吉非替尼下调肿瘤抑制素M抑制博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化

目的研究肿瘤抑制素M(OSM)及其下游通路在吉非替尼干预的肺纤维化小鼠中的改变,探讨OSM及下游通路在肺纤维化中的作用。方法 36只SPF级昆明小鼠随机分为3组:正常组(生理盐水气管内雾化)、博莱霉素组(博莱霉素3 mg/kg气管内雾化)、吉非替尼处理组(博莱霉素气管内雾化后,每天吉非替尼20 mg/kg灌胃)。实验第14天收集肺标本,肺组织行HE与Masson染色;RT-PCR法检测α-SMA、OSM m RNA表达水平;Western blot法检测α-SMA、OSM、ERK1/2、P-ERK1/2、P38、P-P38蛋白表达水平。结果博莱霉素组小鼠肺组织病理损伤较正常组小鼠明显加重、胶原沉积明显增加、炎症损伤评分及纤维化评分明显增加(P0.05),α-SMA、OSM m RNA及蛋白表达水平明显升高(P0.05),p-ERK1/2、p-P38蛋白表达水平明显升高(P0.05),吉非替尼组小鼠上述指标均较博莱霉素组明显降低(P0.05)。结论吉非替尼能显著缓解博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化,其机制可能与抑制OSM m RNA及蛋白的表达及其下游P38和ERK1/2的磷酸化密切相关。     

灵菌红素对小鼠肺纤维化及其对Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的观察灵菌红素对小鼠肺纤维化的改善作用,探讨Wnt/β-catenin信号通路的调控机制。方法C57BL/6小鼠随机分为对照组(Control group)、博来霉素组(Bleomycin group)和灵菌红素组(Peptide group),每组15只。除对照组外,其余各组小鼠气管内分别一次性注入100μL博莱霉素溶液(5mg/kg)以制备小鼠肺纤维化模型;造模完成后,治疗组分别腹腔注射300μg/kg灵菌红素或300 mg/kg吡非尼酮,连续28天。HE及Masson染色观察肺组织病理变化;测定肺组织羟脯氨酸含量;Western Blot检测肺组织中TGF-β1、α-SMA、Colla I、CollaⅢ及GSK-3β、p-GSK-3β、α-catenin蛋白的表达。结果灵菌红素明显改善小鼠肺组织病理损伤,降低肺组织中羟脯氨酸含量,下调TGF-β1、α-SMA、Colla I、CollaⅢ、p-GSK-3β及β-catenin蛋白表达水平,上调GSK-3蛋白表达水平。结论灵菌红素改善小鼠肺纤维化,与抑制Wnt/β-catenin信号通路活性相关。     

Rho激酶-1在肺纤维化小鼠肺组织中的表达变化与上皮-间充质转化

目的 观察Rho激酶-1(Rock-1) 在博莱霉素（BLM）致小鼠肺纤维化中的表达变化, 探讨其在肺纤维化中与上皮间充质细胞转化(EMT) 的关系。 方法 将60只小鼠随机分成正常对照组（Cont组）, BLM致肺纤维化模型组, 地塞米松（DXM）治疗组。BLM组给予0.04ml BLM (5mg/kg)一次性气管内灌注,治疗组在BLM一次性气管内灌注后每天给予DXM 5mg/kg腹腔注射。各组分别于第3、7、14和28天各处死5只小鼠, 取肺组织, 做病理切片,HE染色观察小鼠肺炎症和纤维化的程度, 以样本碱水解法检测肺组织中羟脯氨酸(HYP)含量, 免疫组织化学检测不同实验组小鼠间充质细胞标记物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA) 和上皮细胞标记物上皮钙黏素( E-Cad) 的表达,应用Western blotting法测定不同实验组小鼠Rock-1的表达水平。 结果 BLM组肺组织病理切片按时间顺序呈现由肺泡炎至纤维化的动态改变,肺组织胶原含量在第7天明显增加, 第28天达高峰, HYP含量测定动态增高。与Cont组比较、BLM组、DXM组E-Cad的蛋白表达降低,α-SMA蛋白表达增高。Western blotting结果显示,BLM组Rock-1的表达与正常对照组比较显著增高( P<0.05),第14天时达到高峰。DXM组Rock-1的表达逐步下降。 结论 Rock-1在小鼠肺纤维化中表达增高, 表明其可能是肺纤维化形成的促进因子, 且随着Rock-1的增高,α-SMA逐步增高 E-Cad逐步降低, 推测Rock-1在肺纤维化形成中的机制可能与促进EMT有关。     

