CD3AK、LAK与CIK细胞生物学特性的研究

①目的探讨CD3AK、LAK及CIK细胞的诱导、增殖能力及杀伤活性的变化.②方法采用CD3单抗和IL-2刺激诱生扩增CD3AK细胞,用IL-2刺激诱生LAK细胞,采用第0天加入IFN-γ,第1天加入IL-1,CD3单抗,IL-2诱生CIK细胞,观察它们的扩增情况;用MTT法以K562和H7402细胞为靶细胞,测定CD3AK、LAK及CIK细胞的杀伤活性.③结果CD3AK和CIK细胞的扩增能力远大于LAK细胞(P＜0.05).CIK细胞和CD3AK相比,在前期无明显差异,至第19、22天时CIK细胞的扩增能力显著高于CD3AK的扩增倍数(P＜0.05).CD3AK和CIK细胞对K562和H7402细胞的杀伤活性均显著高于LAK细胞(P＜0.05).④结论CIK细胞具有更高的扩增能力和更强的杀伤活性,是肿瘤过继免疫治疗中更为有效的杀瘤效应细胞.     

CD3 AK细胞与LAK细胞的诱导和体外杀伤活性的比较

目的：探讨CD3AK细胞与LAK细胞的诱导、增殖动力学和杀伤活性的变化。方法：采用抗CD3单克隆抗体（anti-CD3McAb)和rIL-2及PHA（植物血凝素）共刺激法诱生扩增CD3AK细胞,用等量rIL-2 t PHA共刺激法诱生LAK细胞。观察它们的增殖动力学变化;用MTT法以K562细胞和H7402细胞为靶细胞,测量CD3AK细胞和LAK细胞的杀伤活性。结果：微量的anti-CD3McAb辅以少量的rIL-2和PHA就能诱导和大量扩增CD3AK细胞,其扩增能力显著高于LAK细胞（P<0.001);CD3AK细胞对K562细胞和H7402细胞的杀伤活性显著高于LAK细胞（P<0.05)。结论：CD3AK细胞的扩增能力及杀伤活性均较LAK细胞为强,是更为有效的杀瘤效应细胞。     

CD3AK的制备及杀菌作用观察

目的：观察CD3AK（抗CD3单克隆抗体）的活化及对肿瘤细胞的杀伤活性。方法：以不同的肿瘤细胞为靶细胞,以人外周血淋巴细胞为效应细胞,在体外用不同浓度的抗CD3单克隆抗体和／或IL－2进行激活,用MTT法观察细胞毒杀伤作用。结果：CD3AK的扩增率较LAK高一个数量级,且对不同的肿瘤细胞均有杀伤作用。其18h杀伤均大于4h。结论：由于CD3AK较LAK对IL－2的需要量少,扩增率高,而比LAK更有临床应用发展前景。     

抗CD3单克隆抗体、rIL-2协同活化PBMC抗人脑胶质瘤的体外实验研究

目的探讨抗CD3单克隆抗体活化杀伤细胞(aCD3AK)体外抗脑胶质瘤的机制.方法采用抗CD3单克隆抗体(CD3McAb)和重组白细胞介素2(rIL-2)共同刺激人外周血单个核细胞(PBMC)而获aCD3AK.对比aCD3AK与淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)、肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)在增殖动力学、抗脑胶质瘤活性等方面的差别,并测定aCD3AK抗脑胶质瘤的适宜效靶比和最佳培养时段.结果aACD3AK的增殖倍数明显高于LAK及TIL(均P<0.05),抗脑胶质瘤细胞活性优于LAK,但与TIL比较,差异无统计学意义(P>0.05),抗脑胶质瘤适宜效靶比为201,培养至第7～10天活性最强.结论aCD3AK作为一种新型抗人脑胶质瘤免疫细胞,具有抗脑胶质瘤活性强,前体来源广泛、诱导简易等优势,值得深入研究.     

