TRPC6在PDGF诱导的大鼠气道平滑肌细胞增殖中的作用

 目的：探讨经典瞬时受体电位通道6 (TRPC6) 对血小板源性生长因子 (PDGF) 诱导的气道平滑肌细胞 (ASMCs) 增殖的影响。方法：组织贴块联合酶消化法培养原代大鼠ASMCs。间接免疫荧光法鉴定平滑肌细胞及检测TRPC6在ASMCs上的表达。CCK-8法检测PDGF诱导ASMCs的增殖。Real-time PCR 检测PDGF作用后TRPC6 mRNA的表达。Western blotting检测PDGF作用后TRPC6蛋白的表达。CCK-8法检测TRPC6阻断剂对PDGF 诱导ASMCs增殖的作用。结果：细胞免疫荧光显示：TRPC6广泛存在于气道平滑肌细胞。CCK-8法检测细胞的增殖发现,20 μg/L PDGF作用后 ASMCs发生增殖 (P<0.05);PDGF与TRPC6阻断剂SKF96365共同作用于ASMCs,ASMCs的增殖较单独使用PDGF组减弱 (P<0.05),且减弱的程度具有剂量及时间依赖性。Real-time PCR结果显示：PDGF分别作用于ASMCs 12 h、24 h和48 h后,TRPC6 mRNA表达与相应的对照组比较明显升高 (P<0.05)。Western blotting检测结果显示：PDGF分别作用ASMCs 24 h和48 h后,TRPC6蛋白表达与相应的对照组比较明显升高 (P<0.05)。结论：TRPC6参与了PDGF诱导ASMCs增殖的过程,PDGF促进ASMCs增殖可能与其上调TRPC6 mRNA和蛋白表达相关。     

软骨同源蛋白1(CART1)敲低诱导MDA-MB-231乳腺癌细胞S期阻滞并抑制其侵袭和迁移

目的运用外源性RNA干扰技术,敲低MDA-MB-231乳腺癌细胞中软骨同源蛋白1(CART1)基因的表达,研究CART1基因沉默后对MDA-MB-231细胞生物学行为的影响。方法采用人工合成的针对CART1基因的siRNA,用转染试剂RNAi MAX将CART1-siRNA转染MDA-MB-231细胞。实时定量PCR检测转染后CART1 mRNA水平,Western blot法检测转染后CART1蛋白水平,TranswellTM侵袭实验检测MDA-MB-231细胞侵袭、CCK-8法检测细胞增殖、流式细胞术检测细胞周期的变化。结果 CART1-siRNA能有效沉默CART1在MDA-MB-231细胞中的表达,CART1沉默后MDA-MB-231细胞侵袭和增殖能力明显下降,S期细胞的比率增高而G2/M细胞比率减少。结论下调MDA-MB-231细胞CART1的表达,可降低其侵袭和增殖能力、诱导S期阻滞。     

白细胞介素6受体抗体对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞核因子-κB受体激活因子配体表达影响的实验研究

目的 探讨白细胞介素6受体抗体(IL-6R-Ab)对类风湿关节炎(RA)滑膜成纤维细胞增殖与核因子-κB受体激活因子配体(RANKL)表达的影响.方法 从膝关节镜术中获取RA患者滑膜组织,培养成纤维细胞.实验分为4组:甲氨蝶呤(MTX)组、IL-6R-Ab组、IL-6R-Ab联合MTX组、空白对照组.分别采用CCK-8检测IL-6R-Ab、MTX对RA滑膜成纤维细胞增殖活力影响;荧光定量(FQ)-PCR检测各组培养体系中的滑膜成纤维细胞RANKL mRNA的表达.结果 CCK-8检测结果显示:与空白对照组比较,MTX组、IL-6R-Ab组及联合组成纤维细胞的生长受到抑制(F=54.64,P＜0.05);IL-6R-Ab联合MTX组RA滑膜成纤维细胞的生长显著受到抑制(P＜0.01);但MTX组与IL-6R-Ab组未见统计学差异.ELISA检测结果提示:与MTX组相比,IL-6R-Ab组的RANKL表达量降低(P＜0.05),IL-6R-Ab联合MTX组的RANKL表达量明显降低(P＜0.01).FQ-PCR检测显示,MTX组、IL-6R-Ab组、联合组均能抑制RANKL mRNA的表达(F =32.17,P＜0.05);与MTX组或IL-6R-Ab组相比,IL-6R-Ab联合MTX组RANKL mRNA的表达也受到抑制(P＜0.05).结论 IL-6R-Ab单独或联合MTX使用均能抑制RA滑膜成纤维细胞的增殖活力,显著抑制RANKL的表达.本研究为IL-6R-Ab防治RA滑膜成纤维细胞所造成的关节破坏提供细胞与分子生物学方面的理论依据.     

