相同遗传背景不同辐射抗拒鼻咽癌细胞miRNA差异表达的研究

目的:在验证相同遗传背景鼻咽癌(NPC)细胞CNE-2R和CNE-2不同辐射抗拒性的基础上,探索微小RNA(miRNA)在CNE-2R和CNE-2中的表达差异与肿瘤辐射抗拒的关系。方法:通过观察X线照射对CNE-2R和CNE-2细胞克隆形成数目的影响,利用SigmaPlot软件进行分析及线性二次模型拟合存活曲线,比较CNE-2R和CNE-2细胞剂量存活曲线及其生物学参数;采用μParafloTM微流体芯片检测,用激光扫描仪(GenePix 4000B, Molecular Device)采集杂交图像,经LOWESS滤器规范信号后分析数据差异,根据Targetscan311数据库资料(http://www.targetscan.org),预测CNE-2R和CNE-2细胞miRNA差异表达与NPC不同辐射抗拒的关系。结果:发现在CNE-2R和CNE-2细胞中存在miRNA的差异表达,即与CNE-2细胞比,在检测到的719个miRNA中,CNE-2R细胞中有37个上调,29个下调,其中检测量的绝对值≥2 000 且两者相差≥2倍的miRNA共12个：hsa-miR-200b、hsa-miR-224、hsa-miR-26b、hsa-miR-125a-5p、hsa-miR-205、hsa-let-7e、hsa-let-7g、hsa-miR-19b、hsa-miR-24、hsa-miR-103、hsa-miR-106b和hsa-miR-93。分析结果表明显著差异表达的miRNA与辐射抗拒密切相关。结论:相同遗传背景不同辐射抗拒NPC细胞株CNE-2R和CNE-2细胞的miRNA表达存在差异;差异表达的miRNA与辐射抗拒相关。     

阿司匹林对同源不同辐射抗拒能力鼻咽癌细胞的凋亡诱导作用

目的:探讨阿司匹林诱导同源不同辐射抗拒能力鼻咽癌细胞株CNE2R/CNE2凋亡的作用及其机制。方法:采用MTT法、流式细胞术和Western blot法检测并比较阿司匹林对CNE2R和CNE2细胞活力、细胞凋亡及凋亡相关蛋白procaspase-3、cleaved caspase-3、procaspase-9、procaspase-12、PARP、cleaved PARP、Bcl-2和Bax,以及PI3K p110α、Akt和p27蛋白水平的影响。结果:阿司匹林抑制同源不同辐射抗拒能力细胞CNE2R/CNE2的活力(阿司匹林对CNE2细胞作用24、48和72 h的IC50分别为6.18、3.92和3.06 mmol/L,对CNE2R细胞作用24、48和72 h的IC50分别为7.05、3.90和2.20 mmol/L,两者差异无统计学显著性)。阿司匹林作用48 h后,CNE2R细胞凋亡率升高,明显高于CNE2细胞(P0.05)。阿司匹林作用48 h后,CNE2和CNE2R细胞中procaspase-3、procaspase-9、procaspase-12和PARP的蛋白水平降低,cleaved caspase-3和cleaved PARP的蛋白水平升高(P0.05);PI3K p110α和Akt蛋白水平下降,Bcl-2水平降低,Bax水平升高,Bcl-2/Bax比值降低,p27水平升高(P0.05)。结论:阿司匹林对同源不同辐射抗拒能力鼻咽癌细胞株CNE2R和CNE2具有同等细胞活力抑制作用;并且可以诱导细胞凋亡,且对抗辐射细胞株CNE2R的凋亡诱导作用更明显。阿司匹林的抗癌作用可能与其影响PI3K/Akt信号通路及其下游蛋白的水平有关。     

