Survivin与皮肤病的研究进展

Survivin是凋亡抑制蛋白家族新成员.其在皮肤恶性肿瘤、癌前期皮肤病、某些良性角质形成细胞过度增生性皮肤病中高表达.Survivin通过抑制细胞凋亡、调节细胞分裂、参与肿瘤血管形成等多重功能参与皮肤疾病的发生.抑癌基因p53通过对抗Survivin蛋白的抗凋亡活性诱导肿瘤细胞凋亡.检测癌组织中Survivin和p53基因的表达可以为肿瘤患者的诊断和判断预后提供参考指标,并且针对Survivin基因及Survivin联合p53基因的靶向治疗将为皮肤癌的治疗开辟新的途径.     

生存素与皮肤肿瘤相关性的研究进展

生存素基因是凋亡抑制蛋白家族新成员,因其结构较为独特,且能选择性地在肿瘤中表达,正常终末分化组织中不表达,是皮肤鳞癌、恶性黑素瘤的预后指标;抑制其表达能显著促进常见皮肤恶性肿瘤细胞发生凋亡,对正常组织无明显影响,有望成为肿瘤标记物和肿瘤治疗的新靶点。     

凋亡抑制蛋白livin在人皮肤鳞状细胞癌中表达的初步研究

目的:研究凋亡抑制蛋白livin在人皮肤鳞状细胞癌(简称鳞癌)组织及细胞中的表达情况.方法:①采用免疫组化染色方法检测18例鳞癌组织中livin的表达情况;②利用反转录(RT)-PCR及Western blot的方法检测皮肤鳞癌细胞系A431细胞中livin mRNA及蛋白的表达情况.结果:①livin蛋白在正常皮肤组织中不表达,鳞癌组织中livin蛋白的阳性表达率为72.2%;②livin基因mRNA及蛋白在皮肤鳞癌细胞系A431中表达较高.结论:凋亡抑制基因livin在人皮肤鳞癌组织及细胞中高表达,提示livin基因在皮肤鳞癌发生发展中起一定作用,为皮肤鳞癌的诊断及治疗研究提供实验基础.     

白藜芦醇对人皮肤鳞状细胞癌A431裸鼠移植瘤生长的影响

目的：评价白藜芦醇（Resveratrol,Res）对皮肤鳞状细胞癌（简称鳞癌）移植瘤生长的影响。方法：建立人皮肤鳞癌（A431）裸鼠移植瘤模型,分别予以药物干预后处死荷瘤鼠,称取瘤质量;HE染色观察各组移植瘤组织细胞病理形态学变化;应用原位末端标记（TUNEL）技术检测细胞凋亡;采用sP免疫组化法检测Res对各组裸鼠移植瘤组织中凋亡调控基因Bcl-2及Bax的蛋白表达的影响。结果：Res实验组移植瘤体积、瘤质量低于阴性对照组,肿瘤组织的凋亡指数高于阴性对照组,瘤组织中Bcl-2蛋白表达低于阴性对照组,Bax蛋白表达高于阴性对照组（均P〈0．05）。结论：白藜芦醇可通过下调Bcl-2和上调Bax蛋白的表达诱导皮肤鳞癌细胞凋亡,从而抑制移植瘤的生长。     

Pinx1、hTERT mRNA在三种皮肤肿瘤组织中的表达及意义

目的 探讨内源性端粒酶抑制基因PinX1及端粒酶逆转录酶hTERT在基底细胞癌、鳞状细胞癌、日光性角化病组织中的表达及其意义。 方法 实时定量PCR检测实验组36例3种皮肤肿瘤组织中内源性端粒酶抑制基因PinX1及端粒酶逆转录酶hTERT的mRNA表达水平,并以15例正常人皮肤组织作为对照组。 结果 实验组PinX1基因的mRNA表达水平（2.53 ± 1.57）低于对照组（4.25 ± 2.02）,差异有统计学意义（t = 3.273,P < 0.05）;hTERT基因的mRNA表达水平（6.37 ± 3.81）明显高于对照组（1.62 ± 0.99）,差异有统计学意义（t = 6.927,P < 0.05）;Pinx1的表达水平与hTERT表达的相关性无统计学意义（P > 0.05）。 结论 PinX1的下调及hTERT上调可能与3种皮肤肿瘤形成过程中端粒酶激活及维持机制有关。     

