雌激素对大鼠胸腺细胞凋亡及Bcl-2、Bax表达的影响

目的:探讨苯甲酸雌二醇对大鼠胸腺Bcl-2和Bax表达及细胞凋亡的影响及其机制.方法:雌性大鼠行卵巢切除术,给予苯甲酸雌二醇后,观察胸腺指数的变化,Hochest33342荧光染色及透射电镜标本观察胸腺细胞凋亡情况,免疫组织化学检测胸腺组织中Bcl-2和Bax的表达情况,原位杂交技术检测Bcl-2、Bax m RNA的表达情况.结果:双侧卵巢切除组大鼠胸腺指数较假手术组增加,双侧卵巢切除+雌激素组大鼠胸腺指数较双侧卵巢切除组减小;假手术组和双侧卵巢切除组大鼠胸腺组织中以正常胸腺细胞为主,偶见凋亡细胞或凋亡小体,双侧卵巢切除+雌激素组可见较多凋亡细胞和凋亡小体;双侧卵巢切除+雌激素组大鼠胸腺组织中Bcl-2表达较双侧卵巢切除组和假手术组增高明显降低,而Bax表达呈现相反趋势;Bcl-2 mRNA、Bax mRNA的表达与Bcl-2、Bax的表达呈一致性.结论:雌激素可以降低大鼠胸腺指数,抑制胸腺组织中Bcl-2的表达,促进Bax的表达,从而诱导大鼠胸腺细胞凋亡,促进雌性大鼠胸腺退化.     

敲低膜联蛋白A7对人肝癌HepG2细胞Bcl-2和Bax表达的影响

目的 探讨敲低膜联蛋白A7表达对人肝癌细胞系HepG2细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达的影响。方法 将HepG2细胞接种于6孔板,分为3组：siRNA干扰组、阴性对照组和空白对照组,其中干扰组只转染靶向膜联蛋白A7的siRNA,阴性对照组只转染阴性对照siRNA,空白对照组只加转染试剂。通过Western blotting鉴定膜联蛋白A7在转染后48h可被最大程度的抑制,于是在转染后48h采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率,通过免疫组织化学、Western blotting和RT PCR检测Bcl-2和Bax蛋白及mRNA的表达。 结果 与阴性对照组和空白对照组相比,siRNA干扰组细胞凋亡率显著增高（P<0.05）,Bcl-2蛋白和mRNA的表达均显著降低（P<0.05）,而Bax蛋白和mRNA均未发生显著变化（P>0.05）。结论 敲低膜联蛋白A7可促进HepG2细胞的凋亡,降低Bcl-2和Bax的比值。     

丙酸睾酮对大鼠胸腺细胞凋亡及胸腺中Bcl-2、Bax表达的影响

目的探讨丙酸睾酮在大鼠胸腺退化过程中的作用及其对大鼠胸腺中Bcl-2和Bax表达的影响。方法雄性大鼠去势后给予丙酸睾酮皮下注射,分别于注射后第1、4、7天取材,用半薄切片甲苯胺蓝染色检测胸腺细胞凋亡情况,免疫组织化学法检测胸腺组织中Bcl-2和Bax的表达情况,采用t检验进行统计学处理。结果丙酸睾酮处理组大鼠胸腺组织中可发现较多的凋亡细胞和凋亡小体;去势组大鼠胸腺组织中Bcl-2表达量明显高于假手术组（P〈0.001）,丙酸睾酮处理后Bcl-2表达量明显减少（P〈0.001）;而Bax的表达正好相反,去势组大鼠胸腺组织中Bax表达量明显低于假手术组（P〈0.001）,给予丙酸睾酮后Bax表达量明显增加（P〈0.001）;结论丙酸睾酮可诱导大鼠胸腺细胞凋亡,并抑制大鼠胸腺组织中Bcl-2的表达,促进Bax的表达。     