不同辐射抗拒鼻咽癌细胞微小RNA差异表达的研究

目的: 在验证鼻咽癌（nasopharygycarcinoma, NPC）细胞CNE-1和CNE-2不同辐射抗拒性的基础上，探索微小RNA(miRNA)在CNE-1和CNE-2中的表达差异。方法: 通过观察X线照射对CNE-1和 CNE-2 细胞克隆形成数目的影响，利用SigmaPlot 软件进行分析及线性二次模型拟合存活曲线, 比较CNE-1和CNE-2 细胞剂量存活曲线及其生物学参数；采用Paraflo microfluidic microRNA芯片检测，用激光扫描器收集杂交的图像，经LOWESS 滤器规范信号后分析数据差异,根据Targetscan3.1数据库资料 (http:∥www.targetscan.org)，预测CNE-1和CNE-2细胞microRNA差异表达与NPC放射敏感性差异的关系。结果: 发现在CNE-1和CNE-2细胞中miRNA的差异表达，即与CNE-2细胞比，在检测的326个microRNA中，CNE-1细胞中有20个miRNA上调，13个miRNA下调，其中检测量的绝对值在2 000以上且两者相差在3倍以上的miRNA有hsa-miR-152、hsa-miR-7、hsa-miR-205和hsa-miR-572；分析结果提示明显差异表达的miRNA与放疗敏感性密切相关。结论: 不同辐射抗拒NPC细胞株CNE-1和CNE-2细胞的microRNA的表达有差异；差异表达的miRNA与放疗敏感有关。     

姜黄素衍生物B50对不同辐射抗拒的同源鼻咽癌细胞增殖及凋亡的作用

目的: 比较姜黄素衍生物(B50)抑制不同辐射抗拒的同源鼻咽癌细胞CNE-2与CNE-2R作用的差异。方法: 采用MTT法和克隆形成实验检测B50对细胞活力及增殖的影响,以流式细胞仪检测B50对细胞周期分布、细胞凋亡及线粒体膜电位的影响。结果: B50可抑制CNE-2R细胞的活力 ,且呈时间浓度依赖性,其抑制作用明显优于对CNE-2细胞的作用 ,P<0.01; 同时B50抑制CNE-2R细胞增殖的作用明显优于对CNE-2的作用 vs (0.82±0.01)μmol/L],P<0.01;药物作用48 h后,B50使CNE-2R细胞G₂/M期的比例升高(7.1%→34.9%),明显优于CNE-2细胞 (12.4%→35.7%)(P<0.01);B50作用于CNE-2R细胞24 h后早期凋亡率升高(3.7%→19.5%),明显优于CNE-2细胞(4.4%→14.8%)(P<0.01);B50作用24 h后,CNE-2R细胞线粒体膜电位下降了(43.17±3.11)%,明显优于对CNE-2细胞的降低率 (P<0.01)。结论: 与CNE-2相比,B50能更显著地抑制辐射抗拒CNE-2R细胞的细胞活力及增殖能力,且更明显地调控细胞周期停滞于G₂/M期,诱导细胞凋亡及降低线粒体膜电位。这些结果提示B50具有逆转辐射抗拒的潜在价值。     

肾细胞癌RASSF1A基因启动子区甲基化状况与表达水平研究

目的检测19例肾细胞癌患者癌组织及癌旁组织Ras相关区域家族蛋白1A（RASSFlA）基因启动子区甲基化情况并检测其mRNA表达水平，探索两者之间的联系。方法收集肾细胞癌患者癌组织及相应癌旁组织19份，分别提取其基因组DNA，以甲基化特异性PCR（Methylation special PCR，MSP）法检测RASSFlA基因启动子区甲基化情况。并以QPCR法检测了RASSFlA基因的mRNA表达水平。结果19例中有lO例肾细胞癌患者癌组织存在高甲基化，mRNA表达水平表达降低，二者之间存在显著负相关性（r=-0．8734，P〈0．01）。结论肾细胞癌中RASSFlA基因启动子区存在高甲基化，并抑制该基因的表达。     

