马桑内酯致大鼠癫痫持续状态后海马神经细胞凋亡的观察

观察马桑内酯（ｃｏｒｉａｒｉａｌａｃｔｏｎｅ，ＣＬ）诱导鼠癫痫持续状态（ＳＥ）时海马细胞中ＤＮＡ损伤及凋亡现象。方法用流式细胞术检测海马细胞中ＤＮＡ状态，用免疫组织化学方法显示海马谷氨酸阳性细胞，并以流式细胞术免疫荧光法测定海马细胞中ＢＣＬ－２样蛋白含量。结果ＳＥ后海马细胞中有ＤＮＡ损伤断裂；海马ＣＡ３区谷氨酸阳性细胞数量减少，着色变淡；海马细胞中ＢＣＬ－２样蛋白增加。结论ＳＥ可诱导海马细胞ＤＮＡ损伤进而凋亡；ＳＥ时谷氨酸过量释放可造成突触后靶细胞损伤。ＢＣＬ－２样蛋白增加可能是ＢＣＬ－２家族蛋白共同变化的结果，是细胞自身的保护机制，以抗损伤和凋亡。     

海人酸致癫痫大鼠海马GABAB受体亚单位GBR1a mRNA表达的研究

目的　通过研究海人酸致癫痫大鼠海马 GABAB受体亚单位 GBR1a m RNA表达的变化 ,为进一步探明癫痫发病的受体分子生物学机制奠定基础。方法　在立体定位仪下 ,将海人酸注射至大鼠杏仁核制备癫痫模型。将大鼠随机分为正常组和海马致癫痫组 ,分别于不同时间取材 ,进行脑组织 GABAB受体亚单位 GBR1a m RNA原位杂交检测。结果　正常组海马各区均有极少量的 GABAB受体亚单位 GBR1a m RNA的分布 ;海人酸致癫痫组( 6 h,12 h,2 4h) GABAB受体亚单位 GBR1a m RNA水平显著高于对照组 ( P<0 .0 1)。结论　正常大鼠海马各区存在着少量的 GBR1a m RNA表达 ,海人酸致痫后 6 h,12 h,2 4h,GBR1a m RNA的表达水平上调。     

海人酸致癫癎持续状态大鼠海马神经元线粒体损伤及caspase-3表达

目的观察海人酸诱导的癫痫间持续状态(status ep ilepticus,SE)大鼠海马CA3区神经元线粒体损伤及caspase-3的表达。方法用海人酸诱导大鼠SE 2 h;于SE终止后第3、6、24 h取海马,光镜观察神经元的变化,并用电镜进一步观察线粒体的超微结构;免疫组化方法检测caspase-3的表达。结果SE终止后3h电镜下可见到线粒体嵴的肿胀和膜的崩解;SE后24 h神经元呈坏死样改变;caspase-3的表达在SE后6 h开始增加(与对照组比较,P<0.05),于第24 h明显增高(P<0.01)。结论在实验性SE模型中早期即出现线粒体超微结构的损伤,其后出现caspase-3的表达增高及神经元形态的改变,提示线粒体的损伤是SE后神经元损伤的关键环节。     

海人酸致难治性癫痫大鼠脑组织及外周血P糖蛋白表达趋势相关性研究

目的 研究难治性癫痫大鼠脑组织及外周血中P糖蛋白表达的相关性,探讨难治性癫痫可能的耐药机制,并比较海人酸在不同核团致痫后P糖蛋白表达的差异.方法 用海人酸分别于大鼠杏仁核及海马进行化学点燃,制作难治性癫痫模型.采用免疫组化方法,分析比较难治性癫痫大鼠脑组织及外周血中P糖蛋白的表达.结果 杏仁核点燃组与海马点燃组大鼠脑组织及外周血P糖蛋白表达高于与其相对应的生理盐水卡马西平组及生理盐水对照组,有统计学意义(P＜0.05);杏仁核生理盐水卡马两平组及海马生理盐水卡马西平组大鼠脑组织及外周血P糖蛋白的表达高于杏仁核生理盐水对照组及海马生理盐水对照组,有统计学意义(P＜0.05);杏仁核点燃组和海马点燃组大鼠脑组织及外周血P糖蛋白的表达相近,无统计学意义(P＞0.05).结论 难治性癫痫大鼠外周血及脑组织中P糖蛋白的表达具有一定的相关性,难治性癫痫的耐药机制可能是癫痫本身、服用抗癫痫药物等多因素作用的结果.杏仁核点燃模型及海马点燃模型均可诱导相近似的P糖蛋白的表达.     

