红葱头提取物减轻PM2.5诱导的血管内皮细胞的氧化应激

目的探究红葱头提取物对PM2.5诱导的血管内皮细胞EA.hy926的保护作用的研究。方法实验分为空白对照组、PM2.5组、阳性对照组(N-乙酰半胱氨酸+PM2.5组)和红葱头提取物+PM2.5组,PM2.5配制成30μg/mL,NAC浓度为10 mmol/L,红葱头提取物的浓度为64μg/mL。通过CCK-8法检测计算细胞存活率;ROS试剂盒检测细胞损伤产生的自由基;WB检测相关凋亡分子(Cytochrome C、Caspase-3、Caspase-9)的表达。结果 CCK-8结果显示:PM2.5会使EA.hy926细胞存活率明显下降,但红葱头提取物预处理后能提高PM2.5损伤的细胞存活率;细胞内产生的活性氧量由小至大为:空白对照组阳性对照组红葱头提取物+PM2.5组PM2.5组;WB分析样本相关凋亡蛋白表达:与对照组相比,PM2.5染毒后,EA.hy926细胞内促凋亡蛋白Cytochrome C、Caspase-3、Caspase-9表达上调,用红葱头提取物预处理可以下调PM2.5诱导的Cytochrome C、Caspase-3、Caspase-9的表达。结论红葱头提取物对PM2.5引起的血管内皮细胞的氧化应激具有保护作用。     

紫草素对高糖诱导的血管内皮细胞凋亡和氧化应激的影响

目的:探讨紫草素(shikonin)对高浓度葡萄糖诱导的血管内皮细胞凋亡和氧化应激水平的影响及其可能的作用机制。方法:体外培养的大鼠胸主动脉内皮细胞随机分为5组:正常对照组(培养基中葡萄糖浓度为5.5 mmol/L)、高糖组(培养基中葡萄糖浓度为33 mmol/L)、高糖+低浓度紫草素组(培养基中葡萄糖浓度为33mmol/L,紫草素浓度为0.1μmol/L)、高糖+中浓度紫草素组(培养基中葡萄糖浓度为33 mmol/L,紫草素浓度为1μmol/L)和高糖+高浓度紫草素组(培养基中葡萄糖浓度为33 mmol/L,紫草素浓度为10μmol/L)。各组细胞经相应处理后,CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞的凋亡率;此外,检测细胞中丙二醛(malondialdehyde,MDA)、活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)的水平,以反映细胞的氧化应激状态;Western blot检测Nrf2/HO-1信号通路的活性。结果:相较于高糖组,紫草素处理可呈剂量依赖性地逆转高糖所致的内皮细胞活力降低及凋亡率增加。与正常对照组相比,高浓度葡萄糖可升高内皮细胞中MDA和ROS的含量,同时降低SOD和GSH-Px的活性;相较于高糖组,给予紫草素干预后,细胞内MDA和ROS的含量降低,SOD和GSH-Px的活性升高。此外,高糖可致内皮细胞中cleaved caspase-3、HO-1及核内Nrf2蛋白表达的增加;与高糖组相比,给予紫草素干预后细胞中cleaved caspase-3、HO-1和核内Nrf2的表达部分下降。结论:紫草素可显著改善高糖所致的血管内皮细胞凋亡,其作用机制可能与激活Nrf2/HO-1信号通路并降低细胞的氧化应激水平有关。     

