缺血后适应对大鼠肾脏急性热缺血再灌注损伤细胞凋亡的影响

目的 探讨缺血后适应对大鼠急性肾缺血再灌注损伤(isclaemic reperfusion injury,IRI)所导致的细胞凋亡的影响.方法 将40只Wistar健康雄性大鼠随机分为对照组(C组)、缺血再灌注组(IRI组)、缺血后适应组(IPo组)和腺苷组(Ado组)4组,C组仅行右肾切除,左肾蒂游离,其他3组除切除右肾外,IRI组为大鼠肾脏急性热缺血再灌注损伤模型,IPo组于再灌注之前行6个10 s无限制灌注 10 s再缺血循环,Ado组于缺血前10 min经静脉给予腺苷.分别采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)、流式细胞术及肾组织病理形态学的方法观察细胞凋亡.结果 ,与C组相比,IRI组细胞凋亡数显著增加(P＜0.05);与IRI组相比,IPo组和Ado组细胞凋亡数显著减少(P<0.05),而二者之间差异无统计学意义,结论 缺血后适应可以减少缺血再灌注引起的大鼠肾脏细胞凋亡.再灌注损伤;细胞凋亡     

缺血预适应与后适应对家兔局部短期缺血再灌注心肌细胞凋亡影响的研究

目的：探讨缺血预适应与缺血后适应对兔局部缺血再灌注,心肌细胞凋亡的影响。方法：用30只新西兰大白兔建立心肌缺血再灌注动物模型,采用DNA电泳和TUNEL分析检测缺血再灌注心肌组织的细胞凋亡情况,免疫组化方法检测心肌组织中Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果：缺血再灌注组缺血区心肌DNA电泳出现200bp,400bp2条条带呈梯形,其余各组未见梯形;TUNEL检测显示缺血再灌注组心肌细胞凋亡指数较其他实验组显著增加（P〈0．05）;缺血再灌注组Bcl-2基因蛋白表达量低于其他各组（P〈0．05）;缺血再灌注组Bax基因蛋白表达量高于其他各组（P〈0．05）。结论：缺血后适应可产生内源性心脏保护作用。缺血预适应、缺血后适应显著减轻了兔缺血再灌注诱导的心肌细胞凋亡程度与上调Bcl-2蛋白表达、下调Bax蛋白表达有关。     

局灶性脑缺血再灌注大鼠大脑皮质中Caspase-3蛋白的表达

目的：观察局灶性脑缺血再灌注（FCIR）大鼠大脑皮质Caspase-3的表达。方法：雄性SD大鼠42只，分为假手术组和缺血再灌注（IR）组，IR组又分为缺血2h再灌注2h、6h、12h、24h、48h、72h组，每组6只。IR组采用线栓法建立FCIR模型，假手术组仅插线1cm；于脑视交叉平面向后7～11mm处取脑组织。HE染色观察各个时间点细胞形态学变化，免疫组织化学SP法观察不同时间Caspase-3的表达，TUNEL法检测细胞凋亡。结果：脑缺血2h再灌注6hCaspase-3表达升高，再灌注24h达到高峰，再灌注72h开始下降。凋亡细胞数的变化与Caspase-3表达变化一致。结论：Caspase-3参与了脑缺血再灌注神经元的死亡过程，该作用可能与细胞凋亡有关。     

针刺对局灶性脑缺血再灌注大鼠神经细胞凋亡的影响

目的研究针刺对局灶性脑缺血再灌注大鼠神经细胞凋亡的影响。方法建立大鼠中动脉阻塞再灌注模型（MCAO）,应用TUNEL法观察神经元凋亡,免疫组织化学法检测Caspase-3蛋白表达。结果脑缺血再灌注后应用针刺疗法能够降低大鼠神经细胞受损后出珊的Caspase-3蛋白表达,并能减轻神经细胞凋亡。结论针刺疗法能通过有效的抑制脑缺血再灌注后大鼠神经细胞的凋亡起到脑保护作用。     