丹皮酚通过抑制miR-21表达减轻博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化

目的研究丹皮酚(PAE)通过抑制微小RNA-21(miR-21)减轻博莱霉素(BLM)诱导肺纤维化的相关机制。方法将SD大鼠随机分为对照组、BLM组、阳性对照(PC)组、PAE组,比较各组大鼠的肺纤维化相关指标,miR-21、Smad7的mRNA相对表达水平,及Smad7、TGF-β1、COLIA1、α-SMA蛋白水平;将制备好的纤维细胞分为对照组,TGF-β1组,PAE-L组,PAE-M组,PAE-H组,miR-21抑制剂组,检测各组细胞中miR-21、Smad7的mRNA相对表达水平及Smad7、COLIA1、α-SMA蛋白水平,并验证miR-21与Smad7的靶向关系。结果与对照组相比,BLM组大鼠的肺系数、羟脯氨酸、肺纤维化程度,miR-21mRNA表达水平,TGF-β1、COLIA1、α-SMA蛋白表达水平显著升高均显著升高(P0.01),Smad7的mRNA及蛋白表达水平显著降低(P0.01),与BLM组相比,PC组和PAE组大鼠的肺系数、羟脯氨酸、肺纤维化程度均显著降低(P0.01);与BLM组相比,PC组和PAE组大鼠肺组织中miR-21 mRNA水平,TGF-β1、COLIA1、α-SMA蛋白水平显著降低,Smad7的mRNA及蛋白水平显著升高(P0.01);与对照组相比,TGF-β1组成纤维细胞中miR-21的mRNA及COLIA1、α-SMA蛋白水平显著升高(P0.01),Smad7的m RNA及蛋白水平显著降低(P0.01);与TGF-β1组相比,PAE-L组、PAE-M组、PAE-H组、miR-21 inhibitor组成纤维细胞中miR-21的mRNA水平及COLIA1、α-SMA蛋白水平显著降低(P0.01),Smad7的mRNA及蛋白表达水平显著升高(P0.01);靶基因数据库预测及双荧光素酶报告实验表明,miR-21靶向抑制Smad7。结论 PAE可能通过抑制miR-21表达靶向促进Smad7表达,并抑制TGF-β1表达来减轻BLM诱导的肺纤维化。     

依那西普对博莱霉素所致小鼠肺纤维化的影响及其机制

目的:观察依那西普对博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化的作用及可能机制。方法:方法将30只SPF级雄性昆明小鼠随机分为3组,即对照组、模型组、干预组,每组10只。对照组小鼠气管内灌注生理盐水,模型组小鼠气管内灌注博莱霉素5 mg/kg,干预组小鼠气管内灌注博莱霉素后,3 mg/kg依那西普腹腔注射,一周2次。于造模后28 d处死小鼠,收集肺组织,碱水解法检测羟脯氨酸含量;肺组织用4%多聚甲醛固定后,石蜡包埋切片,行HE染色及Masson染色;Western blot法检测肺组织NF-κB和磷酸化NF-κB的表达。结果:干预组小鼠肺组织羟脯氨酸含量较模型组明显下降(P0.01);干预组肺组织炎症评分较模型组明显下降(P0.01),肺纤维化评分较模型组下降(P0.01);干预组肺组织磷酸化NF-κB的表达下降(P0.01)。结论:依那西普可抑制NF-κB的磷酸化,减轻博莱霉素导致的小鼠肺部炎症程度和纤维化改变,延缓肺纤维化进展。     

