miR-193b体外协同增强多柔比星对乳腺癌细胞的抗肿瘤效应

目的:研究微小RNA(microRNA,miR)-193b是否能增强多柔比星对乳腺癌细胞的杀伤效力及机制。方法:用real-time PCR方法检测乳腺癌患者及健康对照者血浆中的miR-193b表达水平。MTT法检测miR-193b联合多柔比星对乳腺癌细胞系MDA-MB-231的杀伤效力。利用生物信息学、real-time PCR及Western blot方法验证miR-193b是否调节乳腺癌细胞Mcl-1的表达。构建Mcl-1真核表达载体,MTT法检测Mcl-1表达载体转染对miR-193b联合多柔比星治疗乳腺癌疗效的影响。结果:乳腺癌患者血浆中miR-193b表达水平显著低于对照组。miR-193b联合多柔比星治疗组对MDA-MB-231细胞的杀伤效力显著高于多柔比星单治疗组。miR-193b转染后,MDA-MB-231细胞Mcl-1的mRNA及蛋白表达水平均下降。miR-193b联合多柔比星在Mcl-1表达载体转染后对MDA-MB-231细胞的杀伤活性显著低于未转染Mcl-1表达载体的miR-193b联合多柔比星组。结论:miR-193b通过靶向于Mcl-1增强多柔比星对乳腺癌细胞的杀伤效力。     

miR-193b与子宫内膜癌临床病理表现的关系及其对化疗敏感性的影响研究

目的 研究miR-193b在子宫内膜癌组织中的表达,以及其与临床病理参数的关系,并探讨其对子宫内膜癌Ishikawa细胞紫杉醇化疗敏感性的影响。方法 检测68例子宫内膜癌组织中miR-193b的表达水平,以60例正常子宫内膜组织作为对照组,探讨其表达与子宫内膜癌临床病理资料的关系。设计miR-193bsiRNA及miR-193b利用脂质体2000转染入细胞内,并通过real-timePCR检测其转染效率,利用MTT法体外划痕实验验证miR-193b联合紫杉醇对肿瘤细胞的杀伤效力,利用生物信息学、real-time PCR和Western blot方法验证miR-193b是否调节子宫内膜癌细胞Mcl-1的表达。构建Mcl-1真核表达载体,MTT法和流式细胞术检测Mcl-1表达载体转染对miR-193b联合紫杉醇治疗子宫内膜癌疗效的影响。结果 与正常子宫内膜组织相比较,miR-193b在子宫内膜癌组织中表达下调（P<0.05）。不同临床肿瘤分期、病理分级、肌层浸润深度子宫内膜癌患者miR-193b表达水平分别比较,差异均具有统计学意义（P<0.05）,而不同年龄、淋巴转移、脉管...     

miR-92a与miR-19b对小鼠胰岛β细胞胰岛素基因表达的影响

目的:探讨微小RNA-92a(miR-92a)和微小RNA-19b(miR-19b)对小鼠胰岛β细胞胰岛素基因表达的影响。方法:qPCR检测小鼠胰岛素瘤MIN6细胞内源性miR-92a和miR-19b的相对表达水平。将MIN6细胞分为对照组及实验Ⅰ、Ⅱ组(每组n=3),分别转染阴性对照miRNA(NC)、miR-92a和miR-19b,qPCR验证miRNAs的过表达,光学显微镜观察细胞形态,CCK8法检测细胞活力,qPCR、Western blot及免疫荧光检测胰岛素表达情况,生物信息学预测、双萤光素酶报告基因实验和Western blot分析miR-92a和miR-19b调控胰岛素表达的可能机制。结果:与成体胰腺祖细胞相比,MIN6细胞内源性miR-92a和miR-19b相对表达量显著降低(P<0.05);过表达miR-92a和miR-19b对MIN6细胞活力没有影响,但抑制胰岛素mRNA和蛋白表达;miR-19b显著抑制NeuroD1 3’UTR萤光素酶活性和NeuroD1蛋白表达(P<0.05),而miR-92a对NeuroD1 3’UTR萤光素酶活性和NeuroD...     

