DEK表达下调通过抑制胃癌SGC-7901细胞中NF-κB信号途径诱导细胞凋亡

目的:研究DEK表达下调对胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响,并分析其与NF-κB信号途径及凋亡相关蛋白表达的关系。方法:将DEK siRNA和对照siRNA转染胃癌SGC-7901细胞,并将SGC-7901细胞分为未处理组、对照siRNA组及DEK siRNA组。采用实时荧光定量PCR和Western blot检测3组胃癌SGC-7901细胞中DEK mRNA和蛋白的表达;流式细胞术检测3组SGC-7901细胞凋亡的变化;Caspase-Glo-3/9试剂盒检测3组SGC-7901细胞中caspase-3和caspase-9的活性;Western blot技术检测3组SGC-7901细胞中NF-κB信号途径关键调控蛋白p65及凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达。结果:与未处理组和对照siRNA组相比,DEK siRNA组SGC-7901细胞中DEK的mRNA和蛋白表达水平显著下调(P0.05)。DEK siRNA组SGC-7901细胞的早期凋亡率和总凋亡率均显著高于未处理组和对照siRNA组(P0.05)。最为显著的是,DEK siRNA转染细胞后,p65和Bcl-2蛋白表达下调,Bax蛋白表达上调,并伴随caspase-3和caspase-9活性上升。结论:DEK表达下调介导的SGC-7901细胞凋亡可能与NF-κB信号途径密切相关。     

MicroRNA-146a通过靶向TAK1诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡

目的:观察微小RNA-146a(miR-146a)对胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响及其可能的分子机制。方法:将miR-146a mimic(上调miR-146a表达)和miR-146a inhibitor(下调miR-146a表达)分别转染至人胃癌SGC-7901细胞中,同时设置miRNA无义序列转染为阴性对照组(NC组)。RT-q PCR检测转染后胃癌细胞miR-146a的表达水平;CCK-8法和流式细胞术检测miR-146a对SGC-7901胃癌细胞生长活力和凋亡的影响;RT-q PCR和Western blot法检测miR-146a上调或下调对转化生长因子β激活激酶1(TAK1)/核因子κB(NF-κB)通路的影响。结果:在SGC-7901细胞中,上调miR-146a表达显著促进细胞凋亡,而下调miR-146a表达则显著抑制细胞凋亡。与NC组相比,miR-146a mimics转染SGC-7901细胞后,TAK1的mRNA和蛋白表达均明显下降,差异均有统计学显著性(P0.05),而miR-146a inhibitors转染组TAK1的mRNA和蛋白质表达则显著增加(P0.05),提示miR-146a负调控TAK1表达。敲低TAK1促进SGC-7901细胞凋亡(P0.01),而TAK1过表达TAKI则抑制SGC-7901细胞凋亡(P0.01)。此外,过表达miR-146a和敲低TAK1均能显著上调NF-κB抑制蛋白α(IκBα)和下调B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)表达。结论:本研究结果表明miR-146a通过靶向TAK1抑制NF-κB途径,从而诱导胃癌细胞凋亡。     

光动力疗法对子宫内膜癌Ishikawa细胞系细胞周期和凋亡的影响

目的 探讨光动力疗法(PDT)对子宫内膜癌Ishikawa细胞系细胞周期及凋亡的影响.方法 以四甲基吡啶卟啉(TMPyP)为光敏剂的PDT处理Ishikawa细胞,显微镜观察细胞形态;细胞计数试剂盒CCK-8检测细胞的存活率;流式细胞术检测细胞周期;使用Annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒及流式细胞术检测细胞的凋亡;蛋白免疫印迹法检测Bcl-2、NF-κB P65及磷酸化NF-κB P65的表达.结果 PDT可以改变Ishikawa细胞的形态,降低细胞存活率(P＜0.05),并与光敏剂TMPyP的浓度和激光能量密度有关;PDT引起细胞S期阻滞(P＜0.05),诱导Ishikawa细胞发生凋亡(P＜0.05),降低Bcl-2蛋白的表达和NF-κB P65的磷酸化水平(P＜0.05).结论 PDT可能通过下调Bcl-2、NF-κB的活性引起Ishikawa细胞S期阻滞和细胞凋亡.     