自然流产模型小鼠蜕膜细胞凋亡及Bcl-2、Bax表达的研究

目的：通过比较正常妊娠模型小鼠及自然流产模型小鼠蜕膜细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白的表达，从细胞及分子水平探讨自然流产的发病机制。方法：建立正常妊娠模型CBAXBALB／c和自然流产模型CBAXDBA／2。用免疫组化SABC法测定两组模型孕13天蜕膜细胞Bcl-2和Bax蛋白的表达，并通过MIAS-2000医用彩色病理图像免疫组化测量系统对其表达进行半定量分析，其结果用平均灰度值表示；同时应用DNA缺口原位末端标记技术（TUNEL）测定两组模型孕13天蜕膜细胞凋亡情况。结果：与正常妊娠模型相比，自然流产模型蜕膜细胞Bcl-2蛋白的表达降低（P〈0．01）；Bax蛋白的表达明显升高（P〈0．01）。蜕膜细胞凋亡指数，自然流产模型明显高于正常妊娠模型（P〈0．01）。结论：早孕期蜕膜组织细胞凋亡异常是自然流产的机制之一，Bcl-2／Bax途径可能是诱导早孕期蜕膜细胞凋亡的重要因素。     

苦碟子对恶性黑色素瘤细胞抑制及凋亡蛋白Bcl-2/Bax表达的影响

目的观察不同浓度中药苦碟子对恶性B16黑色素瘤细胞的抑制作用和凋亡蛋白Bcl-2/Bax表达的变化,探讨中药苦碟子抑制B16黑色素瘤细胞生长的可能机制。方法通过细胞培养和MTT实验,检测苦碟子对B16黑色素瘤细胞的生长抑制情况,Western blot测定凋亡蛋白Bcl-2/Bax表达,免疫荧光染色检测Bcl-2/Bax蛋白在不同浓度苦碟子处理的黑色素瘤细胞中的表达。透射电镜观察不同浓度梯度中药苦碟子诱导细胞凋亡,其细胞结构的特征性变化。结果随着苦碟子药物浓度的增加,黑色素瘤细胞活细胞数目逐渐减少,细胞存活率显著下降(<0.05),凋亡抑制蛋白Bcl-2表达水平呈现下降趋势,而促凋亡蛋白Bax呈现上升趋势(<0.05),免疫荧光染色显示Bcl-2表达逐渐减少,Bax表达逐渐增加;电镜下凋亡小体数目不断增加,核固缩逐渐明显,细胞间隙增大,线粒体数目减少。结论中药苦碟子有浓度依赖性抑制黑色素瘤细胞生长,促进细胞凋亡,凋亡蛋白Bcl-2/Bax变化呈线性关系。     

辛伐他汀预处理对脑缺血再灌注损伤Bcl-2和Bax表达的影响

目的:探讨辛伐他汀预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及其机制。方法:随机将48只雄性SD大鼠分为4组:空白对照组、假手术组、缺血再灌注组和辛伐他汀预处理组。辛伐他汀预处理组在模型制备前用辛伐他汀20mg/kg连续灌胃10d,1次/d;假手术组及缺血再灌注组用相同体积的等渗盐水连续灌胃10d。以线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,于缺血2h再灌注24h后行5分制神经功能评分,并断头取脑分别测定脑梗死体积、凋亡细胞数及Bcl-2、Bax表达。结果:与空白对照组和假手术组比较,缺血再灌注组和辛伐他汀预处理组神经功能缺损较为严重,脑梗死体积增大,凋亡细胞数目增多,Bcl-2、Bax表达增加(均P0.01)。与缺血再灌注组相比,辛伐他汀预处理组神经功能有不同程度改善,脑梗死体积明显减小,凋亡细胞数及Bax表达降低,Bcl-2表达增高,比较差异均有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论:辛伐他汀预处理对大鼠脑缺血再灌注有神经保护作用,其作用机制可能与辛伐他汀上调脑组织中Bcl-2、下调Bax表达,抑制细胞凋亡有关。     

