白杨素对人骨肉瘤细胞MG-63增殖与凋亡的影响

目的探讨白杨素对人骨肉瘤细胞MG-63增殖与凋亡的影响及可能机制。方法采用不同浓度白杨素(0,2.5,5,10,20,40 mg/L)作用于MG-63细胞后,MTT法和流式细胞仪分别检测白杨素对细胞增殖与凋亡的影响。蛋白免疫印迹检测白杨素(20 mg/L)对骨肉瘤细胞Bax、Bcl-2、Caspase-3、Survivin蛋白表达的影响。Real-time PCR方法检测白杨素(20 mg/L)对骨肉瘤细胞Bax mRNA、Bcl-2 mRNA、Caspase-3 mRNA、Survivin mRNA表达水平的影响。结果白杨素抑制MG-63细胞增殖、促进MG-63细胞凋亡,并呈浓度依赖性。经20 mg/L白杨素处理后,MG-63细胞Bax与Caspase-3蛋白与mRNA表达水平显著升高,而Bcl-2与Survivin蛋白与mRNA表达水平显著降低。结论白杨素在体外抑制MG-63细胞增殖,促进MG-63细胞凋亡,与调控凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3、Survivin的表达相关。     

蝎毒多肽对人骨肉瘤细胞株MG-63活性的影响

目的探讨蝎毒多肽对人骨肉瘤MG-63细胞增殖凋亡的影响。方法利用0、4、8、12μg/mL浓度蝎毒多肽处理MG-63细胞12、24、48 h,CCK-8法检测细胞活性、镜下观察细胞形态变化、吖啶橙荧光染色法观察细胞凋亡,8μg/mL蝎毒多肽处理MG-63细胞24、48 h,Hoechst-33258荧光染色观察细胞核染色质形态。结果 4、8、12μg/mL的蝎毒多肽可抑制MG-63细胞活性,抑制其增殖,呈剂量-时间依赖性。8μg/mL处理24 h细胞存活率为0.5506±0.0502,与对照组比较,差异有统计学意义(P0.01)。吖啶橙荧光染色,细胞染色质浓缩,细胞核碎裂成点状,被染成大小不一、致密浓染的绿色颗粒,随着浓度增大、时间延长,坏死细胞逐渐增多。呈现凋亡核碎裂典型变化,随剂量增加更趋明显。呈剂量依赖性抑制其增殖能力。Hoechst-33258染色观察可见凋亡细胞染色质呈固缩或碎裂状染色质,染色质着色不均,核形态各异。随作用时间增加而更趋明显。结论蝎毒多肽可以抑制骨肉瘤细胞活性,抑制其体外增殖,诱导其发生凋亡,该作用呈剂量依赖和时间依赖。     

腺病毒载体介导的ING4基因对MG-63人骨肉瘤细胞的抑制作用

目的:用人源化改造的鼠肿瘤生长抑制因子(mING4)基因构建的腺病毒表达载体(Ad-ING4)研究对MG-63人骨肉瘤细胞的抑制作用.方法:以pcDNA3.0-mING-4重组质粒为模板,通过基因定点突变技术对mING4基因进行人源化改造,采用腺病毒载体的基因重组和体外包装技术获得表达与人ING-4氨基酸序列相同的重组腺病毒子(Ad-ING4),感染MG-63细胞,用荧光显微镜、RT-PCR法检测ING4在MG-63细胞中的转录和表达;MTT法和流式细胞技术检测ING4基因表达对MG-63细胞的生长抑制和凋亡效应;荧光共聚焦显微镜观察MG-63细胞凋亡的形态学变化;半定量RT-PCR法检测ING4基因表达对MG-63细胞巾的Bax、Bcl-2基闪表达的影响.结果:基因测序和PCR分析结果显示,人源化改造的小鼠ING4分子氨基酸序列与人ING4分子完全相同,成功构建了Ad-ING4腺病毒表达载体,在MG-63细胞中ING4基因的表达对MG-63细胞增殖有明显抑制作用,并可诱导细胞凋亡,出现典型细胞凋亡形态学变化,ING4基因表达可通过上调细胞中Bax和下调Bcl-2基因表达诱导细胞凋亡.结论:转染ING4基因可明显抑制MG-63人骨肉瘤细胞的生长,诱导细胞凋亡,该现象可能是通过改变Bax,Bcl-2表达水平来发挥抗肿瘤作用的.     