低氧预适应对大鼠脑缺血再灌注神经细胞凋亡和Caspase-3活性的影响

目的探讨低氧预适应(8%O2,3h)对大鼠大脑中动脉缺血2h再灌注后12h神经细胞凋亡及Caspase-3活性的影响。方法低氧预适应后12h制作脑缺血再灌注模型,大鼠大脑中动脉阻塞2h,灌注损伤12h,用TUNEL法和荧光四肽底物法分别检测假手术组、缺血再灌注组和低氧预适应组的凋亡细胞百分率和Caspase-3活性水平。结果与缺血再灌注组比较,低氧预适应组和假手术组的凋亡细胞百分率和Caspase-3活性水平显著降低(P<0.05,P<0.01);低氧预适应组与假手术组比较,细胞凋亡率明显升高(P<0.01),Caspase-3水平反而降低(P<0.01)。结论低氧预适应可减少大脑中动脉缺血2h再灌注后Caspase-3活性,抑制神经细胞的凋亡。     

缺血后适应抑制大鼠脑缺血-再灌注后星形胶质细胞的增生

目的：观察缺血后适应（ ischemia postconditioning,IPostC）对大鼠脑缺血-再灌注损伤后胶质纤维酸性蛋白（ glial fibrillary acidic protein,GFAP）和组蛋白去乙酰化酶1（histone deacetylase1,HDAC1）表达变化,初步探讨 IPostC 对星形胶质细胞增生的影响。方法采用线栓法制备大鼠短暂性大脑中动脉阻塞模型（transient middle cerebral occlusion,tMCAO）模型,采用抽签法将21只健康雄性 Sprague Dawley（SD）大鼠（体质量280~300 g）随机分为7组,每组3只：①假手术组（S）;② tMCAO 1h 组（R-1h）;③ tMCAO＋IPostC 1h 组（P-1h）;④ tMCAO 4h 组（R-4h）;⑤ tMCAO＋IPostC 4h 组（P-4h）;⑥ tMCAO 24h 组（R-24h）;⑦tMCAO＋IPostC 24h 组（P-24h）。缺血后适应的具体操作是在拔除线栓后即刻用动脉阻断夹夹闭双侧颈总动脉,阻断血流10 s后恢复血流10 s,如此反复操作5次。分别应用 Western blotting 法和免疫荧光法研究大鼠脑缺血-再灌注及后适应1、4和24 h 时HDAC1和 GFAP 表达的变化。结果（1）Western blotting 结果显示：①与 S 组相比,R 组 GFAP 蛋白的表达均有所增加,R-1h 和R-24h 显著增加（P〈0.05）,P 组的表达变化不大。与 R 组相比,P 组 GFAP 的表达下降,其中 P-4h 组显著下降（P〈0.05）。②与 S组相比,R 组 HDAC1蛋白的表达均有所增加,其中 R-1h 显著增加（P〈0.05）,P 组的表达变化不大。与 R 组相比,P 组 HDAC1的表达下降。（2）免疫荧光结果显示：HDAC1和 GFAP 蛋白有共定位,且 HDAC1和 GFAP 的变化趋势同 Western blotting 结果相同。结论 IPostC 可能通过降低 HDAC1的表达来抑制星形胶质细胞的增生从而发挥对脑缺血-再灌注损伤的神经保护作用。     

缺血后适应对大鼠急性脑缺血的影响

目的：探讨缺血后适应（ IP）对大鼠急性脑缺血的保护作用及机制。方法54只雄性SD大鼠随机分为3组,每组18只：Sham组、I／R组、IP组,分别予假手术、阻塞大脑中动脉2 h后长时间灌注以及在阻塞大脑中动脉再灌注时作IP处理,比较3组大鼠神经功能缺损评分、脑含水量、脑梗死体积、海马CA1区细胞形态学变化和凋亡细胞水平。结果与I／R组比较,IP组脑缺血再灌注损伤减轻,神经缺损评分降低,脑含水量减少,脑梗死体积减小,锥体细胞损伤明显减轻,退变神经元明显减少,凋亡细胞水平降低,差异有统计学意义（ P＜0.05）。结论 IP在脑血管缺血急性期具有神经保护作用,其机制可能是降低神经细胞的凋亡水平。     