海人酸大鼠癫痫模型的建立

目的 应用海人酸注射建立海人酸大鼠癫痫模型,评价其生物学特性.方法 通过立体定位手术,大鼠海马组织微量注射海人酸,术后观察大鼠行为学表现、电生理改变及海马超微形态结构变化.结果 海人酸注射后实验大鼠出现典型的颞叶癫痫发作过程,表现为湿狗样抖动、前肢抽搐、跌倒以及全身强直-阵挛性发作等,皮层脑电图出现多种形式的痫性放电,单神经元放电细胞外记录显示癫痫模型大鼠放电杂乱,形态不规整.电镜显示神经细胞固缩,星形细胞突起肿胀,神经突触水肿,可见兴奋性递质小泡,线粒体水肿崩解,嵴排列紊乱,血管内皮细胞水肿,血脑屏障破坏.结论 大鼠立体定向海人酸药物注射是一种较理想的癫痫模型.     

海人酸致痫大鼠海马细胞外氨基酸类神经递质的变化

目的 分析海马细胞外氨基酸递质在癫痫发生中的作用,探讨海人酸致痫模型大鼠癫痫发生的机制.方法 应用立体定向方法建立海人酸大鼠颞叶癫痫模型,观察大鼠行为学和电生理变化,应用电镜观察大鼠海马超微结构,应用微透析获取大鼠海马细胞外液,高压液相色谱法测定透析液中的兴奋性氨基酸谷氨酸、抑制性氨基酸牛磺酸及γ-氨基丁酸的含量.结果 海人酸注射后大鼠出现典型的颞叶癫痫发作,皮层脑电显示痫性发作,电镜显示兴奋性神经递质增加,高效液相色谱分析显示海马细胞外谷氨酸、牛磺酸和γ-氨基丁酸含量明显高于对照组(P＜0.05),虽然谷氨酸、γ-氨基丁酸都升高,而谷氨酸升高的更明显.结论 兴奋性氨基酸与抑制性氨基酸的失衡在海人酸致痫大鼠模型的癫痫发生过程中发挥重要作用,是癫痫发生的原因之一.     

海人酸致痫大鼠海马神经元凋亡研究

目的　研究大鼠癫痫发作后海马神经元凋亡的时空分布。方法　采用海人酸 (KA)诱导大鼠癫痫模型 ,以原位末端标记 (TUNEL)及透射电镜检测癫痫发作后 6h、1d、3d、7d海马神经元凋亡。结果　对照组及KA致痫后 6h组 ,海马区均未发现凋亡细胞。KA致痫后 1d ,海马CA1、CA3及CA4区开始出现凋亡细胞 ,3d时明显增多 ,7d时最多。KA致痫后 1d、3d、7d ,海马CA1锥体层线性长度1mm的TUNEL阳性细胞数分别为 (6 .6 0± 3.6 9)个、(13.5 7± 5 .17)个和 (2 5 .96± 4 .87)个 ;CA3区分别为 (6 .4 8± 2 .4 5 )个、(13.89± 2 .5 2 )个和 (2 8.80± 5 .39)个 ;CA4区分别为 (4 .6 0± 1.4 5 )个、(12 .2 0± 2 .0 4 )个和 (2 5 .2 0± 5 .83)个。 3个时间组相应区域凋亡神经元数比较均存在显著性差异(P <0 .0 0 1)。透射电镜观察可见典型的凋亡细胞形态学改变。结论　凋亡参与KA致痫大鼠癫痫发作后海马神经元迟发性死亡过程。     