吉非替尼通过增加Foxo3a活性抑制肺纤维化小鼠上皮-间质转分化

 目的：研究吉非替尼对肺纤维化小鼠转录因子叉头框蛋白O3a(Foxo3a)活性、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）水平及相关通路的影响,探讨吉非替尼抑制肺上皮-间质转分化的可能机制。方法：将30只SPF级雌性昆明小鼠随机分为3组：对照组（生理盐水气管内雾化）、博来霉素组（博来霉素3 mg/kg溶于100 μL生理盐水气管内雾化）和吉非替尼处理组（博来霉素气管内雾化后,每天吉非替尼20 mg/kg溶于100 μL生理盐水灌胃）。实验第14天收集样本,将小鼠肺组织置于10%中性甲醛固定,石蜡包埋切片后行HE与Masson染色;RT-PCR法检测Foxo3a和α-SMA mRNA表达水平;Western blotting法检测表皮生长因子受体（EGFR）、Akt、Foxo3a和α-SMA蛋白表达水平。结果：吉非替尼处理组小鼠肺组织病理损伤较博来霉素组明显减轻,胶原沉积明显减少,炎症损伤评分及纤维化评分明显下降（均P<0.01）,Foxo3a mRNA表达水平明显升高（P<0.05）,α-SMA mRNA表达水平明显下降（P<0.05）,总Foxo3a蛋白表达增加,但Foxo3a磷酸化水平显著下降(P<0.01),胞核Foxo3a蛋白明显增加（P<0.05）;同时,EGFR和Akt磷酸化水平也显著下降（P<0.01,P<0.05）,上皮-间质转分化标志蛋白α-SMA表达水平明显降低（P<0.05）。结论:吉非替尼抑制博来霉素诱导的肺纤维化,其机制可能与抑制EGFR/Akt通路活化、增强转录因子Foxo3a活性、从而抑制上皮-间质转分化密切相关。     

大黄酸通过抑制miR-21而干预TGF-β1/Smad通路并减轻博莱霉素所致大鼠肺纤维化

目的:观察大黄酸(rhein,RH)对博莱霉素所致肺纤维化大鼠微小RNA-21(miR-21)表达以及转化生长因子β1(TGF-β1)/Smad通路的影响。方法:博莱霉素一次性气管内注射复制大鼠肺纤维化模型,随机分为RH低、中、高剂量组及模型(model)组;正常对照组大鼠气管内注射生理盐水。用药28 d后,HE染色观察各组大鼠肺组织形态学的变化;测定肺系数、肺组织羟脯氨酸含量;real-time PCR检测肺组织中miR-21和TGF-β1/Smad7m RNA表达;Western blot法分析TGF-β1和Smad7蛋白的表达。结果:与model组相比,RH用药组大鼠的肺泡炎及肺纤维化程度有明显降低,肺系数及肺组织羟脯氨酸含量也显著减少,肺组织中miR-21表达下降,TGF-β1的m RNA和蛋白表达水平也明显下降,Smad7的mRNA及蛋白表达水平明显增高(P0.05)。结论:RH抗肺纤维化的作用可能与抑制miR-21的表达,从而干预TGF-β1/Smad信号通路,减少细胞外基质沉积有关。     

