沉默Slug对喉癌Hep-2细胞增殖和细胞侵袭的影响

目的探讨沉默喉癌细胞株Hep-2中Slug基因对细胞增殖和细胞侵袭的影响。方法将靶向Slug基因si RNA转染至喉癌Hep-2细胞,Real time PCR和Western blot方法分别检测转染后Slug m RNA和蛋白表达变化,通过CCK-8法测定Hep-2细胞增殖能力的变化,流式细胞术检测细胞周期及transwell法检测细胞侵袭力。结果转染Slug-si RNA的实验组Hep-2细胞内slug m RNA和蛋白表达水平与对照组相比明显降低(0.05),Hep-2细胞增殖能力和侵袭能力显著降低(0.05)。结论沉默Slug基因可以抑制喉癌Hep-2细胞的增殖和侵袭能力,提示Slug基因可能参与喉癌发生发展。     

miR-137对喉癌Hep-2细胞增殖、侵袭与凋亡的影响及可能机制

目的探讨miR-137对喉癌Hep-2细胞增殖及迁移能力的影响及可能机制。方法采用miR-137模拟物转染喉癌Hep-2细胞,实验分为空白对照组组(未进行转染)、miR-137阴性对照组(转染无关序列)、miR-137模拟物转染组(进行miR-137模拟物转染)。real-time PCR法验证转染效率,采用CCK8法检测miR-137对喉癌Hep-2细胞增殖的影响,采用Transwell实验检测转染后Hep-2细胞的侵袭能力变化,采用流式细胞术检测miR-137对Hep-2细胞凋亡的影响;Western blot检测转染后Hep-2细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase-3以及侵袭相关蛋白T细胞因子-4(TCF-4)蛋白表达的变化。结果与空白对照组或阴性对照组相比,miR-137模拟物转染组Hep-2细胞miR-137的表达水平显著高于对照组(P0.01),喉癌Hep-2细胞的增殖与侵袭能力显著降低,细胞凋亡率明显升高,凋亡相关蛋白Bcl-2表达水平降低,而Bax与caspase-3蛋白表达升高,侵袭相关蛋白TCF-4表达降低。结论过表达miR-137抑制Hep-2细胞增殖与侵袭、诱导细胞凋亡,与上调Bax、caspase-3蛋白表达和下调Bcl-2、TCF-4表达相关。     

p62/SQSTM1在鼻咽癌中的表达

目的:研究p62在鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)细胞、组织中的表达情况及其自身抗体在外周血中的水平,探究p62与NPC发生、转移的关系及其在临床中的应用价值.方法:采用Western印迹法和免疫组织化学染色法分别检测NPC细胞株NP69,6-10B和5-8F和NPC患者组织中的p62表达;ELISA检测患者血清中抗p62抗体浓度,并分析其与临床病理特征的关系.结果:p62在NP69,6-10B和5-8F细胞中的表达水平依次升高(P＜0.05);NPC组织中p62高表达,其水平与患者有无转移(x2=9.332,P=0.002)有关.NPC患者血清中抗p62水平较慢性鼻咽炎组明显升高(t=-4.653,P＜0.001),且抗p62抗体水平与患者是否转移有关(t=14.255,P=0.016);血清抗p62抗体筛查NPC的最佳临界值为51.82 μg/L,判别是否发生转移的临界值为62.03 μg/L.结论:p62高表达与NPC发生及转移密切相关,组织中p62蛋白和血清中抗p62抗体可能作为NPC病情监测和判断预后的新指标.     

小檗碱对喉癌Hep-2细胞增殖与凋亡的影响及可能机制

目的探讨小檗碱对喉癌Hep-2细胞增殖与凋亡的影响及可能机制。方法免疫组织化学方法与Western blot方法检测喉癌组织及癌旁正常组织中环氧合酶-2(COX-2)与细胞周期调节蛋白CyclinB1的表达。MTT方法检测不同质量浓度小檗碱(0,5,10,20mg/L)对喉癌Hep-2细胞增殖的影响;流式细胞仪检测小檗碱(0,20 mg/L)对喉癌Hep-2细胞凋亡的影响。Western blot方法检测小檗碱(0,20 mg/L)作用喉癌Hep-2细胞24h后COX-2与CyclinB1的表达变化。结果 COX-2与CyclinB1在喉癌组织的阳性表达率及平均光密度值显著高于癌旁正常组织(P0.01)。小檗碱抑制喉癌Hep-2细胞增殖,并呈时间浓度依赖性;给予20 mg/L小檗碱作用后,喉癌Hep-2细胞凋亡率明显增加,喉癌Hep-2细胞中的COX-2与CyclinB1表达水平明显低于未加药组(P0.01)。结论小檗碱抑制喉癌Hep-2细胞的增殖并促进凋亡,下调COX-2与CyclinB1的表达可能是其作用机制之一。     