抑癌基因DKK3对皮肤恶性黑素瘤细胞增殖和凋亡的影响北大核心CSCD

目的 探讨DKK3 在人皮肤恶性黑素瘤细胞及组织中的表达及其对黑素瘤细胞A375增殖与凋亡的影响。方法 通过反转录（RT）？PCR及实时定量PCR分析DKK3 mRNA在人恶性黑素瘤细胞系HM、A375、WM451、WM35、SK？MEL？1、Hs？695T和MDA？MB？435s及38例原发性黑素瘤、4例转移性黑素瘤和20例色素痣组织中的相对表达。分别转染恶性黑素瘤A375细胞pcDNA3.1（＋）？Flag？DKK3 质粒（实验组）和pcDNA3.1（＋）？Flag？Vector 质粒（对照组），RT？PCR 验证 DKK3 的过表达；通过CCK8法和平板克隆实验分析 DKK3 对A375细胞增殖的影响，流式细胞仪分析 DKK3对A375细胞凋亡的影响，Western印迹检测A375细胞周期和凋亡相关蛋白的表达。结果 DKK3 mRNA 在WM35细胞系表达下调，HM、A375、WM451、SK？MEL？1和Hs？695T细胞系表达缺失，MDA？MB？435s细胞高表达。与色素痣相比，DKK3 mRNA在人恶性黑素瘤组织表达降低（P 〈 0.001）。与对照组A375细胞相比 （100%），实验组A375细胞克隆形成效率明显受到抑制（23.22% ± 3.55%）；同时转染后24、48、72 h细胞活性受到明显抑制（均P 〈 0.05）。流式细胞仪检测发现，与对照组A375细胞（G1期，25.38% ± 2.92%）相比，实验组A375细胞明显阻滞于G1期（48.68% ± 3.92%，P 〈 0.001），细胞凋亡率明显升高（P 〈 0.001）。与对照组A375细胞相比，实验组周期凋亡相关蛋白p21、Bax、活化的parp和 活化的Caspase？3表达升高，细胞周期蛋白D1和Bcl2表达降低（均P 〈 0.001）。结论 DKK3在人皮肤恶性黑素瘤组织中表达下调，可能作为潜在的抑癌基因参与皮肤恶性黑素瘤的进展。     

Notch1基因对裸鼠皮肤鳞状细胞癌移植瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨Notch1基因在人皮肤鳞状细胞癌SCL-1细胞裸鼠移植瘤中的作用。方法 于裸鼠腋下接种0.2 ml 1 × 108/ml的SCL-1细胞悬液,建立人皮肤鳞状细胞癌裸鼠移植瘤模型,将其分为三组：未处理组（接种PBS悬浮的未转染细胞）,空载体转染组（接种空载体转染的细胞）和Notch1转染组（接种Notch1转染的细胞）。连续2周观察转染荷瘤裸鼠的生长情况,采用TdT介导的dUTP缺口末端标记技术（TUNEL）研究肿瘤组织中的细胞凋亡,利用RT-PCR和Western印迹研究肿瘤组织中Notch1、bcl-2和bax mRNA和蛋白的表达。结果 Notch1转染组中肿瘤的生长明显受到抑制,其肿瘤的重量为（0.574 ± 0.219） g,显著低于未处理组（2.642 ± 0.404） g和空载体转染组（2.606 ± 0.512） g（F = 26.642,P 值均 < 0.01）。TUNEL结果表明,Notch1转染组每500个细胞中凋亡的细胞数为87 ± 9,明显高于未处理组（8 ± 2）和空载体转染组（10 ± 3）中细胞凋亡的数目（P < 0.05）;此外,RT-PCR和Western印迹结果表明Notch1转染组中裸鼠肿瘤组织Notch1和bax mRNA和蛋白表达均显著上升,而bcl-2的表达显著下调,三组间比较差异具有统计学意义（P值均 ＜ 0.05）。结论 Notch1基因能抑制人皮肤鳞状细胞癌细胞SCL-1裸鼠皮下移植瘤的生长,诱导SCL-1细胞凋亡,后者可能与bax表达的上升和bcl-2表达的下调相关。     