转录因子CDX2过表达对人胃癌SGC-7901细胞增殖和细胞周期的影响*

 目的： 探索CDX2过表达对人胃癌SGC-7901细胞增殖、生长和细胞周期的影响及其分子机制。方法: 采用携带CDX2基因的重组慢病毒颗粒（LV-CDX2-GFP）感染SGC-7901细胞,作为实验组（LV-CDX2-GFP组）;以对照慢病毒颗粒（LV-GFP）感染SGC-7901细胞,作为阴性对照组（LV-GFP组）;空白对照组常规培养,不做任何处理。分别采用CCK-8法检测细胞的增殖活力,流式细胞术检测各组细胞周期的分布,半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blotting技术检测细胞中CDX2、Bax、Bcl-2、cyclin D1和survivin mRNA和蛋白的表达。结果: 与LV-GFP组和空白对照组比较,LV-CDX2-GFP组细胞增殖活力明显降低(P<0.05),G0/G1期所占比例上升(P<0.05),Bcl-2、cyclin D1和survivin mRNA和蛋白的表达降低（P<0.05）,Bax mRNA和蛋白的表达上调（P<0.05）,而LV-GFP组与空白对照组比较,差异无统计学意义（P>0.05）。结论: 慢病毒介导的CDX2过表达抑制胃癌细胞增殖和生长,使细胞周期停滞在 G0/G1期,其机制可能与CDX2过表达使胃癌细胞Bcl-2、cyclin D1、survivin表达下调和Bax表达上调有关。     

siRNA干扰14-3-3ζ基因可体外促进人胃癌SGC-7901细胞凋亡

目的探讨siRNA干扰14-3-3ζ基因对人胃腺癌细胞系SGC-7901增殖凋亡的影响及其作用机制。方法利用siRNA干扰技术降低14-3-3ζ基因的正常表达的SGC-7901细胞为实验组,siRNA-control的对照组和未加处理的空白组。用实时荧光定量PCR和Western blot检测14-3-3ζ基因mRNA的表达水平和蛋白表达水平;CCK8实验检测各组SGC-7901细胞的增殖;流式细胞术检测细胞周期和凋亡;Western blot检测周期和凋亡相关蛋白P53、cyclin D1、PUMA、Bax和Bcl-2。结果 siRNA干扰组14-3-3ζ基因的mRNA和蛋白表达水平低于空白组和对照组(P0.05);CCK8检测细胞增殖较对照组显著降低(P0.05);siRNA干扰组细胞周期G0/G1的比率较对照组高,而G2/M和S期则显著降低(P0.05);siRNA干扰组的细胞凋亡率也显著升高(P0.05);相关通路蛋白在siRNA干扰组中cyclin D1和Bcl-2表达降低,P53、PUMA、Bax蛋白表达增高(P0.05)。结论 siRNA干扰14-3-3ζ可以通过P53通路,下调cyclin D1抑制SGC-7901细胞增殖并阻滞周期,上调PUMA、Bax蛋白和下调Bcl-2蛋白促进细胞凋亡。     