雷公藤多甙对IL-1β诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364增殖和IL-6分泌的影响

目的:观察雷公藤多甙对IL-1β诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364增殖和IL-6分泌的影响,探讨其治疗类风湿性关节炎的作用机理.方法:培养大鼠滑膜细胞株RSC-364,运用CCK-8法检测不同剂量的雷公藤多甙对IL-1β诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364增殖的影响,酶联免疫吸附实验检测细胞株培养上清中的IL-6的含量.结果:经过IL-1β诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364,在不同浓度的雷公藤多甙的作用48h后,其增殖明显受到抑制,并呈剂量依赖性.同时各剂量组均可抑制IL-1β诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364分泌炎性因子IL-6的分泌.结论: 雷公藤多甙抑制IL-1β诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364的过度增殖和IL-6的分泌,这可能是其治疗类风湿性关节炎的作用机理之一.     

沉默TREM-2对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞迁移和侵袭的影响

 目的: 应用RNA干扰(RNAi)技术沉默类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(RA-FLS)髓样细胞触发受体2(TREM-2)的表达,探讨TREM-2基因沉默对RA-FLS迁移和侵袭能力的影响及其相关机制。方法: 向RA-FLS转染特异性的TREM-2 siRNA,利用RT-PCR法和Western blot法检测沉默效果;CCK-8法检测各组细胞生长情况;Transwell小室测定细胞的迁移和侵袭能力;ELISA法检测细胞MMP-2和MMP-9的分泌水平;Western blot法分析沉默TREM-2基因对细胞PI3K/AKT通路的影响。结果: TREM-2 siRNA能显著降低RA-FLS中TREM2 mRNA和蛋白的表达(P<0.05)。沉默TREM-2基因后,各时点各组细胞的活力未见明显差异;特异性干扰组RA-FLS的迁移细胞数目与空白组和control siRNA组相比明显增多(P<0.05);TREM-2 siRNA组侵袭细胞数目相比空白组和control siRNA组明显增多(P<0.05);TREM-2 siRNA干扰后RA-FLS分泌的MMP-2显著增加(P<0.05)而MMP-9未见明显变化;特异性转染后的RA-FLS相对于对照组PI3K/AKT的磷酸化水平显著增强(P<0.05)。结论: TREM-2可能通过调节PI3K/AKT通路的活化对RA-FLS的迁移和侵袭能力发挥着重要作用。     

