乙醇对豚鼠单个心房肌细胞L-型钙通道的影响

目的： 采用膜片钳全细胞记录方法，观察乙醇对分离的豚鼠单个心房肌细胞L-型钙电流（ICa.L）的影响。方法： 使用酶解方法获得豚鼠单个心房肌细胞，采用全细胞膜片钳记录技术观察不同浓度乙醇急性干预对ICa.L电流-电压曲线、激活曲线、失活曲线的影响。结果： 急性乙醇干预下，ICa.L的I-V曲线发生了变化，而失活曲线未发生变化，激活曲线仅在80mmol/L的时候发生了变化。在乙醇浓度≤45 mmol/L时可抑制ICa.L，而在≥50 mmol/L时可明显增大ICa.L，在45 mmol/L-50 mmol/L之间这两种作用发生了突然的转换。结论： 乙醇对于ICa.L的影响作用基本为非电压依赖性，但具有浓度依赖性，不同浓度的乙醇可对ICa.L产生不同甚至相反的作用，这有助于解释房颤和房扑之间的关系。     

缝隙连接蛋白43通过调控L型钙电流参与心房肌细胞的电重塑

目的:观察缝隙连接蛋白43(Cx43)是否通过与L型钙通道共定位,调控L型钙电流,参与房颤(AF)的发病机制。方法:使用蛋白免疫印迹和实时荧光定量PCR检测AF和窦性心律患者心房组织中Cx43的蛋白和mRNA表达差异;用RNA干扰技术沉默心房肌细胞的Cx43表达,实时荧光定量PCR和全细胞膜片钳实验观察对L型钙通道mRNA表达和L型钙电流的影响;免疫共沉淀和激光共聚焦显微成像观察心房肌细胞中Cx43与L型钙通道是否存在共定位。结果:AF患者心房组织中的Cx43表达明显低于窦性心律患者;干扰Cx43表达可明显抑制L型钙电流和L型钙通道α1c亚基的mRNA表达;且心房肌细胞中Cx43与L型钙通道存在共定位。结论:心房肌细胞中的Cx43可通过与L型钙通道形成分子复合物,调控L型钙电流,参与心房肌细胞的电重塑。     

血小板活化因子对豚鼠心室肌细胞钾电流及动作电位的影响

 目的：研究血小板活化因子(PAF)对豚鼠心室肌细胞钾电流及动作电位的影响。 方法:应用全细胞膜片钳技术，记录豚鼠心室肌细胞动作电位及钾电流(I_K 与I_K1)。 结果:当电极内液ATP浓度为5 mmol/L，1 μmol/L PAF使APD₉₀由对照的(225.8±23.3)ms延长至(352.8±29.8)ms(n=5, P<0.05)；使I_K尾电流在指令电压 +30 mV 时由对照的(173.5±16.7)pA降为(152.1±11.5)pA(P<0.05, n=4)；使I_K1在指令电压 -120 mV 时从(-6.1±1.3)nA降为(-5.6±1.1)nA(P<0.05, n=5)；当电极内液ATP 为0 mmol/L，APD₉₀明显缩短，1 μmol/L PAF使APD₉₀由对照的(153.0±24.6)ms缩短为(88.2±19.4)ms (n=5, P<0.01)，而用1 μmol/L格列本脲 ( I_KATP特异性阻滞剂)预处理后，恢复了PAF可显著延长动作电位时程的作用。 结论: PAF使缺血区K_ATP开放，动作电位时程缩短，却可抑制正常区I_K 与I_K1，使动作电位延长，从而放大了缺血区与正常区的不均一性，这可能与缺血时心律失常的发生有关。     

牵张刺激对乳大鼠心房肌细胞瞬时外向钾电流和内向整流钾电流的影响

 目的：探究牵张刺激对乳鼠心房肌细胞瞬时外向钾电流（Ito）、内向整流钾电流（IK1）和动作电位时程（APD）的影响。方法：取1日龄SD乳大鼠心脏,分离、消化获得心房肌细胞。于细胞牵引装置培养24 h分组：对照组不予牵张刺激;牵张组予增加12%硅胶膜面积牵张刺激24 h。膜片钳全细胞记录方法记录细胞膜Ito、IK1和APD的变化。结果：在+60 mV刺激电压水平,牵张组Ito密度与对照组相比明显降低［(16±04）pA/pF vs (121±29) pA/pF,P<001］。在-120 mV刺激电压下,牵张组IK1密度较对照组增大［（-108± 08） pA/pF vs (-88±09)pA/pF,P<001］。牵张组动作电位复极50%（APD50）和复极90％（APD90）均较对照组明显缩短［(105±14）ms vs (155±24) ms,(300± 28) ms vs (563±36) ms,P<001］。结论：牵张刺激可降低乳大鼠心房肌细胞Ito密度,增大IK1密度,缩短APD,这可能是压力负荷增大致心房电重构的基础之一。     

