补体系统在异种移植中作用的研究进展

补体系统在异种移植超急性排斥反应中的作用已基本被阐明。通过转基因方法使猪血管内皮细胞表达人补体调节蛋白,可以避免发生异种移植超急性排斥反应。但移植过程中的缺血再灌注损伤却不可避免,补体介导的血管内皮细胞激活可以引起急性血管性排斥反应,并影响移植物的长期存活。本文就补体系统在异种移植领域的研究进展作一综述。     

异种器官移植

由于供体器官来源困难，世界器官移植界重新认识异种移植的价值。本文着重探讨异种超急性排斥的机理，补体、自然抗体、内皮细胞在超急性排斥中的作用以及异种器官移植基础研究的进展。     

转染人补体调节基因对猪血管内皮细胞的保护作用

供者血管内皮细胞(EC)是猪到人异种移植时引发超急性排斥反应的靶抗原的主要分布部位。利用转基因技术让猪的内皮细胞表达人补体调节基因(hDAF)，可能会增强其血管内皮细胞的防御能力，借以克服超急性排斥反应的发生，联合转染一种以上人补体调节蛋白基因可能效果更好。为此，我们进行了如下实验。     

异种器官移植(文献综述)

由于供体器官来源困难,世界器官移植界重新认识异种移植的价值.本文着重探讨异种超急性排斥的机理,补体、自然抗体、内皮细胞在超急性排斥中的作用以及异种器官移植基础研究的进展.     

异种肝移植中补体作用及抑制策略

近 40年来 ,随着同种肝移植的巨大成功 ,供肝短缺的问题日益突出。异种移植作为较有希望的解决途径之一 ,得到越来越多的重视。但阻碍异种肝移植临床实施的首要障碍即是超急性排斥反应 (ＨＡＲ)。大量的研究表明 ,补体在ＨＡＲ发生中起着重要作用 ;而抑制补体激活可以阻止ＨＡＲ ,尤其是转人补体调节蛋白 (ｈＣＲＰ)基因的动物的出现 ,更使人们看到了征服ＨＡＲ的光明前景。这里 ,将近年补体在异种肝移植中超急性排斥反应中的作用及其防治策略的进展作一综述。一、补体在超急性排斥反应发生中的作用及激活途径1.补体在超急性排斥反应发生中…     

人血清对猪血管内皮细胞的细胞毒效应研究

目的 探讨异种(猪/人）超急性排斥的发生机制。方法 人血清为天然抗体和补体源。用四唑盐法行补体依赖的细胞毒反应，建立体外超急性排斥模型。结果 正常人血清能溶解猪血管内皮细胞；而Clg缺乏及B因子缺乏的人血清对猪血管内皮细胞的溶解率较低(P＜0．01)；同种猪血清及灭活补体的人血清不溶解猪血管内皮细胞；将经典或旁路途径有缺陷的人血清等体积混合，其细胞毒作用恢复正常。结论 治疗猪/人之同的超急性排斥应考虑补体旁路途径激活的问题。     

异种移植排斥机理的探讨

补体的激活是超急性排斥的中心环节,为了研究经典及旁路途径在这种排斥中的作用,本研究建立了体外超急性排斥模型.选择猪血管内皮细胞为靶,人血清为天然抗体和补体源,用四唑盐法(methyl thagolyl tetragoliam,MTT)行补体依赖的细胞毒反应(complement-dependent cytotoxicity,CDC).人血清能溶解58±5%的猪血管内皮细胞.加入EGTA阻断经典途径后人血清的溶细胞率降为51±3%(P<0.01).同样Clq缺乏的人血清仅溶解37±7%猪血管内皮细胞(P<0.001).人血清50℃加热20min,阻断旁路途径后,其溶细胞率降为42±5%(P<0.001).B因子缺乏的人血清(阻断旁路途径)仅溶42±10%的猪血管内皮细胞(P<0.001)同种猪血清及加热灭活补体的人血清不溶猪血管内皮细胞.将经典途径及旁路途径缺陷的人血清等体积混合,血清的细胞毒作用恢复正常.同样,Clq缺乏人血清和B因子缺乏人血清分别加入Clq和B因子后,血清细胞毒作用亦恢复正常.在这一体外异种超急性排斥模型中,补体经典和旁路两条途径均参与超急性排斥反应.提示抑制猪/人之间的超急性排斥应考虑补体两条途径均激活的问题.     