Survivin的生物学特性及其在皮肤病中表达的意义

Survivin作为凋亡抑制蛋白IAP家族的成员之一，不仅具有抑制由线粒体诱导的凋亡的作用，还协同单一的p53基因抑制凋亡的发生，同时在血管生成过程中抑制血管内皮细胞的凋亡，保护新生血管。Survivin在正常表皮不表达，但在很多皮肤疾病中有充分表达。本文综述了Survivin的分子结构、抑制凋亡的机制以及在各种皮肤组织中，Survivin的表达与诊断、预后、治疗的意义。     

在基底细胞癌和鳞状细胞癌皮损中bcl—2与Fas蛋白的表达

为了探讨细胞凋亡抑制基因ｂｃｌ－２（Ｂ－ｃｅｌｌｌｙｍｐｈｏｍａ／ｌｅｕｋｅｍｉａ２）及凋亡基因Ｆａｓ与皮肤基底细胞癌（ＢＣＣ）及鳞状细胞癌（ＳＣＣ）发生、发展的关系，对１３例ＢＣＣ及１１例ＳＣＣ皮损进行了ｂｃｌ－２蛋白和Ｆａｓ抗原的免疫组化研究。１１例ＳＣＣ中Ⅰ级６例、Ⅱ级３例、Ⅲ级２例。结果１３例ＢＣＣ肿瘤组织全层ｂｃｌ－２均染色阳性，而无任何Ｆａｓ阳性着色；１１例ＳＣＣ无１例ｂｃｌ－２染色阳性，却全部出现Ｆａｓ阳性细胞，且Ｆａｓ的表达强度与肿瘤分化程度呈正相关。该结果证明：ｂｃｌ－２表达见于ＢＣＣ，而不见于ＳＣＣ；Ｆａｓ表达则见于ＳＣＣ，而不见于ＢＣＣ。这种区别反映出两种皮肤肿瘤在发病机理上的差异     

几种IAP蛋白及其相关因子在蕈样肉芽肿中的表达及NB-UVB的作用

目的 探讨生存素（Survivin）和Livin两种凋亡抑制蛋白（IAP）及其相关因子Bcl-xl和Caspase-3在蕈样肉芽肿（MF）中的表达情况和窄谱中波紫外线（NB-UVB）的干预作用。方法 采用免疫组化SABC法测定生存素、Livin、Bcl-xl和Caspase-3在MF皮损中的表达，用TUNEL法和原位杂交技术检测NB-UVB治疗前后四种因子mRNA的转录水平和细胞凋亡指数的变化。结果 在MF红斑期、斑块期和肿瘤期，生存素的表达阳性率分别为40.00%、75.00%、77.78%；Bcl-xl为60.00%、68.75%、88.89%，二者在正常皮肤均无表达。Livin在MF三期中阳性率依次为40.00%、25.00%和44.44%；Caspase-3为60.00%、43.75％和22.22％，二者均与正常皮肤相似。NB-UVB治疗后，MF中凋亡细胞显著增多（t = 6.49，P < 0.001），生存素mRNA和Bcl-xl mRNA的表达较照射治疗前有显著降低（P < 0.10），而Caspase-3 mRNA的表达增加（P < 0.10），Livin mRNA的表达在照射治疗前后无显著变化（P > 0.10）。结论 生存素、Bcl-xl和Caspase-3可能参与MF中T淋巴细胞凋亡障碍的调节过程，与MF的发病有关。NB-UVB对MF的治疗作用可能与其抑制生存素mRNA和Bcl-xl mRNA的转录，降低IAP蛋白水平，增加Caspase-3的转录，进而增强MF肿瘤细胞的凋亡有关。     

皮肤肿瘤

２００１１１８９ 抗凋亡基因Ｂｃｌ－２在皮肤良恶性肿瘤中的表达／万力（河北医大四院皮肤科）…／／临床皮肤科杂志．－２０００，２９（４）．－２０４ 应用流式细胞免疫荧光技术对３３例皮肤恶性病变细胞中Ｂｃｌ－２蛋白的相对含量进行定量分析。结果显示良性肿瘤及正常皮肤中ＤＮＡ含量及Ｂｃｌ－２相对含量均低于恶性肿瘤。表明肿瘤发生机制不仅有细胞过度增生所起的作用，细胞凋亡受阻也起重要作用。表２参９（汤亚娥）２００１１１９０小儿皮肤血管瘤中肥大细胞的定量研究和超微结构分析／邹音（江西省儿童医院病理科）…／／中华…     