抗瓜氨酸化肽特异性免疫复合物对类风湿关节滑膜细胞功能影响的研究

目的:研究类风湿关节炎(RA)患者血清抗瓜氨酸化肽特异性免疫复合物(ACPA-IC)对RA患者关节成纤维样滑膜细胞(FLS)增殖和分泌细胞因子功能的影响。方法:用PEG沉淀法提取RA患者血清免疫复合物(IC),ELISA法检测IC中ACPA-IC水平。用G蛋白免疫亲和层析法从6份ACPA-IC(+)RA血清、4份ACPA-IC(-)RA血清及10份正常人血清中提取IC。体外培养RA关节FLS;分别用RA ACPA-IC(+)提取物、ACPA-IC(-)提取物及健康人血清IC(C-IC)刺激FLS,用CCK-8(Cell Counting Kit-8)试剂检测FLS增殖情况,液态芯片技术检测不同来源IC刺激对FLS分泌IL-1β、IL-2、IL-6、IL-8、IL-10、IL-15、IL-17、TNF-α、GM-CSF、EGF、VEGF等11种细胞因子水平的影响。结果:RA患者ACPA-IC(+)提取物能够显著促进FLS增殖,与对照组IC比较,在培养24小时时间里,四种浓度(25、50、75和100μg/ml)的ACPA-IC都能显著促进FLS增殖。RA患者血清ACPA-IC(+)和ACPA-IC(-)提取物刺激FLS 24小时后,可诱导细胞分泌大量IL-6、IL-8和GM-CSF;其中ACPA-IC(+)组刺激FLS分泌GM-CSF和IL-8量均显著高于ACPA-IC(-)组和C-IC组,ACPA-IC(+)组刺激FLS分泌IL-6水平显著高于C-IC组,但与ACPA-IC(-)组无显著性差异。三组间刺激分泌IL-1β、IL-2、IL-10、IL-15、IL-17、TNF-α、EGF、VEGF等其他8种细胞因子含量均无显著性差异。结论:RA患者血清ACPA-IC可促进FLS增殖,并诱导其分泌IL-6、IL-8和GM-CSF等炎性细胞因子,进而进一步诱发滑膜炎症反应及骨质破坏。     

IL-32γ对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖与细胞周期的影响

目的:研究IL-32γ对类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLS)增殖与细胞周期的影响及机制。方法:体外培养活动性类风湿关节炎和骨关节炎(OA)患者成纤维样滑膜细胞并以IL-32γ处理,应用MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期;Western印迹方法检测cyclinD1及NF-κBp65蛋白含量;免疫细胞化学染色法检测PCNA表达的变化。结果:IL-32γ对OA-FLS增殖没有影响;不同浓度的IL-32γ(10～100 ng/ml)在72～120小时范围内,浓度和时间依赖性促进RA-FLS增殖;100 ng/ml的IL-32γ作用RA-FLS 48小时后促进了细胞周期由G1期向S期,进而G2/M期转化,同时上调了cyclin D1、NF-κBp65和PCNA的蛋白表达水平。结论:IL-32γ可促进RA-FLS增殖和加速细胞周期转化。上调NF-κBp65和cyclin D1的表达可能是其作用机制之一。     

TRPC6介导的钙离子紊乱通过激活STAT3促进肾小管上皮细胞损伤后炎症反应及肾间质纤维化

目的:采用动物及细胞实验探讨肾小管上皮细胞(TECs)中瞬时受体电位阳离子通道C亚族成员6(TRPC6)介导的钙离子(Ca~(2+))紊乱对肾脏纤维化过程中炎症反应及细胞外基质合成的影响及机制。方法:(1)在体实验:建立小鼠单侧输尿管梗阻(UUO)模型,分为假手术组及UUO模型组,分别向两组小鼠腹腔注射TRPC6抑制剂BTP2或溶媒,在手术后14 d取肾组织留检。通过激光共聚焦检测TECs内Ca~(2+)浓度;通过HE染色及Masson染色检测肾组织病理改变;Western blot法检测TRPC6、纤维化相关蛋白I型胶原(COL1)、信号转导及转录激活因子3(STAT3)及p-STAT3的表达水平;real-time PCR法检测炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6及肿瘤坏死因子α(TNF-α)的mRNA水平。(2)体外实验:应用TGF-β刺激人肾脏近曲小管上皮细胞株HK-2,向HK-2细胞转染TRPC6质粒或TRPC6 siRNA,Western blot法检测TRPC6、COL1、STAT3及p-STAT3的表达水平;real-time PCR法检测炎症因子IL-1β、IL-6及TNF-α的mRNA水平。结果:(1)UUO模型中,TECs内Ca~(2+)浓度较假手术组显著升高;腹腔注射BTP2可减轻肾小管损伤及肾脏炎症细胞浸润,显著降低肾组织炎症因子IL-1β、IL-6及TNF-α的mRNA水平,降低肾组织COL1及p-STAT3蛋白水平(P0.05)。(2)体外实验中,TGF-β刺激下,HK-2细胞中炎症因子IL-1β、IL-6及TNF-α的mRNA水平和COL1表达增多,高表达TRPC6进一步增加炎症因子及COL1的表达,沉默TRPC6则降低炎症因子及COL1的表达(P0.05)。结论:在UUO模型及体外培养的TECs实验中,TRPC6介导的Ca~(2+)紊乱通过促进STAT3磷酸化,加重肾脏炎症反应及肾间质纤维化水平。     

