晚期糖基化终末产物调节氧化应激对内皮祖细胞生物学功能的影响

目的 观察晚期糖基化终末产物对体外培养的内皮祖细胞氧化应激状况的改变及对内皮祖细胞生物学功能的影响,探讨晚期糖基化终末产物参与动脉粥样硬化发生发展的可能作用位点.方法 使用密度梯度离心法从骨髓获取单个核细胞并进行体外培养.对贴壁细胞进行细胞化学分析,以激光共聚焦显微镜鉴定FITC标记荆豆凝血素I和DiI-标记的乙酰化低密度脂蛋白双染色阳性细胞为正在分化的内皮祖细胞.在内皮祖细胞中加入不同浓度晚期糖基化终末产物,测定晚期糖基化终末产物作用24 h后内皮祖细胞内活性氧、超氧化物岐化酶、谷胱甘肽过氧化物酶含量,同时测定内皮祖细胞迁移、黏附和增殖能力.结果 随晚期糖基化终末产物作用浓度升高(0、50、100和200 mg/L),内皮祖细胞内活性氧含量明显增加(分别为2.78±0.12、5.98±0.11、6.42±0.12和7.39±0.09,P<0.01),超氧化物岐化酶(分别为100%、81.2%±3.1%、71.0%±3.1%和44.2%±3.3%,P<0.01)、谷胱甘肽过氧化物酶(分别为100%、80.4%±3.6%、68.6%±3.7%和40.6%±4.2%,P<0.01)等抗氧化酶mR-NA含量减少,活性减退(P<0.01),内皮祖细胞生物学功能明显减退(P<0.01).结论 晚期糖基化终末产物促进内皮祖细胞内活性氧生成,减少抗氧化酶的合成,增强氧化应激,破坏细胞内环境稳定性,使细胞生物学功能受损.并且这种变化与晚期糖基化终末产物浓度成正相关.     

糖基化终产物引起晚期内皮祖细胞功能障碍

目的观察与糖尿病患者血清浓度类似的糖基化终产物修饰的牛血清白蛋白对体外培养脐血来源晚期内皮祖细胞功能的影响并探讨可能机制。方法密度梯度离心法分离脐血中单个核细胞,用差速贴壁法分离、培养晚期内皮祖细胞。流式细胞术、免疫细胞化学染色及荧光标记的乙酰化低密度脂蛋白、植物凝集素被用于鉴定培养的细胞。将晚期糖基化修饰的牛血清白蛋白与晚期内皮祖细胞共同培养24h后,利用噻唑蓝法检测细胞的增殖能力,AnnexinV/PI双染法流式细胞术检测细胞凋亡;Boyden小室法检测血管内皮生长因子趋化的细胞迁移;ECMatirx-gel检测形成毛细血管样网状结构的能力。利用逆转录聚合酶链反应、蛋白免疫印迹法测定糖基化终产物受体mRNA和蛋白表达水平。结果脐血单个核细胞在体外培养过程中先后出现两种细胞:第5～7天出现集落样生长细胞,扩增不明显,存在14天左右即消失,这类细胞被称为"早期内皮祖细胞";10～15天时,逐渐出现20～50个细胞组成的细胞簇,1～3天即可形成大于500个细胞簇,细胞呈铺路石样,可传代,大于95%的细胞免疫表型为CD45-/CD146+/CD105+,表达内皮细胞特有的vWF因子,可摄取乙酰化低密度脂蛋白并可与荆豆凝集素1结合,这类细胞被称为"晚期内皮祖细胞"。50～400mg/L晚期糖基化修饰的牛血清白蛋白与晚期内皮祖细胞共培养24h后,与对照组相比,细胞的增殖能力未见明显变化(P0.05)。当晚期糖基化修饰的牛血清白蛋白浓度大于100mg/L时,与对照组相比,晚期内皮祖细胞的凋亡增加(P0.05)、血管内皮生长因子趋化的迁移以及在ECMatirx-gel上形成新生血管的能力下降(P0.05),糖基化终产物受体mRNA和蛋白表达均增加(P0.05)。结论糖基化终产物通过促进凋亡、抑制迁移及体外形成新生血管的能力引起晚期内皮祖细胞功能障碍,这些影响可能与糖基化终产物上调晚期内皮祖细胞上糖基化终产物受体表达有关。     

