DNA甲基转移酶在前列腺癌中的表达及其对体外细胞增殖及侵袭能力的影响

目的探讨DNA甲基转移酶(DNMTs)在前列腺癌(PCa)组织及前列腺癌细胞系中的表达情况及其对体外前列腺癌细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭能力的影响。方法收集24例患者的前列腺组织样本,其中前列腺癌组织样本12例,良性前列腺增生组织样本12例。免疫组织化学染色检测DNMT1、DNMT3b的表达。通过Western blot及RT-qPCR检测前列腺癌细胞系(DU145、PC-3)及人正常前列腺上皮细胞系(RWPE-1)中DNMT1、DNMT3b的表达。采用siRNA分别下调DU145细胞系中DNMT1、DNMT3b表达,检测DU145细胞生物学行为的改变。结果 DNMT1、DNMT3b在前列腺癌组织中的表达高于前列腺增生组织(P0.05)。DNMT1、DNMT3b在DU145、PC-3细胞系中的表达高于RWPE-1细胞系(P0.05),且DNMT1、DNMT3b在DU145中的表达高于PC-3(P0.05)。下调DU145细胞中DNMT1、DNMT3b的表达,可显著抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,减弱细胞迁移及侵袭能力(P0.05),其中DNMT1抑制组效果最显著。结论 DNA甲基转移酶(DNMT1、DNMT3b)在前列腺癌中的表达高于正常前列腺,其中DNMT1对细胞生物学行为影响最显著。     

LINC00341通过靶向miR-187对前列腺癌DU145细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响

目的 探讨LINC00341对前列腺癌DU145细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的靶向影响及机制。方法 将LINC00341过表达载体（pcDNA3.1-LINC00341）转染前列腺癌细胞DU145,检测细胞的增殖力、细胞凋亡及迁移和侵袭能力,蛋白质印记（Western blot）法检测Cyclin D1、P21、Bcl-2、Bax、MMP-2和E钙黏蛋白（E-cadherin）的表达。双荧光素酶报告实验联合RT-qPCR验证LINC00341对miR-187的靶向调控关系。将miR-187模拟物（miR-187 mimics）和pcDNA3.1-LINC00341共转染DU145细胞,采用上述方法检测细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力变化。结果 过表达LINC00341抑制DU145细胞Cyclin D1、Bcl-2和MMP-2的表达,促进P21、Bax和E-cadherin蛋白的表达水平,抑制DU145细胞的增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡。miR-187是LINC00341的靶基因,LINC00341靶向负性调控miR-187表达。过表达miR-187可逆转LINC00341过表达对DU1...     

长链非编码RNA FENDRR对前列腺癌DU-145细胞生物学行为的影响

目的探讨长链非编码RNA FENDRR对前列腺癌DU-145细胞生物学行为的影响。方法 realtime PCR方法检测前列腺癌细胞株DU-145和正常前列腺上皮细胞RWPE-1中FENDRR的表达水平。构建FENDRR基因表达载体pcDNA-FENDRR并转染DU-145细胞,real-time PCR方法验证转染效率。FENDRR基因过表达后,平板克隆实验实验检测DU-145细胞增殖能力的变化;流式细胞术检测DU-145细胞的凋亡率;划痕实验与Transwell实验检测DU-145细胞迁移和侵袭能力的变化。结果 FENDRR在前列腺癌细胞株DU-145中的表达明显低于正常前列腺上皮细胞RWPE-1(P0.01)。pcDNA-FENDRR转染显著上调DU-145细胞中FENDRR mRNA的表达。FENDRR基因过表达后,DU-145细胞的增殖、迁移与侵袭能力明显降低,细胞凋亡率明显升高(P0.01)。结论过表达lncRNA FENDRR能够抑制前列腺癌DU-145细胞增殖、迁移与侵袭,并促进凋亡,在前列腺癌中发挥肿瘤抑制基因的作用。     