清除补体避免猪到猕猴异种心脏移植超急性排斥反应的实验研究

目的 观察纯化的眼镜蛇毒因子(CVF)对猪到狱猴异种心脏移植超急性排斥反应的影响。方法 以幼猪为供者，施行猪到狱猴腹腔内异位心脏移植，实验组(n＝4)使用CVF完全清除受者体内补体，对照组(n＝5)不使用CVF，两个组术后均采用环抱素A、甲泼尼龙和环磷酰胺抑制排斥反应，通过检测血清C3、C4水平及总补体活性验证CVF的效果，移植心停跳时切取移植心进行病理检查。结果 在使用CVF后，实验组血清C3降为0，总补体活性CH50值也几乎为0，末发现明显毒副反应，移植猪心存活时间平均为lld，最长达13d，病理学提示均发生了延迟性异种排斥反应；对照组3个移植心在移植后60min内发生超急性排斥反应，另2个分别存活22h及6d。结论 纯化的CVF有良好的清除补体的作用，且末见明显副作用；使用CVF可克服猪到狱猴异种心脏移植超急性排斥反应的发生。     

眼镜蛇毒因子清除补体对大鼠异种心脏移植超急性排斥反应的影响

目的　探讨眼睛蛇毒因子 (CVF)对血清总补体活性及对豚鼠到大鼠异种心脏移植超急性排斥反应的影响。方法　 1 5只正常大鼠随机分成 3组 ,按组分别一次性静脉给予 2 0、50、1 0 0 μg/kg的CVF ,检测不同时间点的补体活性 ;在豚鼠到大鼠异位心脏移植前 2 4h静脉给予CVF50 μg/kg,观察CVF对异种心脏移植超急性排斥反应的影响。结果　在给予CVF后 6h ,3个剂量组的血清总补体活性均显著降低 ,3个组用药后均未见明显毒副反应。使用CVF的实验组 ,移植的异种心脏存活时间显著延长 ,平均达 56 .1 3h ,对照组仅为 0 .1 9h(P <0 .0 0 1 ) ,病理检查结果证实实验组均未发生超急性排斥反应 ,仅见延迟性异种排斥反应 (DXR)的病理特征 ,对照组均见超急性排斥反应的病理特征 ,且总补体活性较术前有明显下降。结论　眼镜蛇毒因子有良好的降低大鼠补体活性的作用 ,且副作用不明显 ;使用眼镜蛇毒因子可克服豚鼠到大鼠的异种心脏移植超急性排斥反应的发生。     

补体抑制治疗与心脏移植超急性排斥反应

心脏移植超急性排斥反应(hyperacute rejection,HAR)与补体系统激活有关,迅速导致移植心脏功能丧失.动物实验中使用眼睛蛇毒因子、可溶性补体受体1、补体调节蛋白以及C5单克隆抗体等补体抑制剂,可以从补体级联反应的不同水平抑制同种或异种心脏移植HAR的发生.抑制补体激活将在临床心脏移植HAR的预防及治疗中显示出重要的作用.     

异种移植排斥机理的探讨

补体的激活是超急性排斥的中心环节，为了研究经典及旁路途径在这种排斥中的作用，本研究建立了体外超急性排斥模型。选择猪血管内皮细胞为人靶，人血清为天然抗体和补体源，用四唑盐法（ＭＴＴ）行补体依赖的细胞毒反应（ＣＤＣ）。人血清能溶解５８±５％的猪血管内皮细胞。加入ＥＧＴＡ阻断经典途径后人血清的溶细胞率降为５１±３％（Ｐ〈０．０１）。同样Ｃｌｑ缺乏的人血清仅溶解３７±７％猪血管内皮细胞（Ｐ〈０．００１）。     

转人CRP基因在异种移植中的研究

目的：研究转入补体调节蛋白（CRP）DAF、MCP和CD59基因对抑制人补体激活从而克服超急性排斥反应的作用。方法：利用显微注射建立转人衰变加速因子（hDAF)小鼠和猪的模型和转梁hMCP及hCD59真核表达质粒的猪内皮细胞（EC）,研究小鼠和猪EC表达抑制人补体激活的人补体调节蛋白（CRP）对异种移植超急性排斥反应的抑制作用。结果（1）转人DAF基因小鼠心脏用新鲜人血连续丛外灌注,转基因组心脏搏动时间（174．6min)比对照组（106．5min)明显延延长。（2）转hDAF基因猪心脏异位移植给猕猴、移植心最长存活90h,受者死亡前移植心仍有功能,移植心病理检查未见超急性排斥反应病理改变。（3）转DAF基因基因猪EC死亡率在不同浓度血清时均明显低于对照组,在转hDAF基因猪EC上再分别转染hMCP及hCD59真核表达质粒,转hDAF hMCP或hDAF hCD59在不同血清浓度时EC死亡率较单纯hDAF组明显下降（P＜0．05）。结论,转人DAF及MCP、CD59补体调节蛋白基因能克服人对异种器官或组织的超急性排斥反应。     

猪到猕猴异种心脏移植超急性排斥反应的免疫学及病理学变化

目的观察猪到猕猴异种心脏移植超急性排斥反应时的免疫学及病理学变化。方法采用猪到猕猴腹腔内异位心脏移植模型,检测发生超急性排斥反应者的血液中补体、天然抗体及T淋巴细胞亚群的变化,并对移植心脏进行免疫组化(测定C3、C4、C5b9、IgG及IgM的沉积)及病理学分析。结果发生超急性排斥反应时,血清补体C3、C4的含量、总补体活性及抗猪内皮细胞天然抗体均有一定程度的下降;CD4 /CD8 T淋巴细胞的比率也有所下降;移植心脏中均有补体C3、C4、C5b9的沉积,IgG及IgM也均有沉积,但IgG和IgM沉积强度的差异无统计学意义;病理学改变主要为心肌间质弥漫性出血、水肿,毛细血管内普遍淤血。结论补体通过经典途径激活参与猪到猕猴异种心脏移植超急性排斥反应;超急性排斥反应时受者血中天然抗体水平明显下降;CD4 T淋巴细胞可能参与异种移植超急性排斥反应过程并有所消耗;发生超急性排斥反应的移植物突出病理表现为间质出血。     