CRISPR/Cas9介导下高效敲除SQSTM1/p62基因的Hela细胞模型的建立

目的 :探讨针对p62双sgRNA向导CRISPR/Cas9基因编辑效率。方法 :采用CRISPR/Cas9基因编辑技术成功敲除p62基因,通过细胞有限稀释法和嘌呤霉素筛选,免疫印迹法验证双sgRNA和单sgRNA向导的基因编辑成功率;流式细胞仪验证p62缺失对Hela细胞凋亡的影响。结果 :免疫印迹分析得出双sgRNA导向的p62敲除效率高于单sgRNA导向的敲除,靶序列测序比对分析确认p62编码基因发生大片段缺失突变。H_2O_2处理稳定敲除的Hela细胞系显示,p62基因敲除能明显抑制Hela细胞H_2O_2诱导的早期细胞凋亡。结论 :成功建立了p62敲除的Hela细胞系,双sgRNA向导的CRISPR/Cas9基因编辑体系可能是一种更有效的编辑工具。     

p53与细胞凋亡

细胞增殖周期分四个阶段，ＤＮＡ合成前期（Ｇ１期）到ＤＮＡ合成期（Ｓ期）受一系列基因调节。这些基因包括具有起促进作用的基因和起抑制作用的基因，二者作用的平衡维持细胞增殖的正常状态。当具有启动作用的基因表达增强或具有抑制作用的基因（如ｐ５３）因缺失突变所...     

藻蓝蛋白诱导喉癌HEP-2细胞凋亡的实验研究

目的:探讨藻蓝蛋白对人喉癌HEP-2细胞凋亡的影响,并初步探讨其机制。方法:不同浓度藻蓝蛋白处理HEP-2细胞,分别以MTT、倒置显微镜、扫描电镜、透射电镜、流式细胞术检测藻蓝蛋白对HEP-2细胞活力及凋亡的影响;DCFH-DA标记的流式细胞术检测细胞内的活性氧水平;分光光度法检测细胞内caspase-3、-8、-9的活性;RT-PCR、Western blot检测细胞凋亡相关基因的表达。结果:MTT结果显示藻蓝蛋白能够抑制喉癌HEP-2的细胞活力,且呈时间和剂量依赖性;倒置显微镜、电镜、流式细胞术的一系列定性化和定量化实验证实藻蓝蛋白可显著诱导HEP-2细胞的凋亡;藻蓝蛋白处理后细胞内ROS水平升高,caspase-3、-8、-9被激活;RT-PCR结果表明,藻蓝蛋白作用后Bax、Fas、P53、caspase-3和caspase-9表达显著上调(P0.05),Bcl-2表达显著下调(P0.05);Western blot结果和RT-PCR结果一致。结论:藻蓝蛋白能够诱导HEP-2细胞的凋亡,其机制可能与细胞内ROS水平升高,上调Bax、Fas和P53 mRNA,下调Bcl-2 mRNA的表达,从而促进凋亡信号的转导最终导致细胞凋亡有关。     

叶酸磁性纳米颗粒载顺铂抑制人喉癌Hep-2细胞生长且无细胞毒性作用

BACKGROUND: Chemotherapy drugs can kill both cancer cells and normal tissue cells. Molecular targeted therapy can reduce or avoid toxicity of chemotherapy drugs to normal cells. OBJECTIVE: To study the therapeutic effect of folic acid magnetic nanoparticles containing cisplatin on laryngeal cancer. METHODS: Folic acid-cis-diaminodichloroplatinum (II)-aldehyde sodium alginate-magnetic nanoparticles (FA-CDDP-ASA-MNPs) were prepared. The FA-CDDP-ASA-MNPs, CDDP and FA-ASA-MNPs were cultured together with human laryngeal cancer Hep-2 cells. To detect the effect of FA-CDDP-ASA-MNPs, CDDP and FA-ASA-MNPs on human laryngeal cancer Hep-2 cells, MTT, flow cytometry and transmission electron microscopy examination were used in vitro. RESULTS AND CONCLUSION: Both FA-CDDP-ASA-MNPs and CDDP could inhibit the growth of human laryngeal cancer Hep-2 cells, and there was no difference in their inhibitory rates (P > 0.05). FA-CDDP-ASA-MNPs and CDDP showed increased inhibitory rates of human laryngeal cancer Hep-2 cells with the increase of CDPP concentration. The half maximal inhibitory concentrations of CDDP for inhibiting Hep-2 cells were significantly different at 24 and 48 hours after culture (P < 0.05). Both FA-CDDP-ASA-MNPs and CDDP could cause apoptosis in Hep-2 cells, and the number of apoptotic cells was increased with the increase of drug concentrations (P < 0.05), but there was no difference between two kinds of drugs (P > 0.05). FA-CDDP-ASA-MNPs and CDDP at low concentrations could increase the percentage of cells at G0/G1, but decrease the cell proportion at S and G2/M phases (P < 0.05). Under transmission electron microscope, Hep-2 cells with the intake of FA-CDDP-ASA-MNPs appeared to have notable apoptosis. These findings suggest that folic acid magnetic nanoparticles containing cisplatin can inhibit the growth of human laryngeal cancer Hep 2 cells, with no influence on the efficacy of cisplatin and with no cytotoxic effect.       