胡椒碱减轻H2O2 引起的兔心房肌细胞内向整流钾电流及超速激活延迟整流钾电流的异常改变

目的: 研究胡椒碱对H₂O₂引起的兔单个心房肌细胞内向整流钾电流(I_K1)及超速激活的延迟整流钾电流(I_KUr)异常的影响。方法: 采用全细胞膜片钳技术分析50 μmol/L H₂O₂对兔单个心房肌细胞I_K1和I_KUr的影响,并研究预先应用7 μmol/L胡椒碱对其的保护作用。结果: 7 μmol/L胡椒碱对正常兔心房肌细胞I_K1和I_KUr及其通道动力学无显著影响。在50 μmol/L H₂O₂作用下,兔心房肌细胞I_K1峰值由(-148.2±16.7)pA/pF降低至(-64.2±9.8)pA/pF (P<0.05),电流-电压曲线上移;而I_KUr峰值由(16.0±2.1)pA/pF降低至(6.1±1.4)pA/pF (P<0.05),电流-电压曲线下移,通道稳态激活曲线右移,通道稳态失活曲线左移及恢复时间减慢,而且存在频率依赖性特征。预先给予7 μmol/L胡椒碱,明显减轻H₂O₂对I_K1和I_KUr的抑制作用(P<0.01),并可减少H₂O₂对超速激活延迟整流钾通道动力学的异常影响。结论: 胡椒碱可减轻氧化应激对心房肌细胞I_K1和I_KUr的影响。     

TNFα对单个大鼠心室肌细胞L型钙电流的影响

目的探讨TNFα对心肌细胞L型钙电流的影响。方法分离大鼠单个心室肌细胞,用全细胞膜片钳方法检测TNFα对单个心室肌细胞L型钙电流的影响。结果 TNFα使单个大鼠心室肌细胞L型钙电流持续增强,促进细胞外钙离子持续向细胞内流动。结论 TNFα与感染性休克心脏收缩性改变相关。     

三七总皂甙对豚鼠心房肌细胞电生理特性的影响

目的： 研究三七总皂甙(panax notoginseng saponins,PNS)对离体豚鼠左心耳心肌细胞(left atrial appendage,LAA)电生理特性的影响, 以探讨其抗心律失常的作用机制。方法：应用标准玻璃微电极细胞内记录技术,记录不同浓度PNS灌流时,离体豚鼠左心耳心肌细胞的动作电位(action potential,AP)和有效不应期(effective refractory period,ERP)。结果：0.7、7、70、700 mg/L PNS在灌流20 min时作用最突出,与对照组比较7 mg/L PNS灌流20 min时的动作电位时程(action potential duration, APD) APD80,70 mg/L灌流20、30、40 min时APD50和APD80均明显延长（P<0.05）。0.7-700 mg/L 4个浓度组的PNS灌流20min时豚鼠心房肌细胞的静息电位(rest potential,RP)、动作电位幅度(action potential amplitude,APA) 和0相最大除极速率(Vmax)无明显变化。7 mg/L和70 mg/L的PNS灌流20min能明显延长心房肌细胞的ERP,与对照组比较由（127.00±7.26）ms分别延长为（153.00±9.19）ms和(161.00±10.21)ms,P<0.01。而在7 000 mg/L高浓度时,灌流10 min以后即出现心律失常现象。结论：一定浓度的PNS能延长豚鼠心房肌细胞的APD和ERP,与胺碘酮(amiodarone)相似,这可能是其抗心律失常的作用机制。     

丹参酮ⅡA对豚鼠肥厚心肌延迟整流钾通道的影响

目的: 通过研究丹参酮ⅡA(TSN)对豚鼠肥厚心肌细胞快激活延迟整流钾电流(I_Kr)和慢激活延迟整流钾电流(I_Ks)的影响,在离子通道水平探讨丹参酮ⅡA抗肥厚心肌心律失常的机制。方法: 采用腹主动脉结扎技术制造心肌肥厚模型,将豚鼠随机分为假手术组(A组)、肥厚模型组(B组)、低剂量丹参组(C组,10 mg·kg^-1·d^-1)、高剂量丹参组(D组,20 mg·kg^-1·d^-1)和缬沙坦治疗组(E组,10 mg·kg^-1·d^-1),每组12只。通过应用标准的全细胞膜片钳技术记录各实验组心肌细胞膜上动作电位时程(APD)、I_Ks和I_Kr密度的变化。结果: (1)与A组相比,B组、C组、D组和E组手术后4周血压均明显升高,差异有显著差异(P＜0.01),B、C、D和E组间血压无显著差异(P＞0.05)。(2)与A组相比,B组心肌细胞的膜电容明显升高,APD显著延长(P＜0.01)。 (3)与B组相比,C、D和E组显著缩短肥大心肌细胞APD的延长,降低膜电容和阻断心肌细胞上I_Kr、I_Ks的密度(P＜0.01);C和D组间无显著差异(P＞0.05)。结论: 丹参酮Ⅱ-A能降低肥厚心肌细胞上I_Kr 和I_Ks的密度,可能是其干预肥厚心肌电生理异常的重要机制之一。     