精索静脉曲张大鼠睾丸细胞线粒体钙、Bcl-2/Bax蛋白表达和细胞凋亡的研究

目的：研究精索静脉曲张（VC）大鼠睾丸细胞线粒体钙、Bcl-2/Bax蛋白表达与细胞凋亡及其机制。 方法： 选取35只成年健康雄性 Wistar大鼠，随机分为VC组（VG, n=20）和假手术组（SOG, n=15）。术后10周，取双侧睾丸，采用火焰原子吸收法测定线粒体钙、采用原位缺口末端标记法(TUNEL)检测生殖细胞凋亡,免疫组化SABC法检测Bcl-2/Bax蛋白表达。 结果： VC组大鼠双侧睾丸生殖细胞线粒体钙的含量明显低于SOG组，生殖细胞凋亡显著增多，Bcl-2表达显著降低，Bax表达显著升高,但双侧睾丸生殖细胞凋亡率差异无显著。 结论： VC时，大鼠睾丸生殖细胞凋亡明显增加，提示VC时所致的男性不育可能是在某种凋亡诱发因素（高温、毒素返流、氧自由基等）作用下，线粒体钙、Bcl-2/Bax蛋白表达的变化直接对生殖细胞产生影响,导致男性不育。     

环氧合酶-2抑制剂对非小细胞肺癌A549细胞Bcl-2和Bax表达的影响

目的探讨环氧合酶-2抑制剂对非小细胞肺癌A549细胞Bcl-2和Bax表达的影响。方法加不同浓-1度塞来昔布与A549肺癌细胞共培养,MTT法检测细胞增殖,50μmol·L塞来昔布作用于A549细胞48 h,实时定量PCR方法检测各组细胞的Bcl-2和Bax基因表达水平,Western blot方法检测各组细胞的Bcl-2和Bax蛋白表达。结果塞来昔布在体外对细胞株A549的生长抑制作用呈剂量、时间依赖性;各组细胞培养48h后,相比于对照组,塞来昔布组细胞Bcl-2 m RNA和蛋白表达显著下调,Bax m RNA和蛋白表达显著上调,Bcl-2/Bax比值显著降低(<0.01)。结论塞来昔布可能通过调节Bcl-2和Bax的表达抑制A549细胞增殖。     

大鼠额叶损伤后细胞凋亡及Bax与Bcl-2蛋白的表达变化

本研究目的为探讨大鼠额叶锐器损伤后细胞凋亡的变化规律及调控机制。通过电镜、TUNEL法及免疫组织化学染色方法检测细胞凋亡和Bax、Bcl2蛋白的表达变化,结果发现凋亡细胞在损伤后3h即可发现,24h达到高峰;伤后3hBax和Bcl2表达明显升高,Bax表达12h达到高峰,而Bcl2表达6h即达到高峰;伤后Bax/Bcl2比值上调,24h达到高峰,随后逐渐下降。结果表明大鼠额叶锐器伤后存在细胞凋亡,凋亡细胞数量的变化与伤后时程有关,Bax/Bcl2比值是决定细胞凋亡的重要因素。     