沉默长链非编码RNA CCAT2对人骨肉瘤细胞MG-63增殖与凋亡的影响

目的探讨靶向沉默长链非编码RNA肠癌相关转录子2(lncRNA CCAT2)对人骨肉瘤细胞MG-63增殖与凋亡的影响。方法实时荧光定量PCR(qPCR)方法检测骨肉瘤MG63细胞与人成骨hFOB1.19细胞中lncRNA CCAT2表达水平;转染小干扰RNA沉默MG63细胞中lncRNA CCAT2的表达,qPCR方法验证沉默效率。沉默MG63细胞中lncRNA CCAT2表达后,MTT方法检测MG63细胞增殖能力的变化,流式细胞术检测MG63细胞的凋亡率,Western blot方法检测MG63细胞p53及Bcl-2蛋白的表达变化。结果lncRNA CCAT2在骨肉瘤MG63细胞中的表达显著高于人成骨hFOB1.19细胞(P<0.01);转染小干扰RNA能够显著降低MG63细胞中lncRNA CCAT2的表达水平(P<0.01)。沉默lncRNA CCAT2后,MG63细胞的增殖能力显著降低,凋亡率显著上升,Bcl-2蛋白表达显著降低p53蛋白表达显著升高(P<0.01)。结论靶向沉默lncRNA CCAT2能够抑制人骨肉瘤细胞MG-63的增殖并诱导凋亡。     

人参皂苷Rh4诱导肝癌细胞HepG2的凋亡及分子机制

目的:探讨人参皂苷Rh4对人肝癌HepG2细胞凋亡的作用及机制。方法:采用MTT比色法测定不同浓度(10、20和40μmol/L)人参皂苷Rh4对人肝癌HepG2细胞活力的抑制作用;用流式细胞术检测定细胞凋亡率;通过Hoechst 33258和TUNEL染色观察人参皂苷Rh4诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的形态学变化;Western blot法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、caspase-3和caspase-9的表达情况。结果:人参皂苷Rh4能够明显促进人肝癌HepG2细胞的凋亡,且呈剂量依赖性;TUNEL和Hoechst 33258染色实验结果表明,人参皂苷Rh4作用24 h后,细胞呈现明显皱缩、肿胀、破裂等凋亡形态;Western blot分析结果表明,随着人参皂苷Rh4给药浓度的增加,抗凋亡蛋白Bcl-2表达量逐渐下降,而促凋亡蛋白Bax、cleaved caspase-3和caspase-9的表达逐渐升高。结论:人参皂苷Rh4可诱导人肝癌HepG2细胞凋亡,其作用机制可能与下调Bcl-2以及上调Bax、cleaved caspase-3和caspase-9蛋白表达有关。     

异甘草素对人骨肉瘤细胞MG-63增殖及侵袭的影响

目的探讨异甘草素(ISL)对人骨肉瘤细胞MG-63增殖及侵袭的影响及可能机制。方法采用不同浓度异甘草素(0,5,10,20μg/ml)作用于MG-63细胞后,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察ISL对MG-63细胞生长的抑制作用。单一浓度的异甘草素(20μg/ml)处理MG-63细胞48h后,Transwell实验检测MG-63细胞侵袭能力变化,Western blot方法检测Bcl-2、Bax及自噬相关蛋白Beclin1、LC3的表达,实时PCR方法检测Bcl-2mRNA与Bax mRNA的表达水平。结果 ISL以浓度依赖性抑制MG-63细胞增殖。经20μg/ml异甘草素处理后,MG-63细胞侵袭能力显著降低,Bcl-2蛋白的表达下调,Bax及自噬相关蛋白Beclin1、LC3蛋白的表达上调,Bcl-2 mRNA的表达水平下调,Bax mRNA的表达水平上调。结论异甘草素在体外能够抑制MG-63细胞增殖与侵袭,与激活线粒体凋亡通路及自噬通路相关。     

人参皂甙Rg1组合对人成骨肉瘤MG-63细胞分化过程中核基质构型与蛋白质组成的影响

目的 研究中药有效成分人参皂甙Rgl、肉桂酸CINN及丹参酮TanⅡ A的组合(简称RCT),诱导人成骨肉瘤MG-63细胞分化过程中,细胞核基质构型与蛋白质组成的变化.方法 应用流式细胞仪检测细胞周期变化,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法绘制细胞生长曲线,以选择性抽提整装光镜与电镜技术及蛋白质组学技术分析观察处理前后MG-63细胞核基质构型与蛋白质组成的变化.结果 生长曲线显示,RCT处理后MG-63细胞的增殖受到明显抑制,增殖抑制率在第7天达到72.37%,细胞周期出现明显的G0/G1期阻滞.MG-63细胞核基质为典型的肿瘤细胞恶性表型,在RCT处理后发生了向正常细胞转变的恢复性变化.RCT处理后的细胞中多种核基质功能蛋白的表达发生了变化.结论 RCT能显著抑制体外培养MG-63细胞的增殖活动,将细胞周期阻滞于G0/G1期,诱导核基质构型发生了显著的恢复性变化,并改变核基质蛋白的组成,对MG-63细胞具有显著的分化诱导作用.     

