通路抑制剂对Tax诱导的Bcl-3的影响及其在NF-κB激活中作用的研究

目的:通过研究不同通路的抑制剂在TaxP细胞(稳定表达Tax的Jurkat亚细胞系)中对Bcl-3(Human B-cellleukemia protein 3)表达的影响和shRNA Bcl-3对NF-κB转录激活作用的影响,探讨Tax阳性细胞中调控Bcl-3的通路及Bcl-3在NF-κB通路中的作用。方法:将TaxP细胞分别用NF-κB(Nuclear factor-κB)抑制剂、GSK(Glycogen synthase kinase)抑制剂和蛋白酶抑制剂处理后,Western blot检测Bcl-3蛋白的表达情况;将Bcl-3的shRNA质粒转入TaxP细胞中,RT-PCR检测Bcl-3mRNA的表达抑制情况;共转染Bcl-3的shRNA和pNF-κB-luc质粒至Jurkat和TaxP细胞中,检测抑制Bcl-3表达后对NF-κB转录活性的影响。结果:Bcl-3的表达不受GSK抑制剂的影响,但在蛋白酶抑制后有明显的升高;RT-PCR的结果表明,在转染Bcl-3 shRNA质粒后,Bcl-3的mRNA表达有明显的下降,荧光素酶活性结果显示Bcl-3在Jurkat和TaxP细胞中被抑制后NF-κB的转录活性明显下降(P0.05)。结论:Tax诱导的Bcl-3表达不依赖于GSK通路,而NF-κB通路参与了Bcl-3的调控,说明Bcl-3在NF-κB的激活中发挥着促进作用。     

PKCθ激活γδT细胞转录因子NF-κB的作用

目的:探讨经T细胞受体(TCR)途径激活人γδT细胞时,新型蛋白激酶PKCθ在促进转录因子NF-κB活化中的作用.方法:常规分离健康人外周血单个核细胞(PBMC),用结核杆菌耐热性多肽抗原(MtbAg)诱导扩增,获得Vγ9Vδ2 T细胞富集的细胞群(MtbAT).PKCθ抑制剂(Rottlerin)预处理MtbAT,抗CD3单克隆抗体(mAb)刺激后收集细胞,通过电泳迁移率变动分析(EMSA)检测转录因子NF-κB活性变化;经流式细胞术(FCM)检测T细胞活化分子CD69的表达情况.结果:γδT细胞经抗CD3 mAb刺激,NF-κB活性增强;Rottlerin预处理使抗CD3 mAb诱导的NF-κB活化程度显著减弱,并抑制T细胞活化分子CD69的表达.结论:PKC0在人γδT细胞经TCR途径激活NF-κB过程中具有重要作用.     

生殖支原体脂质相关膜蛋白经Toll样受体2激活NF-κB

目的 探讨生殖支原体(Mg)脂质相关膜蛋白(LAMPs)能否经Toll样受体2(TLR2)激活核转录因子κB(NF-κB).方法 提取MgLAMPs刺激THP-1细胞,ELISA检测NF-κBp65活化水平,RT-PCR检测THP-1细胞TLR2 mRNA的表达,随后ELISA检测TLR2中和抗体对LAMPs激活NF-κBp65的影响,最后用LAMPs刺激瞬时共转染pFLAG-TLR2、pNF-κB-luc、pRL-TK的293T细胞,双荧光素酶报告基因分析TLR2在LAMPs激活NF-κB中的作用.结果 LAMPs能诱导THP-1细胞激活NF-κBp65,并且与LAMPs浓度呈明显的剂量依赖性,当LAMPs为4.0μg/ml时NF-κBp65活化程度最高;LAMPs能上调THP-1细胞TLR2 mRNA的表达;TLR2中和抗体能使LAMPs激活NF-κBp65的活化程度降低60%;共转染pFLAG-TLR2浓度的增加,NF-κB的活化程度明显增加,并且与TLR2的转染量呈剂量依赖性.结论 Mg LAMPs能经TLR2激活NF-κB,TLR2介导的激活在LAMPs发挥致病性过程起着重要作用.     