四氢巴马汀及其衍生物对豚鼠心房单细胞外向钾电流的影响

四氢巴马汀及其衍生物对豚鼠心房单细胞外向钾电流的影响李玉荣，杜智敏，孙逾，徐春，杨宝峰，孙明智（哈尔滨医科大学生理教研室，哈尔滨１５００８６）中药四氢巴马汀（ＴＨＰ）具有抗心律失常作用，但其疗效较弱，且具有一定的毒、副作用。多年来，人们试图通过改构或...     

急性坏死性胰腺炎对心室肌细胞钠和钙离子电流的影响

目的:研究急性坏死性胰腺炎(ANP)后心室肌细胞钠通道电流(I_Na)、L-钙通道电流(I_Ca-L)活性的变化。方法:采用牛磺胆酸钠逆行胰胆管注射建立鼠的ANP动物模型,应用膜片钳全细胞记录方法,观察ANP后1 h心肌细胞I_Na、I_Ca-L的变化。结果:I_Na和I_Ca-L电流-电压关系曲线在ANP组较对照组明显上移。ANP组I_Na电流密度峰值(-30 mV)为(12.45±2.26)pA／pF(n=16),明显低于假手术组(25.32±3.31)pA/pF(n=14),P<0.01;ANP组I_Ca-L电流密度峰值(+10 mV)为(3.63±0.65)pA／pF(n=16),显著低于假手术组(5.46±1.03)pA／pF(n=12),P<0.01。结论:ANP可导致心室肌细胞I_Na和I_Ca-L下降,引起心肌传导速度下降和动作电位时程缩短,可能是导致ANP后出现心律失常的原因。     

氧化苦参碱对豚鼠心室肌细胞膜钠通道的影响

目的：研究氧化苦参碱(Oxy)对豚鼠心室肌细胞膜钠通道电流的影响，探讨Oxy在离子通道水平的作用机制。 方法: 用急性酶解法分离豚鼠心室肌细胞，应用膜片钳全细胞记录技术，观察不同浓度的Oxy对钠通道的影响。 结果: 用Oxy 1、10、100、1 000 μmol/L可浓度依赖性地抑制钠电流。在100 μmol/L时，给药后电流密度抑制约40％（P<0.01），可使心肌细胞钠电流－电压曲线上移，但激活电位、峰电位及反转电位无改变；Oxy使失活曲线向负电位方向变化，并使灭活后恢复过程延迟；对激活曲线无明显影响。 结论: Oxy可通过浓度依赖性和电压依赖性地抑制心肌细胞膜钠通道电流。     

抗大鼠心室肌细胞L-型钙通道亚单位抗体的制备与验证

目的：用人工合成的大鼠心室肌细胞L-型钙通道4个亚单位的抗原表位短肽免疫家兔，产生可识别该通道不同亚单位的特异性抗体，并进行验证。方法：从大鼠心室肌细胞L-型钙通道4个亚单位的氨基酸序列中筛选出三段短肽，进行人工合成。用化学合成的多肽与破伤风类毒素（TT）以戊二醛法连接，并以此作为抗原免疫家兔制备抗大鼠心室肌细胞L-型钙通道的免疫血清，经分离纯化获得抗体。抗体的验证通过ELISA，Western blot，免疫荧光组织化学技术进行检测。结果：所制备的抗大鼠心室肌细胞L-型钙通道α1c、β2和α2/δ俗亚单位的抗体滴度分别为1：51200—1：102400、1：1280和1：1280，3个抗体结合到大鼠心肌细胞膜蛋白的分子量分别为235、89和162kD。免疫荧光组织化学实验显示，抗体均能特异性的结合在培养大鼠心室肌细胞膜上。结论：所制备的抗大鼠心室肌细胞L-型钙通道亚单位抗体能特异性识别大鼠心室肌细胞膜上L-型钙通道的不同亚单位。     