siRNA沉默STAT3表达对IL-17诱导人角质形成细胞HaCaT增殖的影响

目的通过体外靶向沉默STAT3基因转录,探讨STAT3抑制对IL-17诱导人角质形成细胞HaCaT增殖能力的影响及其机制。方法采用IL-17A(80ng/ml)刺激体外培养的HaCaT细胞,采用小干扰RNA(Small interfering RNA,siRNA)干扰技术体外沉默人角质形成细胞HaCaT中STAT3基因转录,采用qRT-PCR和Western blot分别检测细胞内STAT3 mRNA,STAT3和pSTAT3蛋白的表达变化,证实基因沉默效果,CCK-8法检测HaCaT细胞增殖能力的变化,Western blot检测STAT3的靶分子survivin及cyclin D1表达的变化,初步探讨STAT3抑制对IL-17诱导Hacat增殖调控的分子机制。结果转染STAT3 siRNA质粒可显著抑制HaCaT细胞中STAT3 mRNA表达,STAT3和pSTAT3蛋白表达(P0.05)。STAT3抑制后,IL-17诱导HaCaT增殖能力显著降低(P0.05),STAT3的靶分子survivin及cyclin D1表达水平显著降低(P0.05)。结论 siRNA干扰靶向抑制STAT3表达可抑制IL-17诱导HaCaT增殖,可能与其抑制survivin及cyclin D1表达有关。     

瓜氨酸化纤维连接蛋白对类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞的凋亡及促炎症因子分泌的影响

针对瓜氨酸化蛋白的抗体被认为是诱发类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的元凶,本研究旨在探讨瓜氨酸化纤维连接蛋白(citrullinated fibronectin,cFn)在RA中的致病机理。通过免疫组化和双重免疫荧光技术分析cFn在RA患者的滑膜组织中的分布情况。用纤维连接蛋白(fibronectin,Fn)以及cFn处理从RA患者的滑膜组织中分离得到成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)后,再通过流式技术和TUNEL法检测细胞凋亡情况。实时荧光定量PCR检测survivin,Caspase 3,cyclin-B1的mRNA表达情况。用ELISA法测定细胞因子的分泌。在RA患者的滑膜组织中Fn形成胞外瓜氨酸化聚合物。Fn诱导了RA-FLS的凋亡,cFn抑制了RA-FLS的凋亡。在RA患者的FLS中,Fn显着增加了caspase-3的表达,抑制了survivin和cyclin-B1的表达;cFn显著增加了survivin的表达,促进了TNF-α和IL-1的分泌。在RA的发生和发展过程中,cFn可能通过抑制细胞凋亡并且增加炎症因子的分泌来发挥其致病性。     

p53/miR-502-5p/TRAF2通路对骨关节炎软骨细胞损伤的影响

目的:探究微小RNA-502-5p(miR-502-5p)对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的骨关节炎(OA)软骨细胞损伤的影响。方法:Western blot和RT-q PCR检测骨关节炎患者软骨组织和IL-1β诱导的软骨细胞中p53和miR-502-5p的表达;分离培养软骨,并分组处理细胞,分别用MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测炎性因子和细胞外基质(ECM)相关蛋白的表达,另外,萤光素酶报告实验检测miR-502-5p对p53及肿瘤坏死因子受体相关因子2(TRAF2)的调控作用。结果:与正常软骨组织相比,OA患者软骨组织中miR-502-5p的水平显著降低,p53和TRAF2水平则明显升高(P0.05)。IL-1β处理软骨细胞后,细胞活力下降、细胞凋亡率增加、IL-6、IL-8和TNF-α的蛋白表达水平显著上升;Ⅱ型胶原和蛋白聚糖的蛋白表达显著下调,基质金属蛋白酶(MMP)-3、MMP-9和MMP-13等的蛋白表达显著上调,miR-502-5p mimic转染反转了IL-1β对软骨细胞的这些作用。此外,p53与miR-502-5p之间存在负反馈调节,同时miR-502-5p能够靶向抑制TRAF2的水平。TRAF2沉默同样反转了IL-1β对软骨细胞增殖、凋亡、炎症反应以及ECM相关蛋白表达的影响。结论:调节p53/miR-502-5p/TRAF2通路能够减轻IL-1β诱导的骨关节软骨细胞损伤。     