白皮杉醇抑制前列腺癌细胞株增殖、迁移与侵袭

目的:观察白皮杉醇对前列腺癌细胞株DU145的细胞活力、迁移与侵袭能力的作用并初步讨论其机制。方法:CCK-8法检测不同浓度白皮杉醇(0、5、10、20、40和80μmol/L)作用不同时间(12、24、36和48 h)对DU145细胞活力的影响;划痕实验与Transwell小室法分别检测白皮杉醇对DU145细胞迁移与侵袭能力的影响;Western blot法检测p-JAK2与p-STAT3的蛋白水平。结果:CCK-8法结果显示白皮杉醇呈浓度依赖性抑制DU145细胞的活力;给予白皮杉醇干预后,细胞迁移数和侵袭数显著减少,p-JAK2与p-STAT3蛋白水平显著下降。结论:白皮杉醇呈浓度依赖性抑制前列腺癌细胞的生长,并具有抑制细胞迁移与侵袭的作用,其机制可能与抑制JAK2/STAT3信号通路有关。     

PDK4异常表达对前列腺癌细胞糖酵解和生长的影响

目的:探讨丙酮酸脱氢酶激酶4(PDK4)在前列腺癌组织中的表达及其对前列腺癌细胞糖酵解和生长的影响。方法:应用免疫组化法检测比较良性前列腺增生和前列腺癌组织中PDK4蛋白的表达差异。通过RT-qPCR和Western blot方法检测正常前列腺上皮细胞RWPE-1和不同前列腺癌细胞株PC3、LNCaP、DU145和C4-2中PDK4的表达水平。构建PDK4-shRNA重组质粒,转染该质粒以下调前列腺癌PC3细胞中PDK4的表达,采用细胞糖酵解试剂盒测定转染前后PC3细胞糖酵解水平的变化,通过CCK-8实验和流式细胞术检测PDK4对PC3细胞活力和细胞周期分布的影响。结果:在前列腺癌组织中,PDK4蛋白的表达水平显著高于良性前列腺增生组织(P<0.05),且PDK4表达的免疫组化评分越高,前列腺癌的Gleason评分也越高(P<0.05);RT-q PCR和Western blot实验结果显示,与正常前列腺上皮细胞相比,前列腺癌细胞株中的PDK4表达水平也显著升高(P<0.05)。此外,CCK-8实验结果表明,敲减PDK4表达后,前列腺癌PC3细胞的活力显著下降(P&l...     

干扰Arf6抑制人前列腺癌细胞系DU145增殖、迁移及侵袭

目的观察干扰二磷酸腺苷核糖基化因子6(Arf6)对人前列腺癌细胞系DU145增殖、迁移及侵袭的影响,并初步探讨其调控机制。方法脂质体转染法将靶向Arf6的特异性siRNA序列、无效序列转染至DU145细胞,分别设为干扰组和NC组,不做处理为空白组。蛋白免疫印迹(Western blot)检测siRNA干扰效率;MTT法检测细胞增殖;划痕试验及Transwell试验检测细胞迁移及侵袭;实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)及Western blot检测Arf6、丝裂原活化的细胞外信号调节激酶(MEK)、细胞外信号调节激酶(ERK)、Ras相关C3肉毒素底物1(Rac1)mRNA及蛋白表达、磷酸化MEK(pMEK)、pERK蛋白表达。结果靶向Arf6的特异性siRNA序列干扰活性为62.67%±4.38%。干扰组不同时刻细胞增殖均显著低于空白组和NC组(P0.05);干扰组细胞迁移率、穿膜细胞数均显著低于空白组及NC组(P0.05);干扰组Arf6、Rac1 mRNA及蛋白相对表达量、pMEK/MEK、pERK/ERK蛋白比值显著低于空白组及NC组(P0.05)。结论干扰Arf6可抑制人前列腺癌细胞系DU145增殖、迁移及侵袭能力,可能与下调pMEK、pERK、Rac1蛋白表达,抑制MEK/ERK信号通路有关。     