上皮型钙黏素基因启动子甲基化及其mRNA和蛋白表达在鼻咽癌组织中的意义

目的　探讨鼻咽癌癌细胞上皮型钙黏素基因启动子甲基化的程度及其mRNA和蛋白表达水平在鼻咽癌早期浸润和转移中的作用。方法　采用甲基化特异性聚合酶链反应 (methylation specificPCR ,MSP)、蛋白印迹、免疫组织化学和逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)等方法检测 2 1例鼻咽癌患者鼻咽原发癌和淋巴结转移癌配对组织中的上皮型钙黏素基因启动子甲基化程度和上皮型钙黏素、β 链接素在不同组织中mRNA和蛋白水平的表达。 结果　 ( 1)在 2 1例鼻咽原发癌组织中 ,11例( 5 2 4% )可以检测到上皮型钙黏素基因启动子的甲基化 ,而在配对的 2 1例淋巴结转移癌组织中 17例 ( 80 9% )则可检测到 ,二者差异具有显著性 (P <0 0 5 )。 ( 2 )在鼻咽原发癌组织中 ,80 %的癌细胞均表达上皮型钙黏素蛋白 ,在淋巴结转移癌组织中只有平均 5 0 %的癌细胞表达 ,两者亦差异有显著性 (P =0 0 0 4) ;但β 链接素蛋白在原发癌和淋巴结转移癌组织中均有较高的表达量 (均为 85 % )。 ( 3 )蛋白印迹检测表明 ,上皮型钙黏素在鼻咽原发癌组织中表达的平均相对强度为 2 0 6 7± 3 2 7,明显高于在转移癌组织中的蛋白平均相对强度 65 0± 15 9;而 β 链接素在不同组织中的蛋白表达相对强度则差异无显著性 (P =0 75 4)。 ( 4)上皮型钙黏     

宫颈癌脆性组氨酸三联基因的表达与血浆中的甲基化状态

目的探讨宫颈癌患者血浆中脆性组氨酸三联（fragile histidine triad, FHIT） 基因5′端CpG岛甲基化状态以及该基因在宫颈癌组织中的表达情况。方法用甲基化特异性聚合酶链反应（methylafion specific polymerase chain reaction, MS-PCR）对151例患者的血浆进行FHIT基因甲基化状态的研究，并用免疫组织化学方法检测FHIT蛋白的表达情况。结果31．13％的患者血浆FHIT基因发生甲基化；59．60％宫颈癌组织FHIT蛋白表达减弱或缺失，其中47．78％存在血浆FHIT基因的甲基化。结论血浆中FHIT基因甲基化是引起宫颈癌FHIT蛋白表达减弱的重要因素，利用它可以对宫颈癌进行无创伤诊断和预后的评估。     

p21基因启动子甲基化对血管平滑肌细胞向泡沫细胞转化的影响

目的观察氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)对血管平滑肌细胞(VSMC)p21基因启动子甲基化及对VSMC向泡沫细胞转化的影响。方法采用组织贴块法培养人脐血管平滑肌细胞,给予不同浓度氧化低密度脂蛋白ox-LDL(0,10mg/L,20mg/L,40mg/L)孵育24h,甲基化特异PCR(MS-PCR)检测p21基因启动子区CpG岛甲基化程度,MTT比色法测定VSMC增殖活性,油红O染色镜下观察计数泡沫细胞比率。结果 ox-LDL呈浓度依赖性促进p21启动子甲基化,同时平滑细胞增殖活性增高,向泡沫细胞转化增加。结论 ox-LDL可以通过p21基因甲基化促进VSMC向泡沫细胞转化,p21基因甲基化可能在动脉粥样硬化发生中起到一定作用。     

锯齿状病变组织中Runx3基因的甲基化及蛋白表达

目的探讨Runx3基因启动子区CpG岛甲基化状态和蛋白表达在锯齿状病变发生与癌变通路中的作用及意义。方法用TaqMan探针为基础的实时定量PCR(Methylight)法检测77例锯齿状病变(29例HP、29例SSA/P和19例TSA)、16例正常结直肠组织和14例结直肠癌中Runx3基因CpG岛甲基化状态,同时用免疫组化法检测相应组织中Runx3蛋白的表达;并分析两者之间的关系。结果 Runx3启动子CpG岛甲基化率在正常和HP、SSA/P、TSA、CRC分别为12.5%(2/16)和17.2%(5/29)、51.7%(15/29)、63.2%(12/19)和78.6%(11/14)。Runx3蛋白阳性表达率在正常和HP、SSA/P、TSA、CRC分别为81.3%(13/16)和72.2%(21/29)、48.3%(14/29)、31.6%(6/19)、21.4%(3/14)。SSA/P、TSA和CRC 3组中Runx3甲基化与Runx3蛋白表达结果具有相关性(P0.05),且为负相关。结论 Runx3基因启动子区域甲基化是诱导Runx3蛋白表达下调或缺失的主要原因,在锯齿状病变尤其是锯齿状腺瘤的发生及癌变通路中起重要作用。     