糖基化终产物对大鼠主动脉平滑肌细胞结缔组织生长因子表达的影响

目的 研究糖基化终产物对结缔组织生长因子(CTGF mRNA)及蛋白质表达的影响,探讨糖基化终产物致动脉粥样硬化机制. 方法 采用组织块贴壁法培养大鼠主动脉平滑肌细胞.反转录聚合酶链反应、蛋白免疫印迹法检测血管平滑肌细胞结缔组织生长因子mRNA及蛋白质的表达. 结果 随着糖基化修饰的牛血清白蛋白(AGE-BSA)的干预浓度(100、200、400 mg/L)升高,CTGF mRNA的表达水平呈上升趋势,分别为(0.78±0.03)、(1.15±0.03)、(1.40±0.04)mg/L,与未干预(0.40±0.02)mg/L比较,差异有统计学意义(P<0.05),不同浓度间差异亦有统计学意义(P<0.05).以200 mg/L的AGE-BSA对平滑肌细胞分别干预0、4、8、16、24、48、72 h,发现4 h时CTGF mRNA表达即已升高(0.93±0.04)mg/L,8 h时最高(1.29±0.04)mg/L,以后虽略有下降,但仍维持较高水平. 结论 糖基化终产物促进血管平滑肌细胞表达结缔组织生长因子,可能是其致动脉粥样硬化机制中的一个重要方面.     

糖基化终产物对平滑肌细胞增殖及纤溶酶原激活物抑制剂1基因表达的影响

目的探讨糖基化终产物对大鼠平滑肌细胞增殖以及纤溶酶原激活物抑制剂1基因表达的影响。方法体外分离培养大鼠平滑肌细胞,以不同浓度(50、100、200和400mg/L)糖基化终产物作用于平滑肌细胞不同时间(0、4、8、16、24、48、72和96h),MTT法观察糖基化终产物对平滑肌细胞增殖的影响,逆转录聚合酶链反应测定纤溶酶原激活物抑制剂1基因的表达。结果不同浓度的糖基化终产物作用8h均对平滑肌细胞增殖无影响,以后各时间点不同浓度的糖基化终产物均导致平滑肌细胞增殖,与对照组比较差异有显著性(P<0.05)。糖基化终产物作用不同时间均可使平滑肌细胞表达纤溶酶原激活物抑制剂1基因水平升高,且随着浓度升高而增加(分别为0.85±0.05、0.97±0.05、1.08±0.12和1.41±0.05),与对照组(0.80±0.03)比较差异有显著性(P<0.05)。结论糖基化终产物诱导血管平滑肌细胞增殖并增加纤溶酶原激活物抑制剂1基因表达是糖尿病患者易患动脉粥样硬化的可能原因。     

急性心肌梗死伴2型糖尿病患者内皮祖细胞动员障碍

目的观察急性心肌梗死伴2型糖尿病患者血浆缺血相关因子血管内皮生长因子和基质细胞衍生因子水平,骨髓内皮祖细胞动员是否存在障碍,以及基质细胞衍生因子、血管内皮生长因子-内皮祖细胞动员通路是否存在异常。方法采用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞,用流式细胞仪检测急性心肌梗死后不同时间点(1、3、5、7、14和28天)外周血CD45-/low /CD34 /CD133 /KDR 早期内皮祖细胞数量。酶联免疫吸附法检测血浆中血管内皮生长因子、基质细胞衍生因子以及高敏C反应蛋白的浓度。结果急性心肌梗死伴2型糖尿病患者外周血内皮祖细胞动员高峰(第7天)较急性心肌梗死非糖尿病患者(第5天)延迟且显著减少[(140±48)/106比(246±100)/106,P<0.05]。糖尿病组血浆血管内皮生长因子(第5天:277±95ng/L比168±35ng/L,P<0.05)、基质细胞衍生因子(第5天:3835±402ng/L比3287±384ng/L,P<0.05)以及高敏C反应蛋白(第3天:55.55±14.88mg/L比36.92±14.83mg/L,P<0.05)在高峰点的水平显著高于非糖尿病组。结论糖尿病患者心肌梗死后组织缺血程度较重,但组织缺血后基质细胞衍生因子、血管内皮生长因子-内皮祖细胞动员通路存在障碍,这可能是糖尿病患者缺血后血管新生功能障碍,发生急性心肌梗死后预后较差的原因之一。     