下调XBP1基因表达对脑胶质瘤细胞活力和凋亡的影响

目的:探讨下调X盒结合蛋白1(XBP1)表达对脑胶质瘤细胞活力和凋亡的影响。方法:q PCR检测脑胶质瘤组织中XBP1的m RNA表达。将干扰XBP1表达的小干扰RNA(XBP1-si RNA组)转染人脑胶质瘤U251细胞,同时设置正常对照(control)组(细胞无特殊处理)和阴性对照(NC-si RNA)组(转染不具有任何干扰作用的si RNA),转染48 h后,用q PCR检测3组细胞中XBP1的m RNA表达;Western blot检测XBP1、增殖细胞核抗原(PCNA)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、细胞周期素D1(cyclin D1)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)和磷酸化Akt(p-Akt)蛋白水平;CCK-8法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞周期及凋亡。结果:XBP1在脑胶质瘤中的表达显著高于瘤旁组织(P0.05);转染XBP1-si RNA后,细胞中XBP1的m RNA及蛋白表达均显著降低(P0.05);NC-si RNA组细胞活力、细胞周期变化、细胞凋亡率及PCNA、Bcl-2、Bax、cyclin D1、PI3K和p-Akt的蛋白水平与control组比较差异无统计学显著性;XBP1-si RNA组细胞活力、S期细胞及PCNA、Bcl-2、cyclin D1、PI3K和p-Akt蛋白水平均显著低于control组,细胞凋亡率、G0/G1期细胞及Bax蛋白表达均显著高于control组(P0.05)。结论:下调脑胶质瘤细胞XBP1基因表达可降低肿瘤细胞的活力,阻滞细胞于G1期,并促进细胞的凋亡,其机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路有关。     

白藜芦醇对氧糖剥夺/再复氧损伤后小胶质细胞系N9活化的影响

目的 探讨白藜芦醇对氧糖剥夺/再复氧损伤（OGD/R）后小胶质细胞系N9活化的影响。 方法 体外培养的N9小胶质细胞行氧糖剥夺150 min,复氧培养24 h。实验分为正常组（Nor）、对照组(Ctrl)和白藜芦醇预处理组(Res)。细胞计数盒-8（CCK-8）法测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡,免疫荧光法检测Iba1蛋白表达,Western blotting检测钙离子接头蛋白1（Iba1）、CD11b、Caspase-3、Bax、白细胞介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子α（TNF-α）和IL-1β蛋白表达,ELISA法检测培养细胞上清液中IL-10、TNF-α和IL-1β蛋白含量。 结果 CCK-8 法检测结果显示,OGD/R损伤后对照组、1、5、20、40和80 μmol/L白藜芦醇组细胞活力均较正常组降低（P＜0.05,n=3）,但5、20和 40 μmol/L白藜芦醇组细胞活力较对照组显著增强（P＜0.05,n=3）,以20 μmol/L组最强。流式细胞术、免疫荧光、Western blotting和ELISA法显示,对照组和白藜芦醇组CD11b、Iba1、Caspase-3、Bax、IL-10、TNF-α、IL-1β蛋白表达或含量或凋亡细胞百分比均显著高于正常组（P＜0.05,n=3）,但白藜芦醇组除IL-10蛋白表达或含量较对照组增高外,其余均 低于对照组（P＜0.05,n=3）。结论 白藜芦醇预处理可抑制OGD/R后小胶质细胞的活化及凋亡,减轻炎症反应。     