丹参酮IIA通过抑制p38 MAPK通路减轻PM2.5对血管内皮细胞的损伤

 目的: 探讨PM2.5对EA.hy926型人脐静脉内皮细胞损伤的影响及丹参酮ⅡA在这一过程中的作用及机制。方法: 采集广州城区大气PM2.5并以不同质量浓度(0、20、200、400 mg/L)染毒EA.hy926细胞24 h,MTT法测细胞存活率,流式细胞术测细胞凋亡,Western blot法测p-p38 MAPK、Bax和Bcl-2的蛋白水平,ELISA法测白细胞介素-6(IL-6)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,并测定细胞丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)及乳酸脱氢酶(LDH)活性;分别加入丹参酮ⅡA(5、10、20μ mol/L)和p38 MAPK通路特异性阻滞剂SB20358020μ mol/L检测丹参酮ⅡA的干预作用及机制。结果: 与对照组比较,PM2.5染毒后呈剂量依赖性降低EA.hy926细胞的存活率,上调p-p38 MAPK蛋白水平及Bax/Bcl-2蛋白比率以促进细胞凋亡,诱导分泌IL-6及TNF-α,降低SOD活性,增加MDA含量及LDH活性,差异均有统计学显著性(P<0.05);丹参酮ⅡA呈剂量依赖性增加EA.hy926细胞的存活率,下调p-p38 MAPK蛋白水平及Bax/Bcl-2蛋白比率以抑制细胞凋亡,降低IL-6及TNF-α含量,增加SOD活性,降低MDA含量及LDH活性,差异均有统计学显著性(P<0.05)。结论: 丹参酮ⅡA可通过抑制p38 MAPK通路,减轻PM2.5对EA.hy926细胞的损伤。     

人endostatin体外诱导血管内皮细胞凋亡的实验研究

目的 探讨人endostatin抑制血管内皮细胞增殖的作用机制。方法 在含重组人endostatin蛋白和10%小牛血清的DMEM培养基中，培养人脐静脉内皮细胞ECV304。72h后，采用透射电镜，流式细胞术细胞周期分析和细胞核DNA的1.5%琼脂糖凝胶电泳，检测重组人endostatin蛋白作用后，血管内皮细胞的凋亡。结果 透射电镜下可见实验组ECV304细胞核染色质浓缩，边集，核碎裂及胞浆浓缩等，呈典型的凋亡细胞的形态学表现，流式细胞术细胞周期分析显示，在G1期峰前存在1个凋亡峰（20.6%)，1.5%琼脂糖凝胶电泳显示，细胞核DNA呈梯状，对照组ECV304细胞表达正常。结论 重组人endostatin蛋白可诱导血管内皮细胞凋亡，是其抑制血管内皮细胞增殖的原因之一。     

川芎嗪和剪切率对悬浮血管内皮细胞凋亡的影响

目的 探讨川芎嗪和剪切率对悬浮血管内皮细胞凋亡的影响。方法 体外培养大鼠脑微血管内皮细胞(rCMEC)，以川芎嗪和锥一板旋转剪切方式共同作用于悬浮rCMEC，采用Annexinv-FITC／PI双染法，流式细胞仪检测川芎嗪和剪应力对rCMEC凋亡的影响。结果 方差分析表明，川芎嗪和剪切率对rCMEC凋亡率有显著影响，川芎嗪降低凋亡率；剪切率增加凋亡率，二者作用相反但无交互作用。组间t检验表明：单独使用川芎嗪时，在本实验剂量范围内(3l.5～126μg／m1)，川芎嗪对静态悬浮rCMEC凋亡率无显著影响。高剪切率(6000，8000s-1)可诱导rCMEC凋亡，川芎嗪对此具有显著抑制作用。结论 适当剂量的川芎嗪可用于抑制高剪切率诱导的血管内皮细胞凋亡。     

血管内皮细胞的活化或损伤诱导平滑肌细胞的增生和凋亡

一、材料与方法1.细胞培养 :采用改进的Ｊａｆｆｅ氏培养法 ,培养人脐带静脉内皮细胞。采用贴块法培养人脐动脉平滑肌细胞并传代。培养液均为含 2 0 %胎牛血清的ＤＭＥＭ培养液。2 .内皮细胞的脂质过氧化引发实验 :将培养达融合状态的内皮细胞分组 ,分别加入含不同浓度氢过氧化枯烯的培养液孵育后 ,测定脂质过氧化物的代谢终产物丙二醛 (ＭＤＡ)的含量。3.培养液中乳酸脱氢酶 (ＬＤＨ)活性的测定 :ＬＤＨ是细胞内的可溶性酶 ,当细胞膜被破坏时可漏出细胞外 ,可作为细胞损伤的早期检测指标。采取内皮细胞培养液 ,以Ｓｉｇｍａ公司的ＬＤＨ测…     

