内皮祖细胞培养上清对高氧暴露新生大鼠肺结构的改善作用

目的:研究内皮祖细胞培养上清(endothelial progenitor cell-conditioned medium,EPC-CM)对高氧暴露新生大鼠肺损伤时肺泡结构的改善作用及其机制。方法:从新生SD大鼠骨髓中获取内皮祖细胞并鉴定,收集第3代细胞的培养上清备用。另取新生SD大鼠40只随机分为4组,即空气组:仔鼠在空气(21%O_2)中喂养21天;高氧组:仔鼠在85% O_2中喂养21天;内皮细胞基础培养基(endothelial cell basal medium,EBM)干预组:仔鼠在85%O_2中喂养至第14天时,经气道给予100μL EBM,然后喂养至第21天;EPC-CM干预组:仔鼠在85% O_2中喂养至第14天,经气道给予100μL EPC-CM,喂养至第21天。第21天处死小鼠,左肺用4%多聚甲醛固定,留作石蜡切片,随后HE染色进行肺组织病理形态学观察,并做辐射状肺泡计数(radical alveolar count,RAC)及肺泡平均线性截距(mean linear intercept,MLI)测量;免疫组织化学方法对血管内皮细胞FVIII染色,计数肺组织微血管密度;右肺留作实时荧光定量PCR检测肺组织KGF、VEGF、SP-A和SP-C的mRNA表达。结果:培养所得细胞具有典型的EPCs形态改变,能结合异硫氰酸荧光素标记的荆豆凝集素1并摄取Di I荧光标记的乙酰化低密度脂蛋白。高氧组及EBM干预组的仔鼠体重、RAC、MLI和微血管密度较空气组显著降低(P0.05),EPC-CM干预组的RAC和微血管密度较高氧组和EBM干预组明显增加(P0.05),而体重和MLI的变化无明显差异,但有增高的趋势。高氧组和EBM干预组肺组织KGF、VEGF、SP-A和SP-C的mRNA表达较空气组显著降低(P0.05),EPC-CM干预组的表达显著高于高氧组和EBM干预组(P0.05)。结论:EPC-CM可改善高氧暴露新生大鼠的肺泡化和肺血管发育,可能与促进肺内KGF和VEGF mRNA的表达相关。     

肺泡Ⅱ型上皮细胞与肺纤维化

肺泡Ⅱ型上皮细胞（ＡＴⅡ）是肺内重要结构细胞，与肺纤维化的发生、发展有联系。肺纤维化过程既有ＡＴⅡ的增生、肥大，亦可见其受损、破坏，ＡＴⅡ参与肺纤维化的机理主要有：（１）ＡＴⅡ与肺成纤维细胞及ＥＣＭ的相互作用；（２）ＡＴⅡ受损导致肺泡结构改变；（３）调节炎症反应；（４）表达生长因子。     

细胞自噬在大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞低氧/复氧损伤中的作用

目的 探讨细胞自噬在大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞(AECⅡ)低氧/复氧(H/R)中的作用.方法 将大鼠AECⅡ分为对照组(C)、低氧/复氧组(H/R)、DMSO溶剂组(HD)、自噬激动剂组(Rap)和自噬抑制剂组(3-MA).CCK-8法检测细胞活力;反转录RT-PCR检测自噬相关蛋白mRNA表达水平;Western blot...     

维甲酸下调高氧暴露下胎鼠肺成纤维细胞及Ⅱ型肺泡上皮细胞MMP-2表达

目的探讨维甲酸(RA)对高氧暴露下胎鼠肺成纤维细胞(LFs)和肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)基质金属蛋白酶-2 (MMP -2 )表达的影响及调控。方法原代培养胎鼠肺LFs及AECⅡ,待其生长至亚汇合状态时,随机分为:空气组、空气+RA组、高氧组和高氧+RA组。于培养2、6、12、2 4和4 8(AECⅡ)或72h(LFs)时,采用半定量RT- PCR方法检测MMP 2和TIMP 2mRNA表达,应用Westernblot检测p38和磷酸化p38(p p38)蛋白表达水平。结果(1)与空气组比较,高氧可促进胎鼠LFs、AECⅡMMP 2mRNA和胎鼠LFsp p38表达(P <0 . 0 1或P <0. 0 5 ) ;(2 )RA能部分下调高氧诱导的胎鼠LFs、AECⅡMMP 2mRNA高表达和明显降低胎鼠LFsp p38表达;(3)高氧、RA对胎鼠LFs、AECⅡTIMP -2mRNA和胎鼠LFsp38蛋白表达无明显影响;(4)胎鼠LFsp p38与MMP 2mRNA表达呈显著性正相关(r =0. 76 7,P <0. 0 1,n =18)。结论高氧可促进胎鼠LFs、AECⅡMMP 2mRNA表达;p38通路参与高氧状态下胎鼠LFsMMP -2表达调控;RA可在转录后水平调节p38的活性状态从而实现对MMP-2的表达调控。     