RelB在蛋白酶体抑制剂诱导的maspin表达中的作用研究

目的: 探讨前列腺癌细胞中,核转录因子NF-κB家族成员之一RelB在蛋白酶体抑制剂作用下maspin蛋白表达调控中的作用机制。方法: 采用Western blotting法检测前列腺癌细胞中内源性及蛋白酶体抑制剂MG-132作用下RelA、RelB和maspin的蛋白表达;采用免疫组化法检测前列腺癌组织中RelB和maspin的表达情况;通过转染小分子RNA至前列腺癌细胞中沉默RelB的表达;采用Western blotting法检测RelB沉默对MG-132诱导的maspin蛋白表达情况的影响;PI染色法结合流式细胞术检测细胞死亡率。结果: 雄激素非依赖型前列腺癌细胞DU145中RelB表达增强而maspin表达明显降低。在检测的10例前列腺癌组织样本中,恶性度高(Gleason评分4-5)的样本普遍同时存在胞核内RelB强染色和maspin表达缺失。MG-132作用DU145细胞24 h后RelB在胞浆和胞核中表达水平下调,伴随着maspin在胞核内的表达上调。MG-132处理RelB表达沉默的DU145细胞8和24 h后,maspin的表达无明显变化,而RelA蛋白的表达水平呈时间依赖性的下调。结论: 在雄激素非依赖型前列腺癌细胞和晚期前列腺癌组织中,maspin与RelB的表达呈负相关性。蛋白酶体抑制剂诱导maspin的表达上调过程中,RelB是重要的调控因子。     

沉默URG11基因对前列腺癌LNCaP细胞增殖、迁移与侵袭的影响

 目的: 观察上调基因11(up-regulated gene 11,URG11)在前列腺癌细胞系中的表达及降低URG11表达对人前列腺癌LNCaP细胞增殖和侵袭能力的影响。方法: 用real-time PCR和Western blot检测前列腺癌细胞系和正常前列腺上皮细胞系中URG11 mRNA和蛋白水平;设计针对URG11基因的siRNA靶序列,转染LNCaP细胞,采用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡,MTS测定LNCaP细胞增殖能力,划痕和侵袭实验评价LNCaP细胞迁移及侵袭能力。结果: 在LNCaP、DU145、PC3前列腺癌细胞系和RWPE-1正常前列腺上皮细胞系中URG11 mRNA和蛋白表达水平存在显著差异,在前列腺癌细胞中URG11 mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。与对照组相比,转染URG11 siRNA的LNCaP细胞增殖停滞在G₁/S期并诱导前列腺癌细胞凋亡,转染组的细胞凋亡率为8.79%±0.12%,而且LNCaP肿瘤细胞的迁移及侵袭能力明显下降(P<0.05)。结论: URG11在前列腺癌系中高表达。通过RNAi沉默URG11基因能明显抑制LNCaP细胞增殖和侵袭能力,并诱导细胞凋亡。     

ACSL3在前列腺癌细胞系中的表达及其对前列腺癌转移的影响

 目的:观察比较长链脂酰辅酶A合成酶3（long-chain acyl-CoA synthetase 3, ACSL3）在前列腺正常上皮细胞和不同类型前列腺癌细胞系中的表达差异,通过构建ACSL3基因稳定表达的前列腺癌细胞株研究ACSL3对前列腺癌细胞侵袭能力的影响。方法:利用RT-PCR方法检测ACSL3 mRNA在前列腺正常上皮细胞、局限性及转移性前列腺癌细胞中的表达情况,分析其表达与前列腺癌发生、进展及转移的关系;以前列腺癌细胞基因组cDNA为模板,通过PCR扩增ACSL3基因,重组构建含有Flag标签的pCDNA3.1(+)-Flag-ACSL3质粒,包装慢病毒,转染前列腺癌细胞,通过荧光显微镜、RT-PCR和Western blotting等方法鉴定ACSL3在细胞内的表达情况;利用Transwell侵袭实验研究ACSL3对前列腺癌细胞侵袭能力的改变。结果:较前列腺正常上皮细胞,各种前列腺癌细胞中ACSL3 mRNA表达均明显下降。同时,局限性前列腺癌细胞中ACLS3 mRNA表达较转移性前列腺癌细胞明显升高;此外,雄激素非依赖性前列腺癌细胞比雄激素依赖性前列腺癌细胞中ACLS3 mRNA表达显著降低。进而,我们成功构建和包装了表达ACSL3基因的pCDNA3.1(+)-Flag-ACSL3重组质粒及慢病毒,并转染前列腺癌细胞,筛选出稳定表达株;并且,通过Transwell实验证实ACSL3表达与前列腺癌细胞的侵袭能力呈负相关。结论:前列腺正常上皮细胞及不同前列腺癌细胞系中ACSL3的表达存在明显差异,提示ACSL3可能在前列腺癌的发生发展中起重要作用;成功构建了ACSL3基因稳定表达的前列腺癌细胞株,并初步证实ACSL3过表达可以抑制前列腺癌细胞的侵袭力。     