NF-κB与Hp感染及胃癌关系的研究进展

NF-κB是一组分布和作用均十分广泛的转录因子,具有显著的促细胞生长及抗凋亡作用,与细胞恶性转化关系密切。近年来的研究发现,胃癌组织中NF-κB呈持续活化状态,在体外试验中,幽门螺杆菌(Hp)可诱导胃癌细胞株NF-κB持续激活。NF-κB通过调控各种靶基因转录,与胃癌的发生、发展及转移有关。     

TNF-α对肠上皮细胞PIgR、NF-κB亚单位表达影响

目的:研究肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对Caco-2细胞表达多聚免疫球蛋白受体(pIgR)和核因子-κB(NF-κB)亚单位RelA/RelB的影响。方法:采用Real-time PCR方法检测肠上皮细胞表达pIgR、RelA和RelB的变化。结果:与无TNF-α刺激比较,用不同浓度TNF-α刺激后pIgR、RelA和RelB基因的表达明显增加(P<0.01)。结论:TNF-α促进肠上皮细胞表达pIgR、NF-κB亚单位基因表达,TNF-α通过NF-κB通路激活pIgR基因的转录。     

鹰嘴豆芽素A通过PPARα/γ抑制脂多糖诱导猪外周血单个核细胞炎性细胞因子的分泌

目的:研究鹰嘴豆芽素A对脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导猪外周血单个核细胞分泌炎性细胞因子的影响。方法:用鹰嘴豆芽素A(50,100μmol/L)处理猪外周血单个核细胞,采用ELISA方法检测其对LPS刺激后细胞分泌肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素6(Interleukin-6,IL-6)的影响,并用RT-PCR法检测这些细胞因子mRNA的表达,用Western blot法检测核因子κB(Nuclear factorκB,NF-κB)由细胞浆移位至细胞核内情况以判断NF-κB活性变化;同时分别用过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)α的拮抗剂MK886和PPARγ的拮抗剂GW9662与鹰嘴豆芽素A共同处理猪外周血单个核细胞,观察鹰嘴豆芽素A在PPARα或PPARγ的活性被抑制时对NF-κB活性的影响。结果:鹰嘴豆芽素A能显著降低LPS诱导猪外周血单个核细胞的TNF-α、IL-6的分泌和mRNA的表达;同时鹰嘴豆芽素A显著抑制了LPS诱导猪外周血单个核细胞NF-κB的激活,而此抑制作用均被MK886或GW9662减弱。结论:鹰嘴豆芽素A可通过PPARα和PPARγ抑制LPS诱导猪外周血单个核细胞NF-κB的活化,从而下调LPS诱导的TNF-α、IL-6的生成。     

核因子κB(NF-κB)信号通路在炎症与肿瘤中作用的研究进展

核因子κB(NF-κB)是一种能调节多种炎症和免疫基因表达的诱导性转录调节因子,能与多种细胞因子基因的启动子或增强子区NF-κB结合位点特异性结合,调控其转录和表达;进一步影响细胞的周期、自噬、衰老、凋亡,炎症反应和免疫应答等病理生理过程。同时,NF-κB是联系炎症与肿瘤的关键信号分子,对炎症及肿瘤微环境具有重要影响。NF-κB不适当的激活和表达与多种肿瘤的发生发展及肿瘤细胞的耐药性密切相关。NF-κB的激活是许多病理状态的决定因素,这使它逐渐成为相关临床疾病的治疗靶点。精细调控NF-κB活性,对于临床治疗炎症相关疾病和肿瘤将具有重要意义。     

核因子-κB在糖尿病肾组织中的表达及干预治疗

核因子(NF)-κB是细胞中一种重要的核转录因子，它参与细胞内的信号转导、免疫反应、炎症反应以及细胞生长发育等多种生物过程，在细胞因子诱导的基因表达中起关键性的调控作用。活化的NF-κB可能通过调控许多炎症因子的转录过程在糖尿病肾病（DN）的发生发展过程中起重要作用。抑制NF-κB的激活和IκB的降解等干预治疗可能是防治DN的手段之一。     

核因子-κB在肝纤维化中作用的研究进展

细胞核因子-κB(NuclearFactorkappaB,NF-κB)是调节炎症反应最重要的转录因子,在肝纤维化中参与调控肝细胞的凋亡和增殖,调节各种介质释放、引起的炎症反应、促发枯否(氏)细胞产生炎性因子扩大肝脏炎症过程,最终使肝星状细胞(hepatocelluarstellatecell,HSC)活化,产生大量胶原纤维发生纤维化。本文概述了NF-κB通路的组成和激活过程,NF-κB与其它肝纤维化相关细胞因子的关系以及在肝纤维化形成过程中NF-κB对肝细胞、肝星状细胞有关基因转录的调节进展。     

研究短文伊贝沙坦对系膜增生肾炎大鼠肾核因子-κB及MMP-9的作用

核因子-κB(nuc lear factor-kappaB,NF-κB)是一种重要的核转录因子,参予细胞内信号传递,调控多种基因表达,许多肾脏疾病均伴有NF-κB转录活性异常。基质金属蛋白酶-9(m atrix m etalloprote inase-9,MMP-9)基因5′端启动子内有NF-κB的结合位点,许多细胞因子可通过这些结合位点来诱导MMP-9的表达。MMP-9的表达和活性与肾小球内的细胞增生呈正相关。血管紧张素II(angiotensinII,AngII)有调节血管张力、血流和促进细胞生长、增生以及致炎等作用,它可激活肾脏NF-κB表达,从而使NF-κB调控下的炎症因子表达上升。系膜增生性肾小…     