GM-CSF对体外培养的LAK细胞抗肿瘤作用影响的初步研究

目的　探讨GM CSF对LAK细胞抗肿瘤作用影响 ,为临床应用GM CSF提供一些实验数据。方法　按常规分离正常人外周血成单个核细胞 ,分GM CSF组和LAK细胞组进行实验 ,观察GM CSF对LAK细胞的增殖活性和LAK细胞的细胞毒活性的影响。结果　GM CSF组细胞增殖活性较LAK组细胞增殖活性高 ,增殖第 7天时 ,GM CSF组达 7 3× 1 0 6/ml细胞 ,而LAK组只有 5 9× 1 0 6/ml细胞。GM CSF组效应细胞对肝癌细胞杀伤活性为 (1 7 4 8± 1 0 6 5 ) % ,LAK组效应细胞对肝癌细胞杀伤活性为 (32 36± 7 2 9) % ;说明GM CSF组对肝癌细胞的杀伤活性较LAK组效应细胞的杀伤活性为低 (P <0 0 0 5 )。结论　GM CSF对LAK细胞抗肿瘤功能具有抑制作用     

小鼠颌下腺组织培养上清液影响红系造血的实验研究

为了研究颌下腺是否合成造血因子以及合成的造血因子的可能种类 ,进一步研究颌下腺对血发生的调控 ,采用造血祖细胞体外培养和流式细胞术检测细胞表面标记物。结果显示 ,小鼠颌下腺组织培养上清液(SGCM)在体外培养中 ,对早期和晚期红系造血祖细胞有促进增殖和分化的作用 ,实验组集落数远远高于阴性对照组 (P<0 .0 5 ) ;晚期红系祖细胞 (CFU- E)培养体系雄性小鼠颌下腺组织培养上清液组集落数明显高于雌性组 (P<0 .0 5 ) ,早期红系祖细胞 (BFU- E)培养体系没有明显差异 (P>0 .0 5 ) ,贫血模型小鼠颌下腺促进 BFU- E和 CFU- E增殖和分化的活性高于正常小鼠 (P<0 .0 5 ) ,IL- 3与 SGCM有协同刺激作用 ,说明小鼠颌下腺确能合成和分泌促进红系造血的细胞因子 ,雄性小鼠颌下腺促进 CFU- E增殖和分化细胞因子的活性高于雌性小鼠。本实验为进一步研究小鼠颌下腺合成造血因子和其与造血调控的关系提供了实验依据。     

抗CD3mAb和IL-2共激活T杀伤细胞的免疫生物学活性研究

目的 探讨抗CD3单克隆抗体(CD3mAb)和rIL-2共同激活诱生的具有高效溶细胞活性的杀瘤效应细胞T-AK(T-activated killer)细胞的免疫生物特征。方法 观察从正常人外周血单个核细胞中诱生制备的T-AK细胞的形态学、免疫表型、细胞毒活性及其构成成分。结果 T-AK细胞具有活化淋巴母细胞的形态学特点;90％以上细胞表达T淋巴细胞表型(CD3^ ,CD8^ ),20％～50％细胞表达NK细胞表型(CD16^ ,CD56^ ),并表达IL-2受体(IL-2R)、CD38和MHCⅡ类抗原(HLA-DR^ )等激活淋巴细胞的表面标志;T-AK细胞对K562细胞、Raji细胞等具有高度杀伤活性,其活性主要由CD3mAb激活的CD3 AK活性(～50％)、IL-2诱生的LAK活性(～30％)、NK活性(～10％)和可溶性抑制因子的抑制活性(～10％)等4部分构成。结论 T-AK细胞为异质细胞群体,其主体为活化T淋巴细胞和NK细胞,具有CD3AK细胞和LAK细胞的共同活性。     

MtbAK细胞与CD3AK、LAK细胞体外增殖和杀瘤活性比较

目的:比较结核杆菌抗原激活的杀伤细胞(Mtb AK)、CD3AK及LAK细胞的体外增殖能力和杀瘤活性.方法:分别用结核杆菌抗原(Mtb-Ag)、CD3 mAb和rIL-2刺激人外周血单个核细胞(PBMC),在含rIL-2的RPMI 1640培养液中诱导扩增MtbAk、CD3AK和LAK细胞,用计数法动态观察细胞扩增情况,在流式细胞仪上分析MtbAK中的γδ T细胞比例,以MTT法检测三种扩增细胞对肿瘤细胞的细胞毒活性.结果:与CD3AK和LAK细胞相比,MtbAK细胞具有更强的增殖能力和较高的细胞毒活性.结论:MtbAK细胞在体外更易于扩增,具有较高的杀瘤活性,有可能应用于肿瘤患者的临床过继免疫治疗.     