多功能蛋白p62调节细胞自噬及相关疾病的研究进展

Sequestosome 1 （p62/SQSTM1）是一种由应激诱导产生的细胞内蛋白并作用于选择性自噬的多功能蛋白.p62包含多种蛋白作用域,可结合聚泛素化蛋白并将其进一步降解,在信号转导过程中发挥重要作用.研究表明,p62参与多种疾病的病理过程,如神经退行性疾病、糖尿病、肥胖甚至是癌症.因而从p62的结构和功能这两方面阐述其在相关疾病中的作用很有必要.     

人肝细胞癌中LC3B和p62的表达及意义

目的观察自噬标志因子LC3B和p62在人肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中的表达及其临床意义。方法采用免疫组化法检测61例人HCC组织中LC3B和p62的表达,分析二者表达与临床病理特征及其预后的关系。结果 HCC中LC3B和p62的高表达率分别为31.1%和65.6%;LC3B表达与肿瘤大小、组织学分级和临床分期呈显著正相关(P0.05),p62表达与肿瘤临床分期呈显著正相关(P0.05);LC3B和p62表达均与HCC患者的无复发生存期和总生存期密切相关(P=0.009和0.036;P=0.001和0.007)。结论肿瘤细胞自噬活性的提高可能参与人HCC的发展,LC3B和p62表达可能是肝细胞进展和预后不良的潜在标志物。     

人喉癌长春新碱耐药细胞株的建立及其生物学特性

目的:建立人喉癌长春新碱多药耐药细胞系。方法:以药物浓度梯度递增法诱导筛选人喉癌Hep-2的多药耐药细胞株Hep-2/v,比较两组细胞的形态和倍增时间;MTT法确定细胞的IC50及其耐药指数;流式细胞仪检测两组细胞的细胞周期分布以及细胞内的罗丹明聚集情况;实时定量RT-PCR法检测MDR1基因的mRNA表达,Western blot法检测相应的蛋白表达情况。结果:建成的Hep-2/v耐药细胞株,其耐药性能稳定,耐药指数为45,并与顺铂及5-氟尿嘧啶有不同程度的交叉耐药性;Hep-2/v的体外群体细胞倍增时间较亲代细胞延长13.58小时;细胞周期分析结果显示其G0/G1期细胞升高,而S期细胞则明显降低(P0.05);罗丹明染色显示,Hep-2细胞内的罗丹明较Hep-2/v明显升高(P0.01);Hep-2/v细胞MDR1表达在基因及蛋白水平明显高于Hep-2细胞(P0.01)。结论:Hep-2/v细胞株具有明确及稳定的多药耐药性,是研究多药耐药机制及筛选逆转剂的良好模型。     

吲哚美辛对人喉癌Hep-2细胞系侵袭力的影响

目的: 通过体外实验的方法探讨非甾体类抗炎药吲哚美辛对人喉癌Hep-2细胞系侵袭能力的影响。方法:Hep-2细胞经吲哚美辛作用后,撤药培养,绘制生长曲线,并用软琼脂集落形成实验检测肿瘤细胞非锚着生长能力,琼脂糖滴法检测肿瘤细胞移动能力,单层细胞侵袭实验计算肿瘤侵袭指数。结果:吲哚美辛作用后的Hep-2细胞软琼脂集落形成数目减少,细胞移动能力下降,单层细胞侵袭指数降低。结论:吲哚美辛能抑制人喉癌Hep-2细胞系的侵袭性。     

采用恶性肿瘤患者IgG类自身抗体研究p62的抗原性

目的：研究p62不同区域的抗原性。方法：取p62全长重组子及克隆其不同区域的3个重组于进行表达和纯化。以各重组蛋白为包被抗原，建立检测IgG类抗p62自身抗体的ELISA技术。结果：恶性肿瘤患者血清中抗p62各片段自身抗体阳性率以抗p62—1为最高，抗p62—3次之，抗p62—2最低，3者均低于抗全长p62。抗全长p62的阳性率与抗p62—1的阳性率无明显差异，而与抗p62—2和抗p62—3均有非常显著差异。除肺癌外，肝癌、胃癌、肠癌、食管癌和乳腺癌患者的3个抗原片段的自身抗体的叠加阳性率均低于全长p62。结论：p62的抗原性主要位于p62-1，但其结构的完整性对维持其抗原性具有重要意义。     