NF-κB与TNF诱导的细胞凋亡

不同类型的细胞对于TNF-α诱导的细胞凋亡的敏感性可以有很大差别,但是多数的细胞在同时给予蛋白质合成抑制剂处理时会对TNF-α变得非常敏感。有学者认为有一个基因或一组基因在TNF受体活化后被诱导而传导细胞凋亡信号。近期的研究表明,一种被TNF激活的NF-κB转录因子在这一过程中起部分的作用。该发现把NF-κB原先只作为免疫和炎症反应调控因子的功能拓宽到了也可参与细胞凋亡的调控。     

干扰3T3-L1脂肪细胞生长激素受体对生长激素诱导的细胞炎症因子表达和分泌的影响

目的:探讨干扰3T3-L1脂肪细胞生长激素受体(GHR)对生长激素(GH)诱导的脂肪细胞核因子κB(NF-κB)激活及炎症细胞因子mRNA表达和分泌的影响。方法:采用RNA干扰技术抑制3T3-L1脂肪细胞中GHR的表达;Western blot检测GHR的蛋白表达;双萤光素酶报告基因系统分析GHR对GH激活的3T3-L1脂肪细胞NF-κB转录活性的影响;real-time RT-PCR和ELISA技术检测GHR对GH诱导的3T3-L1脂肪细胞炎症因子mRNA表达和分泌的影响。结果:干扰3T3-L1脂肪细胞GHR的表达能够显著抑制生长激素诱导的细胞NF-κB的激活,并减少TNF-α、IL-1β和IL-6等炎症细胞因子的mRNA表达和分泌。结论:干扰3T3-L1脂肪细胞GHR可抑制GH诱导的炎症细胞因子表达和分泌。     

NF-kB及其在肿瘤发生发展中的作用

核因子κB(NF-κB)是一组广泛存在于哺乳动物细胞中的转录因子,由Sen等于1986年首先在B细胞中发现。NF-κB除主要参与炎症和自身免疫反应相关的基因调控外,还参与骨的重建以及皮肤附属器官的发生。近些年来,很多研究发现,NF-κB对肿瘤的起源、发展、血管新生和转移及肿瘤细胞凋亡具有重要作用,并与肿瘤细胞耐药性的产生关系密切。因此,NF-κB在癌症发病过程中的作用越来越受到重视。本文对NF-κB的组成、调控、激活等方面及其在肿瘤发生发展过程中的作用作一综述。     

食管癌ECA109细胞中Survivin shRNA干扰对核因子κB表达的影响及调控机制

目的探讨Survivin作为基因表达调控因子,对核因子κB(NF-κB)基因的转录及蛋白水平活性的影响及与NF-κB的调控关系。方法采用Survivin短发夹RNA(shRNA)干扰技术,脂质体转染食管癌ECA109细胞,检测Survivin沉默效果,选择最佳转染浓度;半定量RT-PCR检测Survivin shRNA干扰后食管癌ECA109细胞中NF-κB及其通路的上游调控因子核因子κB抑制蛋白α(IKKα)、IKKβ表达变化;Western blotting方法检测NF-κB蛋白的表达变化;流式细胞术检测干扰之后食管癌ECA109细胞增殖、凋亡指数的变化。结果 Survivin shRNA干扰食管癌ECA109细胞后,Survivin mRNA和蛋白表达明显下调;NF-κB mRNA表达变化无明显差异,但其蛋白磷酸化水平降低,NF-κB上游因子IKKα、IKKβmRNA表达下调;食管癌ECA109细胞凋亡明显增加,G2期细胞比例增加,S期细胞减少,细胞周期受阻。结论 Survivin通过在转录水平影响IKKα、IKKβmRNA表达,调控NF-κB蛋白活化水平,提示Survivin在肿瘤信号调控网络中可作为一个新的基因表达调控因子。     

双歧杆菌对大鼠腹腔巨噬细胞NF-κB和IκB的影响

目的：探讨双歧杆菌对大鼠腹腔巨噬细胞核转录因子 NF-κB和IκB调控。 方法： 收集大鼠腹腔巨噬细胞，实验分为正常对照组、双歧杆菌刺激组，以不同浓度的双歧杆菌106、107、108和109cells/L刺激细胞60 min,或以108cells/L的浓度刺激细胞不同时间(15、30、60、120和180 min)，分别收集细胞以提取总蛋白及核蛋白。用凝胶电泳迁移分析法（EMSA）测定NF-κB的结合活性；用Western印迹分析巨噬细胞胞浆内相应的IκBα蛋白表达。 结果： 双歧杆菌处理后，巨噬细胞 NF-κB向核内转移，结合活性明显增加，相应的IκBα表达降低。 结论： 双歧杆菌可以通过激活腹腔巨噬细胞核转录因子 NF-κB来发挥调作控用。     