牛蒡子苷元诱导人鼻咽癌CNE-1细胞凋亡及其作用机制

 目的: 探讨牛蒡子苷元(arctigenin,ARG)对人鼻咽癌CNE-1细胞凋亡的影响及其分子作用机制。方法: 经不同浓度的ARG处理CNE-1细胞后,采用CCK-8法检测ARG对CNE-1细胞活力的影响;caspase-3及caspase-9活性检测法检测CNE-1细胞caspase-3及caspase-9活性的变化;流式细胞术分析CNE-1细胞凋亡率的变化; real-time PCR法检测PI3K/AKT/XIAP信号通路相关分子mRNA表达水平的变化;Western blot法检测PI3K/AKT/XIAP通路蛋白水平的变化。结果: 随浓度和时间的增加,ARG可抑制鼻咽癌CNE-1细胞的活力(P<0.01);caspase-3及caspase-9活性的增加及细胞凋亡率的升高表明ARG可显著促进CNE-1细胞的凋亡;与对照组相比,PI3K/AKT/XIAP信号通路相关分子对mRNA表达均明显下调(P<0.01);ARG可明显下调PI3K/AKT/XIAP各蛋白水平(P<0.05)。结论: ARG可诱导鼻咽癌细胞凋亡,降低PI3K/AKT/XIAP相关分子水平可能是其促进细胞凋亡的机制。     

Hepatocyte growth factor suppresses tumor cell apoptosis in nasopharyngeal carcinoma by upregulating Bcl-2 protein expression

Hepatocyte growth factor (HGF) is a multifunctional cytokine, but cell apoptosis related to HGF in nasopharyngeal carcinoma (NPC) and the potential mechanisms involved have not yet been identified. In this study, we aimed at determining whether HGF is a potent inhibitor of cell apoptosis in NPC, and tried to find out which antiapoptotic or proapoptotic protein is involved in this process.     

人硫氧还蛋白对肺缺血再灌注损伤时细胞凋亡及Bcl-2/Bax的影响

目的:探讨细胞凋亡与肺缺血再灌注损伤的关系以及人硫氧还蛋白对凋亡及其相关基因的影响。方法:健康清洁级Wistar大鼠84只,随机分为对照组、肺缺血再灌注1h、3h、5h组和人硫氧还蛋白干预1h、3h和5h组。复制肺缺血再灌注损伤模型。采用电子显微镜和原位缺口末端标记法观测肺组织细胞凋亡的变化和凋亡指数,免疫组化技术检测肺组织细胞Bcl-2、Bax及凋亡信号调节激酶1(ASK1)蛋白表达的变化。结果:肺缺血再灌注组肺组织细胞凋亡指数、ASK1、Bcl-2和Bax蛋白表达均显著高于对照组(均P0.01),超微结构呈严重损伤性改变。人硫氧还蛋白干预组ASK1、Bax的表达显著下降(均P0.01),Bcl-2的表达及Bcl-2/Bax比值显著上调(P0.05或P0.01),肺组织细胞凋亡指数也显著低于缺血再灌注组(P0.01)。肺组织细胞凋亡指数分别与ASK1、Bax蛋白之间均呈显著正相关(分别r=0.775、r=0.814;均P0.01);与Bcl-2/Bax蛋白呈显著负相关关系(r=-0.275,P0.05)。结论:Bcl-2/Bax比值下调启动的肺组织细胞凋亡可能参与了肺缺血再灌注损伤的发生。人硫氧还蛋白可能通过下调ASK1的表达,提高Bcl-2/Bax的比值减少肺组织细胞凋亡,从而减轻肺缺血再灌注损伤。     

Ziyuglycoside II-induced apoptosis in human gastric carcinoma BGC-823 cells by regulating Bax/Bcl-2 expression and activating caspase-3 pathway

Ziyuglycoside II is an active compound of Sanguisorba officinalis L. that has anti-inflammation, antioxidation, antibiosis, and homeostasis properties. We report here on the anticancer effect of ziyuglycoside II on human gastric carcinoma BGC-823 cells. We investigated the effects of ziyuglycoside II on cell growth, cell cycle, and cell apoptosis of this cell line. Our results revealed that ziyuglycoside II could inhibit the proliferation of BGC-823 cells by inducing apoptosis but not cell cycle arrest, which was associated with regulation of Bax/Bcl-2 expression, and activation of the caspase-3 pathway. Our study is the first to report the antitumor potential of ziyuglycoside II in BGC-823 gastric cancer cells. Ziyuglycoside II may become a potential therapeutic agent against gastric cancer in the future.     