婆罗双树样基因4在人前列腺癌细胞和组织中的表达及其与临床预后之间的关系

 目的：评估婆罗双树样基因4（SALL4）在人前列腺癌细胞系和前列腺癌组织中的表达情况,并明确其表达水平和临床病理学参数间的关系。方法：用免疫荧光技术、RT-PCR和Western blotting检测SALL4在LNCaP、DU145、PC-3细胞系和RWPE-1正常前列腺上皮细胞系中的表达。同时用免疫组化方法检测SALL4在前列腺增生及前列腺癌组织中的表达,并探讨其与Gleason评分等临床病理参数的关系。结果： SALL4蛋白在细胞中主要表达于胞浆,在3种前列腺癌细胞株中SALL4蛋白表达水平要明显高于正常前列腺上皮细胞RWPE-1（P＜005）,而SALL4 mRNA表达水平在4种细胞系中无明显差异（P＞0.05）。免疫组化结果显示SALL4在前列腺癌组织中的表达水平明显高于增生和正常前列腺组织（P＜0.01）。SALL4蛋白表达水平与Gleason评分、前列腺癌临床分期、预后及组织前列腺特异抗原（PSA）表达密切相关,而与患者年龄、治疗前血清总PSA水平、前列腺体积及组织雄激素受体表达无明显相关性。结论：SALL4蛋白在前列腺癌中高表达,提示其在前列腺癌的发生、发展过程中可能起重要作用,有可能成为诊断前列腺癌新的肿瘤标志物及评估其恶性程度、进展和预后的参考指标。     

趋化因子及其受体CXCL12/CXCR4在人前列腺癌转移机制中的作用

目的 探讨趋化因子及其受体CXCL12/CXCR4在人前列腺癌转移机制中的作用.方法 免疫组织化学技术分析CXCL12/CXCR4蛋白在18例前列腺癌组织中的表达;免疫细胞化学技术分析CXCL12/CXCR4蛋白在人前列腺癌细胞株PC3、DU145和LNCap中的表达;迁移、侵袭试验分析外源性CXCL12对PC3、DU145和LNCap体外侵袭能力的调节作用.结果 18例人前列腺癌组织中,17例不同强度表达CXCR4蛋白,1例阴性表达,同时除1例标本弱表达CXCL12蛋白外,其余不表达CXCL12蛋白.3种前列腺癌细胞株均表达CXCR4蛋白,不表达CXCL12蛋白.外源性CXCLl2可明显促进PC3、DU145及LNCap的体外迁移、侵袭,以抗CXCL12或CXCR4抗体预处理PC3、LNCap细胞可以拮抗CXCL12对它们的促迁移、侵袭作用.结论 人前列腺癌组织表达CXCR4蛋白,CXCL12/CXCR4信号通路可能参与前列腺癌的侵袭、转移.     