血管内皮生长因子对OX-LDL诱导的内皮细胞凋亡的影响及其机理

目的研究血管内皮生长因子（VEGF）对氧化型低密度脂蛋白（OX—LDL）诱导的血管内皮细胞凋亡的拮抗作用及其机理，以探讨VEGF预防血管成形术后再狭窄的机制。方法将对数生长期的人脐静脉内皮细胞分成对照组、OX—LDL处理组和OX—LDL＋VEGF处理组，12h后采用原位末端标记法和流式细胞术观察各组细胞的凋亡发生情况，并通过逆转录聚合酶链反应研究各组细胞中凋亡相关基因Bcl-2与Fas mRNA的表达情况。结果OX—LDL处理组凋亡细胞和Fas mRNA表达明显多于对照组和OX-LDL＋VEGF处理组，而Bcl-2 mRNA表达情况相反。结论VEGF能部分拮抗OX—LDL诱导的血管内皮细胞凋亡，可能与其上调Bcl-2 mRNA表达及下调Fas mRNA表达有关，为VEGF预防血管成形术后再狭窄进一步提供了理论依据。     

血管内皮细胞生长因子对内皮细胞凋亡拮抗作用的研究

目的 :初步探讨缺氧对培养人脐静脉内皮细胞凋亡的影响及血管内皮生长因子的干预性影响。方法 :( 1)人脐静脉内皮细胞的培养及鉴定。 ( 2 )建立人脐静脉内皮细胞缺氧模型 ,TUNEL法观测不同缺氧时间 ( 0、12、2 4、48h)对内皮细胞凋亡的影响及不同剂量血管内皮生长因子的拮抗作用。结果 :随缺氧时间延长 ,HUVECs凋亡率显著升高 ,呈时间相关性 ;血管内皮生长因子显著抑制缺氧导致的内皮细胞凋亡 ,呈剂量相关性。结论 :缺氧作为一种致病因素 ,对内皮细胞凋亡的促发作用是随缺氧时间的延长而加重的。内皮细胞的过度凋亡是引起内皮功能障碍的一个重要因素 ,血管内皮生长因子通过抑制内皮细胞凋亡 ,而具有内皮细胞保护作用。     

蜂胶水提液对体外培养的血管内皮细胞凋亡的影响

目的：探讨泰山蜂胶水提液对一定浓度的肿瘤坏死因子-α诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的作用。方法:用消化灌注法收集人脐静脉内皮细胞进行体外原代培养，用终浓度为50 μg/L的肿瘤坏死因子-α诱导其凋亡，培养液中分别加入终浓度为50 mg/L、100 mg/L和200 mg/L的蜂胶水提液干预，共同孵育24h，用流式细胞仪和缺口末端标记技术TUNEL检测细胞凋亡率。结果:模型组内皮细胞凋亡率均明显高于对照组，不同浓度蜂胶组内皮细胞凋亡率明显低于模型组（P＜0.01）。结论:泰山蜂胶水提液能抑制肿瘤坏死因子-α诱导的人脐静脉内皮细胞的凋亡，从而起到保护血管内皮细胞的作用。     