Prohibitin在姜黄素诱导人成骨肉瘤MG-63细胞凋亡过程中的调控机制

目的 探讨姜黄素（curcumin）诱导成骨肉瘤细胞凋亡前后,Prohibitin（PHB）蛋白的定位与表达变化,及PHB与凋亡相关基因产物的共定位关系。
方法 选择性抽提经姜黄素诱导处理前后的人成骨肉瘤MG-63细胞核基质蛋白,以蛋白质组学、免疫印迹法和激光扫描共焦显微技术对PHB在核基质中存在、分布及其与凋亡相关基因产物在MG-63细胞中的共定位关系进行了研究。结果 双向凝胶电泳、质谱鉴定和免疫印迹法结果显示,PHB存在于MG-63细胞核基质蛋白组分中,细胞凋亡后在细胞核基质蛋白中表达下调。免疫荧光显微镜观察显示,PHB定位于MG-63细胞核基质纤维上,经姜黄素处理后出现分布位置与表达水平的变化。激光扫描共焦显微镜观察结果显示,PHB在MG-63细胞凋亡过程中与Bax、Bcl-2、Fas、P53、c-Myc和Rb等基因产物具有共定位关系,且共定位区域发生了变化。 结论 PHB是一种核基质结合蛋白;PHB在MG-63细胞凋亡过程中的表达与分布变化,及其与细胞凋亡相关基因的共定位关系,对MG-63细胞凋亡具有重要影响。     

人参皂苷CK对人骨肉瘤细胞U2-OS增殖及迁移能力的影响

目的探讨人参皂苷CK对人骨肉瘤细胞U2-OS增殖及迁移能力的影响。方法将人骨肉瘤细胞U2-OS分为阴性对照组(Control组)和实验组(CK药物组),MTT方法与CCK-8方法检测细胞活性及增殖能力,细胞划痕实验及Transwell实验检测细胞迁移能力,Western blotting检测侵袭相关蛋白MMP-9及MMP-2的表达。结果CK能够显著降低U2-OS细胞体外活性及生存率(P0.05);细胞划痕实验及Transwell法证明CK可抑制U2-OS体外迁移能力(P0.05);CK处理后U2-OS细胞的MMP-9及MMP-2表达水平下调(P0.05)。结论人参皂苷CK对骨肿瘤细胞U2-OS的抑制作用与下调MMP-9及MMP-2表达水平相关。     

miR-21靶向FasL对人骨肉瘤MG-63细胞增殖的调控

目的探讨miR-21是否能够通过靶向抑制FasL基因调控人骨肉瘤MG-63细胞的增殖。方法利用荧光素酶报告基因实验验证FasL基因是否为miR-21的靶基因,应用阳离子脂质体Lipofectamine~(TM)2000将miR-21 mimics或inhibitor转染至MG-63细胞,利用real-time PCR和Western blotting分析转染后MG-63细胞FasL m RNA和蛋白表达的变化,通过MTT法分析转染后MG-63细胞增殖水平变化。结果荧光素酶报告基因实验证实FasL基因为miR-21的靶基因。与对照组相比,转染miR-21 mimics后,MG-63细胞FasL mRNA与蛋白的表达均显著降低,增殖能力明显升高(P0.01);与对照组相比,转染miR-21 inhibitor后,MG-63细胞FasL mRNA与蛋白的表达均显著升高,增殖能力明显降低,P0.01。结论 miR-21可能通过靶向FasL基因促进人骨肉瘤MG-63细胞增殖。     

人骨肉瘤细胞株MG-63中肿瘤干细胞的生物学特性

背景：骨肉瘤干细胞在骨肉瘤的发生、复发及对化疗药物的耐药性中发挥关键作用,而目前关于骨肉瘤干细胞体外分离培养及生物学特性研究的报道甚少。 目的：从人骨肉瘤细胞株MG-63中分离出具有干细胞特征的高致瘤性细胞亚群,检测肿瘤干细胞特异性标志物CD105的表达。 方法：无血清悬浮培养法从人骨肉瘤细胞株MG-63中分离出骨肉瘤细胞球,应用流式细胞术检测细胞球中CD73、CD90、CD105的表达,免疫荧光法检测骨肉瘤细胞株及骨肉瘤细胞球中CD105的阳性率,免疫磁珠法分选出CD105⁺和CD105^-的细胞,传代后分别接种于NOD/SCID小鼠评估其致瘤性。 结果与结论：CD105在球体细胞中高表达,此类肿瘤细胞具有高侵袭性和高致瘤性,在NOD-SCID小鼠中仅需移植1 000个细胞即可形成肿瘤,这些细胞具有自主生长特性,能够在无血清条件下长期培养,CD105⁺骨肉瘤细胞显示了干细胞的生物学特性,CD105可能成为骨肉瘤干细胞的表面标志之一。     