抗人C5单克隆抗体对补体介导的超急性排斥反应的抑制作用

目的 研究抗人C5单克隆抗体对补体介导的超急性排斥反应的抑制作用.方法 获取8例临床心脏移植供者的主动脉血20ml和主动脉血管,分别用于提取淋巴细胞和主动脉内皮细胞.同时,采集相应8例心脏移植受者移植前的中心静脉血20 ml和外周静脉血5 ml,分别用于提取淋巴细胞和制备补体.供者主动脉内皮细胞经培养后,依次加入供、受者淋巴细胞混合培养上清50μl和受者静脉血浆(含补体)20 μl,建立主动脉内皮细胞超急性排斥反应模型.模型建立后,将供者主动脉内皮细胞平均分为2组,C5组:加入20 mg/L的抗人C5单克隆抗体20μl;对照组:加入M200培养液20 μl.经台盼蓝染色,倒置显微镜下观察主动脉内皮细胞的染色情况及活性,并测定主动脉内皮细胞刺激指数(SI).结果 经观察,对照组大部分主动脉内皮细胞蓝染、肿胀死亡,而C5组大部分主动脉内皮细胞未见蓝染,存活良好;对照组和C5组吸光度值分别为1.528±0.046和1.644±0.058,两组比较,差异有统计学意义(P<0.001),SI为1.076±0.038.结论 在离体主动脉内皮细胞超急性排斥反应模型中,抗人C5单克隆抗体可以抑制补体介导的主动脉内皮细胞溶解.     

异种移植领域中异种抗原的研究现状

异种移植目前需要解决的主要问题仍是超急排斥反应。异种移植血管内皮细胞上的异种抗原是导致超急排斥反应发生的关键。本文从导种抗原的性质、遗传学特征、分布和作用等方面介绍了近年来在异种移植领域中的研究现状及有可能消除异种抗原的分子生物学技术。     

异种移植领域转基因动物补体调节蛋白高效特异性表达研究进展

随着异种移植理论的发展，逐渐认识到转基因动物的修饰应主要针对其血管内皮细胞组织，并在建立转基因动物中构建特异的转录调控元件，获得补体调节蛋白在转基因动物血管内皮细胞组织特异性高效表达。本文就近几年有关异种移植领域转基因动物补体调节蛋白高效特异性表达方面研究进展作一综述。     

细胞粘附分子与异种移植排斥反应

排斥反应是导致异种移植失败的主要原因。在异种移植排斥中，移植物血管内皮细胞活化是关键，而细胞粘附分子的表达与内皮细胞的活化以及白细胞趋化均关系密切，更成为异种移植排斥反应中不可获缺的重要环节。本文综述了细胞粘附分子的生物学特点、在异种移植排斥反应中的诱导和表达及其在治疗中的研究进展。     

猪—猴异种血管移植免疫反应初探

目的 探讨猪－猴异种血管移植超急性排斥反应（HAR）的机理。方法 猪股静脉原位异种移植于恒河猴,发生HAR后通过免疫组化检测移植血管IgG、IgG、C3及C4的沉积。结果 大量IgM、C3和C4沉积于移植静脉内皮, 未发现IgG沉积于移植血管内皮。结论 猪－猴异种移植HAR是由异种自然抗体IgM与异抗原特异结合启动,进而以经典途径激活补体系统而发生。     

异种移植中转基因动物策略研究进展

近年来,在同种移植研究的基础上,异种移植的研究也进行了大量的工作,突出的成绩表现在异种移植免疫障碍阶段的划分和定义,即超急排斥反应,急性血管排斥（有时也称延迟排斥）,细胞排斥或慢性排斥,生理功能及其它,根据异种移植免疫学理论,利用转基因技术,建立转基因动物克服超急免疫排斥是异种移植研究的又一进步,显示转基因动物具有很大的发展前景,使异种移植走进临床成为可能,本文将就近年异种移植免疫学理论及根据其机制,利用转基因动物克服免疫排斥研究状况作一综述。     

细胞粘附分子与异种移植排斥反应

排斥反应是导致异种移植失败的主要原因。在异种移植排斥中,移植物血管内皮细胞活化是关键,而细胞粘附分子的表达与内皮细胞的活化以及白细胞趋化均关系密切,更成为异种移植排斥反应中不可获缺的重要环节。本文综述了细胞粘附分子的生物学特点、在异种移植排斥反应中的诱导和表达及其在治疗中的研究进展。