虫草素增强顺铂诱导的食管癌细胞系Eca109凋亡

目的研究虫草素与顺铂联合用药对食管癌细胞Eca109凋亡的影响及其作用机制。方法将食管癌细胞Eca109分为对照组、不同浓度虫草素处理组、不同浓度顺铂处理组和虫草素(70μg/m L)与顺铂(0.8μg/m L)联合处理组。MTS法检测Eca109细胞增殖;Hoechst 33258染色法及流式细胞术检测Eca109细胞凋亡;Western blot法检测细胞核内NF-κB P65及凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达水平;ELISA法检测细胞核内NF-κB P65与DNA的结合活性。结果虫草素与顺铂联合应用使顺铂对Eca109细胞的抑制率由29.30%增加至70.41%(P0.05),增强了顺铂对Eca109的敏感性;与顺铂单独用药相比,联合用药能够显著增加顺铂诱导的细胞凋亡(P0.05);与对照组相比顺铂能够增加细胞核内NF-κB P65的活性,而虫草素却能抑制NF-κB P65的活性,联合用药后NF-κB P65的活性下调;与虫草素和顺铂单独用药相比,联合用药组能够使抗凋亡蛋白Bcl-2的表达显著降低(P0.05),而促凋亡蛋白Bax表达则显著增高(P0.05)。结论虫草素可能通过抑制NF-κB途径,调节下游信号分子Bcl-2和Bax的表达,增强顺铂对Eca109的凋亡诱导效应。     

Akt抑制剂perifosine抑制胃癌细胞增殖并诱导凋亡的实验研究

目的: 探讨新的Akt抑制剂perifosine对胃癌细胞增殖与凋亡的影响。方法: 采用MTT法检测perifosine对胃癌细胞SGC-7901细胞增殖的影响;流式细胞术分析细胞周期变化;AnnexinⅤ-FITC试剂盒检测细胞凋亡;免疫印迹法检测蛋白表达水平。结果: Perifosine能够抑制SGC-7901细胞的增殖,且抑制作用呈时间和剂量依赖性。胃癌细胞经perifosine处理后,细胞阻滞于G₂期,p21表达水平增加,而cyclin B1的表达受到抑制;凋亡诱导现象随着perifosine剂量的增加而增强。免疫印迹结果显示perifosine活化SGC-7901细胞内caspase-3﹑caspase-9及其底物多聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP),促进凋亡诱导蛋白Bax的表达,并抑制Bcl-2的表达。结论: Perifosine对人胃癌细胞SGC-7901的生长具有显著的抑制作用,其凋亡诱导活性与调节caspase家族和Bcl-2家族蛋白的表达密切相关。     

NF-κB、Bcl-2和Bax蛋白在大鼠脑缺血预处理脑组织中的表达及意义

目的探讨核转录因子-κB(NF-κB)、凋亡调控蛋白Bcl-2、Bax在大鼠局灶性脑缺血预处理脑组织中的表达及意义。方法线栓法阻断SD大鼠大脑中动脉建立脑缺血预处理及脑缺血模型。TTC染色法测量脑梗死体积,免疫组织化学方法检测前脑皮质、基底核NF-κB、Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果与缺血组相比,预处理缺血组脑梗死体积明显减小(p<0.01),NF-κB蛋白和Bax蛋白表达的细胞数减少(p<0.001),Bcl-2蛋白表达细胞数明显增加(p<0.001)。结论缺血预处理可有效抑制NF-κB的激活并减少神经元的凋亡,Bcl-2蛋白表达增加和Bax蛋白表达下降可能是缺血预处理产生耐受的原因之一。     

钌多吡啶配合物诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡

目的:观察钌多吡啶配合物Ru1对胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响及其作用机制。方法:MTT检测细胞活性,并计算细胞活性抑制率;用结晶紫染色方法检测Ru1对SGC-7901细胞数量的抑制作用;通过AnnexinⅤ-FITC及PI染色法检测Ru1对SGC-7901细胞凋亡的影响;采用Western blot技术检测凋亡相关蛋白表达的情况。结果:MTT结果及结晶紫染色结果表明,Ru1能明显降低SGC-7901细胞活性及细胞数量;凋亡实验结果显示,Ru1作用于SGC-7901细胞24 h后,可导致SGC-7901细胞出现明显凋亡;Western blot结果显示Ru1可上调SGC-7901细胞Bax蛋白的表达,同时下调Bcl-2蛋白的表达(P0.05)。结论:Ru1可以通过影响Bax蛋白和Bcl-2蛋白的表达从而诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡。     