缺血预适应对肺缺血再灌注过程中细胞因子和细胞凋亡的影响及其意义

肺缺血再灌注损伤（lung inchemia-reperfusion in iury,LIRI）是临床上存在的一种脏器损伤现象，其机制尚未完全明确。过去研究较多的是自由基损伤和细胞内钙超载，目前已认识到LIRI的主要机制之一是过度的炎症反应。近年来，体内、外大量研究表明，许多参与全身炎症过程的炎症递质和影响因素均可对细胞凋亡产生影响。而细胞因子的产生则是导致细胞凋亡的重要因素之一。     

吗啡预处理对缺血再灌注损伤后大鼠心脏中Caspase-3表达及细胞凋亡的影响

目的探讨吗啡预处理(MP)对大鼠全心缺血再灌注损伤(IRI)后心肌组织中Caspase-3表达水平以及心肌细胞凋亡的影响。方法雄性成年SD大鼠51只随机分为3组:对照组(Sham组)、全心缺血再灌注组(IR组)、MP组(1μmol/L)。Sham组持续灌注195 min。IR组灌注K-H液45 min后制备离体全心缺血30 min再灌注10、60、120 min模型。MP组于缺血前灌注含吗啡K-H液和无吗啡K-H液各5 min, 3个循环。氯化三苯基四氮唑(TTC)染色测定梗死区(IS)、缺血危险区(AAR)以及IS/AAR比值;化学比色法测定冠脉流出液乳酸脱氢酶(LDH)活性;Western blot及TUNEL染色分别测定心肌组织Caspase-3蛋白表达及细胞凋亡情况。结果与Sham组比较,IR组再灌注末心肌梗死体积百分比增加,再灌注后各时间点LDH活性、Caspase-3蛋白表达及心肌细胞凋亡比率均显著升高(P<0.05);与IR组比较,MP显著降低IS/AAR比值和再灌注后各时点LDH活性、Caspase-3蛋白表达以及心肌细胞凋亡比率(P<0.05);IR组与M...     

氟西汀预处理对SD大鼠脑缺血再灌注损伤的脑保护作用

[摘要]　目的　探讨预防性应用氟西汀对SD大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的脑保护作用。　方法　48只健康雄性SD大鼠随机分为脑缺血再灌注组（对照组,n=24）和氟西汀组（n=24）,对照组与氟西汀组均制备大鼠右侧大脑中动脉闭塞的脑缺血再灌注模型,分别于术前14 d胃内灌注生理盐水和氟西汀。各组按缺血2 h再灌注2 h、6 h、24 h再分为3个亚组（n＝8）。比较相同再灌注时间点两组的神经功能缺损评分、脑梗死体积及缺血侧海马区半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）的表达情况。　结果　相同再灌注时间点,氟西汀组较对照组神经功能缺损评分值降低,其中再灌注2 h及6 h,两组间比较差异均无显著性意义（P>0.05）,再灌注24 h,两组间比较差异具有显著性意义（P<0.05）;氟西汀组较对照组脑梗死体积减小,其中再灌注2 h及6 h,两组间比较差异均无显著性意义（P>0.05）,再灌注24 h,两组间比较差异具有显著性意义（P<0.01）;氟西汀组缺血侧海马区Caspase-3阳性表达细胞数在相同再灌注时间较对照组均减少,差异具有显著性意义（P<0.05）。　结论　氟西汀具有神经保护作用,预防性应用氟西汀在脑缺血再灌注损伤急性期即起显著作用,其机制可能与其减少Caspase-3的表达有关。     