硫化氢通过调控NF-κB通路抑制阿霉素引起的心肌细胞炎症与细胞毒性

 目的：探讨硫化氢（H2S）是否通过调控核因子κB(NF-κB)通路抑制阿霉素（DOX）引起的心肌细胞炎症反应与细胞毒性。方法：应用Western blotting法测定NF-κB p65表达;酶联免疫吸附试验（ELISA）测定白细胞介素（IL）-1β、IL-6及肿瘤坏死因子α(TNF-α)的分泌水平;细胞计数盒（CCK-8）检测细胞存活率,Hoechst 33258核染色法检测凋亡细胞的形态学及数量的变化。结果：应用5 μmol/L DOX处理H9c2心肌细胞明显上调磷酸化NF-κB p65（p-p65）表达水平,并引起炎症反应和细胞毒性,表现为IL-1β、IL-6、TNF-α的分泌水平升高、凋亡细胞数量增多及细胞存活率降低。400 μmol/L NaHS（H2S供体）预处理30 min能显著抑制DOX对心肌细胞p-p65表达的上调作用,并减轻DOX引起的炎症反应和细胞损伤,使IL-1β、IL-6、TNF-α的分泌水平下降、凋亡细胞数量降低及细胞存活率升高。与NaHS的作用相似,NF-κB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（PDTC,100 μmol/L）预处理也能阻断DOX引起的心肌炎症反应和细胞毒性。IL-1受体拮抗剂（IL-1Ra, 20 μg/L）与DOX共处理能拮抗DOX对心肌细胞NF-κB p65的激活作用及细胞毒性作用。结论：在DOX引起的心肌细胞炎症中,NF-κB通路与IL-1β之间存在正的相互作用;H2S可通过抑制NF-κB通路保护心肌细胞对抗DOX引起的炎症反应与细胞毒性。     

橄榄苦苷对IL-1β诱导的大鼠软骨细胞损伤的作用及机制研究

目的:研究橄榄苦苷对白细胞介素1β(IL-1β)诱导的SD大鼠关节软骨细胞的影响。方法:采用酶两步顺序消化法消化SD大鼠关节软骨分离细胞,体外培养软骨细胞,光学显微镜观察细胞形态,阿尔新蓝染色及Ⅱ型胶原免疫组化法对软骨细胞进行鉴定。橄榄苦苷对软骨细胞的细胞毒性采用CCK-8实验进行评估。取第3代软骨细胞,分别用浓度为10、50或100μmol/L的橄榄苦苷预先处理,随后用IL-1β刺激细胞24 h,所生成的NO和前列腺素E2(PGE2)的量分别用格里斯重氮化反应和酶联反应吸附实验进行评估。基质金属蛋白酶(MMP)-1和MMP-13 mRNA的表达利用实时荧光定量PCR进行定量检测。采用免疫印迹实验分析诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、环氧化酶2(COX-2)和活化NF-κB的蛋白表达。结果:软骨细胞在不同浓度橄榄苦苷培养24 h后,其生存能力与对照组相比无明显差异。橄榄苦苷可以显著降低IL-1β刺激下软骨细胞MMP-1和MMP-13 mRNA的表达及NO、PGE2的生成。橄榄苦苷通过减少IκB蛋白的降解从而抑制IL-1β介导的NF-κB通路的活化。结论:橄榄苦苷可通过NF-κB信号转导通路调控炎症的发生发展,进一步明确了橄榄苦苷对关节炎防治作用的分子机制,为骨关节炎的免疫治疗提供了重要的基础理论依据。     