原发性高血压患者 ABCG4 基因启动子的甲基化差异分析

目的: 分析原发性高血压患者DNA启动子甲基化的差异,期待从表观遗传学的角度初步揭示人类原发性高血压的发病机制。方法: 实验对象分为正常对照组和原发性高血压组,提取外周血单个核细胞全基因组DNA。通过DNA甲基化芯片高通量筛选,共得到差异甲基化基因627个。筛选 FZD7、LRP、TTBK1、USFP1、SYCE1、NDUSF8、ZNF540和ABCG4 共8个可能与高血压相关基因,并进行后续亚硫酸氢盐测序PCR分析。结果: 8个候选基因中, ABCG4 差异甲基化程度最为显著。原发性高血压组 ABCG4 基因启动子区甲基化率为18.3%,正常组为32.4%,两者差异显著(P<0.01)。结论: 本研究证实原发性高血压患者 ABCG4 基因启动子低甲基化,可能在原发性高血压的发病机制中起到一定的作用。     

Jaw tracking技术对鼻咽癌调强放疗靶区和危及器官受照剂量影响的研究

目的 研究Smart LMC算法的铅门跟随(Jaw tracking)技术对鼻咽癌(NPC)动态调强放疗(IMRT)靶区和危及器官(OAR)受照剂量的影响.方法 在Eclipse TPS(11.0)上采用DVO算法优化10例NPC患者的各射野通量图,根据同一射野通量图分别计算生成Jaw tracking技术和铅门固定(Jaw fixed)技术的MLC运行文件,以AAA算法计算剂量,生成计划文件.观察计划执行时铅门的位置,比较计划总跳数、靶区剂量、OAR剂量和射野验证通过率.结果 JT-IMRT计划与JF-IMRT计划相比,射野的X和Y方向准直器铅门在166个控制点上打开间隔距离变小;计划总跳数增加了3.59％～ 11.63％;靶区剂量差异无统计学意义(P＞0.05);脑干、脊髓、两侧晶体、两侧视神经的Dmax和两侧腮腺剂量的Dmean,D50％相应值均降低,其差异具有统计学意义(t=5.70～8.66,P＜0.05);射野验证通过率提高,其差异具有统计学意义(t=5.18,P＜0.05).结论 Smart LMC算法的JT-IMRT执行方式,受叶片间和闭合断面的漏射线影响较小,其计划OAR的受量更低,剂量计算精度及验证通过率更高,实际投照剂量更为真实可靠,更适于临床应用.     

X线电离辐射诱导人鼻咽癌CNE-2细胞发生上皮-间充质转化及其潜在机制

目的:探讨X线电离辐射诱导鼻咽癌CNE-2细胞发生上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)及其可能的信号通路。方法:分别采用0 Gy、2 Gy、4 Gy和8 Gy的X线照射鼻咽癌CNE-2细胞,通过倒置显微镜观察照射24 h后细胞形态的改变;应用细胞划痕实验和Transwell实验观察细胞迁移和侵袭能力的变化;分别采用real-time PCR和Western blot法检测EMT相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(vimentin)mRNA及蛋白水平的变化,并采用Western blot法检测Akt和p-Akt蛋白水平的变化。结果:经X线照射后鼻咽癌CNE-2细胞呈典型的"鹅卵石"样或纺锤形,且伸出伪足,细胞间隙增大,细胞的侵袭和迁移能力增强(P0.01);real-time PCR和Western blot法检测结果显示,与未照射组相比,各照射组细胞中E-cadherin mRNA和蛋白的表达水平均显著下调(P0.01),而N-cadherin和vimentin mRNA和蛋白的表达水平明显上调(P0.05);PI3K/Akt信号通路中p-Akt蛋白的水平显著升高(P0.01),而Akt的表达无明显变化。结论:X线电离辐射能够诱导鼻咽癌CNE-2细胞发生EMT,其机制可能与PI3K/Akt信号通路的激活有关。     