突变型P53基因产物在皮肤鳞状细胞癌和基因细胞癌中的表达

应用免疫组化技术检测皮肤鳞状细胞（SCC）和基底细胞癌（BCC）中P53基因突变产物。结果显示，正常皮肤粘膜组织中无P53蛋白表达，而在肿瘤标本中，36例SCC中55．6％（20／36），33例BCC45．5％（15／33）P53蛋白过度表达，两换显性差异（X^2=0.33,P>0.05)，源于肛门－生殖器周围的SCC中的67％（8／12）P53免疫组化阳性，P53基因产物可以在肿瘤组织和／或其表皮中表达。结果提示P53基因突变在皮肝恶履性肿瘤发生、发展过程中起重要作用，P53免疫组化对皮肤恶性肿瘤有一定诊断价值，但不断鉴别BCC和SCC。SCC组织学分化程度可能与P53基因突变无关。     

皮肤肿瘤

992397 皮脂腺肿瘤p53及bcl-2蛋白表达的研究/张士发（沈阳军区总医院皮肤科）…//中国皮肤性病学杂志.-1999,13（1）.-11～12 应用免疫组化方法对皮脂腺良、恶性肿瘤中的p53及bcl-2两种基因产物的表达进行了检测。结果发现,5例正常人皮肤均不表达bcl-2蛋白。而5例皮脂腺癌,2例皮脂腺瘤和2例皮脂腺增生均有不同程度表达bcl-2蛋白,除肿瘤细胞外,表皮角朊细胞、毛囊细胞和少数“正常”的皮脂腺、汗腺细胞及单一核细胞亦可表达。bcl-2蛋白对良、恶性肿瘤细胞和其他细胞均可发挥抗凋亡作用。而p53蛋白仅表达于5例皮脂腺癌的癌细胞,说明仅恶性皮脂腺肿瘤存在p53基因突变。皮脂腺癌p53基因突变发生于肿瘤早期并对肿瘤的发生起决定作用。而bcl-2蛋白的表达则是p53基因突变的继发结果,对肿瘤的发生起协同促进作用。检测p53蛋白可用于鉴别良、恶性皮脂腺肿瘤。参6（刘辅仁）     

RPL34基因敲低对人皮肤鳞状细胞癌SCL-1细胞的影响

【摘要】目的 研究ribosomal protein L34 (RPL34)基因敲低后对皮肤SCC细胞增殖、凋亡的影响。方法 首先通过免疫组化对14例皮肤cSCC患者和16例正常对照的组织进行RPL34表达分析。然后利用慢病毒感染皮肤鳞癌SCL-1 细胞RPL34表达进行基因敲低后,流式细胞仪检测细胞周期分布及凋亡,MTT检测细胞增殖,qPCR检测目的基因敲减效率,Western blot分析RPL34表达水平。计数资料用卡方检验进行比较,计量资料用均数±标准差表示,t检验比较2组间差异。α设定为0.05,P<0.05认为有统计学差异。结果免疫组化实验中,cSCC肿瘤组织中RPL34在细胞浆的表达明显高于正常对照皮肤组织（cSCC组细胞核表达评分为2.929±1.542,细胞浆表达评分为2.143±1.956,正常对照皮肤组织中细胞核表达评分为2.563 ±1.153,细胞浆表达评分为0.500±0.516。）。流式细胞仪分析检测细胞凋亡情况,在空白对照组凋亡率为4.58 %,而RPL34-shRNA组的凋亡率为9.42%（P<0.05）。细胞周期分布情况实验组（shRPL34）处于S期的细胞增多(P<0.05),处于G1期的细胞减少(P<0.05),处于G2/M期的细胞无显著变化(P＞0.05)。MTT检测细胞增殖,shRPL34组的SCL-1细胞OD490吸光率及吸收率变化倍数明显低于空白对照组(P<0.05),提示具有活力的细胞数量明显低于对照组。qPCR结果中,经shRNA慢病毒感染后,实验组SCL-1细胞中RPL34基因在mRNA水平的表达量受到抑制,敲减效率达到85.1%（p<0.05）。结论 RPL34在cSCC中可以调节细胞增殖、凋亡,干扰细胞周期。     