Apoptosis and the expression of Bax and Bcl-2 in hyperplasia and adenocarcinoma of the uterine endometrium

BACKGROUND: Apoptosis plays a crucial role in carcinogenesis in various tumours. This study was designed to investigate the occurrence of apoptosis and the expression of Bcl-2 and Bax proteins in endometrial tumours of corpus uteri. METHODS: Endometrial tissues were obtained from 20 patients with endometrioid adenocarcinoma, 16 patients with endometrial hyperplasia, and 4 patients with myoma uteri (which were used as controls). The occurrence of apoptosis was examined by using molecular biochemical techniques. The expression of Bcl-2 and Bax proteins was also investigated using immunohistochemical staining with appropriate antibodies. RESULTS: The labelling of DNA in situ indicated that apoptotic cells were sporadically seen in postmenopausal endometrium (5.2 +/- 2.1, n = 4) and endometrial hyperplasia without atypia (2.6 +/- 0.5, n = 9). In contrast, labelled cells were detected in atypical endometrial hyperplasia (15.9 +/- 2.2, n = 7), and their numbers increased intensely in adenocarcinoma (29.3 +/- 3.7, n = 20). Autoradiographic analysis revealed DNA laddering in many cases of carcinoma. Bcl-2 was highly immunopositive in hyperplasia without atypia (36.2 +/- 6.5%, n = 9), but was decreased in the atypical endometrial hyperplasia (16.3 +/- 4.8%, n = 7). Large fractions of the carcinoma (6.3 +/- 1.8%, n = 20) and normal endometrium (2.8 +/- 1.4%, n = 4) were immunonegative or slightly immunopositive to Bcl-2. In contrast, Bax immunoreactivity was more frequent and stronger in adenocarcinoma (43.6 +/- 4.1%, n = 20) than that in normal endometrium (17.6 +/- 6.7%, n = 4) and hyperplasia (7.2 +/- 2.2%, n = 16). CONCLUSIONS: These results suggest that cells in hyperplasia expressing Bcl-2 might have prolonged survival ability. Neoplastic cells in adenocarcinoma might show apoptosis in association with a decreased expression of Bcl-2 and an increased expression of Bax. Therefore, the frequency of apoptosis and the expression of Bcl-2 and Bax might be correlated with carcinogenesis in the uterine endometrium of humans.     

白藜芦醇诱导鼻咽癌细胞CNE-2Z凋亡过程中caspase-6的活化

目的:探讨白藜芦醇(Res)诱导鼻咽癌细胞CNE-2Z凋亡过程中是否有caspase-6的活化。方法:用Western-blot分析caspase-6酶原的裂解,半定量RT-PCR检测caspase-6mRNA表达的改变,比色法测定caspase-6活性的变化。结果:用Res 0(对照)、25、50、100、200μmol/L处理细胞24小时,caspase-6酶原的表达随药物浓度的增加而减少,100 μmol/L时开始出现活性裂解片段P20(20 kD),200μmol/L时P20增加;caspase-6 mRNA的表达呈浓度依赖性的增加(P<0.01);caspase-6活性呈浓度和时间依赖性的升高(P<0.01)。结论:Res诱导CNE-2Z细胞凋亡过程中有caspase-6的活化。     