重组质粒pEGFP-ING4的构建及其对MCF-7细胞凋亡的影响

目的检测ING4(inhibitor of growth 4)对MCF-7细胞凋亡的影响。方法从人胎盘总RNA中克隆人ING4基因,构建其真核表达质粒pEGFP-ING4转染MCF-7细胞表达ING4后,流式细胞仪检测细胞凋亡率;荧光定量RT-PCR检测ING4、NF-κB、caspase-3、IL-8、Bcl-2及Bax基因的表达。结果构建的重组质粒转染可见目的蛋白融合表达,与对照相比MCF-7细胞凋亡率增高;ING4、caspase-3及IL-8基因的表达上调,NF-κB与Bcl-2/Bax基因的表达下调。结论成功从人胎盘组织克隆了ING4基因并构建其真核表达质粒在人MCF-7细胞中表达;ING4在人MCF-7细胞中能引起凋亡相关基因的改变并促进MCF-7细胞的凋亡,这为进一步研究ING4的抗肿瘤机制奠定了基础。     

鳕鱼皮寡肽对人胃癌细胞SGC-7901增殖凋亡的影响及机制

目的 探讨鳕鱼皮寡肽（CSO）对人胃癌细胞（SGC-7901）的增殖影响。 方法 用不同浓度CSO处理体外培养的SGC-7901细胞后,荧光显微镜下观察细胞4’6-二脒 基-2-苯基吲哚（DAPI）染色后细胞形态变化,应用CCK-8 实验检测细胞活力,免疫印迹法和流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期。 结果 CSO对SGC-7901细胞增殖有明显的抑制作用,且并呈剂量、时间效应关系（P<0.05）。作用于SGC-7901胃癌细胞24 h、48 h和72 h的IC50分别是156.90 g/L、102.10 g/L、73.13 g/L。DAPI染色后发现,SGC-7901细胞随着CSO浓度增加可见大量的细胞核碎裂,荧光强烈。24h细胞凋亡率检测显示,细胞随着浓度的增加凋亡率呈上升趋势,表明CSO对SGC-7901呈浓度效应关系。细胞周期观察发现,SGC-7901细胞G₁期细胞数随着CSO浓度的增加而递增,而S/G₂期细胞随着浓度的细胞递降。Caspase-3、Caspase-9随着CSO浓度的逐渐增高表达上调,Bcl-2表达下调。 结论 鳕鱼皮寡肽能抑制人胃癌细胞（SGC-7901）增殖,诱导凋亡,抑癌机制可能与Caspase-3、Caspase-9上调和Bcl-2下调相关。     

阿帕替尼通过阻断VEGF通路增强胃癌放疗疗效

目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF)受体2酪氨酸激酶抑制剂阿帕替尼对胃癌细胞株SGC-7901放疗疗效的影响及其可能机制。方法:试验设对照组、阿帕替尼组、单纯放疗组与联合组。CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术分析细胞凋亡比例与细胞周期,免疫荧光染色观察细胞核内γ-H_2AX的表达,Western blot法检测细胞增殖和凋亡相关蛋白。结果:与阿帕替尼组或单纯放疗组相比,阿帕替尼联合X射线显著降低SGC-7901细胞的生长活力(P0.01),增殖相关蛋白p-PLCγ1和p-ERK1/2的水平下降;细胞凋亡比例明显升高(P0.01),凋亡相关蛋白PARP、cleaved caspase-9和cleaved caspase-3蛋白水平上调,Bcl-2表达下降;SGC-7901细胞核内γ-H_2AX焦点淬灭延迟,表明阿帕替尼干扰放射线诱导的DNA双链断裂的修复;SGC-7901 G_2期细胞比例显著增高(P0.01)。结论:阿帕替尼通过阻断VEGF通路增加胃癌细胞对X射线照射的敏感性。     