下调p21活化蛋白激酶2表达对人乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响*

 目的： 应用RNA干扰技术下调人乳腺癌MCF-7细胞中p21活化蛋白激酶2（PAK2）的表达,观察其对MCF-7细胞增殖和凋亡的影响。方法: 构建针对PAK2基因的短发卡RNA(shRNA)慢病毒表达载体并包装病毒颗粒,感染MCF-7细胞,筛选获得稳定细胞株。Western blotting检测细胞中PAK2蛋白表达水平的改变;CellTiter 96 AQueous法和软琼脂集落形成实验检测MCF-7细胞体外增殖能力的改变;流式细胞术检测十字孢碱诱导的MCF-7细胞凋亡的变化。结果: MCF-7细胞的PAK2基因被沉默后,PAK2蛋白表达量明显下降（P<0.01）,与阴性对照组相比,sh-PAK2组细胞生长明显减缓（P<0.01）,克隆形成的数目和大小明显下降（P<0.01）,十字孢碱诱导的细胞凋亡率显著增加（P<0.01）。结论：通过RNA干扰技术下调PAK2的表达,可抑制MCF-7细胞的生长和增殖,并增强其对化疗药物诱导的细胞凋亡的敏感性。PAK2可能是潜在的乳腺癌治疗的新靶点。     

bcl-3基因通过cyclin D1及Bax蛋白影响人结肠癌RKO细胞的凋亡

目的:研究bcl-3基因对人结肠癌RKO细胞迁移及凋亡的影响及机制。方法:采用人bcl-3基因的RNA干扰慢病毒载体沉默人结肠癌RKO细胞bcl-3基因的表达后,划痕实验观察bcl-3基因沉默前后RKO细胞迁移能力的变化,Annexin V/PI双染色法检测bcl-3基因沉默前后RKO细胞凋亡率的变化,Western blot法检测bcl-3基因沉默前后细胞周期蛋白cyclin D1及凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的变化。结果:划痕实验显示,划痕后36 h,bcl-3基因沉默前后RKO细胞划痕愈合率分别为84.00%及40.00%,差异具有统计学意义(P0.05)。Annexin V/PI双染色法流式细胞术分析显示,bcl-3基因沉默前后的RKO细胞均经5μmol/L顺铂处理24 h后,沉默前后的RKO细胞凋亡率分别为12.89%及59.67%,差异具有统计学意义(P0.05)。Western blot法检测显示bcl-3基因沉默后cyclin D1蛋白表达显著下降(P0.05),Bax蛋白表达显著上升(P0.05),但Bcl-2表达无明显变化(P0.05)。结论:沉默bcl-3基因后,RKO细胞迁移能力下降,凋亡率增加,并伴细胞周期蛋白cyclin D1及凋亡相关蛋白Bax表达的变化。bcl-3基因可能通过改变cyclin D1及Bax蛋白的表达而影响RKO细胞的凋亡。     

青蒿琥酯对乳腺癌MCF-7细胞抗失巢凋亡的影响

目的：探讨青蒿琥酯对乳腺癌细胞抗失巢凋亡的影响。 方法： 采用不同浓度的青蒿琥酯处理乳腺癌MCF-7细胞，采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP切口末端标记法(TUNEL)法检测乳腺癌细胞抗失巢凋亡，采用软琼脂集落形成试验检测细胞的生长增殖。 结果： 青蒿琥酯能有效地抑制乳腺癌MCF-7细胞锚着不依赖性增殖，且呈浓度依赖性。乳腺癌细胞经青蒿琥酯处理后，可促进失巢凋亡，且与时间和浓度相关。 结论： 青蒿琥酯可有效地抑制乳腺癌细胞锚着不依赖性增殖，其机制可能与促进失巢凋亡有关。     

硫酸肝素对人肝癌HepG2细胞系增殖和凋亡的影响

目的:探讨硫酸肝素对人肝癌HepG2细胞系增殖和凋亡的影响。方法:体外观察硫酸肝素作用于人肝癌细胞系(HepG2)的细胞增殖、凋亡效应和细胞ras基因表达的变化关系。结果:硫酸肝素能下调细胞HepG2的增殖能力及其细胞ras基因蛋白的表达并上调其细胞的凋亡率。结论:硫酸肝素对人肝癌细胞增殖、凋亡的影响与ras基因蛋白介导的信号转导有关。