晚期糖基化终产物诱导ECV304细胞株氧化增强的可能机制

目的探讨晚期糖基化终产物诱导细胞株ECV304氧化增强的机制。方法取ECV304细胞培养,与不同浓度的晚期糖基化终产物-人血清白蛋白共孵育,或分别经NADPH氧化酶抑制剂Apocynin或蛋白激酶C抑制剂GF109203或酪氨酸蛋白激酶抑制剂Genistein预孵育0.5 h后,再与晚期糖基化终产物—人血清白蛋白共孵育,1h后收集细胞,用细胞色素C法检测O2-.,ThioGlo-1试剂检测还原型谷胱甘肽。结果12.5 mg/L、50 mg/L和200mg/L晚期糖基化终产物—人血清白蛋白可导致ECV304细胞内O2-.从1.37±0.67 nmol/(107.h)增加到3.44±0.40、10.67±0.67和10.93±0.67 nmol/(107.h),使还原型谷胱甘肽从9.54±0.41 nmol/106降低到9.02±0.21、8.41±0.34和8.02±0.18 nmol/106,两者均呈剂量依赖性。Apocynin、GF109203及Genistein均可抑制O2-.的增加及还原型谷胱甘肽的降低。结论晚期糖基化终产物-人血清白蛋白可通过蛋白激酶C和酪氨酸蛋白激酶途径激活NADPH氧化酶,引起ECV304细胞内O2-.产生及还原型谷胱甘肽降低,导致细胞内氧化增强。     

晚期糖基化终产物对人内皮细胞表达MCP-1和VCAM-1的影响及阿托伐他汀的干预

目的观察晚期糖基化终产物对体外培养人脐静脉内皮细胞表达单核细胞趋化蛋白1和血管细胞黏附分子1的影响及阿托伐他汀的干预作用,探讨晚期糖基化终产物诱发动脉粥样硬化形成的机制和阿托伐他汀治疗的机制。方法胶原酶消化法分离获取人脐静脉内皮细胞;倒置相差显微镜形态观察法及免疫细胞化学染色法鉴定人脐静脉内皮细胞;逆转录聚合酶链反应法对单核细胞趋化蛋白1、血管细胞黏附分子1及晚期糖基化终产物受体基因表达进行分析;活性氧检测试剂盒检测细胞内活性氧产生量,倒置荧光显微镜下观察细胞内活性氧荧光强度。结果倒置相差显微镜下可见培养的细胞呈卵圆形或多角形,典型的铺路石样排列,经CD31、CD34染色,细胞浆内有棕黄色颗粒沉着(CD31、CD34阳性)。与空白对照组相比,晚期糖基化终产物(10-4~10-1g/L)呈浓度依赖性增强人内皮细胞单核细胞趋化蛋白1和血管细胞黏附分子1基因表达,10-4g/L晚期糖基化终产物组人内皮细胞单核细胞趋化蛋1和血管细胞黏附分子1基因表达水平开始显著增高(0.26±0.02比0.17±0.04;0.22±0.02比0.08±0.01,P<0.01);与晚期糖基化终产物组相比,阿托伐他汀(0.1、1、10μ...     