硫化氢通过抑制TGF-β1/Smad信号通路抗大鼠肺纤维化

目的观察硫化氢(H2S)对博莱霉素所致大鼠肺纤维化的影响,并探讨其是否通过转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad信号通路发挥作用。方法 SD大鼠50只随机分为正常对照组、假手术组、模型组、硫氢化钠(Na HS)组和地塞米松组,每组10只,假手术组大鼠以生理盐水气管内注入,而后3组大鼠以博莱霉素A5气管内注入制备肺纤维化模型。自第2天起,Na HS组、地塞米松组大鼠分别以Na HS、地塞米松腹腔注射,其余3组腹腔注射等量生理盐水。全部大鼠第28天处死,留取肺组织,行HE和Masson染色,通过试剂盒测定肺组织羟脯氨酸(HYP)含量,采用实时荧光定量PCR和Western blot分别检测肺组织中TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(ColⅠ)、Ⅲ型胶原(ColⅢ)m RNA和蛋白表达。结果与模型组比较,Na HS组和地塞米松组肺泡炎症与肺纤维化程度明显减轻(P0.01)。与正常对照组或假手术组比较,模型组肺组织HYP含量以及TGF-β1、Smad 2、Smad 3、α-SMA、ColⅠ、ColⅢm RNA和蛋白表达水平升高,但Smad 7 m RNA和蛋白表达水平降低,差异均有统计学意义(P0.01)。通过Na HS或地塞米松处理后,肺组织HYP含量以及TGF-β1、Smad 2、Smad 3、α-SMA、ColⅠ、ColⅢm RNA和蛋白表达水平减少,而Smad 7 m RNA和蛋白表达水平增加,与模型组比较,差异均有统计学意义(P0.01)。然而,Na HS组与地塞米松组以及假手术组与正常对照组上述指标相比无显著性差异(P0.05)。结论 H2S可能通过抑制TGF-β1/Smad信号转导通路下调α-SMA表达,从而减少ColⅠ、ColⅢ合成发挥抗大鼠肺纤维化作用。     

黄芪对肺纤维化大鼠Th1/Th2型细胞因子平衡及自由基代谢的影响

目的 研究黄芪水提物、黄芪皂苷对博莱霉素(BLM)所致肺纤维化大鼠Th1/Th2型细胞因子平衡、NO、SOD、MDA及肺组织病理结构的影响,探索黄芪阻抑肺纤维化的效应及其机制.方法 Wister大鼠随机分为空白组、BLM模型组、地塞米松组、黄芪水提物组、黄芪皂苷组;气管内注入BLM制作大鼠肺纤维化模型,造模后第2天开始药物干预,14、28 d各取6只大鼠,分别检测血IFN-γ、IL-4、NO水平,肺组织SOD、MDA水平及肺组织病理结构的动态变化.结果 与空白组比较,模型组大鼠IFN-γ、IFN-γ/IL-4比值、SOD含量降低,IL-4、NO、MDA的含量明显升高,肺组织发生明显的肺泡炎及纤维化改变(P＜0.05);与模璎组比较,黄芪水提物组、黄芪皂苷组、地寒米松组使大鼠血IFN-γ、IFN-γ/IL-4比值、SOD含量明显升高,NO、MDA含量明显降低,肺组织的肺泡炎及纤维化程度明显降低(P＜0.05);黄芪水提物组、黄芪皂苷组与地塞米松组比较,各指标均无统计学差异(P＞0.05).结论黄芪水提物、黄芪皂苷对肺纤维化大鼠肺组织均具有保护作用,调节Th1/Th2型细胞因子的平衡及NO代谢、及提高抗氧化能力可能是其阻抑肺纤维化发生的机理之一.     

结缔组织生长因子在博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化中的作用探讨

目的:检测结缔组织生长因子(CTGF)在小鼠肺内的表达,并探讨其在肺纤维化中的意义。方法:通过向气管内滴入博莱霉素建立小鼠肺纤维化模型。用免疫组化染色方法检测不同时期肺组织中CTGF蛋白的表达;用RT PCR检测CTGFmRNA的表达;用酸水解法测定肺羟脯氨酸的含量。结果:在正常小鼠肺组织中,CTGF蛋白和其mRNA几乎不表达;而在模型组的肺组织中表达明显升高(P<0.01)。CTGF蛋白表达于支气管/细支气管上皮细胞、肺泡Ⅱ型上皮细胞和肺成纤维细胞,表达量与肺组织中羟脯氨酸的含量呈显著的正相关(r=0.92,P<0.001)。结论:CTGF与肺纤维化的形成关系密切,CTGF检测可作为评价肺纤维化发生、发展的一种灵敏的指标。     