高氧对早产大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞转分化的影响

目的:探讨高氧对早产鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞(typeIIalveolarepithelialcells,AECⅡ)转分化的影响。方法:原代培养早产大鼠的AECⅡ,建立高氧细胞损伤模型。利用倒置相差显微镜和透射电镜观察细胞的形态变化。用免疫细胞化学染色法检测AECⅡ特异性肺泡表面活性蛋白-C(surfactantproteinC,SP-C)及Ⅰ型肺泡上皮细胞(typeⅠalveolarepitheli-alcells,AECⅠ)特异性水通道蛋白5(aquaporin5,AQP5)的表达。用RT-PCR和流式细胞术分别检测SP-C、AQP5mRNA及蛋白的表达。结果:随着给氧时间的延长,原代培养的AECⅡ伸展变平,失去其板层体及微绒毛,丧失AECⅡ的特性,获得AECⅠ样外观。伴随其形态学改变,AECⅡ逐渐停止表达其特异性蛋白SP-C,开始表达AECⅠ特异性蛋白AQP5。高氧组给O2后24、48及72h,SP-CmRNA、SP-C 细胞的表达率及荧光指数(fluorescenceindex,FI)较同时间点的空气组明显降低,AQP5的上述指标在24h和48h则较空气组明显增加。高氧组给O2后72h,AQP5的表达开始减弱,与同时间点的空气组相比较无明显差异。结论:高氧诱导的早产大鼠AECⅡ转分化在肺泡上皮细胞损伤的修复中起重要作用。     

CGRP减轻高氧诱导的早产鼠肺泡Ⅱ型细胞损伤及对Gli1表达的影响

目的 探讨降钙素基因相关肽(CGRP)对高氧致早产鼠肺泡Ⅱ型细胞(AECⅡ)损伤的保护作用及对Sonichedgehog(Shh)通路Gli1蛋白表达的影响和意义.方法 分离纯化早产鼠AECⅡ,分为空气、空气+CGRP、空气+CGRP+ CGRP拮抗剂(CGRP8-37)、高氧(95％O2)、高氧+CGRP及高氧+CGRP+ CGRP8-37组.培养24h后观察AECⅡ形态,流式细胞术检测凋亡率,荧光分子探针法检测细胞内活性氧(ROS),分光光度法检测丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD);RT-qPCR检测表面活性蛋白C(SPC) mRNA,Western blot检测Gli1蛋白表达.结果 95％ O2诱导24 h后,AECⅡ凋亡率比空气对照增加3.6倍,ROS水平增加1.5倍,MDA增加65％,SOD降低近一半,SPC mRNA和Gli1蛋白表达显著降低(均P＜0.05);CGRP干预后可显著减轻上述变化(P＜0.05).结论 CGRP可减轻高氧诱导的AECⅡ损伤,其机制可能与Shh信号通路的激活有关.     

高氧致早产鼠BPD模型肺泡Ⅱ型上皮细胞形态与功能的变化

目的探讨高浓度氧致早产鼠支气管肺发育不良(BPD)形态与功能的动态变化规律.方法采用光镜、透射电镜及RT-PCR技术考察高氧致早产鼠BPD模型肺泡Ⅱ型上皮细胞形态学及SPA、SPB、 AQP5 mRNA表达动态变化.结果 1.吸氧7d出现肺泡化障碍,至21d正常肺泡结构基本消失;2.吸氧 1d,AECⅡ线粒体肿胀;3d板层小体排空;7d微绒毛减少,细胞核异染质增加.14d上述变化明显加重,线粒体嵴断裂,融解,伴有气血屏障明显增厚;至21d时细胞核固缩、融解,线粒体、板层小体、微绒毛消失,肺间质有大量纤维组织增生.3.SPA、SPB mRNA水平吸氧初期降低,随着吸氧时间的延长逐渐升高;4.实验组AQP5mRNA水平明显低于对照组.结论吸入高氧可引起肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)损伤,继而导致肺泡化障碍及AECⅡ分泌及转化功能变化.     