亚硒酸钠通过线粒体途径诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡的机制

目的通过检测亚硒酸钠诱导人胃癌SGC-7901细胞系凋亡过程中Bax/Bcl-2、线粒体膜电位和细胞色素C(Cyt C)表达的变化,探讨亚硒酸钠诱导胃癌细胞凋亡的作用机制。方法将人胃癌细胞系SGC-7901细胞加入不同浓度亚硒酸钠(2.5、5.0、10.0mol/L)的培养液中培养24h、48h,免疫细胞化学法和免疫印迹法(Western blotting)检测Bax/Bcl-2蛋白的表达;以罗丹明123(rhodamine123)为细胞染色剂,采用流式细胞技术检测细胞的线粒体膜电位的变化;Western blotting检测细胞质Cyt C和线粒体Cyt C蛋白含量的变化。结果免疫细胞化学法和Western blotting检测结果显示,亚硒酸钠能够能够提高Bax蛋白的表达(P0.05)、降低Bcl-2蛋白的表达(P0.05),且呈剂量依懒性;流式细胞术结果显示,亚硒酸钠能够降低细胞线粒体膜电位;提示:亚硒酸钠可以通过改变Bax、Bcl-2蛋白的含量,降低线粒体的膜电位来诱导细胞凋亡。Western blotting检测结果显示,亚硒酸钠能够提高细胞质Cyt C蛋白的表达(P0.05)并降低线粒体内Cyt C蛋白的表达(P0.05),促使线粒体内的Cyt C向细胞质内释放。结论亚硒酸钠通过上调Bax并下调Bcl-2蛋白表达,降低线粒体膜电位,促进Cyt C从线粒体释放到细胞质,通过线粒体途径诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡。     

Integrin β1对胃癌细胞SGC7901多药耐药性的影响

目的:探究整合素β1(integrinβ1)对胃癌多药耐药性的影响及可能的作用机制。方法:Western blot法及q PCR实验检测胃癌细胞株SGC-7901及胃癌耐药细胞株SGC-7901/DDP中integrinβ1的表达情况。采用integrinβ1反义寡核苷酸转染,敲减胃癌耐药细胞株SGC-7901/DDP中integrinβ1的表达,CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法检测integrinβ1、Bcl-2/Bax、cleaved caspase-3/caspase-3、细胞色素C(CytC)和p-AKT/AKT的蛋白水平。结果:耐药细胞株SGC7901/DDP中integrinβ1的mRNA及蛋白表达水平均明显高于亲本细胞株;并且在亲本细胞株SGC7901中加入顺铂、长春新碱及5-氟尿嘧啶等化疗药物刺激后,integrinβ1的蛋白表达水平明显升高。敲减integrinβ1的表达可诱导胃癌耐药细胞SGC7901/DDP的凋亡,增加细胞对化疗药物的敏感性;此外下调Bcl-2/Bax、p-AKT~(Ser473)和p-AKT~(Thr308)的蛋白水平,同时促进线粒体Cyt-C的释放,上调cleaved caspase-3的蛋白水平。结论:敲减胃癌顺铂耐药细胞SGC7901/DDP的integrinβ1表达可恢复细胞对化疗药物的敏感性,促进细胞经线粒体路径的凋亡,其机制可能与抑制AKT的磷酸化,阻断该信号通路有关。     