生存素、bcl-2在皮肤鳞状细胞癌皮损及细胞系的表达

目的 探讨凋亡抑制基因生存素、bcl-2在皮肤鳞状细胞癌（简称鳞癌）皮损及皮肤鳞癌细胞系（SCL-1）细胞中的表达意义。方法 细胞免疫组化观察60例鳞癌患者皮损中生存素、bcl－2蛋白的表达并进行统计分析。Western印迹检测HaCaT细胞系和皮肤鳞癌细胞系（SCL-1）细胞中生存素bcl－2蛋白的表达。结果 免疫组化示正常皮肤组织中未见bcl-2与生存素表达;生存素、bcl-2在鳞癌皮损中呈阳性表达,bcl-2、生存素蛋白表达阳性率分别为70%、 60%,两者表达无相关性（P > 0.05）。生存素的表达与年龄、性别、发病部位、病理分级无明显关系,与有无淋巴结转移密切相关。bcl-2蛋白的表达与年龄、性别、发病部位,淋巴结转移无明显关系,但随着鳞癌肿瘤病理分级的升高而降低。Western印迹分析示生存素、bcl-2蛋白在SCL-1细胞中表达明显高于HaCaT细胞。结论 生存素、bcl-2在鳞癌的发生发展中,可能通过不同的抗凋亡路径发挥作用。     

水通道蛋白3在四种皮肤肿瘤中的表达

目的 探讨水通道蛋白3（AQP3）在四种皮肤肿瘤组织中的表达及意义。方法 应用免疫组织化学方法检测30例脂溢性角化病、15例Bowen病、32例鳞状细胞癌、17例恶性黑素瘤及15例正常人皮肤组织中AQP3的表达。结果 脂溢性角化病、Bowen病、鳞状细胞癌、恶性黑素瘤及正常人表皮组织中均存在AQP3蛋白的表达;脂溢性角化病皮损中AQP3表达水平与正常人对照组差异无统计学意义（P > 0.05）;Bowen病、鳞状细胞癌及恶性黑素瘤皮损中AQP3蛋白表达显著高于正常人对照组（P < 0.01）,其中鳞状细胞癌与恶性黑素瘤的表达最强,均显著高于Bowen病（P < 0.01）,但鳞状细胞癌与恶性黑素瘤比较差异无统计学意义（P > 0.05）。此外,在鳞状细胞癌中AQP3的表达与肿瘤的分化有显著相关性（P < 0.01）;在已转移恶性黑素瘤中AQP3的表达显著高于未转移恶性黑素瘤（P < 0.05）。结论 AQP3在皮肤恶性肿瘤中表达上调。     

沉默单核细胞趋化蛋白3对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖、迁移及凋亡的影响北大核心CSCD

目的:探讨沉默单核细胞趋化蛋白3(MCP-3)对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖、迁移及凋亡等功能的影响。方法:取增生性瘢痕组织和正常皮肤组织,qRT-PCR检测正常皮肤组织和增生性瘢痕组织中MCP-3 mRNA表达水平;分离培养增生性瘢痕组织成纤维细胞(HSF)和正常皮肤组织成纤维细胞(NSF),qRT-PCR和Western blot检测两种成纤维细胞中MCP-3 mRNA和蛋白表达水平。采用MCP-3干扰慢病毒(shRNA-MCP-3)和其阴性对照病毒(shRNA-NC)感染HSF,MTT检测各组细胞增殖活性,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,Transwell实验检测细胞的迁移能力,qRT-PCR检测各组细胞中MCP-3、collagenⅠ和collagenⅢmRNA水平,Western blot检测细胞中凋亡相关蛋白MCP-3、Bax、Bcl-2、Cleaved-caspase-3及collagenⅠ和collagenⅢ蛋白表达水平。结果:MCP-3在增生性瘢痕组织及HSF中高表达。与blank组和shRNA-NC组比较,shRNA-MCP-3组细胞中MCP-3 mRNA和蛋白表达水平显著下降(P<0.01),细胞增殖活性、迁移能力及细胞中collagenⅠ、collagenⅢ和Bcl-2表达水平均显著降低(P<0.01),同时细胞凋亡率及凋亡蛋白Bax和Cleaved-caspase-3表达水平显著上升(P<0.01)。结论:干扰MCP-3表达可能通过抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡,减少细胞合成胶原,从而发挥抑制瘢痕形成与发展的作用。     