依达拉奉对海人酸致颞叶癫痫大鼠海马神经元的保护作用

目的本实验观察依达拉奉对海人酸致痫大鼠海马神经元损伤的保护作用。方法选用成年健康雄性Wistar大鼠18只,体重260±20g。实验动物随机分为3组,①sham组(n=6):右侧海马CA3区注入等量的生理盐水;②KA模型组(n=6):右侧海马CA3区注入KA 4μg.kg-1(4μg/μl);③依达拉奉组(n=6):右侧海马CA3区注入KA 4μg.kg-1(4μg/μl)后,即刻给予依达拉奉10mg.kg-1.d-1腹腔注射。于大鼠注药或假手术后立即观察各组大鼠的行为学表现,于7d断头取脑,石蜡切片进行硫堇染色,于光学显微镜下观察注药对侧(左侧)海马CA1、CA3区及CA4门区组织形态学特征,并对其进行组织学分级。结果 Sham组大鼠注射对侧海马CA1、CA3和CA4门区无明显组织损伤,组织学分级多为0～1级,ND值为198±20.62和212±30.14;模型组KA致痫大鼠可见明显的组织损伤,组织学分级多为2～3级,ND值为79±13.72和90±14.98,与sham组相比,组织学分级显著升高(p<0.05),ND值显著降低(p<0.01)。依达拉奉组大鼠海马CA1区可见少量、散在性神经元坏死,组织学分级多1～2级,ND值为101±16.85和135±12.17。与模型组相比,组织学分级降低(p<0.05),ND值显著升高(p<0.05)。结论依达拉奉能够减轻KA致痫大鼠海马神经元的损伤,对神经元具有保护作用。     

癫痫持续状态后海马神经元凋亡的形态学证据及意义

癫痫持续状态（ｓｔａｔｕｓｅｐｉｅｐｔｉｃｕｓ，ＳＥ）可造成选择性神经元损害。近来研究发现这些脑组织中神经元死亡可能是通过凋亡（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）机制。腹腔注射贝美格（Ｂｅｍｅｇｒｉｄｅ）诱导ＳＥ，研究了鼠ＳＥ后脑损害中的神经元凋亡现象，以ＨＥ染色、电镜、荧光（ＡｃｒｉｄｉｎｅＯｒａｎｇｅ，ＡＯ）细胞核染色方法观察细胞形态，以流式细胞术及凝胶电冰鉴定ＤＮＡ片断。ＳＥ后２４小时，海马中的易损神经元死亡具有凋亡特征：①光镜及电镜观察到细胞核内染色体凝聚和边及；②阳性ＡＯ着色细胞核；③流式细胞术及凝胶电冰显示具有ＤＮＡ片断。而且有Ⅰ型和Ⅱ型两种形式的凋亡。因此ＳＥ引起海马损害中神经元有通过调亡机制发生死亡．     

海人酸致痫大鼠海马CA3区神经元线粒体超微结构损伤及caspase-3的表达变化

目的观察海人酸(KA)诱导的癫痫持续状态(SE)大鼠海马CA3区神经元线粒体超微结构的损伤及caspase-3的表达变化.方法用KA诱导大鼠SE 2h.于SE终止后第3、12、24小时取海马,电镜观察线粒体的超微结构,免疫组化方法检测caspase-3的表达.腹腔内注射生理盐水的大鼠设为对照组.结果SE终止后3 h,电镜下可见线粒体肿胀及膜完整性的破裂.caspase-3的表达于SE后1 2 h较对照组增加,平均阳性细胞数及灰度值分别为10.49±0.68及45.57±2.27(P＜0.05);于SE后24 h,分别为37 36±0.57及11 5.24±1 22(P＜0.01).结论在实验性SE模型中,海马神经元线粒体超微结构的损伤早于caspase-3的表达,提示线粒体的损伤可能是SE后神经元损伤的关键环节.     