PTEN 在动脉粥样硬化中的表达及对血管内皮细胞增殖凋亡的影响研究

目的:探讨第10号染色体同源缺失性磷酸酶鄄张力蛋白(PTEN)在动脉粥样硬化中的表达及对血管内皮细胞(VEC)增殖凋亡的影响。方法:构建动脉粥样硬化小鼠模型,Real-time PCR和Western blot检测动脉粥样硬化组织中PTEN水平;用不同浓度的氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)处理大鼠VEC,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖活性。VEC转染PTEN过表达载体(pSicoR-PTEN),用ox-LDL 处理细胞,Real-time PCR和Western blot检测PTEN水平,MTT检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot 检测磷酸化的STAT3(p-STAT3)、信号转导与转录因子3(STAT3)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)水平。结果:动脉粥样硬化组织中的PTEN水平明显低于正常的动脉组织(P<0.05)。不同浓度的ox-LDL处理后的VEC存活率明显降低,并且细胞存活率随着ox-LDL浓度的升高而降低。Ox-LDL作用后的VEC中PTEN表达水平下降,而转染pSicoR-PTEN后可以提高VEC中PTEN表达水平。Ox-LDL处理后的VEC凋亡率增加,细胞中Cleaved Caspase-3水平升高,p-STAT3 水平下降,与正常培养的VEC相比差异具有统计学意义(P<0.05)。转染pSicoR-PTEN后VEC 经过ox-LDL处理后细胞存活率、p-STAT3 水平明显升高,而细胞凋亡率、Cleaved Caspase-3水平明显降低,与单纯ox-LDL处理后的细胞相比差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:PTEN 在动脉粥样硬化组织中表达下调,PTEN 可以逆转ox-LDL对VEC增殖抑制和凋亡促进作用,作用机制可能与STAT3 信号通路的激活有关。     

白藜芦醇抑制叔丁基过氧化物诱导的外周血内皮祖细胞损伤

目的:观察白藜芦醇对叔丁基过氧化物诱导的人外周血内皮祖细胞(EPC)凋亡的影响,探讨其可能机制。方法:密度梯度离心法获取人外周血单个核细胞,培养4 d后,收集贴壁细胞。实验分为对照组、叔丁基过氧化物诱导组和白藜芦醇+叔丁基过氧化物组。采用二苯基四氮唑溴盐(MTT)比色法和5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brd U)ELISA法检测EPC增殖能力;采用改良Boyden小室法检测EPC增殖及迁移能力;Annexin V-FITC/PI染色及流式细胞术检测EPC凋亡率;比色法检测caspase-3活性;荧光探针H_2DCF-DA法检测细胞内活性氧簇(ROS)水平;Western blot检测cleaved caspase-3、Bax及Bcl-2蛋白的表达。结果:白藜芦醇能抑制叔丁基过氧化物诱导的EPC凋亡,并增加EPC增殖及迁移能力;白藜芦醇降低EPC细胞内ROS水平,抑制caspase-3的活性及cleaved caspase-3的蛋白水平,同时能促进Bcl-2及抑制Bax蛋白表达。结论:白藜芦醇对叔丁基过氧化物诱导的EPC凋亡有抑制作用,其机制可能与抗氧化应激有关。     

氧化应激诱导HepG2肝癌细胞凋亡的研究(英)

目的：直接暴露细胞于活性氧能诱导发生凋亡，本文研究氧化应激诱导HepG2肝癌细胞的死亡及其机制。方法：暴露细胞于2 mmol/L过氧化氢产生氧化应激，用DNA凝胶电泳检测细胞凋亡，用荧光染色法检测细胞线粒体膜电位变化，Western blotting检测细胞浆中细胞色素c变化，fluorometric assay kit检测caspase活性变化。结果：氧化应激作用于HepG2细胞后12 h开始发生凋亡；氧化应激作用后4 h，细胞线粒体膜电位明显下降；胞浆中细胞色素c浓度呈时间依赖性增高；氧化应激作用8 h、12 h后细胞内caspase-3、caspase-9活性分别升高6.7及3.6倍，但caspase-8活性无变化。结论：氧化应激能诱导HepG2肝癌细胞发生凋亡，其途径与线粒体通路及caspase激活有关。     