类视黄醇X受体对缺氧/复氧诱导的大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞氧化应激反应的调控作用

目的：探讨类视黄醇X受体（RXR）在缺氧/复氧（HR）诱导的大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞（AECⅡ）氧化应激反应中的调控作用。方法：随机将细胞实验分成5组：对照（C）组、HR组、HR+溶剂二甲基亚砜（DMSO）组（HD组）、HR+RXR激动剂9-顺式维甲酸（9-RA）组（RA组）和HR+RXR抑制剂HX531组（HX组）。采用CCK-8法检测各组细胞活力;免疫荧光法进行AECⅡ特异性指标表面活性物质蛋白A(SP-A)的鉴定和RXRα表达的观察;试剂盒检测细胞内超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量;透射电镜观察细胞内超微结构的变化;Western blot检测核因子E2相关因子2(Nrf2)蛋白水平;RT-PCR检测Nrf2的mRNA表达水平。结果：与C组相比,HR、HD、RA和HX组细胞活力均显著降低（P<0.05）,SOD活性显著下降（P<0.05）,MDA含量显著增高（P<0.05）,Nrf2的mRNA和蛋白表达水平显著降低（P<0.05或P<0.01）,RXRα的免疫荧光表达显著增加（P<0.01）;与HR和HX组相比,RA组细胞活力增加...     

神经肽P物质促进高氧诱导的胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞转分化

目的 探讨感觉神经肽P物质(substance P,SP)对高氧诱导的胎鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞(type Ⅱ alveolar epithelial cells,AECⅡ)转分化的影响.方法 剖官取出孕21 d(足月为22 d)SD胎鼠,分离纯化原代培养AECⅡ,采用随机分组法分为:空气暴露组(氧体积分数为0.21)、高氧暴露组(氧体积分数为0.95)、SP干预组,SP干预组于暴露前加入SP 1×10-6 mol/L,在置于氧体积分数为0.21和0.95中分别暴露12、24、和48 h,电镜观察AECⅡ的形态变化;免疫细胞化学染色法和流式细胞仪检测AECⅡ特异性肺泡表而活性蛋白-C(surfactant protein C,sp-C)及Ⅰ型肺泡上皮细胞(type Ⅰ alveolar epithelial cells,AEC Ⅰ)特异性水通道蛋5(aquaporin5,AQP5)的表达.结果 与空气组比较,高氧暴露后,AECⅡ SP-C的表达、SP-C细胞的表达率及荧光指数(fluorescence index,FI)明显降低,AQP5表达明显增加;而SP干预后,SP-C、AQP5表达都明显增加,形态学的损伤也有明显的改善.结论 SP可促进高氧诱导的胎鼠AECⅡ的转分化,在肺损伤修复中可能起重要作用.     

维甲酸X受体对缺氧/复氧诱导的大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞自噬的调控作用

目的:探讨维甲酸X受体(RXR)对缺氧/复氧(H/R)诱导的大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AEC Ⅱ)自噬的调控作用及分子机制。方法:常氧培养大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞,将生长至对数生长期的细胞随机分为5组:(1)对照组:细胞于正常条件下培养30 h;(2)缺氧/复氧组:细胞缺氧6 h,复氧24 h;(3)溶剂DMSO组:细胞于造模前1.5 h用浓度低于0.1%的DMSO进行预处理,其余处理同H/R组;(4)9-顺式维甲酸(9-RA)组:细胞于缺氧前1 h用9-RA(100 nmol/L)预处理;(5)HX531组:细胞先用9-RA处理0.5 h,然后用HX531(2.5μmol/L)处理1 h。采用CCK-8法检测各组细胞活力;免疫荧光染色法观察各组细胞RXRα表达变化;用透射电镜观察细胞内部超微结构的改变;RT-PCR检测腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、自噬相关蛋白beclin 1及LC3、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)和P62 mRNA水平的表达。Western blot检测p-AMPK、beclin 1、LC3-Ⅱ、p-mTOR和P62蛋白的表达。结果:与对照组相比,其余4组细胞的细胞活...     