miR-145过表达对宫颈癌细胞辐射敏感性的影响

目的:探讨微小RNA(miR)-145过表达增强宫颈癌细胞放疗敏感性的分子机制。方法:运用Lipofectamine 2000将miR-145-mimic转染4株宫颈癌细胞系He La、Ca Ski、C33A和Si Ha,以NC-mimic为阴性对照,并以real-time PCR检测子宫内膜基质细胞(ESC)和4株宫颈癌细胞中miR-145的表达水平;转染的细胞经电离辐射照射后于不同时点运用MTT法和Annexin V-FITC/PI染色法联合流式细胞术分别测定细胞活力和细胞凋亡率;运用免疫荧光检测组蛋白γH2AX的表达水平;Western blot检测细胞中螺旋酶样转录因子(HLTF)的蛋白表达水平。结果:miR-145在ESC中高表达,而在4株宫颈癌细胞中均呈低表达,转染miR-145-mimic后4株宫项癌细胞中miR-145的表达水平显著高于NC-mimic组细胞(P0.05)。相同条件下,辐照后miR-145过表达的宫颈癌细胞的活力显著低于NC-mimic组细胞,72 h的细胞凋亡率明显增加(P0.05)。免疫荧光观察结果显示miR-145过表达显著促进电离辐射诱导的γH2AX激活;Western blot结果显示,miR-145过表达显著抑制HLTF的表达,与NC-mimic比较差异有统计学意义(P0.05)。结论:miR-145在正常子宫内膜上皮细胞中高表达,而在宫颈癌细胞系中低表达;miR-145过表达可显著抑制宫颈癌细胞的活力,促进电离辐射诱导的细胞凋亡。miR-145过表达增强宫颈癌细胞的辐射敏感性,其机制可能与下调HLTF表达、抑制DNA损伤修复、促进细胞凋亡有关。     

血清miR-181b和miR-27a表达与颈动脉粥样硬化程度相关

目的 分析血清微小RNA(miR)-181b、miR-27a表达与颈动脉粥样硬化(CAS)病变程度的关系.方法 选取血脂异常患者102例,健康人100名为对照组,RT-qPCR检测血清miR-181b和miR-27a的表达.对比血脂异常患者与对照组血清miR-181b、miR-27a表达差异,分析血脂异常患者发生CAS...     

血浆miR-193b和miR-199a在食管癌诊治中的临床价值

目的 探讨miRNA-193b和miRNA-199a在血浆中的表达对食管鳞癌的诊治价值.方法 选取2014年9月至2015年6月之间食管鳞癌患者56例,同期健康体检者30例.采用qRT-PCR技术(TaqMan探针法)检测食管鳞癌患者和健康者血浆中miRNA-193b、miRNA-199a的表达水平,以及检测食管鳞癌患者术前、术后1w血浆中miRNA-193b、miRNA-199a的表达水平,并结合临床病理资料,探讨它们与食管鳞癌的关系.结果 食管鳞癌患者血浆中miR-193b和miR-199a的表达量均明显低于健康体检者(P＜0.05);食管癌患者术后血浆中miR-193b和miR-199a的表达量均明显高于术前(P＜0.05);血浆中miR-193b的表达与肿瘤TNM分期有关(t=-5.332,P=0.000),表现为随着TNM分期越晚,表达逐渐下调的趋势,与患者年龄、性别、肿瘤分化程度、淋巴结转移无明显关联(P＞0.05).miR-199a的表达与肿瘤分化程度、肿瘤TNM分期、淋巴结转移有关(P＜0.05),表现为随着分化程度越低、TNM分期越晚和出现淋巴结转移,表达逐渐下调的趋势,而与患者年龄、性别无明显关联(P＞0.05).结论 miRNA-193b、miRNA-199a在食管鳞癌患者血浆中表达下调,可能作为抑癌基因参与食管鳞癌的发生发展.     

