组各时点星形胶质细胞P4502C11mRNA的表达量无显著差异;③谷氨酸组P4502C11mRNA6h显著增高, 以后更为显著(24h内);④缺氧+谷氨酸组P4502C113h显著增高, 以后更为显著(24h内);⑤缺氧+谷氨酸组增高的幅度显著高于谷氨酸组。结论:缺氧和谷氨酸协同作用, 促使体外培养的星形胶质细胞P4502C11mRNA表达增强, 后者催化花生四烯酸生成环氧二十烷三烯酸, 这可能是缺氧性脑血管扩张的重要机制之一。     

去甲肾上腺素诱导大鼠神经胶质细胞cAMP生成与VEGF mRNA变化的相关性

目的： 探讨去甲肾上腺素(NE)诱导大鼠神经胶质细胞环磷酸腺苷（cAMP）变化及与血管内皮细胞生长因子（VEGF）mRNA的关系。方法: 用放射免疫法检测细胞cAMP的变化。用实时荧光定量PCR法，检测细胞VEGFmRNA表达，并分析VEGF mRNA和细胞内cAMP含量的相关性。 结果: ①随着20 μmol/L NE刺激细胞时间逐渐延长，细胞中cAMP含量逐渐增加，有明显的时间依赖性关系（P<0.01）。②不同浓度(10-50 μmol/L)的NE刺激细胞2 h后，随着NE浓度的逐渐增高，细胞中cAMP含量逐渐增加，有明显的剂量依赖性关系，与对照组相比，有显著差异（P<0.01），VEGFmRNA与cAMP的含量随NE浓度变化2者呈显著正相关（r=0.94，P<0.01）。结论: NE能够诱导神经胶质细胞分泌cAMP，与NE诱导细胞VEGFmRNA变化有相关性。     

机械拉伸对成骨细胞增殖及IGF-1 mRNA表达的影响

应用体外周期性机械拉伸装置对大鼠成骨细胞施加拉伸刺激。研究了应变15％,频率20次／min的拉伸刺激下不同加载时间对成骨细胞增殖及IGF-1 mRNA表达的影响。发现在受载12 h时,细胞相对增殖指数最大,随受载时间的增加而逐渐趋向于1,同时IGF-1 mRNA表达显著增加。说明成骨细胞对周期性机械拉伸刺激的响应,可能是通过增强成骨细胞IGF-1的自分泌作用来发挥其促增殖的生物学效应。并且受载的成骨细胞经过自身调控后,逐渐适应于新的力学环境,保持一种新的平衡状态。     

Activation of histamine H<Subscript>1</Subscript>-receptor enhances neurotrophic factor secretion from cultured astrocytes

Objective:Histamine stimulates nerve growth factor (NGF) secretion from cultured astrocytes. Histamine H₁-receptor antagonists completely block its effect. In the present study, we determined the involvement of histamine-receptor subtypes in this process.Materials and methods:Radioligand-binding assay was used to establish the presence of histamine H₁- and H₂-receptors on new-born rat cortical astrocytes in primary culture. Histamine H₁-, H₂- and H₃/H₄-receptor ligands, and highly selective protein kinase C (PKC) inhibitor were used to influence NGF secretion from cultured astrocytes. NGF, released into the culture medium, was measured by NGF-ELISA.Results:Histamine H₁-receptor agonists (histamine, selected histaprodifens) increased the secretion of NGF from cultured astrocytes in a concentration-dependent manner. H₁-receptor antagonists/inverse agonists (mepyramine, triprolidine) and PKC inhibitor completely blocked the effect of histamine. Histamine H₂- and H₃-receptor agonists did not enhance NGF secretion significantly. In addition, H₂- and H₃/H₄-receptor antagonists did not diminish histamine-stimulated NGF release.Conclusions:Our results indicate that histamine H₁-receptor and PKC are involved in the signal transduction pathway, responsible for histamine-stimulated NGF secretion from cultured astrocytes.Received 25 July 2003; returned for revision 4 November 2003; accepted by A. Falus 23 December 2003     