下调TPD52基因表达通过Wnt信号通路对子宫肌瘤细胞活力、凋亡及TNF-α和IL-6表达的影响

目的:探讨下调肿瘤蛋白D52(TPD52)基因表达通过Wnt信号通路对子宫肌瘤细胞活力、凋亡及肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)表达的影响。方法:将针对TPD52的特异性si RNA(si-TPD52)及其阴性对照转染原代培养的子宫肌瘤细胞,并加入Dickkopf-1(DKK1)作为Wnt信号通路抑制剂,转染48 h后,用Western blot检测TPD52及Wnt信号通路关键分子β-catenin和相关靶蛋白cyclin D1和survivin的蛋白表达; MTT及流式细胞术分别检测细胞活力和凋亡率的变化; RT-qPCR检测TNF-α和IL-6的m RNA表达。结果:TPD52在转染si-TPD52的子宫肌瘤细胞的表达显著低于空白对照组和阴性对照组(P 0. 05);与阴性对照组比较,si-TPD52组细胞活力明显受到抑制,凋亡率增加,TNF-α的m RNA表达降低,IL-6的m RNA表达升高,β-catenin、cyclin D1和survivin的蛋白表达降低(P 0. 05);加入DKK1后si-TPD52对细胞活力和凋亡的影响更明显。结论:下调TPD52基因表达可通过Wnt信号通路抑制子宫肌瘤细胞生长和诱导凋亡,同时下调TNF-α和上调IL-6表达。     

CFTR对TF1细胞活力和凋亡的影响及相关机制

目的:探讨囊性纤维化跨膜传导调节因子(CFTR)在急性髓系白血病中的表达情况并探讨其对人红白血病细胞株TF1生物学功能的影响及潜在作用机制。方法:Real-time PCR技术检测急性髓系白血病患儿骨髓单个核细胞中CFTR的表达水平。常规培养的TF1细胞中加入CFTR特异性抑制剂CFTRinh-172,然后分别采用CCK-8法和流式细胞术检测细胞活力、细胞周期及细胞凋亡情况;Western blot检测Wnt信号通路相关蛋白的表达水平。结果:CFTR在急性髓系白血病患者及白血病细胞中均呈高表达。TF1细胞中加入CFTR特异性抑制剂后,细胞的活力下降,G_0/G_1期细胞比例显著升高而S期细胞比例降低,细胞凋亡率显著增加,细胞中β-catenin、c-Myc及cyclin D1的蛋白表达水平显著降低(P0.05)。结论:CFTR在急性髓系白血病中表达显著升高;抑制CFTR可通过经典的Wnt信号通路抑制白血病细胞株TF1的生长,并促进其凋亡。     

动脉粥样硬化中CARHSP1基因的表达对缺氧诱导的血管内皮细胞活力凋亡及免疫因子的影响

目的:探讨动脉粥样硬化斑块中钙调节热稳定蛋白1(CARHSP1)基因的表达对缺氧诱导的血管内皮细胞活力、凋亡及白细胞介素6(IL-6)和C-反应蛋白(CRP)表达的影响。方法:用Western blot检测动脉粥样硬化斑块中CARHSP1的蛋白表达;缺氧处理人脐静脉内皮细胞(HUVECs),将细胞分为正常培养组、缺氧组、缺氧+CARHSP1-siRNA组和缺氧+pc DNA3. 1-CARHSP1组,用CCK-8法及流式细胞术分别检测各组细胞活力及凋亡率; RT-PCR检测IL-6和CRP的表达; Western blot检测凋亡蛋白caspase-3、cleaved caspase-3、Bcl-2和Bax的蛋白水平。结果:CARHSP1在动脉粥样硬化斑块中的蛋白表达显著高于对照组(P 0. 05);缺氧可明显增加CARHSP1的表达。缺氧组HUVECs活力及Bcl-2表达显著低于正常培养组,细胞凋亡率及IL-6、CRP、cleaved caspase-3和Bax的蛋白水平显著高于正常培养组(P 0. 05);与缺氧组比较,缺氧+CARHSP1-siRNA组的活力及Bcl-2表达显著升高,细胞凋亡率及IL-6、CRP、cleaved caspase-3和Bax的蛋白水平显著降低(P 0. 05),pc DNA3. 1-CARHSP1组的细胞活力及Bcl-2表达显著降低,细胞凋亡率及IL-6、CRP、cleaved caspase-3和Bax表达显著升高(P 0. 05)。结论:CARHSP1在动脉粥样硬化斑块中表达升高,抑制CARHSP1表达可提高HUVECs的活力,降低细胞凋亡,下调免疫因子IL-6和CRP的表达,而过表达CARHSP1则反之。     