联合靶向阻断miR-29b/92b/106b抑制胃癌细胞生长及迁移

目的:本研究旨在寻找胃癌转移相关微小RNA(microRNA,miRNA,miR),揭示其对胃癌细胞生物学功能的影响,并探讨联合阻断候选miRNA在胃癌治疗中的临床应用价值。方法:收集发生淋巴结转移及无转移患者的胃癌标本各3例,采用miRNA表达芯片筛选转移相关的候选miRNA;将锁核酸修饰的候选miRNA的反义寡核苷酸转染BGC-823胃癌细胞株,运用CCK-8法、流式细胞术、划痕实验及Transwell迁移实验分析候选miRNA抑制前后胃癌细胞生物学功能的变化;构建多西环素诱导多重靶向候选miRNA的裸鼠移植瘤模型,观察联合靶向阻断候选miRNA后,肿瘤细胞体内生长情况。结果:miRNA表达芯片发现miR-29b、miR-92b及miR-106b在发生淋巴结转移患者的胃癌组织最高,并将它们确定为胃癌转移相关候选miRNA;分别在BGC-823细胞中抑制上述miRNA,可导致细胞活力减弱,凋亡诱导增加,迁移能力显著下降(P 0. 05);同时,体内联合阻断miR-29b/92b/106b,裸鼠移植瘤的形成较对照组显著减少。结论:miR-29b、miR-92b及miR-106b与胃癌细胞的迁移有关,联合阻断上述miRNA可明显抑制胃癌细胞体内外生长。这3个miRNA可能作为潜在的治疗靶点。     

miR-30b在高磷诱导的大鼠血管平滑肌细胞钙化中的作用

目的:观察微小RNA-30b(miR-30b)在高磷诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)钙化中的作用及其机制.方法:将SD大鼠随机分为假手术(sham)组和慢性肾衰竭所致血管钙化(CRF+VC)组.采用硝酸银染色检测血管钙化情况;免疫组织化学法检测成骨转录因子Runx2的表达.体外培养原代大鼠胸主动脉VSMCs并分为...     

In situ hybridization analysis of the expression of miR-106b in colonic cancer

Background: MicroRNA-106b (miR-106b) is thought to be an oncogenic microRNA that promotes tumor growth and metastasis. The potential predictive value of miR-106b was studied in colonic cancer patients. Methods: The expression of miR-106b was examined in 180 colonic cancer cases using in situ hybridization (ISH) technique and was evaluated semi-quantitatively by examining the staining index. The Correlation of miR-106b expression and clinic-pathological features was analyzed by Spearman Rank Correlation. Wilcoxon signed rank test was used for assessing the expression difference of miRNA-106b between colonic cancerous and para-cancerous ones, and their effects on patient survival were analyzed by a log-rank test and the Kaplan-Meier method. Results: MiR-106b was higher expressed in para-cancerous tissues, compared with colonic cancerous ones (P < 0.001). A positive correlation of miR-106b levels between colonic and para-cancerous tissues was also observed (CC = 0.523, P < 0.001). Furthermore, the expression of miR-106b was not significantly correlated with clinic-pathological parameters, including gender, age, histological grade, tumor size, pT stage, pN stage, pM stage and pTNM stage of the patients. Histological grade was positively correlated with pT stage (P = 0.011), pN stage (P = 0.036) and pTNM stage (P = 0.009). Patients expressing high levels of miR-106b both in colonic cancer tissues and para-cancerous ones have a relatively longer survival time but the difference is not statistically significant (P = 0.16). Conclusions: The expression difference of miR-106b levels between colonic tissues and para-cancerous tissues is statistically significant, but the miR-106b levels were not quite correlated with clinic-pathological characteristics and overall survival times of patients with colonic cancer. Lower levels of miR-106b may be connected with neoplastic effects due to interference with TGF-β signaling, providing evidence that down-regulation of miR-106b might also play an important role in the progression of the disease. The study results are consistent with the literature and support the notion that miR-106b is an oncogenic microRNA.     

miR-1246增强宫颈癌细胞辐射敏感性的分子机制研究

目的:探讨微小RNA-1246(miR-1246)过表达增强宫颈癌细胞放疗敏感性的分子机制。方法:运用脂质体2000将miR-1246模拟物(miR-1246 mimic)转染4种宫颈癌细胞系He La、Ca Ski、C33A和Si Ha,以阴性对照模拟物(NC-mimic)为阴性对照。Real-time PCR检测宫颈癌组织、正常组织、子宫内膜上皮细胞系ESC和4株宫颈癌细胞中miR-1246的表达水平;转染的细胞经电离辐射照射后运用MTT法和Transwell法分别测定细胞活力和细胞迁移能力;运用免疫荧光法检测γH2AX表达水平;Western blot检测细胞中γH2AX、ATM、p-ATM和p-p53的蛋白水平。结果:miR-1246在正常组织和ESC细胞中高表达,而在4株宫颈癌细胞和宫颈癌组织中低表达;转染miR-1246 mimic后miR-1246表达水平显著高于NC-mimic组细胞(P 0. 05)。相同条件下,辐照后miR-1246过表达组宫颈癌细胞活力显著低于NC-mimic组,细胞迁移率明显降低(P 0. 05)。免疫荧光结果显示,miR-1246过表达显著增强电离辐射诱导的γH2AX激活(P 0. 05);Western blot结果显示,与NC-mimic组比较,miR-1246过表达显著促进电离辐射诱导γH2AX蛋白的表达,减低p-ATM和p-p53的蛋白水平(P 0. 05)。结论:miR-1246在正常组织和子宫内膜上皮细胞中高表达,而在宫颈癌组织和宫颈癌细胞系中低表达;miR-1246过表达抑制宫颈癌细胞活力和迁移能力,并可能通过阻断ATM通路、抑制DNA损伤修复而增强宫颈癌细胞的辐射敏感性。     