胎儿骨髓基质细胞与外源性细胞因子的协同造血支持作用

目的 :探讨胎儿骨髓基质细胞与外源性细胞因子的协同造血支持作用。方法 :联合应用胎儿骨髓基质细胞与外源性细胞因子如重组人干细胞因子 (rh SCF)、IL - 3、IL - 6、粒巨噬细胞集落刺激因子 (GM- CSF)、粒细胞集落刺激因子 (G- CSF)、促红细胞生成素 (EPO)等先后对成人骨髓单个核细胞及 CD34 + 富集细胞培养 5 d至 2周。结果 :胎儿骨髓基质细胞与上述细胞因子具有良好的协同作用 ,CD34 +富集细胞以胎儿骨髓基质细胞 +SCF+IL- 3+IL- 6 +G- CSF+EPO培养 2周 ,可使细胞总数、粒 -单系造血祖细胞 (CFU- GM)、早期红系造血祖细胞 (BFU- E)及 CD34 +细胞分别扩增 (119.6± 30 .9)倍、(5 4.6± 17.4)倍、(2 5 .2± 4.4)倍、(11.1± 4.2 )倍。结论 :胎儿骨髓基质细胞可协同上述外源性细胞因子支持成人骨髓造血祖细胞的有效扩增     

CD_3AK的制备及杀瘤作用观察

目的：观察CD_3AK抗CD3单克隆抗体）的活化及对肿瘤细胞的杀伤活性。方法：以不同的肿瘤细胞为靶细胞,以人外周血淋巴细胞为效应细胞,在体外用不同浓度的抗CD3单克隆抗体和／或IL-2进行激活,用MTT法观察细胞毒杀伤作用。结果：CD3AK的扩增率较LAK高一个数量级,且对不同的肿瘤细胞均有杀伤作用。其18h杀伤均大于4h。结论：由于CD3AK较LAK对IL-2的需要量少,扩增率高,而比LAK更有临床应用发展前景。     

白细胞介素2激活的外周血和脐带血及骨髓单个核细胞培养上清对骨髓造血的影响

目的：探讨用白细胞介素2（IL-2）激性的外周血（APB）和脐带血（ACB）及骨髓（ABM）单个核细胞的培养上清,对骨髓造血的影响和作用的可能机制。方法：应用MTT法,在体外同时检测APB和ACB及ABM培养上清,对骨髓和外周血单个核细胞增殖能力的影响;同时用集落培养法,检测这3种上清对骨髓粒-单细胞集落和成纤维细胞集落形成能力的影响。结果：加入APB和ACB及ABM培养上清,对正常骨髓和外周血单个核细胞增殖能力,以及粒-单细胞集落和成纤维细胞集落形成无显著的影响。结论：应用IL-2对自体干细胞移植物进行体外净化时,培养上清对正常造血细胞和单个核细胞无显著影响。     