肺泡Ⅱ型上皮细胞的原代培养及生物学特性比较研究

目的：建立大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ) 的改良体外原代培养法，并对其生物学特性进行比较研究。方法：AECⅡ用胰蛋白酶和胶原酶消化法分离后，接种于大鼠免疫球蛋白G （IgG）包被的培养瓶黏附纯化。将获得的AECⅡ用碱性磷酸酶(AKP) 、电镜和肺表面活性物质相关蛋白A(SPA) 免疫细胞化学方法进行鉴定，并对它的SPA表达和转染特性与AECⅡ来源A549细胞进行比较研究。结果：胰蛋白酶和胶原酶消化加IgG黏附纯化后所得的AEC Ⅱ,产量为2×107-3×107，纯度为75%-84%，细胞活力93％以上，AKP 染色快捷简便。AECⅡ 同A549细胞 相比具有某些不同的特性。结论：采用IgG黏附纯化能提高AECⅡ纯度，AKP 染色简便实用。对于AECⅡ 细胞的某些特性研究发现其并不能完全用A549细胞系来代替。     

高氧及TGF-β1对肺泡Ⅱ型细胞上皮间质转化的影响

目的:探讨高氧及TGF-β1干预小鼠肺泡Ⅱ型细胞(AECⅡ)后,是否发生上皮间质转化(EMT)及其影响。方法:小鼠肺泡Ⅱ型细胞系MLE-12,随机分为空气暴露组、高氧暴露组、TGF-β1干预空气暴露组、TGF-β1干预高氧暴露组。观察各组6、12、24、48 h细胞形态变化。应用细胞免疫荧光双标法及荧光定量PCR法检测各组各时间点肺表面活性物质B(SP-B)及成纤维细胞特异性蛋白1(FSP1)蛋白和mRNA的表达情况。结果:随着高氧及TGF-β1干预时间的延长,AECⅡ逐渐由鹅卵石样变成纺锤体形状,获得成纤维细胞样外观。同时,AECⅡ特异性标记SP-B表达逐渐减弱,成纤维细胞特异性标记FSP1表达逐渐增强,24 h时两者时可见明显的共表达。高氧暴露组、TGF-β1干预空气暴露组及TGF-β1干预高氧暴露组24、48 h SP-B mRNA表达较同时间空气暴露组下调,而FSP1 mRNA表达较同时间空气暴露组上调。结论:高氧及TGF-β1均能诱导AECⅡ发生上皮间质转化,且两者对EMT的作用具有时间依赖性。     

人外周血内皮祖细胞的分离、培养和扩增

目的:改进从人外周血中分离、培养和体外扩增血管内皮祖细胞(EPC)的方法。方法:采用不同淋巴细胞分离液,用密度梯度离心法从外周血分离EPC;用CD34免疫磁性活化细胞分选系统(MACS)分离CD34 细胞;分别培养在包被和不包被有人纤维连接蛋白(HFN)的培养板内;采用细胞免疫化学法检测内皮细胞表面标志CD31、CD34和vWF的表达。结果:从成人外周血可分离获得EPC;不同的分离条件可影响获得EPC的数量和质量,HFN对EPC的生长有促进作用。结论:进一步改进从人外周血分离获取EPC并行体外扩增的方法,为EPC的研究奠定了基础。     

^60Coγ射线照射对肺泡Ⅱ型细胞和肺泡隔间质细胞的生物效应

目的：探讨^60Coγ射线照射对肺泡Ⅱ型细胞和肺泡隔间质细胞的生物效应。方法：原代分离肺内Ⅱ型上皮细胞（AT-Ⅱ）和间质细胞包括巨噬细胞和成纤维细胞，分别进行0、3、5、7Gy的γ射线照射，用细胞核嗜银染色观察照射对AT-Ⅱ增殖的影响；用酶谱分析检测照射后AT-Ⅱ和间质细胞培养上清中基质金属蛋白酶-2、-9（MMP-2，-9）的活性；用ELISA检测间质细胞培养上清中TGF-β1和Ⅳ型胶原含量。结果：AT-Ⅱ的核仁数量随照射剂量增加而增多，其中7Gy组最高；AT-Ⅱ培养上清中MMP-2、-9活性随照射剂量增加呈先增高后降低趋势，间质细胞上清中MMP-2、-9活性和TGF-β1水平逐渐升高，Ⅳ型胶原分泌水平呈先降低后升高趋势。结论：放射性肺损伤早期，AT-Ⅱ、巨噬细胞和成纤维细胞均参与肺组织无效性重建过程，与晚期肺纤维化启动有一定的内在联系。     