Egr-1基因剔除减少炎性相关因子在实验性胰腺炎中的表达

目的：探讨Egr-1基因剔除对实验性胰腺炎小鼠胰腺组织中炎性相关因子表达的影响。 〖HTH〗方法：利用Egr-1基因剔除小鼠，采用大剂量雨蛙素诱导的实验性胰腺炎模型，观察Egr-1基因剔除后，胰腺组织水肿、MPO水平、血清淀粉酶水平、肺组织MPO水平的改变。并利用定量PCR的方法，检测胰腺组织中炎症相关因子组织因子（TF）、纤维蛋白溶酶原激活因子抑制因子（PAI-1）、单核细胞趋化吸引蛋白1（MCP-1）、Gro-1、IL-6和细胞间黏附分子-1（ICAM-1） mRNA的表达。 〖HTH〗结果：Egr-1基因剔除小鼠胰腺组织水肿明显轻于野生型，但组织MPO水平与血清淀粉酶与野生型组间相比无明显差异；肺组织MPO水平明显低于野生型。定量PCR检测结果表明， Egr-1基因剔除组，胰腺组织中TF、PAI-1，以及MCP-1、ICAM-1和IL-6　mRNA的表达，明显少于野生型组。 〖HTH〗结论：Egr-1基因剔除可明显减轻急性胰腺炎的严重程度，其作用可能通过减少胰腺组织中TF、PAI-1，以及MCP-1、ICAM-1和IL-6的表达而实现。     

合成红藻氨酸对星形胶质细胞微丝表达及缝隙连接的影响

 目的：研究合成红藻氨酸（synthetic kainic acid, SKA）对星形胶质细胞（astrocytes, AST）细胞骨架微丝表达及缝隙连接的影响。方法：取1日龄Wistar乳鼠大脑,差速贴壁法去除成纤维细胞,并利用振荡分离法去除少突胶质细胞,获得高纯度的AST细胞。将SKA和其它干涉剂与AST细胞共培养24 h后,用激光扫描共聚焦显微镜观察SKA对骨架蛋白中纤丝状肌动蛋白（F-actin）形态学及表达量的影响,并观察缝隙连接通道阻滞剂1-庚醇（1-heptanol,1-Hep）对SKA作用的影响。结果：和对照组相比,KCl组和KCl+SKA组的荧光强度均明显增强(P<0.01),后者更明显(P<0.01);镜下这2组的F-actin细丝状物较对照组明显增多、增粗、密集,KCl+SKA组更甚。1-Hep可明显降低KCl和SKA所致的F-actin表达,镜下所有1-Hep组可见细胞内部分丝状断裂,有些呈横切状。结论：SKA诱发癫痫的机制可能与其诱发AST细胞中F-actin的增多有关,细胞间缝隙连接可能参与了SKA诱发癫痫的过程。     

去甲肾上腺素/烧伤血清诱导大鼠神经胶质细胞VEGF基因表达

目的： 观察血管内皮细胞生长因子（VEGF）在去甲肾上腺素（NE）/烧伤血清诱导神经胶质细胞时基因表达变化。 方法： 用免疫荧光法观察NE/烧伤血清刺激神经胶质细胞后24 h VEGF在细胞内的分布。用免疫蛋白印迹法检测细胞VEGF蛋白表达。用荧光定量聚合酶联反应（PCR）法检测细胞VEGF mRNA表达。 结果： ①高剂量NE（50 μmol/L）刺激时，神经胶质细胞胞浆内绿色荧光增强，烧伤血清刺激后绿色荧光明显增强，当烧伤血清加高剂量NE刺激时绿色荧光显著增强。②烧伤血清组细胞VEGF蛋白表达增加，烧伤血清加中剂量（20 μmol/L）、高剂量NE组VEGF的蛋白表达明显增加。③烧伤血清刺激后，细胞VEGF mRNA表达增加，烧伤血清与NE同时刺激时，随着NE剂量的增加，细胞中VEGF mRNA表达明显增加。 结论： NE/烧伤血清能够诱导神经胶质细胞VEGF的基因表达增强，提示烧伤应激因素诱导神经胶质细胞分泌VEGF可能是烧伤后脑水肿形成的一个重要因素。     

缺氧时星形胶质细胞定量mRNA表达的内部参照标准研究

目的:观察缺氧对脑星形胶质细胞(AC)守家基因甘油醛-3-磷酸-脱氢酶(GAPDH)和β-肌动蛋白(actin)mRNA表达的影响,进一步观察内皮素转换酶(ECE)-2mRNA可否作为该条件下的内部参照标准。方法:从新生小鼠大脑获原代AC培养,分别在缺氧和正常氧条件下培养24h,提取mRNA,以溴化乙啶染色的28S及18SrRNA作内部参照,用Northernblot杂交技术定量测定GAPDH、β-actin和ECE-2mRNA水平。结果:缺氧24h,ACGAPDHmRNA的表达显著增加,β-actinmRNA表达明显下降;缺氧前后ECE-2的mRNA水平无明显差异。结论:在缺氧缺血条件下,GAPDH和β-actin不宜作为AC定量mRNA分析的内部参照标准,ECE-2可作为其替代。