Curcumin inhibits the proliferation and invasion of human osteosarcoma cell line MG-63 by regulating miR-138

Objective: In this study, we screened the different human osteosarcoma cell line MG-63 miRNAs after the treatment of curcumin and explored the effects of curcumin on MG-63 cells and its mechanism. Methods: Affemitrix miRNA chip was used to detect the changes of miRNA expression profile in MG-63 cells before and after curcumin treatment, and screen different expression of miRNAs. The target gene of miRNA was analyzed by bioinformatics. The expression levels of miRNA-138 target genes Smad4, NFκB p65 and cyclin D3 were detected. MTT and Transwell Cell invasion assays were used to observe the effects of curcumin on MG-63 cells. Results: Curcumin could significantly inhibit the proliferation of MG-63 cells and the expression levels of miRNA-138 target genes Smad4, NFκB p65 and cyclin D3 in MG-63 cells (P<0.05); overexpression of hsa-miR-138 down-regulated the expression levels of Smad4, NFκB p65 and cyclin D3 compared with the treatment of curcumin, while inhibition of hsa-miR-138 up-regulated the expression levels of Smad4, NFκB p65 and cyclin D3. Conclusions: Curcumin could increase the expression of hsa-miR-138, hsa-miR-138 inhibited cell proliferation and invasive ability by inhibition of its target genes.     

分化抑制因子Idl对骨肉瘤细胞增殖的影响

目的探讨分化抑制因子Idl对骨肉瘤细胞增殖的影响及可能的途径。方法采用四甲基偶氮唑蓝（MTY）法检测Idl表达调节后MG．63细胞增殖变化情况;采用流式细胞术检测Idl下调表达后,MG．63细胞凋亡及细胞周期变化情况;Westemblotting技术检测Idl下调表达后对p-AKT水平的影响。结果本实验利用RNA干扰技术下调骨肉瘤细胞系Idl表达后,可以明显抑制MG．63细胞的增殖,p-AKT的水平也显示下降,流式细胞术证明下调后Idl的水平可以一定程度地调节细胞凋亡水平,而对细胞周期无明显影响,另外进一步构建了Idl的真核表达质粒,转染Idl过表达质粒后。并未见骨肉瘤细胞明显地增殖加速。结论分化抑制因子Idl可能通过影响AKT信号通路进而影响了骨肉瘤细胞的增殖。     

抑制survivin基因的表达对骨肉瘤细胞株U-2OS凋亡的影响

目的：观察抑制survivin基因表达后对骨肉瘤细胞株U-2OS凋亡的影响。方法：下调骨肉瘤细胞株U-2OS中survivin的表达,并采用免疫印迹法(western blot)和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测U-2OS细胞株中survivin的蛋白和mRNA表达;同时采用甲基偶氮哇盐(MTT)法、流式细胞术和western blot检测下调survinin对化疗药物顺铂增加细胞凋亡和减少存活率作用的影响,并探讨其对抗凋亡分子Bcl-2以及促凋亡分子Bax的蛋白表达的作用。结果：survivin-siRNA成功转染U-2OS细胞株后,western blot和RT-PCR检测结果均显示U-2OS细胞株中survivin的蛋白和mRNA表达水平显著低于空白对照组(P<0.05);MTT比色法结果显示下调survivin可促进化疗药物顺铂对U-2OS细胞株存活率降低及生长抑制率增加的作用;western blotting检测结果表明,与空白对照组相比,Bcl-2的蛋白表达显著减少(P<0.05),而Bax的蛋白表达显著增加(P<0.05)。结论：下调survivin基因表达可促进骨肉瘤U-2OS细胞株的凋亡,并增加其对化疗药物顺铂的敏感性,为以survivin作为靶基因治疗骨肉瘤提供实验依据。     

辣椒素诱导人骨肉瘤细胞MG-63发生免疫原性细胞死亡

目的探讨辣椒素与顺铂能否抑制人骨肉瘤细胞MG-63增殖并诱导其免疫原性死亡(ICD)。方法 MTT检测细胞的增殖;线粒体膜电位分析细胞凋亡;流式细胞计量术检测细胞膜上钙网蛋白(CRT)表达量;荧光素酶法检测细胞外ATP的释放;ELISA检测细胞上清中高迁移率族蛋白1(HMGB1)的分泌。结果辣椒素及顺铂作用均能抑制细胞MG-63增殖(P0.01),且呈剂量依赖性;辣椒素和顺铂均可诱导MG-63细胞凋亡(P0.01),但只有辣椒素能诱导MG-63细胞内质网中CRT转移到细胞膜表面,且促进ATP及HMGB1的释放(P0.01)。结论辣椒素可诱导人骨肉瘤细胞凋亡及免疫原性死亡。