小鼠骨髓干细胞体外诱导成熟的树突状细胞对T细胞增殖的影响

目的：研究小鼠骨髓干细胞体外诱导分化的树突状细胞对T细胞增殖的影响,为进一步研究树突状细胞的功能及临床肿瘤的治疗提供有效的实验方法。 方法：应用IL-4和GM-CSF培养小鼠骨髓细胞5~7 d,光镜下观察细胞形态学变化;培养至第5~6天,加入黑色素瘤（B16）冻融抗原继续培养1~2 d,流式细胞仪检测细胞表面分子CD83、CD86,并与同种异体T细胞混合培养72 h,终止培养前16 h加入³H-TdR（18.5 kBq/孔）,γ-液体闪烁仪测定cpm值。 结果：用IL-4和GM-CSF培养3 d可见细胞形态发生改变,细胞形状不规则,培养5~6 d时,有刺状突起、拉长,为典型树突状细胞形态学特征;抗原装载后流式细胞仪检测CD83、CD86表达,IL-4+GM-CSF+TNF-α组（61.68%、71.25%）及IL-4+GM-CSF+冻融抗原组（63.11%、76.88%）明显高于对照组（2.41%、3.88%）及单纯IL-4+GM-CSF培养组（21.86%、28.69%）（P<0.001）,IL-4+GM-CSF+TNF-α组与IL-4+GM-CSF+冻融抗原组比较,CD83和CD86表达差异无显著性;液闪仪检测结果显示,IL-4+GM-CSF+冻融抗原组刺激T细胞增殖的能力明显强于其他组,且差异具有显著性（P<0.001, P<0.05）。 结论：小鼠骨髓细胞体外培养成功地诱导扩增出足量树突状细胞,经肿瘤抗原刺激后绝大部分成熟,并能够刺激同种异体T细胞大量增殖,参与免疫应答。     

CD3AK细胞的诱导及其体外抗肿瘤活性的实验研究

本研究采用抗ＣＤ３单克隆抗体辅以少量的基因重组人白细胞介素２和植物血凝素诱导外周血淋巴细胞，成功地研制出具有抗瘤活性的ＣＤ３ＭｃＡｂ激活的杀伤细胞。     

血虚证小鼠模型骨髓细胞红系祖细胞、粒单系祖细胞变化规律及中药复方对其的影响

目的：研究血虚证小鼠模型骨髓造血祖细胞体外增殖水平及变化规律,以及中药复方地甘口服液,红霖四物口服液对其的影响。方法：以Balb/c小鼠为实验对象,分别采用免疫介导法和综合放血法制作血虚证模型。采集其骨髓有核细胞进行培养;并分组灌服地甘口服液,红霖四物口服液,比较观察各组小鼠骨髓细胞体外培养CFU－E,BFU－E,CFU－GM集落的形成情况。结果：两种血虚证小鼠模型的CFU－E,BFU－E,CFU－GM集落形成较空白对照组显下降,尤以前为甚;两种中药复方均可促进模型小鼠骨髓细胞的增殖,但对于免疫介导血虚证模型,两治疗组的效果存在一定差异。结论：血虚证小鼠模型骨髓造血干（红9系,粒单系）细胞的体外增殖较正常小鼠明显下降,而地甘口服液,红霖四物口服液可以促进骨髓CFU－E,BFU－E,CFU－GM集落的形成。     

重组人FLT3配基对人脐血CD34＋细胞的体外扩增作用

目的观察重组人ＦＬ（ｒｈＦＬ）对脐血ＣＤ＋３４细胞的体外扩增作用。方法用磁性细胞分离仪富集人脐血ＣＤ＋３４细胞。在ＣＤ＋３４细胞体外液体培养中加入不同的细胞因子,在不同时间取样测试ＣＤ＋３４细胞阳性百分率、晚期造血祖细胞（粒细胞巨噬细胞集落生成单位及红系爆增式集落形成单位）并计数细胞总数。结果用磁性细胞分离仪可快速富集脐血ＣＤ＋３４细胞,纯度高达８０％以上。ｒｈＦＬ可协同白细胞介素（ＩＬ）－３、ＩＬ－６、粒－巨噬细胞集落刺激因子及促红细胞生成素促进ＣＤ＋３４细胞总数在７天时扩增３．４倍,无ｒｈＦＬ的对照组ＣＤ＋３４细胞只扩增１．５倍,但对晚期造血祖细胞的扩增无明显协同作用。结论用排除法证实ｒｈＦＬ主要扩增了早期造血祖细胞。     

Killing effect of interleukin-2 and interferon-alpha activated leukemic bone marrow in remission on K562 leukemic cells

OBJECTIVE To evaluate the killing effect of interleukin-2 (IL-2) and interferon-alpha (IFN-alpha) activated bone marrow cells on K562 cells.