血流剪切应力对内皮细胞表达人类凋亡蛋白抑制剂的作用

 目的：本研究目的是阐明血流剪切应力抑制血管内皮细胞凋亡的分子机制。方法: 人脐静脉内皮细胞（HUVECs）培养于DMEM, 当细胞融合时，转染Smac基因，将细胞暴露于20 dyne/cm2 的剪切应力，分别测定人类凋亡蛋白抑制剂(human inhibitor of apoptosis protein-2, HIAP-2） 蛋白表达及细胞凋亡蛋白酶（caspase-3）活性。 结果: 20 dyne/cm2 的剪切应力抑制caspase-3活性的增加，此作用与剪切应力能够明显诱导内皮细胞产生HIAP-2 蛋白表达明显增加有关。 结论：证实生理水平剪切应力能够明显诱导内皮细胞产生HIAP-2 蛋白的表达，这可能是剪切应力抑制内皮细胞凋亡发挥抗动脉粥样硬化作用的机制之一。     

Oxidative stress and endothelial damage in patients with asymptomatic carotid atherosclerosis

It is know that oxidative stress can be able to induce cytotoxicity of blood cells, stimulate release of inflammatory cytokines, and induce the production of growth factors. The aim of this study was to investigate oxidative stress and endothelial dysfunction in patients with asymptomatic carotid artery disease and healthy controls. Native low-density lipoproteins, oxidised low-density lipoproteins, malondialdehyde, nitrates, glutathione peroxidase activity and endothelin-1 were determined in patients without severe (range between 30% and 50%) carotid artery stenosis. Native low-density lipoproteins, oxidized low-density lipoproteins, malondialdehyde, glutathione peroxydase, and endothelin-1 concentrations were higher in patients than in health controls (P<0.001). No difference was observed in nitrate values (P<0.8). Our results revealed oxidative stress in patients without severe carotid artery stenosis and clinical symptoms. This was shown by the elevated malondialdehyde and oxidized low-density lipoprotein levels. Received: 6 July 2000 / Accepted: 2 February 2001     

氧化应激和P53参与波动高糖诱导的肾小管上皮细胞凋亡

目的: 探讨波动性高糖引起的肾小管上皮细胞凋亡的机制。方法: 体外培养人肾小管上皮细胞 (HK-2),给予稳定高糖或波动高糖干预,并使用抗氧化剂和P53特异性抑制剂验证氧化应激和P53在波动高糖诱导的肾小管上皮细胞凋亡中的作用;此外,SD大鼠随机分为正常对照组(A)、糖尿病稳定高血糖组(B)和糖尿病波动高血糖组(C)。采用链脲佐菌素(STZ)65 mg/kg腹腔注射诱发糖尿病,血糖波动组每天定时腹腔注射速效胰岛素,并错时给予葡萄糖,造成一天中血糖浓度大幅波动模型。采用比色法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,免疫组化法和Western blotting检测NADPH氧化酶4(Nox4)和P53蛋白表达,流式细胞术和原位缺口末端标记法(TUNEL)检测肾脏细胞凋亡。结果: (1)与稳定高糖比较,波动高糖引起更加明显的HK-2细胞凋亡,P53蛋白表达明显上调,同时培养上清液中MDA含量增加和SOD活性下降,抗氧化剂和P53抑制剂可明显抑制磷酸化P53蛋白表达和细胞凋亡。(2)在体动物实验制模12周后,与B组比较,C组肾组织Nox4表达明显增加,肾小管磷酸化P53蛋白表达上调,细胞凋亡数增加。结论: 氧化应激和P53参与波动性高糖诱导的肾小管上皮细胞凋亡。     