锌对于原发性肝细胞癌BEL-7404细胞生物学行为的影响

目的:观察外源锌对原发性肝细胞癌(HCC)BEL-7404细胞生物学行为的影响。方法:应用TSQ锌离子荧光探针、MTT法、DNA倍体法、吖啶橙/溴乙啶双荧光染色法和Transwell小室法分别检测不同浓度硫酸锌刺激下BEL-7404细胞内锌离子含量、细胞活力、细胞周期、细胞凋亡及细胞迁移和侵袭能力的变化。应用real-time PCR和Western blot法分别检测不同浓度锌离子对BEL-7404细胞白蛋白的mRNA和蛋白表达的影响。结果:随着培养环境中锌离子浓度的升高,BEL-7404细胞内的锌离子含量增加,细胞的存活率和细胞迁移与侵袭能力降低,凋亡率升高(P0.05);G0/G1期细胞比例降低,G2/M期细胞比例升高(P0.05);细胞白蛋白的mRNA和蛋白表达量增加(P0.05)。结论:外源性给予锌离子可抑制HCC细胞的活力、迁移与侵袭能力,诱导细胞凋亡,阻滞细胞周期在G2/M期,并可能降低细胞的恶性表型。     

青藤碱抑制人卵巢癌SKOV3细胞活力、迁移和侵袭

目的:观察青藤碱对人卵巢癌SKOV3细胞活力、迁移和侵袭的影响,并探讨其可能的分子机制。方法:分别采用不同浓度的青藤碱处理SKOV3细胞12、24和48 h,采用CCK-8法检测细胞活力,采用流式细胞术检测细胞周期,采用Transwell实验检测细胞迁移率和侵袭率,同时采用Western blot法检测细胞周期素(cyclin)A、cyclin D1、E-cadherin和基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的蛋白表达水平。结果 :随着青藤碱作用浓度和作用时间的增加,SKOV3和IOSE80细胞活力逐渐降低,青藤碱作用SKOV3和IOSE80细胞48 h的半数抑制浓度(IC_(50))分别为2.12 mmol/L和17.35 mmol/L;青藤碱可呈剂量依赖性地诱导SKOV3细胞发生G_0/G_1期和S期阻滞(P0.05),抑制SKOV3细胞迁移和侵袭(P0.05),下调cyclin A、cyclin D1和MMP-9蛋白水平(P0.05),并上调E-cadherin蛋白水平(P0.05)。结论 :青藤碱可在体外抑制人卵巢癌SKOV3细胞活力、迁移和侵袭,这可能与其下调cyclin D1、cyclin A和MMP-9蛋白水平,以及上调E-cadherin蛋白水平有关。     

长链非编码RNA PVT1调控miR-551通过Wnt信号通路对卵巢癌迁移和侵袭的影响

目的:探讨长链非编码RNA PVT1在卵巢癌组织中的表达情况及其在卵巢癌细胞迁移和侵袭过程中的作用及机制。方法:q PCR检测卵巢癌和正常卵巢组织及不同卵巢癌细胞中PVT1的表达情况;Transwell侵袭实验和细胞划痕实验分别检测沉默PVT1后卵巢癌细胞侵袭和迁移能力的变化;双萤光素酶报告基因检测PVT1与微小RNA(miR)-551的相互作用;Transwell侵袭实验和细胞划痕实验分别检测沉默PVT1后miR-551-inhibitor对卵巢癌细胞侵袭和迁移能力的影响;Western blot法检测沉默PVT1后Wnt信号通路相关蛋白的表达情况。裸鼠皮下成瘤实验检测沉默PVT1对卵巢癌成瘤重量及体积的影响。结果:与正常卵巢组织相比,卵巢瘤组织中PVT1表达明显增高(P0.05);卵巢癌细胞株ES-2中PVT1表达水平最高(P0.05);沉默PVT1可以抑制卵巢癌细胞侵袭和迁移能力;PVT1能与miR-551的位点特异性结合;沉默PVT1后,miR-551-inhibitor可以促进卵巢癌细胞侵袭和迁移能力;沉默PVT1后Wnt信号通路蛋白的表达相应下调;与阴性对照组相比,PVT1-siRNA组荷瘤小鼠肿瘤体积和重量都明显减小(P0.05)。结论:PVT1在卵巢癌发生发展过程中起重要作用,它可以靶向调节miR-551,通过Wnt信号通路调控卵巢癌细胞的侵袭和迁移能力。     