全身亚低温对脑缺血再灌流损伤神经细胞凋亡及Caspase-3的影响

目的 探讨亚低温对大鼠局灶性脑缺血再灌流后神经细胞凋亡及Caspase-3基因表达的影响。方法 应用原位末端标记(TUNEL)和原位杂交技术分别观察亚低温组、常温组脑缺血再灌流不同时间点神经细胞凋亡的变化及Caspase-3 mRNA的表达。结果 (1)常温组脑缺血再灌流后凋亡神经细胞主要分布于缺血周围区，随着再灌流时间的延长凋亡细胞数逐渐增加，至24小时达高峰，2天后开始下降，14天时仍高于假手术组；(2)亚低温组脑缺血再灌流后，凋亡神经细胞也主要位于缺血周围区，数量相对较少，其变化规律与常温组相似，同一时间点相比较，亚低温组均显著低于常温组；(3)常温组脑缺血再灌流2小时后，神经细胞Caspase-3 mRNA开始表达，并随着再灌流时间的延长而增强，24小时达高峰，2天后逐渐下降，至14天略高于假手术组；(4)亚低温组脑缺血再灌流后，神经细胞Caspase-3 mRNA的表达也主要位于缺血周围区，其变化规律与常温组相似，同一时间点相比较，亚低温组均显著低于常温组。结论 脑缺血再灌流后。缺血周围区神经细胞的凋亡是一个动态的渐进过程，Caspase-3基因在介导脑缺血损伤神经元凋亡过程中起关键作用。亚低温对短暂性脑缺血后的神经元凋亡有明显的抑制作用，亚低温可能通过Caspase-3 mRNA途径抵抗脑缺血损伤。     

电针对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑细胞凋亡及神经功能恢复的影响

目的 观察针刺干预对于大鼠局灶性脑缺血再灌注脑细胞内游离钙、Caspase-3 mRNA及大鼠双前肢抓力的影响.方法 145只成年雄性SD大鼠随机分成对照组(sham)、缺血再灌注组(1/R)和针刺组(I/R+EA).选用Longa改良线拴法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型(MCAO).实验大鼠处死后取材制成单细胞悬液,经Fluo-3/AM标记,用激光扫描共聚焦显微镜检测脑细胞[Ca2+]i浓度.应用RT-PCR技术检测大鼠大脑皮层和纹状体内Caspase-3 mRNA表达的变化.大鼠双前肢抓力试验检测大鼠神经功能重建情况.结果 ①针刺干预6h后[Ca2+]i为10.96±1.18,针刺12h后为20.9±4.73,与缺血再灌注组[16.87±3.56,34.10±1.06]比较显著降低,差异有统计学意义(P＜0.01).②I/R组大脑皮层及纹状体Caspase-3 mRNA表达增强;电针干预后Caspase-3 mRNA表达与I/R组比较明显下调.③针刺7d、14d大鼠抓力明显高于脑缺血再灌注7d、14d,针刺30d、60d、90d大鼠抓力与脑缺血再灌注30d、60d、90d组大鼠抓力无明显差异.采用单因素方差分析,I/R+EA与sham及I/R组比较(P＜0.05),差异有统计学意义.结论 缺血急性期针刺干预显著降低大鼠局灶性脑缺血再灌注脑细胞内游离钙的浓度及Caspase-3 mRNA的表达;并有效促进大鼠神经功能的恢复.     

缺血后处理对缺血再灌注大鼠心脏凋亡相关酶活性的影响

目的 观察缺血后处理对大鼠心肌缺血再灌注造成细胞凋亡及凋亡相关酶活性的影响。方法 采用冠状动脉左前降支结扎法制备大鼠心肌缺血再灌注模型,HE染色观察心肌组织病理学改变,TUNEL法检测大鼠心肌细胞凋亡水平,比色法检测心肌组织总抗氧化能力(TAOC)、丙二醛(MDA)水平,分光光度法检测心肌组织Caspase-3、Caspase-9活性。结果 缺血再灌注造成大鼠心肌组织抗氧化能力明显降低(P＜0.01),心肌细胞凋亡明显增加(P＜0.01),Caspase-3、Caspase-9酶活性以及MDA水平明显升高(P＜0.01),缺血后处理能够改善上述表现(P＜0.05)。结论 缺血后处理可通过抑制凋亡相关蛋白酶活性减轻缺血再灌注造成的大鼠心肌细胞损伤。     