红藻氨酸致惊大鼠海马神经元Caspase-3表达与神经元凋亡

目的:研究Caspase-3在红藻氨酸(Kainate,KA)致惊大鼠海马中的变化及其在海马神经元凋亡中的作用.方法:在KA所致大鼠惊厥模型中,用免疫组织化学方法检测惊厥后不同时间点大鼠海马中Caspase-3的表达,用电子显微镜和原位末端标记法(TUNEL)检测惊厥后不同时间点大鼠海马神经元凋亡.结果:惊厥后1 d,大鼠海马内Caspase-3的表达就明显升高,一直持续到惊厥后3 d;大鼠海马内凋亡细胞从惊厥后3 d即明显增多,一直持续到惊厥后7 d.结论:KA所致惊厥后,大鼠海马内Caspase-3表达明显升高,神经元凋亡明显增多,而且Caspase-3的变化发生在神经元凋亡增多之前,提示Caspase-3可能参与了KA致惊厥大鼠海马神经元凋亡的发生.     

红藻氨酸致惊大鼠海马神经元Caspase—3表达与神经元凋亡

目的：研究Caspase-3在红藻氨酸（Kainate,KA)致惊大鼠海马中的变化及其在海马神经元凋亡中的作用。方法：在KA所致大鼠惊厥模型中，用免疫组织化学方法检测惊厥后不同时间点大鼠海马中Caspase-3的表达，用电子显微镜和原位末端标记法（TUNEL）检测惊厥后不同时间点大鼠海马神经元凋亡。结果：惊厥后1d,大鼠海马内Caspase-3的表达就明显升高，一直持续到惊厥3d；大鼠海马内凋亡细胞从惊厥后3d即明显增多，一直持续到惊厥后7d。结论：KA所致惊厥后，大鼠海马内Caspase-3表达明显升高，神经元凋亡明显增多，而且Caspase-3的变化发生在神经元亡增多之前，提示Caspase-3可能参与了KA致惊厥大鼠海马神经元凋亡的发生。     

ATRA诱导胶质瘤C6细胞凋亡过程中Bcl-2和Caspase-3表达的研究

目的研究全反式维甲酸（ATRA）诱导胶质瘤C6细胞凋亡过程中Caspase-3和Bcl-2表达情况,探讨ATRA诱导胶质瘤C6细胞凋亡的机制。方法用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法绘制ATRA不同浓度不同时间（6、12、24、48、72h）对胶质瘤C6细胞作用后细胞生长曲线,逆转录酶-多聚酶链反应（RT—PCR）检测凋亡相关基因Bcl-2和Caspase-3 mRNA水平的表达变化影响,Western blot分析Caspased和Bcl-2在胶质瘤C6细胞中的表达情况。结果胶质瘤C6细胞经ATRA诱导后,细胞的增殖明显受到抑制,通过RT-PCR结果证实Bcl-2 mRNA在ATRA作用下明显呈低表达而Caspase-3 mRNA的表达随时间延长逐渐增高,Western blot检测结果显示ATRA作用后,下调凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达并激活了凋亡蛋白Caspase-3的表达。结论ATRA对胶质瘤C6细胞的增殖具有抑制作用。     

亚低温对大鼠局灶性脑缺血后细胞凋亡及Caspase-3的影响

目的 探讨亚低温对脑缺血损伤的保护作用。方法 用原位末端标记（TUNEL）和原位杂交技术分别观察亚低温组、常温组脑缺血不同时间点神经细胞凋亡的变化及Caspase-3的表达。结果 （1）常温组脑缺血后凋亡神经细胞主要分布于缺血周围区,随着时间的延长凋亡细胞数逐渐增加,至12h达高峰,24h后开始下降,7d时仍高于假手术组;（2）亚低温组脑缺血后,凋亡神经细胞也主要位于缺血周围区,数量相对较少,其变化规律与常温组相似,同一时间点相比较,亚低温组均显著低于常温组;（3）常温组脑缺血2h后,神经细胞Caspase-3开始表达,并随着时间的延长而增强,24h达高峰,其后逐渐下降,至7d略高于假手术组;（4）亚低温组脑缺血后,神经细胞Caspase-3的表达也主要位于缺血周围区,其变化规律与常温组相似,同一时间点相比较,亚低温组均显著低于常温组。结论 脑缺血后,缺血周围区神经细胞的凋亡是一个动态的渐进过程,Caspase-3基因在介导脑缺血损伤神经元凋亡过程中起关键作用。亚低温对短暂性脑缺血后的神经元凋亡有明显的抑制作用,亚低温可能通过Caspase-3途径抵抗脑缺血损伤。     