依那西普抑制博来霉素诱导的小鼠肺纤维化

 目的：观察肿瘤坏死因子 α(TNF-α)拮抗剂依那西普对博来霉素诱导的肺纤维化小鼠的抑制纤维化作用,并探讨依那西普治疗肺纤维化的可能机制。方法：将45只SPF级雌性昆明小鼠随机分为3组：对照组（气管内雾化生理盐水）、纤维化组（气管内博来霉素3 mg/kg溶于100 μL生理盐水内雾化）和依那西普干预组（气管内雾化博来霉素后,4 mg/kg依那西普溶于100 μL生理盐水内腹腔注射,每3 d注射1次）。处理后第28 d收集样本,小鼠左肺置于10%中性甲醛固定,石蜡包埋切片后行HE与Masson染色;右肺碱水解法检测组织羟脯氨酸(HYP)的含量;酶联免疫法检测血清TNF-α和转化生长因子 β（TGF-β）的含量;提取肺组织总蛋白,Western blotting 检测磷酸化ERK1/2、JNK和p38的表达。结果：依那西普干预组肺组织病理损伤及气道上皮下胶原沉积较纤维化组减轻,肺叶炎症损伤评分和纤维化评分明显下降（均P<0.01）,肺组织HYP含量显著降低（P<0.05）,血清TNF-α 和TGF-β的浓度明显减少（均P<0.01）,肺组织ERK1/2、JNK和p38蛋白的磷酸化水平也显著下降（P<0.01,P<0.05,P<0.01）。结论：依那西普能显著下调TNF-α 和TGF-β的水平,从而抑制ERK1/2、JNK和p38的活化,缓解博来霉素诱导的小鼠肺纤维化病变。     

丹参素干预对肺纤维化大鼠TGF-β1/Smads信号通路的影响

 目的： 探讨丹参素对博莱霉素所致大鼠肺纤维化的防治作用及其可能机制。方法： SD大鼠经气管内滴注博莱霉素诱导肺间质纤维化,随后分别腹腔内注射丹参素15 mg·kg-1·d-1(DA组)、地塞米松1 mg·kg-1·d-1(DXM组)和生理盐水2 mL·d-1 (BLM组)进行干预,正常对照组(NC组)气管内滴注和腹腔内注射均用生理盐水。于造模后第28天处死所有大鼠,通过苏木精-伊红(HE)染色和Masson染色来评价治疗效果;免疫组化技术检测肺组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达;实时荧光定量PCR测定转化生长因子β1（TGF-β1）、Smad3及Smad7 mRNA的表达。结果： DA组与BLM组相比,肺泡炎症及肺纤维化程度均明显减轻,肺组织α-SMA表达明显减少,肺组织TGF-β1和Smad3 mRNA表达明显减少,Smad7 mRNA明显增多。结论： 丹参素早期应用可减轻博来霉素诱导的大鼠肺纤维化,可能通过抑制TGF-β1、Smad3 mRNA和促进Smad7 mRNA的表达而实现。     

丙戊酸钠减轻博莱霉素致大鼠肺纤维化

目的:探讨丙戊酸钠在博莱霉素诱导的肺纤维化中的作用及机制。方法:42只大鼠随机分为正常对照组、模型组和治疗组。造模采用博来霉素5 mg/kg气管内注射,自造模14 d开始分别采用生理盐水(0.5m L/d)、丙戊酸钠(300 mg·kg-1·d-1)和地塞米松(0.6 mg·kg-1·d-1)腹腔内注射治疗14 d。模型组分别在造模后14和、28 d处死。治疗组在造模后28 d处死。然后通过HE染色、Masson染色、羟脯氨酸(HYP)检测和Western blotting检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达的变化,综合分析丙戊酸钠对肺纤维化发展的干预作用。结果:HE染色显示丙戊酸钠治疗组的肺泡结构、肺间质的形态优于生理盐水组和地塞米松治疗组。Masson染色及HYP检测用于衡量肺组织内胶原的分布及含量,可见丙戊酸钠治疗组肺组织内胶原的分布及含量均显著低于地塞米松治疗组及生理盐水组。丙戊酸钠可以降低α-SMA的表达,同时上调上皮标志性蛋白E-cadherin的表达。结论:丙戊酸钠可以通过减少胶原的表达与分布及下调间充质蛋白α-SMA,同时上调上皮蛋白E-cadherin的表达从而减轻博来霉素诱导大鼠肺纤维化。     