JNK3抑制NF-κB转录活性的研究

目的研究人c-Jun氨基末端激酶3(c-Jun N-terminal kinases3,JNK3)对核因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)转录活性的影响。方法构建人JNK3真核表达载体pcDNA3.1-JNK3,与3×κB-luc报告基因质粒共转染人胚胎肾细胞293(HEK293),分别进行如下处理:共转染50ngpCMV-Myc-p65质粒;转染24h后,加入浓度为10ng/ml的TNF-α或IL-1β刺激6h,收集细胞,检测荧光素酶活性。结果成功构建了pcDNA3.1-JNK3真核表达载体;提高细胞内p65水平,加入TNF-α或IL-1β刺激均可明显激活NF-κB的转录,JNK3对NF-κB的转录活性有明显抑制作用,且随着JNK3转染剂量的增加,抑制作用增强。结论JNK3能明显抑制NF-κB的转录活性。     

蛋白酶体抑制剂MG132增强4-羟苯基维胺脂诱导肝癌细胞凋亡

目的:观察4-羟苯基维胺脂(4-HPR)联合蛋白酶体抑制剂MG132增强人肝癌Hep3B细胞凋亡的机制.方法:利用流式细胞仪技术检测4-HPR或(和)MG132联合应用后肝癌Hep3B细胞凋亡发生,采用电泳迁移率分析法(EMSA)检测核转录因子(NF-κB)活性变化.结果:流式细胞仪检测显示,MG132明显增加4-HPR诱导肝癌细胞Hep3B引起凋亡;EMSA实验表明MG132能抑制NF-κB的活性.结论:MG132抑制NF-κB活性可增强4-HPR诱导的肝癌Hep3B细胞凋亡,且NF-κB的激活部分抑制4-HPR诱导的肝癌Hep3B细胞凋亡.     

炎症状态下NF-κB-mTOR通路及转录因子RUNX1调控肾小管上皮细胞DC-SIGN表达研究

探讨炎症状态下NF-κB通路、mTOR通路以及转录因子RUNX1对肾小管上皮细胞DC-SIGN表达调控。体外培养肾小管上皮细胞株(HK-2)并经TNF-α刺激,分别给予NF-κB抑制剂(BAY 11-7082)和mTOR抑制剂(Rapamycin)干预。采用免疫印迹试验和实时定量PCR法检测HK-2细胞DC-SIGN表达;免疫印迹试验检测mTOR的磷酸化水平。用上述经TNF-α刺激的HK-2以及建立的肾炎损伤小鼠模型,以实时定量PCR法检测HK-2细胞以及分离的模型鼠肾小管上皮细胞中RUNX1表达。进一步利用HK-2构建过表达RUNX1稳定转染细胞株并经TNF-α刺激,实时定量PCR法检测RUNX1和DC-SIGN表达。结果显示,HK-2经TNF-α刺激模拟炎症状态下,可促进mTOR磷酸化并诱导DC-SIGN表达;NF-κB抑制剂和mTOR抑制剂均能抑制HK-2细胞的DC-SIGN表达,NF-κB抑制剂亦可抑制mTOR的磷酸化。还发现炎症因素刺激下,人和小鼠肾小管上皮细胞体内体外均明显表达RUNX1,且过表达RUNX1的HK-2细胞稳转株显著表达DCSIGN,并在TNF-α刺激下可进一步上调DC-SIGN表达。本研究表明,肾脏微炎症状态下,NF-κB-mTOR通路以及转录因子RUNX1均参与了肾小管上皮细胞DC-SIGN的表达调控。提示此过程中,NF-κB通路作为mTOR上游通路,通过激活后者参与DC-SIGN表达,而转录因子RUNX1可能是启动DC-SIGN表达的关键调控因素。     

051 核转录因子NF-ΚB--肿瘤基因治疗的新焦点

NF-κB是一种重要的核转录因子,由一个复杂的体系组成.它存在于多种细胞,参与多种生理、病理过程的基因调控,并在细胞的抗凋亡过程中起着至关重要的作用.NF-κB系统由NF-κB家族及其抑制物IκB家族共同组成.NF-κB的激活是肿瘤细胞抵抗TNF等抗肿瘤药物作用的重要机制.通过抑制IκB的降解来抑制NF-κB的激活可以导致肿瘤细胞的大量凋亡.因此,通过基因治疗来抑制NF-κB的活性,再辅以常规的化疗将有望成为一个有效的肿瘤治疗方法.