电针对局灶脑缺血/再灌注模型大鼠缺血海马区血管再生的影响及其机制

目的 探讨电针促进局灶脑缺血/再灌注后缺血海马区血管再生的机制。方法 180只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组、CXCR4特异性拮抗剂AMD3100药物组、AMD3100+电针组。线栓法制备右侧局灶脑缺血/再灌注模型。取大鼠“百会”穴（GV 20）及左侧“四关”穴（合谷LI 4/太冲LR 3）为电针穴位,刺激时间为30 min/d。采用逆转录聚合酶链反应法（RT-PCR）检测各组缺血海马区SDF-1α、CXCR4 mRNA表达,免疫荧光双标法检测CD34⁺VEGFR2⁺ EPCs源性血管的表达。结果 与假手术组比较,模型组与电针组SDF-1α、CXCR4 mRNA表达明显增高（P<0.05）,其中电针组各时间点相对模型组增高更为显著（P<0.05）。AMD3100+电针组缺血海马SDF-1α、CXCR4 mRNA表达在再灌注后1 d时明显高于电针组（P<0.05）,但后逐渐下降,7 d时明显低于电针组（P<0.01）。与模型组比较,电针组再灌注3 d、7 d海马CD34⁺VEGFR2⁺ EPCs源性血管表达明显增多（P<0.05）。与电针组比较,AMD3100+电针组再灌注后7 d CD34⁺VEGFR2⁺EPCs源性血管表达明显下降（P<0.01）。CD34⁺VEGFR2⁺血管表达变化与SDF-1α的表达变化显著相关（R=0.784,P<0.01）。结论 电针可通过上调局灶脑缺血/再灌注大鼠缺血海马区SDF-1α/CXCR4的表达,促进血管再生。     

七叶皂甙钠对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠 Bcl-2 和Caspase-3表达及细胞凋亡的影响

目的:探讨七叶皂甙钠对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后Bcl-2和Caspase-3蛋白表达及神经细胞凋亡的影响。方法：采用线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,缺血再灌注模型大鼠随机分为模型组、生理盐水组、七叶皂甙钠组。假手术组手术过程同缺血再灌注模型组,但不闭塞大脑中动脉。采用免疫组织化学染色结合显微图像分析检测再灌后不同时相脑组织缺血半暗带区Bcl-2和 Caspase-3蛋白的动态表达。应用原位末端转移酶标记（TUNEL）染色观察脑组织缺血半暗带区内细胞凋亡的情况。结果:七叶皂甙钠组脑缺血半暗带区Bcl-2蛋白表达上调,与模型组及生理盐水组相比差异有统计学意义(P<0.05);七叶皂甙钠组脑缺血半暗带区Caspase-3蛋白的表达则明显受到抑制,与模型组及生理盐水组相比差异有统计学意义(P<0.05);同时可见七叶皂甙钠组各时相大鼠脑缺血半暗带区神经细胞凋亡数明显低于模型组及生理盐水组（P<0.01）,且凋亡高峰时下降明显。结论:七叶皂甙钠可能通过上调Bcl-2表达,下调Caspase-3的表达,发挥对脑缺血再灌注损伤的保护作用。     

脑心康片对大鼠脑缺血再灌注损伤后Caspase-3 mRNA表达的影响

目的:观察脑心康片对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用,并进一步探讨其作用机制。方法:Wistar大鼠雄性60只,按照体质量随机分为6组,即脑心康片高剂量组、脑心康片中剂量组、尼莫地平组、银杏叶片组、模型组和假手术组,每组10只。分别给等体积生理盐水,各组均连续灌胃给药5 d后,采用大鼠大脑中动脉线栓法制备不完全脑缺血模型,RT-PCR法检测脑心康片对脑缺血后脑组织Caspase-3 mRNA表达的影响。结果:脑心康片能明显抑制Caspase-3 mRNA的表达。结论:脑心康片对脑缺血具有保护作用,其机理可能与脑心康片通过抑制凋亡相关基因的表达,进而抑制神经元细胞凋亡有关。     