肝细胞生长因子对糖基化终产物诱导内皮细胞凋亡的影响

目的探讨糖基化终产物对内皮细胞的凋亡作用,以及肝细胞生长因子对内皮细胞凋亡的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,予不同浓度糖基化终产物及肝细胞生长因子干预,分为实验对照组及100 mg/L、200mg/L4、00 mg/L糖基化终产物组和400 mg/L糖基化终产物 100μg/L肝细胞生长因子组,采用四甲基偶氮唑蓝比色法测定各组内皮细胞生长抑制率,通过吖啶橙荧光染色观察细胞形态学变化,流式细胞术测定Annexin V-FITC/PI双染标记的细胞凋亡率,检测肝细胞生长因子对糖基化终产物诱导内皮细胞凋亡的影响;蛋白免疫印迹法分析各组凋亡基因Bax、Bcl-2蛋白的表达及酶联反应法测定细胞凋亡蛋白酶3的活性。结果肝细胞生长因子能明显降低糖基化终产物对内皮细胞生长的抑制作用(P<0.01);糖基化终产物诱导培养的内皮细胞出现明显的凋亡形态学改变,在一定浓度范围内,内皮细胞凋亡率与糖基化终产物的浓度和作用时间呈依赖关系,肝细胞生长因子干预后可显著降低不同时间的内皮细胞凋亡率(P<0.05);肝细胞生长因子作用内皮细胞抗凋亡基因Bcl-2表达明显升高(P<0.01),而促凋亡基因Bax表达无明显变化(P>0.05);细胞凋亡蛋白酶3活性显著降低(P<0.05)。结论糖基化终产物诱导人内皮细胞凋亡,而肝细胞生长因子抑制糖基化终产物诱导的内皮细胞凋亡,其作用机制可能是上调抗凋亡基因Bcl-2水平、抑制细胞凋亡蛋白酶3的激活。     

冠心病患者外周血内皮祖细胞的数量和活性

目的研究冠心病患者外周血中内皮祖细胞的数量、形态和活性。方法选择冠心病患者57例和正常对照者30例,用密度梯度离心法从外周血获取单个核细胞,将其接种在人纤维连接蛋白包被的培养板,用加入血管内皮生长因子165和碱性成纤维细胞生长因子的1640培养基培养细胞,并分析细胞形态和形成集落的数量,7d后贴壁细胞进行细胞分析和计数。用激光共聚焦显微镜鉴定FITC标记的荆豆凝集素和Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白,双染色阳性细胞为正在分化的内皮祖细胞;用流式细胞仪检测细胞表面抗原CD34和KDR;采用MTT比色法检测细胞的生长状态。结果冠心病患者外周血内皮祖细胞数量较对照组明显减少(23.1±1.8个/200倍比56.7±2.4个/200倍,P<0.05),形成细胞集落数(14.7±2.5个/40倍比24.2±1.7个/40倍,P<0.05)、细胞增殖能力和生长曲线也明显降低。结论冠心病患者外周血内皮祖细胞的数量和活性明显降低。     

糖基化终产物对凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1表达的影响

目的 研究长期高血糖所致糖基化终产物对巨噬细胞凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1表达的影响.方法 U937细胞经佛波酯诱导分化,并将不同浓度或同一浓度糖基化终产物与诱导分化48 h后的U937细胞共同孵育,用Western Blotting法检测凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1蛋白的表达.同时应用ELISA法测定24例2型糖尿病患者及22例正常对照者血清可溶性氧化型低密度脂蛋白受体1的含量.结果 100、200和400 mg/L 糖基化终产物刺激后细胞表面凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1蛋白表达量分别是对照组的1.85、3.22和4.65倍(P<0.05);400 mg/L的糖基化终产物作用12、24、48 h后,U937巨噬细胞该受体蛋白表达量分别为0 h的2.85、3.89和4.3倍(P<0.05).糖尿病患者血清氧化型低密度脂蛋白受体1及糖基化终产物含量较正常对照者显著升高(P<0.01),两者呈正相关(P<0.001). 结论糖基化终产物可增加U937巨噬细胞凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1蛋白表达且呈浓度和时间依赖性.这可能与糖尿病患者加速泡沫细胞形成而易致动脉粥样硬化有关.     