MADPH氧化酶抑制剂对晚期氧化蛋白产物诱导内皮细胞高通透性的影响及机制

目的:探讨NADPH氧化酶(Nox)抑制剂对晚期氧化蛋白产物(AOPP)刺激下血管内皮的保护作用。方法:体外培养人脐静脉内皮细胞进行实验,人血清白蛋白(HSA)作为阴性对照,用不同浓度(50、100和200mg/L)AOPP-HSA共同孵育8 h后,利用5-氯甲基二乙酸荧光素标记人急性单核细胞白血病细胞株THP-1的细胞渗出数量反映内皮细胞的通透性,研究不同浓度AOPP-HSA对单层细胞通透性的影响。此外,另将细胞分为HSA组、AOPP-HSA组和AOPP-HSA+二联苯碘(DPI)组,进而探讨AOPP-HSA对Nox活化水平的影响以及DPI对内皮细胞骨架重构和细胞通透性改变的作用。结果:AOPP-HSA可使血管内皮细胞通透性明显增加(P0.05)。AOPP-HSA可导致Nox磷酸化水平上升,并呈剂量依赖性。Nox抑制剂DPI预处理组可抑制AOPP-HSA刺激下Nox磷酸化水平的上升,从而抑制血管内皮细胞通透性增加及细胞骨架重构。结论:AOPP-HSA可通过激活Nox导致血管内皮细胞通透性受损,Nox抑制剂DPI可以降低其通透性及细胞骨架重构,起到一定的保护作用。     

吉西他滨对肺微血管内皮细胞的损伤及表没食子儿茶素没食子酸酯的保护作用

目的 观察吉西他滨对大鼠肺微血管内皮细胞的影响及表没食子儿茶素没食子酸酯的保护作用。 方法 利用植块法分离大鼠肺微血管内皮细胞。SRB 法检测药物对肺微血管内皮细胞和 A549增殖的影响。流式细胞仪用于检测细胞周期和细胞凋亡。Western blot 法检测凋亡相关蛋白含量。测定细胞内活性氧和超氧化物歧化酶水平以及乳酸脱氢酶渗透情况。 结果 吉西他滨能显著减少肺微血管内皮细胞细胞增殖并将其阻滞于 S 期。吉西他滨引起肺微血管内皮细胞细胞凋亡具有时间依赖性,处理24、48、72 h 后细胞凋亡率分别为7.2%、15.4%、23.3%。同时,吉西他滨作用后细胞内活性氧含量上升,而处理48 h 后超氧化物歧化酶水平显著下降。进一步研究发现,表没食子儿茶素没食子酸酯能够提高吉西他滨处理后肺微血管内皮细胞的存活率,并且减弱吉西他滨造成的超氧化物歧化酶水平的下降。 结论 吉西他滨对肺微血管内皮细胞具有损伤作用,能够引起肺微血管内皮细胞的凋亡和氧化应激的发生,而表没食子儿茶素没食子酸酯对吉西他滨引起的肺微血管内皮细胞损伤具有保护作用。     

同型半胱氨酸对培养的人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

目的:研究同型半胱氨酸(Hcy)对培养的人脐静脉内皮细胞(hUVEC)凋亡的影响。方法:原代培养hUVEC,通过Hoechst 33258荧光染色观察细胞核形态改变,琼脂糖凝胶电泳检测 DNA片段,流式细胞术检测Annexin V/PI联合标记的细胞凋亡率, Western blot检测P53、Bax的表达及比色法测定caspase 3活性。 结果: 同型半胱氨酸诱导培养的hUVEC出现明显的凋亡形态学改变。琼脂糖凝胶电泳检测可见明显的"DNA ladder"图谱。Hcy诱导凋亡细胞数明显增加。同时促进Bax、P53的表达,使caspase 3活性显著增强。结论: 同型半胱氨酸诱导培养的hUVEC凋亡。     

乳酸链球菌素诱导氧化应激促进人骨肉瘤MG63细胞凋亡

目的:探讨乳酸链球菌素(nisin)对人骨肉瘤MG63细胞凋亡及其相关的氧化应激机制.方法:乳酸链球菌素单独或联合抗氧化剂N-乙酰-L-半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)处理MG63细胞后,采用CCK-8法检测细胞活力;annexin-V/PI双染法检测细胞凋亡;2',7'-二氯荧光素二乙酸酯(...