RICTOR对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞活力的影响

 目的：通过siRNA介导的RNA干扰技术沉默类风湿关节炎（RA）成纤维样滑膜细胞（FLS）mTORC2的特异组成蛋白RICTOR的表达,观察其对细胞活力的影响。方法：组织块法培养RA-FLS。应用阳离子脂质体转染的方法,把化学合成的特异性RICTOR siRNA转染RA-FLS,并以转染非特异性siRNA作为阴性对照。利用荧光定量PCR法分析转染24 h后细胞RICTOR mRNA表达水平的变化;Western blotting法分析转染48和72 h后细胞RICTOR蛋白表达水平的变化;以噻唑蓝（MTT）比色法检测转染成纤维样滑膜细胞不同时间（24、48和72 h）RICTOR siRNA对细胞活力的影响。结果：荧光定量PCR结果显示特异性RICTOR siRNA转染组与对照组相比,细胞中RICTOR的mRNA表达水平显著下调,24 h干扰效率达78.3%±63.71%（P<0.01）。Western blotting结果显示与对照组相比,RICTOR siRNA转染组48 h和72 h后RICTOR蛋白表达水平明显降低,沉默效率分别为92.48%±6.14%和98.57%±1.40%（均P<0.01）。MTT结果显示,早期（24和48 h）RICTOR siRNA转染组与阴性对照组细胞存活率比较无显著差异;72 h后,RICTOR siRNA转染组与阴性对照相比,细胞活力明显降低,抑制率为90.14%±1.90%（P<0.01）。结论：转染特异性RICTOR siRNA可降低RA-FLS的活力,提示mTORC2可能与RA-FLS的生长有关。     

HMGA2在胃癌细胞上皮-间充质转化中的作用

目的:探讨HMGA2在胃癌细胞上皮-间充质转化(EMT)中的作用及机制。方法:采用Western blot和RT-qPCR实验检测不同分化程度的人胃癌细胞株MKN45、MKN28和SGC7901以及人永生化胃黏膜上皮细胞株GES-1中HMGA2的表达水平;采用脂质体转染法将pcDNA3.0-HMGA2质粒转染至MKN28细胞中,将si-HMGA2干扰片段转染至MKN45细胞中,并采用Western blot和RT-qPCR实验检测转染效率;CCK-8实验检测HMGA2上调对MKN28细胞活力的影响以及HMGA2下调对MKN45细胞活力的影响;采用细胞迁移和侵袭实验检测HMGA2上调对MKN28细胞迁移和侵袭能力的影响;采用Western blot和RT-qPCR实验检测HMGA2过表达对MKN28细胞EMT相关标志蛋白上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(vimentin)表达的影响以及敲减HMGA2表达对MKN45细胞E-cadherin、N-cadherin和vimentin表达的影响;采用RT-qPCR实验检测过表达HMGA2的MKN28细胞Wnt/β-catenin信号通路相关分子表达的变化。结果:HMGA2在不同分化程度的胃癌细胞中的表达水平是不同的(P0.05)。上调MKN28细胞HMGA2的表达水平能够抑制细胞活力(P0.05);而在MKN45细胞中下调HMGA2的表达水平能够增强细胞活力(P0.05)。上调MKN28细胞HMGA2的表达水平能够促进细胞的迁移和侵袭能力(P0.05),且E-cadherin表达降低,N-cadherin和vimentin表达升高(P0.05);敲减HMGA2在MKN45细胞的表达水平使E-cadherin表达升高,而N-cadherin和vimentin表达降低(P0.05)。上调MKN28细胞中HMGA2的表达水平,细胞内Wnt/β-catenin通路的β-catenin及其下游分子c-Myc和cyclin D1的mRNA表达水平显著增加(P0.05)。结论:HMGA2与胃癌细胞迁移和侵袭能力密切相关,并且能够通过激活细胞内Wnt/β-catenin通路,促进胃癌细胞EMT。