miR-30c抑制宫颈癌细胞恶性表型的分子机制研究

目的:探讨微小RNA(miR)-30c过表达抑制宫颈癌细胞恶性表型的分子机制。方法:运用Lipofectamine 2000转染法将pGenesil-1-miR-30 c质粒转染宫颈癌细胞系C33A、HeLa、SiHa和CaSki,以转染p-Geresil-1的细胞为阴性对照;运用TaqMan real-time PCR检测各组细胞中miR-30c的表达水平;采用MTT法、集落形成实验、Transwell法、Annexin V-FITC及流式细胞术分别测定细胞活力抑制率、集落形成能力、迁移率及凋亡率;Western blot检测Bax、Bcl-2、基质金属蛋白酶(MMP)-9、MMP-13和金属蛋白酶组织抑制物1(TIMP-1)的蛋白表达水平。结果:转染p Genesil-1-miR-30c质粒的宫颈癌细胞系中miR-30c表达水平均显著高于阴性对照组(P0.01);过表达miR-30 c的宫颈癌细胞活力抑制率显著高于阴性对照组(P0.05),细胞集落形成率和迁移率显著低于阴性对照组(P0.05);流式细胞术检测结果显示,miR-30c过表达的宫颈癌细胞凋亡率显著高于对照组(P0.05);Western blot结果显示miR-30 c过表达促进Bax和TIMP-1蛋白的表达,而抑制Bcl-2和MMP-13蛋白的表达(P0.05或P0.01)。结论 :miR-30 c过表达抑制宫颈癌细胞活力和迁移,诱导宫颈癌细胞凋亡,其机制与激活细胞凋亡通路及抑制MMP-13表达有关。     

ACTL6A在宫颈癌中的表达及意义

目的:探讨ACTL6A在宫颈癌中的表达及意义.方法:收集2012年1月至2015年1月间我院收治的93例宫颈癌患者的癌组织和癌旁组织石蜡标本,采用免疫组化法测定ACTL6A表达情况,分析其与临床病理参数及预后之间的关系.应用多因素Cox回归分析预测不良事件的指标.结果:ACTL6A在宫颈癌癌组织阳性表达率(63.5％)...     

利用TCGA数据库分析miR-196b在结直肠癌患者中的临床表达特征并探索miR-196b的体外抗5-FU作用

目的:研究微小RNA(miR)-196b在结直肠癌患者中的表达及其临床意义,探讨过表达miR-196b的结直肠癌细胞对5-氟尿嘧啶(5-FU)的敏感性。方法:在癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)公共数据库下载结直肠癌患者miRNA测序数据及其对应的临床病理资料,运用SPSS 17.0分析miR-196b在结直肠癌患者中的表达水平以及临床特征;采用瞬时转染的方法在人结直肠癌HCT116细胞中过表达miR-196b,并用MTS法分析过表达miR-196b的细胞对5-FU药物敏感性的变化。结果:miR-196b高表达与结直肠癌患者淋巴结转移及TNM分期相关(P0.05),与年龄和性别等无相关性。淋巴结转移和远处转移是直肠癌患者生存的独立影响因子(P0.05),miR-196b的表达水平与患者生存状况无关。过表达miR-196b的HCT116细胞在不同浓度的5-FU作用下,细胞存活率均明显高于对照组(P0.05)。结论:miR-196b可能是结直肠癌患者肿瘤分期和淋巴结转移的分子标志物,并可降低结直肠癌细胞对5-FU的敏感性。