氧化型低密度脂蛋白对人脐静脉内皮祖细胞增殖、凋亡及bcl-2表达的影响

目的探讨氧化型低密度脂蛋白对人脐静脉内皮祖细胞增殖、凋亡及bcl-2表达的影响。方法密度梯度离心法获取人脐静脉血单个核细胞,培养7天后,收集贴壁细胞并加入不同浓度氧化型低密度脂蛋白(分别为5、10及20mg/L)干预48h。MTT法检测氧化型低密度脂蛋白对内皮祖细胞增殖能力的影响,流式细胞仪检测氧化型低密度脂蛋白对细胞凋亡率的影响,逆转录聚台酶链反应检测bcl-2mRNA的表达,免疫细胞化学法检测bcl-2蛋白的表达。结果氧化型低密度脂蛋白呈浓度依赖性抑制内皮祖细胞增殖,诱导内皮祖细胞凋亡(P<0.01);基础状态下内皮祖细胞表达bcl-2mRNA及蛋白,氧化型低密度脂蛋白处理能抑制其表达,并存在量效关系(P<0.05)。结论氧化型低密度脂蛋白通过下调bcl-2的表达诱导内皮祖细胞凋亡、抑制内皮祖细胞增殖,这可能影响血管内皮的修复及新生血管的形成。     

美乐托宁对冠心病患者循环血中内皮祖细胞增殖与凋亡的影响

目的 探讨抗氧化剂美乐托宁对冠心病患者循环血中内皮祖细胞增殖与凋亡的影响及其机制.方法 选择冠状动脉造影确定冠心病患者36例,密度梯度离心法获取冠心病患者外周血单个核细胞,培养7天后,收集贴壁细胞并加入不同浓度美乐托宁(0.5、1.0和2.0 mmol/L)干预6、12、24和48 h.MTT法检测美乐托宁对内皮祖细胞增殖能力的影响,流式细胞仪检测美乐托宁对细胞凋亡率的影响,逆转录.聚台酶链式反应技术检测Bcl-2mRNA表达,Western blot检测Bcl-2的蛋白表达.结果 美乐托宁呈浓度和时间依赖性改善体外培养的冠心病患者外周血内皮祖细胞的粘附、迁移和增殖能力(P<0.01);美乐托宁抑制体外培养的冠心病患者外周血中内皮祖细胞的凋亡,作用呈浓度和时间依赖性(P<0.01);美乐托宁上调内皮祖细胞内Bcl-2 mRNA和蛋白的表达(P<0.01).结论 美乐托宁能改善体外培养的冠心病患者外周血内皮祖细胞的粘附、迁移和增殖能力,并通过上调凋亡抑制基因Bcl-2而发挥抑制内皮祖细胞凋亡的作用.     

Comparative analysis of the predictive power of different endothelial progenitor cell phenotypes on cardiovascular outcome

AIM: To compare the predictive power of different endothelial progenitor cell (EPC) phenotypic markers for future cardiovascular events.METHODS: Peripheral blood was collected from 76 consecutive patients with acute coronary syndromes (ACS) who underwent percutaneous coronary intervention in our institute. The various EPC phenotypes of peripheral blood mononuclear cells were CD34+CD133+, CD34+KDR+, and CD 133+KDR+. The outcome endpoint included cardiovascular mortality, recurrent ACS, and hospitalization for decompensated heart failure during a 24-mo follow-up period.RESULTS: CD34+CD133+ cells (P = 0.034), but not CD34+KDR+ (P = 0.35) or CD 133+KDR+ cells (P = 0.19), were found to predict recurrent ACS. We found no correlation between EPCs measured by any of the three phenotypic combinations of accepted CD markers and the total combination of these separate outcomes.CONCLUSION: The EPC CD34+CD133+ phenotype, but not the CD34+KDR+ or the CD 133+KDR+ phenotypes, is predictive of future adverse cardiovascular outcomes.     