吗啡对人鼻咽癌CNE-2细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨吗啡对人鼻咽癌CNE-2细胞增殖与凋亡的影响及可能的机制.方法 以含0.1、1、10、100、1000mg/L吗啡的培养液作用于体外培养的鼻咽癌CNE-2细胞,等体积培养基作为对照组.MTT法检测吗啡作用24、48和72 h的细胞增殖抑制率,并在不同浓度吗啡作用细胞48 h后,用Hoechst33258荧光染色、流式细胞仪检测细胞凋亡,Western免疫印迹检测Bc1-2、Bax和caspase-3、cleaved-caspase-3蛋白表达.结果 相同作用时间点0.1～100 mg/L吗啡并不影响CNE-2细胞的增殖.而在1000 mg/L吗啡作用下细胞增殖受到明显的抑制,在24、48、72 h CNE-2细胞增殖抑制率随作用时间延长而增加,分别达到(15.0±4.4)%、(30.7±4.9)%和(50.0±4.4)%.48 h后,荧光显微镜下对照组CNE-2细胞未见明显凋亡,0.1～100mg/L吗啡组仅见少量凋亡,而在1000mg/L吗啡组,可见到大量细胞出现典型的凋亡形态学改变.流式细胞仪检测结果显示0.1～100 mg/L吗啡组细胞凋亡率与对照组差异并无统计学意义(P>0.05),而1000mg/L吗啡组细胞凋亡率则明显增加[(39.33±6.03)%比(9.36±1.57)%,P<0.05].Western免疫印迹检测显示在1000 mg/L吗啡作用CNE-2细胞48 h后,Bcl-2蛋白的表达量较对照组明显下降,Bax表达增多,caspase-3活性升高,cleaved-caspase-3表达增多.而其他浓度作用下CNE-2细胞Bcl-2、Bax和caspase-3、cleaved-caspase-3蛋白表达未见明显变化.结论 大剂量吗啡可诱导鼻咽癌CNE-2细胞的凋亡,其机制可能与吗啡上调CNE-2细胞Bax蛋白表达,下调其Bcl-2蛋白表达,引起caspase-3活化有关.     

生育年龄妇女早期卵泡细胞凋亡和Bcl-2/BAX蛋白表达

目的:研究生育年龄妇女早期卵泡的细胞凋亡和Bcl-2/BAX蛋白表达。方法:12例卵巢组织标本来自进行妇科手术的生育年龄妇女(年龄23-38岁),并经过组织病理学检查证实无明显形态异常。利用末端标记法(TUNEL)和免疫组织化学方法研究早期卵泡(包括始基卵泡、间期和初级卵泡)细胞凋亡和Bcl-2/BAX蛋白表达。结果:早期卵泡内18.75%卵细胞表现TUNEL阳性,但是卵泡内未见TUNEL阳性颗粒细胞。BAX在早期卵泡的卵细胞内表达,阳性表达率76.07%;相反未见Bcl-2在卵细胞表达。另外,早期卵泡内颗粒细胞也没有表达Bcl-2和BAX。结论:生育年龄妇女早期卵泡的卵细胞发生凋亡,促凋亡蛋白BAX在卵细胞凋亡过程中发挥调节作用,由此提示BAX介导的卵细胞凋亡可能是生育年龄妇女早期卵泡闭锁的机制。     

热休克蛋白70在缺糖损伤的HeLa细胞中对Bax和Bcl-2以及Bax构象改变的影响

目的 观察热休克蛋白70(Hsp70)对缺糖引起的HeLa细胞凋亡的影响,探讨其与凋亡相关的Bcl-2家族成员的相互作用关系. 方法 用人正义Hsp70重组质粒稳定转染HeLa细胞获得Hsp70过表达细胞.采用Hsp70过表达和正常HeLa细胞无糖培养建立两组细胞损伤模型,并均取3个平行样本.四甲基偶氮唑盐(MTT)法测细胞活率;Hoechst染色法和Giemsa染色法检测细胞凋亡率;RT-PCR法检测Bax和Bcl-2的表达变化,并计算其灰度比值;细胞免疫化学和荧光免疫法检测Bax构象改变情况. 结果 缺糖48h内,Hsp70明显抑制了HeLa细胞凋亡并增强其活力,同时也抑制了凋亡细胞中 Bax/Bcl-2的增高以及Bax的构象改变. 结论 缺糖诱导下,热休克蛋白70在HeLa细胞中能够通过与Bcl-2家族成员作用而抑制凋亡的发生.