大蒜素对心室肌细胞膜钠通道电流的影响

目的: 研究大蒜素对心室肌细胞膜钠通道电流(I_Na)的影响,探讨大蒜素在离子通道水平的药理作用机制。方法: 用急性酶解法分离大鼠心室肌细胞,应用膜片钳全细胞记录技术,观察不同浓度的大蒜素对钠通道的影响。结果: (1)快钠通道电流:大蒜素对豚鼠心室肌细胞I_Na呈电压依赖性和浓度依赖的抑制作用。(2)大蒜素对I_Na电流密度-电压关系(I-V)曲线的影响:给药前I_Na电流密度在膜电位-40 mV达到最大峰值为(-13.41±6.95)pA/pF;在500 μmol/L灌流法给药后,电流密度最大峰值为(-8.53±3.70)pA/pF,给药后电流密度减少约48%。给药前后电流密度变化有显著差异(P<0.01)。(3)大蒜素对I_Na激活-失活曲线的影响:在大蒜素500 μmol/L灌流法给药后,激活曲线显示给药前后半数激活电压为(-44.72±15.61) mV vs (-45.66±17.86)mV,斜率因子为-2.7±0.8 vs -2.2±0.7,给药前后变化无显著差异。失活曲线显示大蒜素使失活曲线向负电位方向变化,差异显著;半数失活电压为(-88.61±9.60) mV vs(-103.03±8.90) mV(P<0.01),斜率因子为-7.85±0.88 vs -7.55±2.75(P>0.05)。结论: 大蒜素可浓度依赖性和电压依赖性地抑制心肌细胞膜钠通道电流;给药后I-V曲线上移,显著减少电流密度;其对失活曲线有明显影响,提示大蒜素主要作用于钠通道的失活态。     

活性氧对豚鼠心室肌细胞不同钾通道离子电流的影响

目的：揭示年头自由基导致跨膜电位变化的离子电流基础。方法：采用全细胞膜片钳技术,观察了Ｈ２Ｏ２（１ｍｍｏｌ／Ｌ）对豚鼠单个心室肌细胞不同钾通道影响。结果：Ｈ２Ｏ２使习心肌细胞静息电位（ＲＰ）降低,动作电位时程（ＡＰＤ）显著缩短的同时,明显抑制超极化时的内向整流钾电流（Ｉｋ１）,致（Ｉｋ１）正常呈Ｎ字型Ｉ－Ｖ曲 成一条斜线;增强延迟整流钾电流（ＩＫ）的快组分（ＩＫＲ）和慢组分（ＩＫＡ）,尤其ＩＫＲ２     

Tetrodotoxin differentially blocks peak and steady-state sodium channel currents in early embryonic chick ventricular myocytes

Single ventricular myocytes were dissociated from 3-day-old embryonic chick hearts and maintained in culture for 9–21 h. The whole-cell patch clamp method was used to record tetrodotoxin (TTX)-sensitive fast Na⁺ currents. The peak Na⁺ current recorded at –20 mV ranged from 10 to 70 A/cm². At more negative potentials, a component of the current decayed very slowly, resulting in a significant steady-state or late Na⁺ current. The origin of the late Na⁺ current was revealed through the examination of single Na⁺ channel currents recorded in outside-out membrane patches. The single Na⁺ channel conductance was 20 pS. A high percentage of the trials ( 16%) displayed multiple reopenings of a single Na⁺ channel, resulting in bursts of current lasting for 150 ms. The frequency distributions of the Na⁺ channel open-times were bi-exponential. The burst-like mode of Na⁺ channel activity (which underlies the slowly- or non-inactivating currents recorded macroscopically), was blocked to a greater degree by TTX, compared to the peak current. The results suggest that differential blockade may occur as a result of the slow binding and increased affinity of TTX to the open Na channel.     

心肌肽素对豚鼠心室肌细胞钠通道的影响

目的： 研究心肌肽素对豚鼠心室肌细胞钠通道的影响，探讨心肌肽素在离子通道水平的作用机制。 方法： 用急性酶解分离法获得豚鼠心室肌细胞，标准全细胞膜片钳技术记录钠电流(I_Na)。 结果： 心肌肽素1、5、10、50、100、500 mg/L使豚鼠心室肌细胞I_Na分别减少(0±1)%、(6±2)%、(10±2)%、(15±1)%、(22±9)%、(30±6)%，呈浓度依赖性抑制I_Na。心肌肽素50 mg/L使I_Na激活时间(TTP)从(2.8±0.7) ms延长至(3.0±0.8) ms (P<0.05)；使I_Na电流密度-电压曲线上移，但不改变激活电位、峰电位、反转电位和I-V曲线的形状；不影响稳态激活曲线、稳态失活曲线和稳态失活后恢复曲线。 结论： 心肌肽素浓度依赖性抑制豚鼠心室肌细胞I_Na，可能是其抗心律失常作用的机制之一。