祖籍湖北汉族鼻咽癌患者与HLA抗原相关的研究

目的：探讨25例鼻咽癌患者和50例正常祖籍湖北汉族居民HLA-A，HLA-B位点抗原分型。方法：采用美国NIH标准微量淋巴细胞毒技术和免疫磁珠法分离TB淋巴细胞。结果：鼻咽癌患者组的HLA-A1，HLA-B63抗原频率明显高于正常对照组(P值分别为0．0098和0．0028)。结论：HLA-A1可能是湖北或华中地区鼻咽癌患者相关的一种区域性抗原，而HLA-B63可能是一个新的鼻咽癌相关的抗原。     

MMP9基因单核苷酸多态性与鼻咽癌遗传易感性的关系

目的研究MMP9基因单核苷酸多态性与广东人鼻咽癌患病风险及临床病理分期的关系。方法以聚合酶链反应（PCR）和限制性片段长度多态性（RFLP）分析方法检测433例鼻咽癌患者和437例健康对照MMP9基因C-1562T和第6外显子R279Q基因型。结果吸烟显著增加鼻咽癌的患病风险（OR=4．01,95％CI=2．86—5．63）。MMP9基因C．1562T和R279Q基因型频率病例组与对照组相似,均未能增加鼻咽癌的发病风险,-1562CT／TF基因型相对于cc基因型AdOR=0．99,95％CI=0．70—1．39;279RQ／QQ基因型相对于RR基因型OR=0．96,95％C1=0．70～1．32;而且与吸烟增加鼻咽癌发病风险无交互作用。鼻咽癌病例组中,-1562CT／TT和RQ／QQ基因型并未表现出更高的T分期（经年龄、性别和吸烟校正后的OR值分别为1．23和0．84,P〉0．05）和淋巴结转移潜能（经年龄、性别和吸烟校正后的OR值分别为0．88和0．68,P〉0．05）。结论MMP9基因C-1562T和第6外显子R279Q多态性与广东地区鼻咽癌患病风险无关,可能不是广东人鼻咽癌发病遗传易感因素。     

Ad-14-3-3σ对不同辐射抗拒的鼻咽癌细胞微小RNA表达的影响

目的： 在明确Ad-14-3-3σ对不同辐射抗拒鼻咽癌（nasopharygycarcinoma, NPC）细胞CNE-1和CNE-2治疗作用的基础上，检测Ad-14-3-3σ对CNE-1和CNE-2细胞中差异表达的微小RNA(microRNA, miRNA)的影响，探索CNE-1和CNE-2细胞中miRNA差异表达与NPC放射敏感性差异的关系。方法: 用Ad-14-3-3σ转染CNE-1和CNE-2细胞；采用Paraflo microfluidic microRNA芯片检测，用激光扫描器收集杂交的图像，经LOWESS滤器规范信号后分析数据差异，根据Targetscan3.1数据库资料（http://www.targetscan.org）探索Ad-14-3-3σ对CNE-1和CNE-2中的miRNA差异表达的影响，预测其差异表达与NPC放射敏感性差异的关系。结果: Ad-14-3-3σ处理细胞以后，CNE-1与CNE-2相比较，有37个microRNA有明显差异，CNE-1中有17个上调，20个下调。其中倍数变化在3倍以上且2者检测量数量差异达到1 000以上的有6个:hsa-miR-152、hsa-miR-205、 hsa-miR-203、 hsa-miR-7、hsa-miR-636和hsa-miR-100。结论: Ad-14-3-3σ能够改变微小RNA(microRNA, miRNA)在CNE-1和CNE-2中的表达模式，缩小CNE-1和CNE-2之间miRNA的表达差异，而这些miRNA可能跟肿瘤的发生和放疗敏感性有关。     