NEU3对人前列腺癌DU145细胞生物学行为的影响

目的:探讨神经氨酸酶3(NEU3)与人前列腺癌DU145细胞活力、侵袭和凋亡的关系,并探讨其分子机制。方法:体外培养人前列腺癌DU145细胞,并分为空白对照组和处理组,处理组再分别给予神经氨酸酶活性抑制剂DANA处理和RNA干扰靶向沉默NEU3,采用CCK-8法检测细胞的活力;Transwell法检测细胞侵袭能力;q PCR法检测2种处理方式对凋亡抑制蛋白Bcl-2 mRNA水平的影响;Western blot法检测2种处理方式对NEU3、基质金属蛋白酶2(MMP2)和Bcl-2表达的影响;流式细胞术检测细胞凋亡水平。结果:与空白对照组相比,DANA处理后前列腺癌细胞的NEU3表达无明显变化,细胞活力增强,MMP2蛋白表达减少,侵袭力减弱,凋亡无明显变化,Bcl-2的mRNA和蛋白表达减少(P 0.05);NEU3沉默后NEU3蛋白表达减少,细胞活力增强,MMP2蛋白表达和细胞侵袭力无明显变化,凋亡能力增强,Bcl-2的mRNA和蛋白表达均下降(P 0.05)。结论:抑制NEU3可以减弱人前列腺癌DU145细胞活力,增强细胞凋亡能力,但对侵袭能力无明显影响。     

CNTN-1 promotes docetaxel resistance and epithelial-to-mesenchymal transition via the PI3K/Akt signaling pathway in prostate cancer

IntroductionTherapy options for prostate cancer (PCa) typically are centered on docetaxel-based chemotherapy but are limited by the effects of multi-drug resistance. Recent advances have illustrated a role of contactin-1 (CNTN-1) in tumor chemoresistance, while the function and mechanism of CNTN-1 in the resistance of docetaxel in prostate cancer have not yet been elucidated.Material and methodsDocetaxel (Dox)-resistant PCa cell lines of PC3 (PC3-DR) and DU145 (DU145-DR) were established, and short hairpin RNA (shRNA) constructs targeting CNTN-1 were generated to analyze the effect of knockdown of CNTN-1 on PCa progression. Cell Counting Kit-8 (CCK-8), flow cytometry, wound-healing, transwell and western blotting analysis were used to analyze cell proliferation, apoptosis, migration, invasion and related protein expression levels, respectively.ResultsKnockdown of CNTN-1 in PC3-DR and DU145-DR cells attenuated cell proliferation, migration, invasion, EMT phenotype, and drug resistance, and increased cell apoptosis further reduced the tumorigenic phenotype. Knockdown of CNTN-1 resulted in an anti-tumor effect in the xenograft tumor model, and decreased activity of the phosphoinositide 3-kinase (PI3K)/Akt signaling pathway both in vitro and in vivo.ConclusionsThe results of the present study suggest that downregulation of CNTN-1 may be an important mechanism to reverse chemoresistance in Dox-resistant PCa progression, thus shedding light on the development of novel anti-tumor therapeutics for the treatment of PCa.     

循环miRNA-141对前列腺癌的诊断和预后价值研究

 目的:研究血清miR-141在前列腺癌中的表达及临床意义。方法:采用实时荧光定量PCR检测75例前列腺癌和52例良性前列腺增生（BPH）患者,以及40例健康对照血清miR-141的相对表达水平。结果:前列腺癌血清miR-141的表达量较BPH和健康对照增高,差异有统计学意义（P＜0.01）。但miR-141在BPH组和对照组中的表达差异无统计学意义（P>0.05）。ROC曲线显示miR-141能够较好地区分前列腺癌与BPH（或健康对照）,曲线下面积分别为0.785（95%CI∶0.689～0.823）和0.801（95%CI∶0.723～0.868）。血清miR-141表达与Gleason积分、临床分期和骨转移相关（均P<0.05）,随着临床分期的增加,miR-141的表达水平增加;但miR-141表达量与患者年龄、肿瘤复发和血清前列腺特异性抗原水平无关(均P>0.05)。结论: 循环miR-141可作为非侵入性诊断前列腺癌并且判断其预后的分子标志物。