皮肤鳞状细胞癌和基底细胞癌基质金属蛋白酶表达及其与肿瘤转移的关系

基质金属蛋白酶通过降解细胞外基质和基底膜成分、破坏局部组织结构及增加肿瘤诱导的血管形成而在肿瘤发展和侵袭的各个阶段均起重要作用；金属蛋白酶组织抑制因子具有抗血管形成及调节基质金属蛋白酶活性的作用，从而抑制肿瘤侵袭与转移。癌组织中基质金属蛋白酶表达上调是皮肤鳞状细胞癌和基底细胞癌的一般特征，金属蛋白酶组织抑制因子-2表达水平可能与上皮源性皮肤肿瘤的体内侵袭和转移能力呈负相关。     

小檗碱对皮肤鳞状细胞癌裸鼠模型的抑制作用及其机制研究

【摘要】 目的 研究小檗碱对皮肤鳞状细胞癌（cSCC）-A431裸鼠移植瘤的体积、重量、细胞增殖及凋亡的影响，探索小檗碱抑制cSCC的可能机制。方法 培养A431细胞，于20只裸鼠背部皮下注射A431细胞悬液建立cSCC移植瘤裸鼠模型。接种第15天，将荷瘤裸鼠随机平均分为4组：低、中、高剂量组裸鼠腹腔分别注射10、20、25 mg/kg小檗碱溶液，对照组腹腔注射生理氯化钠溶液，每日1次，连续给药35 d。分别于给药前、给药第7、14、21、28、35天检测移植瘤体积。实验结束后，处死裸鼠并随即剥离瘤块称重，计算肿瘤生长抑制率。移植瘤行组织病理检查，免疫组化检测Ki67表达水平，TUNNEL染色检测移植瘤组织中凋亡细胞数，荧光定量PCR和Western印迹法分别检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、caspase-3和Ezrin mRNA和蛋白的表达。多组间比较采用单因素方差分析，各组与对照组比较采用Dunnett-t检验。结果 随小檗碱剂量升高和作用时间延长，肿瘤生长曲线逐渐变平缓，各小檗碱组肿瘤生长受到不同程度的抑制，其中高剂量组肿瘤生长抑制作用最明显。小檗碱低、中、高剂量组肿瘤生长抑制率分别为31.05%、66.68%、76.49%，瘤重均显著低于对照组（t = 4.07、6.33、7.26，均P < 0.01）。移植瘤组织病理检查显示，随小檗碱剂量的增加，肿瘤细胞坏死程度和范围增加。免疫组化显示，随小檗碱剂量的增加，Ki67阳性细胞逐渐减少。此外，低、中、高剂量组Ki67阳性细胞数均显著低于对照组（均P < 0.01），而凋亡细胞数均显著高于对照组（P < 0.05或 < 0.01）。4组Bax、Bcl-2、caspase-3、Ezrin mRNA及蛋白表达差异均有统计学意义（均P < 0.01）。其中，小檗碱低、中、高剂量组Bcl-2 mRNA的表达均显著低于对照组（均P < 0.01），中、高剂量组Bcl-2蛋白表达显著低于对照组（均P < 0.01）；高剂量组Bax mRNA及中、高剂量组caspase-3 mRNA的表达均显著高于对照组（P < 0.05或 < 0.01），而低、中、高剂量组Bax、caspase-3蛋白表达量均显著高于对照组（均P < 0.01）；仅高剂量组Ezrin mRNA表达显著高于对照组（均P < 0.01），而低、中、高剂量组Ezrin蛋白表达均显著低于对照组（均P < 0.01）。结论 小檗碱可抑制cSCC-A431裸鼠移植瘤细胞的增殖并促进凋亡，从而一定程度抑制cSCC-A431裸鼠移植瘤的生长，其机制可能与小檗碱上调Bax、caspase-3的表达，同时下调Bcl-2、Ezrin的表达有关。