miR-219与TGFBR2的调控关系在肾脏纤维化中的作用

目的:研究微小RNA-219(miR-219)通过靶向调控转化生长因子βⅡ型受体(TGFBR2)在肾脏纤维化中发挥的作用。方法:收集2017年9月～2018年3月于我院就诊的70例肾脏纤维化患者,选取同期来本院体检的20例健康人设为对照组,RT-qPCR检测肾脏纤维化患者及对照组血清中miR-219的表达水平,并检测血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激大鼠肾成纤维细胞NRK49F后miR-219的表达水平。Western blot检测转染miR-219模拟物(miR-219 mimics)的NRK49F细胞在AngⅡ刺激后α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的蛋白表达情况。筛选出miR-219的潜在靶基因TGFBR2,并通过萤光素酶报告基因法进行验证。RT-qPCR和Western blot检测miR-219 mimics对TGFBR2的mRNA及蛋白表达的影响。RT-qPCR检测miR-219 mimics对α-SMA、结缔组织生长因子(CTGF)、Ⅰ型胶原α1链(COL1A1)和COL3A1的mRNA表达水平的影响。构建单侧输尿管闭塞(UUO)小鼠模型并检测其肾脏组织中miR-219的表达水平,对UUO小鼠注射miR-219后观察肾脏纤维化的变化情况,并检测COL1A1和COL3A1的mRNA表达水平。结果:肾脏纤维化患者血清中miR-219的表达水平明显低于对照组,UUO小鼠肾脏组织中miR-219的表达显著下降(P0.01);AngⅡ刺激NRK49F细胞后miR-219的表达水平明显降低,且miR-219 mimics可抑制α-SMA蛋白的表达(P0.01);miR-219 mimics对TGFBR2具有靶向调控作用,可抑制TGFBR2的mRNA及蛋白表达;miR-219 mimics可抑制α-SMA、CTGF、COL1A1和COL3A1的mRNA表达水平;miR-219可下调UUO小鼠中COL1A1和COL3A1的mRNA表达水平并抑制其肾脏纤维化进程。结论:miR-219可通过抑制TGFBR2的表达从而抑制肾脏纤维化的发展,可能成为肾脏纤维化诊断及治疗的新靶点。     

黄芪多糖通过激活AMPK减轻同型半胱氨酸对人血管内皮细胞的损伤

目的:探讨黄芪多糖(Astragalus polysaccharides,APS)能否减轻同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)对人血管内皮细胞的损伤及其可能的机制。方法:培养人脐静脉内皮细胞,分为正常对照组、APS组[APS(200mg/L)处理24 h]、Hcy组[Hcy(1 mmol/L)处理24 h]和Hcy+APS组[Hcy(1 mmol/L)和APS(200 mg/L)共同处理24 h]。采用MTT法检测细胞活力,采用试剂盒法检测内皮细胞中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)和超氧化物歧化酶(superoxidase dismutase,SOD)活性及丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,采用RT-q PCR检测SOD1、过氧化氢酶(catalase,CAT)和NADPH氧化酶2(NADPH oxidase 2,NOX2)的mRNA表达,并采用Western blot检测腺苷酸活化蛋白激酶α(AMP-activated protein kinaseα,AMPKα)和磷酸化AMPKα(phosphorylated AMPKα,pAMPKα)的蛋白水平。结果:与对照组相比,Hcy组内皮细胞活力明显下降,LDH活性升高,细胞内MDA含量,SOD活性下降,SOD1和CAT的mRNA表达水平显著下降,而NOX2的mRNA表达水平明显升高(P0.05)。APS能够抑制Hcy引起的细胞活力下降、LDH活性升高及MDA含量增加;增加SOD活性,提高SOD1和CAT的mRNA表达水平,减少NOX2的mRNA表达水平(P0.05)。AMPK抑制剂Compound C则可以显著降低APS对Hcy引起的内皮细胞损伤的修复作用。结论:APS可通过活化AMPK调控细胞内氧化应激从而抑制Hcy对血管内皮细胞的损伤。     