METHODS Semi-solid colony and 3H-TdR incorporating method were used.

RESULTS Bone marrow from leukemia patients in remission was activated in vitro with IL-2 for 3 days. The activated bone marrow (ABM) displayed killing effects of 0.31-2.30 logs on K562 cells. This killing effect was further increased to 0.30-3.15 logs when IFN-alpha added with IL-2 to the marrow for activation. IL-2 alone or in combination with IFN-alpha showed no inhibition of CFU-GM and K562 cells. Compared with IL-2 or IFN-alpha alone, the combination of the two cytokines could more effectively maintain the killing effect of ABM on leukemic cells.

CONCLUSIONS IFN-alpha can augment the purging effect of IL-2 ABM and combination of the two cytokines can effectively maintain the cytotoxicity of ABM.

     

rhIL－3对人骨髓粒单祖细胞集落的影响

应用骨髓细胞体外培养技术，观察了国产重组人白细胞介素３（ｒｈＩＬ－３）对人骨髓粒单祖细胞集落的影响。结果显示，ｒｈＩＬ－３能刺激正常骨髓细胞形成由粒细胞或（和）单核细胞构成的细胞集落，这种效应在一定范围内与ｒｈＩＬ－３剂量呈依赖关系。     

补肾复方冲剂影响再生障碍性贫血患者造血祖细胞研究

在探讨补肾复方冲剂治疗肾阳虚型再生障碍性贫血 (简称再障 )临床疗效基础上 ,观察其对于再障患者骨髓造血祖细胞影响。以补肾复方冲剂治疗 30例 ,复方皂矾丸、康力龙各治疗 15例。采用甲基纤维素培养法观察 3组病例治疗前、后骨髓造血祖细胞水平变化 ,并与正常献血员对照。结果示补肾复方组临床有效率为 80 % ,明显高于复方皂矾丸 ( 4 0 % )与康力龙组 ( 4 6 67% ) ;且补肾复方组治疗有效病例的骨髓造血祖细胞 (BFU E及CFU GM )恢复明显优于复方皂矾丸与康力龙组 ;3组间无效者骨髓BFU E及CFU GM水平无明显变化。说明补肾复方冲剂治疗肾阳虚型再障疗效不仅高于复方皂矾丸和康力龙组 ,且其有效者血液学恢复更为完全。     

维生素A缺乏对红系早期祖细胞增殖影响的研究

采用造血祖细胞体外培养。造血生长因子生物活性检测等实验血液学技术，研究维生素Ａ缺乏（ＶＡＤ）对大鼠红系早期祖细胞（ＢＦＵ－Ｅ）增殖调控的影响。结果发现，与对照组比较，ＶＡＤ使ＢＦＵ－Ｅ集落增殖明显减少；用ＶＡＤ的脾及骨髓基质细胞培养上清液明显抑制ＢＦＵ－Ｅ集落增殖。结果提示，ＶＡＤ可能通过抑制造血生长因子白细胞介素３（ＩＬ－３）和粒单系集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）等表达而影响红系造血。     

Double potentialities of tumoricide and hematopoiesis of human bone marrow cells activated by IL-2 and IL-3

The biomodulative and hematopoietic potentialities of IL-2 and IL-3 activatedbone marrow(ABM)cells from patients with lung adenocarcinoma were studied in vitro.Human bone marrow(BM)cells could be activated by IL-2 in culture for 7d.TheseIL-2 ABM cells had higher cytolytic activities against cells of H 7402 cell line and freshautologous adenocarcinoma cells and maintained the cytotoxicities longer than IL-2 acti-vated peripheral blood lymphocytes(APBLs),a point of possible importance in adoptiveimmunotherapy for cancer patients.The IL-2 ABM cells also had similar number ofBFU-E and CFU-GM to that had fresh BM cells if 1L-3 was added 48h alter IL-2 inculture.The IL-2 and IL-3 ABM cells might be used to eliminate tumor cells and tosupply reconstitutive elements of BM for autologous bone marrow transplantation.