脂联素对高糖刺激下内皮祖细胞的作用及其可能的作用机制

目的:研究脂联素(adiponectin,APN)对高糖刺激下内皮祖细胞(Endothelial Progenitor Cells,EPCs)的作用,并探讨其可能的机制。方法: 密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞,经含血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子和100 ml/L胎牛血清的M199培养基培养7 d,贴壁细胞进行形态学、流式细胞仪测细胞分子标志物(CD34、CD133和KDR)和激光共聚焦倒置显微镜下观察培养细胞摄取ac LDL和结合UEA I经何种方法鉴定为EPCs。细胞同步化后,将其随机分为7组:正常糖浓度对照组(55 mmol/L)、高渗对照组（55 mmol/L葡萄糖+245 mmol/L甘露醇及其浓度）、高糖(30mmol/L)组及高糖APN干预组(30 mmol/L葡萄糖合并APN,125、25、5、10 μg/ml)。干预48 h后,分别采用MTT比色法、Transwell小室检测EPCs的增殖、迁移;以Annexin V FITC凋亡检测试剂盒处理细胞,流式细胞仪检测EPCs的凋亡;用荧光探针(DCFH DA)检测法进行细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)检测。结果: ①经密度梯度离心法分离出的外周血单个核细胞培养7 d后,细胞集落增加明显,梭形细胞增多并呈交叉性生长;用激光共聚焦倒置显微镜观察,细胞摄取DiI acLDL呈红色荧光,摄取FITC UEA I呈绿色荧光,摄取DiI acLDL并结合FITC UEA I的细胞呈黄色荧光,流式细胞仪分析结果提示:细胞表达KDR(9232%)、CD133(107%)、CD34(233%),证实培养的细胞是正在分化的EPCs。②随着糖浓度的增高,EPCs的增殖能力下降,凋亡、ROS水平增加(P<001);当糖浓度为30 mmol/L与50 mmol/L时,两者相比对EPCs的影响无统计学差异。③与正常糖浓度对照组相比,高渗对照组EPCs的增殖、迁移、凋亡和ROS水平无统计学差异。在30 mmol/L葡萄糖条件下,EPCs的数量和迁移功能较正常对照组明显下降,细胞凋亡增多,不同浓度APN干预后能明显提高高糖损伤后EPCs的功能(P<005,P<001),并随着浓度的增加,EPCs的增殖与迁移能力增高,凋亡、ROS水平下降(P<001)。结论: ①与对照组相比,高糖干预可导致EPCs增殖能力下降,细胞凋亡增多;②高糖干预后加入APN,EPCs的增殖、迁移能力恢复,细胞凋亡减少,并在一定范围内,其作用随浓度的增加而增强;③高糖可以引起EPCs功能受损,其作用机制可能与ROS水平升高有关;而APN可以通过降低高糖引起的ROS水平,保护EPCs功能;渗透压对EPCs无影响。     