电针对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑细胞凋亡及神经功能恢复的影响

Objective To investigate the influence of acpuncture on free calcium in rat brain cells after focal cerebral ischemia reperfusion.Methods 145 adult male SD rats were randomly divided into control group,simple ischemia reperfusion group and acupuncture with ischemia reperfusion group.The middle cerebral artery occlusion/reperfusion (MCAO/R) rat model was established by the modified Longa occlusion method. ①The part of free calcium in rat brain cells,focal cevebral ischemia model of rats were made by thread locking up the blood vessel for 15 min.30 min later after reperfusion, the Baihui and Shuigou Point in Du meridian were acupunctured electrically 30 min.After 3h, 6h and 12h, the rat was killed and its brain cells were made into single cell suspension,marked by Fluo-3/AM.The fluorescence optical density was recorded by laser confocal microscopy.②The part of nerve functional reconstruction, focal cevebral ischemia model of rats were made by thread locking up the blood vessel for 12 hours.30 min later after reperfusion, the Baihui and Shuigou Point in Du meridian were acupunctured electrically 30 min.After 7 d, 14 d,30 d,60 d and 90 d, the rat was forced to detect it's strength of the dog.Results ①Free calcium in rats of acupuncture therapy group(6h:10.96±1.18;2h:20.9±4.37) was significantly less than that in control group in 6 h and 12 h after reperfusion (6 h: 16.87 ± 3.56,12 h: 34.10 ±1.06)(P<0.05).②The dog in rats of acupuncture therapy group was significantly more than that in control group in 7 d, 14 d after reperfusion (P＜ 0.05 ).No difference of the dog was detected in 30 d ,60 d and 90 d after reperfusion between the two groups.Conclusion Acupunture could decreases the concentration of free calcium and the expression of Caspase-3 mRNA in rat brain cells after focal cerebral ischemia reperfusion, and it can facilitate the recovery of nerve function.     

电针对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑细胞凋亡及神经功能恢复的影响

Objective To investigate the influence of acpuncture on free calcium in rat brain cells after focal cerebral ischemia reperfusion.Methods 145 adult male SD rats were randomly divided into control group,simple ischemia reperfusion group and acupuncture with ischemia reperfusion group.The middle cerebral artery occlusion/reperfusion (MCAO/R) rat model was established by the modified Longa occlusion method. ①The part of free calcium in rat brain cells,focal cevebral ischemia model of rats were made by thread locking up the blood vessel for 15 min.30 min later after reperfusion, the Baihui and Shuigou Point in Du meridian were acupunctured electrically 30 min.After 3h, 6h and 12h, the rat was killed and its brain cells were made into single cell suspension,marked by Fluo-3/AM.The fluorescence optical density was recorded by laser confocal microscopy.②The part of nerve functional reconstruction, focal cevebral ischemia model of rats were made by thread locking up the blood vessel for 12 hours.30 min later after reperfusion, the Baihui and Shuigou Point in Du meridian were acupunctured electrically 30 min.After 7 d, 14 d,30 d,60 d and 90 d, the rat was forced to detect it's strength of the dog.Results ①Free calcium in rats of acupuncture therapy group(6h:10.96±1.18;2h:20.9±4.37) was significantly less than that in control group in 6 h and 12 h after reperfusion (6 h: 16.87 ± 3.56,12 h: 34.10 ±1.06)(P<0.05).②The dog in rats of acupuncture therapy group was significantly more than that in control group in 7 d, 14 d after reperfusion (P＜ 0.05 ).No difference of the dog was detected in 30 d ,60 d and 90 d after reperfusion between the two groups.Conclusion Acupunture could decreases the concentration of free calcium and the expression of Caspase-3 mRNA in rat brain cells after focal cerebral ischemia reperfusion, and it can facilitate the recovery of nerve function.