大叶茜草素抑制大鼠CFSC-2G细胞活化和胶原合成

目的:观察大叶茜草素(mollugin)对大鼠肝星状细胞系CFSC-2G活化和胶原合成的影响并探讨其分子机制。方法:小剂量(10μmol/L)过氧化氢(H_2O_2)诱导CFSC-2G细胞30 min后,再加入不同浓度(0、20、40、60和120μmol/L)的mollugin处理。MTT法检测细胞活力,real-time PCR和Western blot法分别检测核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶-1(HO-1)、核因子κB(NF-κB)p65、Bcl-2、Bcl-x L、Bax以及肝星状细胞活化标志物α-平滑肌肌动蛋白和Ⅰ型胶原蛋白的mRNA和蛋白表达,并用Western blot法检测p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)的磷酸化水平。结果:低剂量H_2O_2可以诱导CFSC-2G细胞活化,mollugin明显促进p38 MAPK磷酸化,上调Nrf2和HO-1的mRNA和蛋白表达,下调NF-κB p65、Bcl-2和Bcl-x L的mRNA和蛋白表达,抑制H_2O_2诱导活化的CFSC-2G细胞活力和胶原合成(P0.05)。结论:Mollugin可能通过上调Nrf2和HO-1并下调NF-κB p65和Bcl-2表达,抑制CFSC-2G细胞活化和胶原合成。     

MicroRNA-1284在胃癌中的表达及其作用机制研究

目的:探讨microRNA-1284(miR-1284)与胃癌的相关性及分子机制。方法:Real-time PCR检测63例胃癌患者的胃癌组织和匹配周围正常胃组织中miR-1284的表达水平及分析其与临床病理特征之间的关系。通过慢病毒载体的构建及包装生成上调miR-1284慢病毒载体并转染胃癌SGC-7901细胞,上调miR-1284后采用realtime PCR验证细胞miR-1284表达水平,CCK-8法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,划痕实验检测细胞迁移能力,生物信息学软件预测miR-1284潜在的靶基因,real-time PCR测定靶基因JAG1表达水平,Western blotting检测JAG1、Notch1和NF-κB的表达水平。结果:66.67%胃癌患者胃癌组织miR-1284表达明显低于正常胃组织(P0.05),miR-1284的表达在不同年龄、性别、TNM分期和淋巴结转移情况患者间的差异无统计学意义(P0.05),但在不同组织学分级患者间的差异有统计学意义(P0.05)。与LV-NC-GFP组和control组比较,LV-miR-1284组的miR-1284表达水平和细胞凋亡显著升高,细胞周期阻滞于G0/G1期,细胞活性和细胞迁移能力减弱,JAG1、Notch1和NF-κB的表达水平降低,均有显著差异(P0.05)。结论:miR-1284可能通过调控其靶基因JAG1而发挥抑制胃癌发生发展的作用。     

下调XBP1基因表达对脑胶质瘤细胞活力和凋亡的影响

目的:探讨下调X盒结合蛋白1(XBP1)表达对脑胶质瘤细胞活力和凋亡的影响。方法:q PCR检测脑胶质瘤组织中XBP1的m RNA表达。将干扰XBP1表达的小干扰RNA(XBP1-si RNA组)转染人脑胶质瘤U251细胞,同时设置正常对照(control)组(细胞无特殊处理)和阴性对照(NC-si RNA)组(转染不具有任何干扰作用的si RNA),转染48 h后,用q PCR检测3组细胞中XBP1的m RNA表达;Western blot检测XBP1、增殖细胞核抗原(PCNA)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、细胞周期素D1(cyclin D1)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)和磷酸化Akt(p-Akt)蛋白水平;CCK-8法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞周期及凋亡。结果:XBP1在脑胶质瘤中的表达显著高于瘤旁组织(P0.05);转染XBP1-si RNA后,细胞中XBP1的m RNA及蛋白表达均显著降低(P0.05);NC-si RNA组细胞活力、细胞周期变化、细胞凋亡率及PCNA、Bcl-2、Bax、cyclin D1、PI3K和p-Akt的蛋白水平与control组比较差异无统计学显著性;XBP1-si RNA组细胞活力、S期细胞及PCNA、Bcl-2、cyclin D1、PI3K和p-Akt蛋白水平均显著低于control组,细胞凋亡率、G0/G1期细胞及Bax蛋白表达均显著高于control组(P0.05)。结论:下调脑胶质瘤细胞XBP1基因表达可降低肿瘤细胞的活力,阻滞细胞于G1期,并促进细胞的凋亡,其机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路有关。