循环CD133+/KDR+内皮祖细胞水平与急性缺血性卒中患者转归的相关性

目的 探讨急性缺血性卒中患者循环CD133+/KDR+内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)水平与转归的关系.方法 纳入发病24 h内的首次急性缺血性卒中住院患者以及年龄和性别相匹配的健康体检者.收集患者人口统计学和临床资料.采用流式细胞术检测CD133+/KDR+EPCs水平.在发病后90 d时对所有患者进行随访,采用改良Rankin量表评价临床转归,0~2分定义为转归良好,>2分定义为转归不良.结果 共纳入连续126例缺血性卒中患者以及60例年龄和性别相匹配的健康体检者.在缺血性卒中患者中,大动脉粥样硬化(large artery atherosclerosis,LAA) 33例(26.19%),小动脉闭塞(small artery occlusion,SAO)74例(58.73%),心源性栓塞(cardioembolism,CE)19例(15.08%);82例(65.08%)转归良好,44例(34.92%)转归不良.LAA型(0.071%±0.018%)、CE型(0.068%±0.016%)和SAO型(0.118%±0.012%)患者基线循环EPCs数量均显著低于对照组(0.246%±0.052%;P均<0.05);CE型(P=0.028)和LAA型(P=0.037)均显著低于SAO型;CE型低于LAA型,但差异无统计学意义(P=0.762).转归不良组LAA型(40.91%对18.29%;χ2=7.577,P=0.006)和CE型(29.55%对7.32%;χ2=11.049,P=0.001)和心房颤动(29.55%对10.98%;χ2=6.582,P=0.009)患者的构成比以及年龄[(69.64±9.62)岁对 (61.12±7.31)岁;t=5.570,P<0.001]、基线NIHSS评分[(14.16±4.22)分对 (6.96±2.04)分;t=12.919,P<0.001]、基线收缩压[(176.06±13.42)mmHg对 (164.12±11.69)mmHg,1 mmHg=0.133 kPa;t=5.187,P<0.001]、低密度脂蛋白胆固醇[(2.92±0.52)mmol/L对 (2.49±0.36)mmol/L;t=5.447,P<0.001]、空腹血糖[(8.76±2.88)mmol/L对 (6.82±2.24)mmol/L;t=4.185,P<0.001]、C反应蛋白[(7.62±1.82)mg/L对 (4.57±1.58)mg/L;t=9.790,P<0.001]和D-二聚体[(1.14±0.08)mg/L对 (0.97±0.22)mg/L;t=4.946,P<0.001]水平均显著高于转归良好组,而SAO型患者构成比(29.55%对74.39%;χ2=23.759,P<0.001)以及高密度脂蛋白胆固醇[(0.94±0.68)mmol/L对 (1.16±0.14)mmol/L;t=2.829,P=0.005]和基线EPCs(0.069%±0.018%对0.098%±0.021%;t=7.755,P<0.001)水平显著低于转归良好组.多变量logistic回归分析显示,基线NIHSS评分较高(优势比1.242,95%可信区间1.126~1.372;P<0.001)、CE型(优势比3.460,95%可信区间1.312~5.146;P=0.016)和基线EPCs数量较低(优势比1.632,95%可信区间1.006~3.024;P<0.001)是急性缺血性卒中患者转归不良的独立危险因素.结论 急性缺血性卒中患者循环EPCs水平显著降低,基线EPCs水平较低是缺血性卒中患者90 d时转归不良的独立预测因素.     

Endothelial progenitor cells in relation to endothelin-1 and endothelin receptor blockade: A randomized,controlled trial

Aims

Endothelial progenitor cells (EPC) represent an endogenous repair mechanism involving rendothelialization and neoangiogenesis. Patients with both diabetes and vascular disease have low numbers of circulating EPC. The endothelium-derived peptide, endothelin-1 (ET-1), is increased in patients with type 2 diabetes and vascular complications and has been suggested to contribute to endothelial dysfunction. Therefore, we investigated the relation between EPC and plasma ET-1 and the effect of dual ET-1 receptor antagonist treatment.

Methods

In this double blind study patients with type 2 diabetes mellitus and microalbuminuria were randomized to treatment with the dual ETA/ETB receptor antagonist bosentan treatment (125 mg bid; n = 17) or placebo (n = 19) for four weeks. Different EPC subpopulations were enumerated by flow cytometry using triple staining (CD34, CD133, KDR) at baseline at the end of treatment. Viability was assessed by 7AAD and Annexin-V-staining.

Results

Baseline ET-1 levels correlated significantly with C-reactive protein levels. Patients with ET-1 levels above the median value had higher levels of CD34⁺CD133⁺ and CD34⁺KDR⁺ EPC. There was no difference in CD34⁺ and CD34⁺CD133⁺KDR⁺ cells, markers of EPC apoptosis or circulating markers of endothelial damage between patients with ET-1 levels below or above the median. Four week treatment with bosentan did not change EPC levels.

Conclusion

Among patients with type 2 diabetes and vascular disease, high plasma levels of ET-1 are associated with higher number of EPC. The recruitment of EPC does not seem to be regulated via ET-1 receptor activation since treatment with a dual ET-1 receptor blocker did not affect circulating EPC numbers.     