鼻咽癌组织中p16基因的缺失、高甲基化和蛋白的表达及其临床意义

目的探讨鼻咽癌组织中p16基因的缺失、高甲基化和蛋白的表达及其临床意义。方法应用免疫组织化学EnVision法检测90例鼻咽非角化性癌(NKC)组织p16蛋白的表达缺失,聚合酶链反应和甲基化酶切方法检测23例NKC组织p16基因缺失和高甲基化。结果90例NKC中p16蛋白表达阴性率为46.7%(42/90),而对照组的阴性率为0(0/30),P<0.05。p16蛋白表达与NKC患者的5年生存率有明显的相关性,生存期5年内者,其缺失率为60.0%(36/60);生存期5年以上者,其缺失率为20.0%(6/30),P<0.05。有、无远处器官转移的病例p16蛋白阴性率分别为81.8%(9/11)和41.8%(33/79),P<0.05。而有、无颅底破坏和(或)颅神经侵犯病例p16蛋白阴性率分别为41.7%(10/24)和48.5%(32/66),P>0.05。23例NKC中未检测到p16基因外显子1的缺失,但有10例p16基因外显子2的缺失,缺失率为43.4%(10/23);同时检测到2例外显子1的异常甲基化,高甲基化率为8.7%(2/23);总突变率为52.1%(12/23)。结论在NKC的发生发展过程中,p16基因缺失起着重要的作用。p16蛋白表达与NKC患者的5年生存率和远处转移有一定的相关性,而与NKC的局部组织侵犯无明显相关性。     

Differential expression of Epstein-Barr virus-encoded RNA and several tumor-related genes in various types of nasopharyngeal epithelial lesions and nasopharyngeal carcinoma using tissue microarray analysis

Studies have revealed that Epstein-Barr virus (EBV) infection, genetic aberration, and environmental factors are of importance in the development of nasopharyngeal carcinoma (NPC), although the definite mechanism remains to be fully elucidated. The aim of our study is to investigate using tissue microarray analysis whether differential expression of EBV-encoded small RNA-1 (EBER-1) and several tumor-related genes were associated with NPC carcinogenesis. Immunohistochemistry and in situ hybridization were performed on tissue microarrays containing 148 NPCs and 164 noncancerous nasopharyngeal epithelia (NPE) with different morphologic features. We found that overexpressions of EBER-1 hybridization signals, p53, p21ras, and bcl-2 proteins and loss expressions of p16 and p27 proteins were significantly increased in NPC tissues compared with normal NPE and hyperplastic NPE (P 相似文献   

不同临床类型原发鼻咽癌组织差异表达蛋白

 目的 寻找上行型、下行型和混合型不同临床类型鼻咽癌原发病瘤灶组织中的差异表达蛋白。方法 采用双向凝胶电泳对不同临床类型鼻咽癌患者的鼻咽癌组织和正常人鼻咽组织总蛋白进行分离,对比找出差异表达蛋白质斑点,结合基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱分析技术和数据库信息检索鉴定差异蛋白点。结果 与正常组比较,混合型鼻咽癌组出现31个差异蛋白质点,其中18个表达上调,13个表达下调;从混合型鼻咽癌组选择10个差异蛋白质斑点进行质谱鉴定,成功鉴定出5个,其中表达上调的有热休克固有蛋白、α1抗胰蛋白酶和巨噬细胞帽蛋白;表达下调的有S100A9蛋白和 蛋白4.1。与下行型鼻咽癌组比较,上行型鼻咽癌组出现31个差异表达蛋白点,其中15个表达上调、16个表达下调;从上行型组选择10个差异蛋白质斑点进行质谱鉴定,成功鉴定出6个,其中表达上调的有线粒体顺乌头酸酶、乙醇脱氢酶、Rab GDP解离抑制因子β;表达下调的有NM23-H1、核氯离子通道蛋白27和乙醛脱氢酶X。结论 不同临床类型鼻咽癌患者肿瘤转移相关蛋白、能量代谢蛋白、解毒蛋白与抗肿瘤转移蛋白表达水平存在差异,这些蛋白可作为临床分型标记物。