盐皮质激素受体在博来霉素诱导的实验性肺纤维化中的作用*

 目的：研究盐皮质激素受体（MR）在博来霉素诱导的实验性肺纤维化进展过程中的作用及机制。方法：将126只6～8周龄雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组、博来霉素组和MR阻断剂螺内酯干预组,气管内一次性滴注博来霉素(2.5 mg/kg)溶液建立实验性小鼠肺纤维化模型,螺内酯干预组每天按螺内酯20 mg/kg经灌胃给药。于术后12 h、1 d、2 d、3 d、7 d、14 d和28 d处死小鼠,采用HE染色和Masson染色观察肺组织病理学变化及纤维化程度,采用real-time PCR检测各组肺组织中胶原1(Col1)、Col3、转化生长因子β(TGF-β)、单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）及MR mRNA的表达水平。结果：（1）与对照组小鼠相比,博来霉素组及螺内酯干预组小鼠在滴注博来霉素后经历了典型的急性炎症期（12 h～3 d）、纤维化进展期（14 d）和纤维化晚期（28 d）。阻断MR下调早期炎症反应并减轻了纤维化程度。（2）螺内酯干预可以有效降低MR mRNA表达水平;阻断MR在急性炎症期显著下调MCP-1 mRNA的表达,在14 d显著下调TGF-β、Col1和Col3 mRNA表达水平。结论：(1）阻断MR可以明显减轻博来霉素诱导的肺纤维化程度;(2）阻断MR可能通过在急性炎症期调节MCP-1和TGF-β的表达,减轻炎症反应,并在纤维化进展期,下调TGF-β的表达,从而抑制肺纤维化的进展。     

慢性酒精摄入所致的肝细胞上皮-间充质转化参与小鼠肝纤维化形成

 目的：探讨慢性酒精摄入对肝组织病理学改变的影响及上皮-间充质转化对肝纤维化形成的作用。方法：将30只雄性C57BL/6小鼠随机分为3组：对照组灌胃给予与酒精组等体积的蒸馏水,低剂量和高剂量酒精组分别灌胃给予2.0 g·kg -1·d -1和 4.0 g·kg -1·d -1酒精5个月。肝组织病理学改变和纤维化分别用HE和 Masson三染色观察;荧光标记的TUNEL法检测肝组织细胞凋亡;自动生化分析仪检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)的活性;肝组织成纤维细胞特异性蛋白1（FSP-1）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和E-钙黏素表达采用免疫荧光观察;E-钙黏素、α-SMA、FSP-1、转化生长因子β 1 (TGF-β 1) 和缺氧诱导因子1α（HIF-1α）蛋白表达水平用Western blotting 检测。结果：与对照组相比,小鼠酒精灌胃5个月后,血清ALT和AST活性升高;肝组织细胞凋亡增加;低剂量酒精组呈现肝脂肪变性和轻度的肝纤维化,高剂量酒精组呈现出严重的肝纤维化;肝组织丙二醛（MDA）含量升高,超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）下降;肝细胞E-钙黏素表达下降,α-SMA表达增加;低剂量酒精组肝细胞内白蛋白和FSP-1共定位,而高剂量酒精组肝细胞内只表达FSP-1;Western blotting检测结果显示,E-钙黏素表达下降,而α-SMA、FSP-1、TGF-β 1和HIF-1α蛋白表达水平升高,但是HIF-1α蛋白表达水平在高、低酒精组之间无差别。结论：慢性酒精摄入可诱导肝纤维化,部分成纤维细胞来源于肝细胞上皮-间充质转化,其机制可能与肝细胞氧化状态、TGF-β 1及HIF-1α升高有关。