Impaired progenitor cell activity in age-related endothelial dysfunction

OBJECTIVES: We investigated whether human age-related endothelial dysfunction is accompanied by quantitative and qualitative alterations of the endothelial progenitor cell (EPC) pool. BACKGROUND: Circulating progenitor cells with an endothelial phenotype contribute to the regeneration and repair of the vessel wall. An association between the loss of endothelial integrity and EPC modification may provide a background to study the mechanistic nature of such age-related vascular changes. METHODS: In 20 old and young healthy individuals (61 +/- 2 years and 25 +/- 1 year, respectively) without major cardiovascular risk factors, endothelial function, defined by flow-mediated dilation of the brachial artery via ultrasound, as well as the number and function of EPCs isolated from peripheral blood, were determined. RESULTS: Older subjects had significantly impaired endothelium-dependent dilation of brachial artery (flow-mediated dilation [FMD] 5.2 +/- 0.5% vs. 7.1 +/- 0.6%; p < 0.05). Endothelium-independent dilation after glycerol trinitrate (GTN) was not different, but the FMD/GTN ratio was significantly lower in old subjects (49 +/- 4% vs. 37 +/- 3%; p < 0.05), suggesting endothelial dysfunction. There were no differences in the numbers of circulating EPCs, defined as CD34/KDR or CD133/KDR double-positive cells in peripheral blood. In contrast, lower survival (39 +/- 6 cells/mm(2) vs. 65 +/- 11 cells/mm(2); p < 0.05), migration (80 +/- 12 vs. 157 +/- 16 cells/mm(2); p < 0.01), and proliferation (0.20 +/- 0.04 cpm vs. 0.44 +/- 0.07 cpm; p < 0.05) implicate functional impairment of EPCs from old subjects. The FMD correlated univariately with EPC migration (r = 0.52, p < 0.05) and EPC proliferation (r = 0.49, p < 0.05). Multivariate analysis showed that both functional features represent independent predictors of endothelial function. CONCLUSIONS: Maintenance of vascular homeostasis by EPCs may be attenuated with age based on functional deficits rather than depletion of CD34/KDR or CD133/KDR cells.     

Altered profile of circulating endothelial progenitor cells in obstructive sleep apnea

Background

Obstructive sleep apnea (OSA) is independently associated with endothelial dysfunction, which may be perpetuated by alteration in endothelial repair capacity. Our study evaluates changes in endothelial progenitor cell (EPC) profile in relation to OSA and the role of advanced glycation end-products (AGE) in this relationship.

Methods

Consecutive Chinese adults undergoing sleep studies, who had no medical illnesses or regular medications, were enrolled. Subjects with morbid obesity or grossly elevated lipoprotein levels were excluded from analysis. Circulating EPC was measured with flow cytometry analysis.

Results

Seventy-two subjects, 64 % with OSA defined by apnea–hypopnea index (AHI) ≥ 5, were analyzed. CD34+ cell counts were positively correlated with oxygen desaturation index (ODI) (r?=?0.250, p?=?0.041) and duration of oxygen desaturation <90 % (T90) (r?=?0.261, p?=?0.033) and negatively with minimal oxygen saturation (r?=??0.247, p?=?0.044) after adjusting for age, glucose, body weight, and smoking status. AGE was positively correlated with indices of OSA severity (AHI, r?=?0.249, p?=?0.042; ODI, r?=?0.244, p?=?0.047; T90, r?=?0.243, p?=?0.047; minimal oxygen saturation, r?=??0.251, p?=?0.041) and negatively with CD133+ cells (r?=??0.281, p?=?0.021). On stepwise multiple linear regression analysis, minimal oxygen saturation (p?=?0.013) and CD133+ cell counts (p?=?0.029) were found to be significant determinants of AGE level (R ²?=?0.147).

Conclusions

Nocturnal hypoxemia in OSA subjects was associated with increase in endothelial cells (CD34+) which may promote vascular repair. Accumulation of AGE in OSA may lead to diminution in early EPC (CD133+) and endothelial repair capacity over time, thus contributing to vascular pathogenesis.