运动条件下健康人循环内皮祖细胞的数量和功能*****☆

背景：运动条件对内皮祖细胞数量和功能是否会产生的影响目前尚无公识。 目的：观察急性运动对健康成人循环内皮祖细胞数量和功能的影响。 方法：健康男性成人志愿者12例参加急性平板运动锻炼(9.3±2.1) min。用流式细胞仪测定运动前后CD34和KDR双标阳性循环内皮祖细胞水平,ac-LDL及lectin荧光标记方法评估体外培养内皮祖细数量,检测内皮祖细胞的黏附、迁移和增殖能力,并测定运动前后血浆和内皮祖细胞分泌一氧化氮、血管内皮生长因子和粒-巨噬细胞集落刺激因子水平变化。 结果与结论：流式细胞仪检测显示健康志愿者运动后循环内皮祖细胞水平较运动前增加(P < 0.05)。荧光标记法证实运动后ac-LDL及lectin抗体双阳性内皮祖细胞数量较运动前增加(P < 0.05),内皮祖细胞迁移和增殖能力明显增强(P < 0.05),但黏附能力无明显变化。急性运动能明显增加健康志愿者的血浆一氧化氮水平(P < 0.05),健康志愿者运动前后血浆一氧化氮水平和循环内皮祖细胞数量及功能的增加倍数呈明显的直线相关回归关系(P < 0.05)。结果证实,运动可明显增加健康成人循环内皮祖细胞的数量和功能,其机制与其诱导一氧化氮释放增多有关。     

IL-4下调COPD肺泡Ⅱ型上皮细胞中COX-2和PDGF的表达

目的：探讨COPD大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞（ATⅡ）中环氧合酶-2（COX-2）及血小板源性生长因子（PDGF）的表达及IL-4对其表达的影响。方法：用雄性Wistar大鼠建立吸烟大鼠COPD模型后取整肺做原代培养，培养出肺泡Ⅱ型上皮细胞。随机分为对照组和模型组，并用IL-4干预模型组的肺泡Ⅱ型上皮细胞。用免疫组化法检测细胞爬片COX-2、PDGF-A及PDGF-B的表达。结果：模型组COX-2和PDGF-A、PDGF-B表达明显增高；IL-4干预组表达显著降低。结论：COPD大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞中COX-2和PDGF的表达显著增高，IL-4可降低其表达。     

吸烟对大鼠肺和肺泡Ⅱ型上皮细胞间粘附分子1表达的检测

为了解吸烟肺组织和肺泡Ⅱ型上皮细胞细胞间粘附分子 1(ＩＣＡＭ 1)ｍＲＮＡ的表达 ,我们通过对不同时间吸烟大鼠肺组织和肺泡Ⅱ型上皮细胞ＩＣＡＭ 1蛋白质水平和ｍＲＮＡ水平测定来探讨吸烟致慢性阻塞性肺疾病 (ＣＯＰＤ)发病的可能途径。2 40只大鼠放入按许三林设计的大鼠被动吸烟装置内 (中华结核和呼吸杂志 1999,7:417 419)每天燃香烟 10支使大鼠形成被动吸烟模型。在吸烟 1、2、3、4、5、6月后及正常喂养的对照组大鼠杀死解剖 ,肺泡Ⅱ型上皮细胞分离、纯化和培养并留取肺组织 ,应用免疫组织化学染色、原位杂交和逆转录聚合酶链反应 (…     

同型半胱氨酸影响内皮祖细胞机制的探讨

目的：探讨同型半胱氨酸（Hcy）影响内皮祖细胞（EPCs）数量和功能的可能机制。 方法：采用密度梯度离心法从外周血获取单个核细胞,将其接种在人纤维连接蛋白包被的培养板,培养4 d后,收集贴壁细胞,加入不同浓度Hcy（10 μmol/L、30 μmol/L、100 μmol/L和200 μmol/L）干预,或先予以1 μmol/L 阿托伐他汀预处理1 h,然后再用200 μmol/L Hcy干预。采用SA-β-半乳糖苷酶染色试剂盒检测衰老细胞,细胞增殖ELISA试剂盒和集落生成能力测定实验检测EPCs的增殖能力和集落形成能力,端粒重复序列扩增法(TRAP)-ELISA定量检测端粒酶活性,Western blotting检测EPCs Akt Ser473磷酸化水平。结果：Hcy呈浓度依赖性增加SA-β-半乳糖苷酶阳性细胞数量,200 μmol/L最为显著,较对照增加了2倍（15.2±9.8 vs 51.9±13.5,P<0.01）,而阿托伐他汀能显著减少Hcy诱导的衰老细胞的数量。此外,Hcy干预后伴随EPCs增殖和集落形成能力的显著损害。Hcy随着浓度的增加而显著降低EPCs端粒酶活性。进一步研究发现Hcy显著减少Akt磷酸化。结论：Hcy加速EPCs衰老,伴随EPCs增殖和集落形成能力的损害,提示细胞衰老也许是Hcy损害EPCs的机制之一。Hcy加速EPCs衰老可能跟EPCs端粒酶活性下降以及Akt磷酸化水平的下降有关。阿托伐他汀可以预防Hcy对EPCs的损害效应。     

肺泡Ⅱ型上皮细胞染色体脆性位点基因FHIT与肺间质纤维化的关系

目的:研究肺间质纤维化模型大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞染色体脆性位点基因FHIT表达的改变.方法:SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组及川芎嗪用药组,分别于给药7、14、28 d后提取肺泡Ⅱ型上皮细胞行体外培养,RT-PCR法检测FHIT基因mRNA表达的改变,免疫组织化学检测FHIT蛋白表达.结果:与假手术组比较,造模7d后模型组大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞染色体脆性位点基因FHIT mRNA及蛋白表达无变化.用药14、28 d后,FHIT基因mRNA及蛋白表达则明显下降.而川芎嗪组比模型组有显著上调.结论:在肺间质纤维化过程中存在染色体脆性位点基因FHIT的改变,川芎嗪可以一定程度上抑制这种改变从而起到防治作用.     

α-硫辛酸对高糖状态下内皮祖细胞的影响

目的:应用高浓度葡萄糖孵育大鼠骨髓内皮祖细胞(EPCs),测定培养上清的丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)水平,同时观察EPCs GPx-1、eNOS的表达,然后应用抗氧化剂ALA进行干预,来探讨葡萄糖引发EPCs损伤的机制及治疗措施。方法:清洁级健康雄性Wistar大鼠(体质量180～200g)15只,分离培养EPCs,用2.5 g/L胰酶/0.2 g/LEDTA消化培养4 d的EPCs,分组贴壁24 h后分别给予葡萄糖5 mmol/L作为正常对照组(NC)、30 mmol/L葡萄糖作为高糖组(HS)以及葡萄糖(30 mmol/L)+α硫辛酸(40μg/L)作为ALA组,孵育EPCs 48 h,实时荧光定量PCR技术及Western blot法测定EPCs GPx-1及eNOS的mRNA及蛋白表达,测定培养液上清的一氧化氮(NO)及MDA水平。结果:(1)不同干预措施对EPCs分泌MDA的影响:高浓度葡萄糖干预48 h后培养上清MDA水平高于正常对照组(P<0.05);应用ALA干预后与高糖组比较MDA水平下降(P<0.05)。(2)不同干预措施对EPCs GPx-1表达的影响:高糖干预48 h后EPCs GPx-1表达显著低于对照组,而ALA干预后EPCs GPx-1表达较高糖组显著增加(P<0.05)。(3)不同干预措施对EPCs eNOS表达及分泌NO的影响:高糖干预48 h后EPCs eNOS表达显著低于对照组,培养上清NO水平低正常对照组(P<0.05),而ALA干预后EPCs eNOS表达较高糖组显著增加(P<0.05),培养上清NO水平升高(P<0.05)。结论:高浓度葡萄糖可以诱发EPCs产生氧化应激,减弱EPCs的抗氧化能力及eNOS表达,使EPCs分泌NO减少,α硫辛酸能够改善高糖导致的EPCs抗氧化能力减弱及NO的分泌。