脑缺血后处理对大鼠海马Caspase-3表达的影响

目的研究脑缺血后处理大鼠海马Caspase-3的变化,探讨脑缺血后处理的脑保护机制。方法建立脑缺血及脑缺血后处理大鼠模型,分别在再缺血后6 h、12 h、1 d、3 d四个时间点观察和比较脑缺血大鼠、脑缺血后处理大鼠神经功能缺损评分、脑梗死体积、海马Caspase-3表达的变化。结果在缺血后相同时间点,后处理组神经功缺损能评分(1.79±0.83),梗死体积6 h(12.17±1.85)、12 h(20.87±1.77)、24 h(31.08±1.69)、72 h(35.61±1.47)和Caspase-3阳性表达6 h(101.17±12.52)、12 h(185.17±20.09)、24 h(251.50±29.56)、72 h(249.83±20.57)较缺血组神经功能缺损评分(2.38±0.65)、梗死体积6 h(16.0±2.70)、12 h(24.85±1.26)、24 h(34.34±2.329)、72 h(40.17±1.21)和Caspase-3阳性表达6h(123.17±16.67)、12 h(224.83±25.42)、24 h(301.50±21.08)、72 h(293.33±40.33)减少(P0.05)。结论缺血后处理对发生脑缺血所致的神经元损伤起保护作用;缺血后处理脑保护机制可能与减少海马Caspase-3表达有关。     

Caspase-3在戊四氮点燃大鼠海马组织中的表达

目的：研究Caspase-3在戊四氮（pentylenetetrazole,PTZ）急性点燃大鼠海马组织中的表达情况。方法：通过腹腔注射戊四氮建立急性点燃大鼠模型，运用逆转录聚合酶链式反应技术分析Caspase-3 mRNA在癫痫发作后的表达情况。结果：癫痫发作后海马组织Caspase-3 mRNA的表达水平早期即出现升高（8h组与对照组相比，P＜0．05），且持续较长一段时间（5d组与对照组相比，P＜0．05）。结论：Caspase-3可能参与了癫痫后海马神经元的凋亡过程。     

丹参注射液对缺氧神经干细胞凋亡和Caspase-3活性的影响

目的 探讨丹参注射液对缺氧培养大鼠神经干细胞的凋亡及Caspase-3活性的影响,以进一步明确丹参注射液神经保护作用的分子机制.方法 体外培养新生大鼠海马神经干细胞,将其分为正常对照组,缺氧培养组及丹参注射液处理组.Hoechst染色后荧光显微镜下观察并计算细胞凋亡率:比色法检测各组细胞Caspase-3的相对活性.结果 缺氧培养大鼠神经干细胞的细胞凋亡率(30.12%±2.09%)及Caspase-3活性(3.85±0.41)均较正常对照组(2.75%±0.28%,1.16±0.07)明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05);施加丹参注射液后,大鼠神经干细胞的细胞凋亡率(9.16%±1.34%)和Caspase-3活性(1.50±0.09)均较缺氧培养组明显下降,差异有统计学意义(P＜0.05).结论丹参注射液可对抗缺氧损伤所致的神经干细胞凋亡,从而起到神经保护作用.     

大鼠大脑中动脉缺血/再灌注模型中Caspase-3的表达

目的 研究Caspase-3在缺血性脑损伤中的作用，进一步探讨缺血性脑血管病的分子机制。方法 用Belayev改良的Longa线栓法制备大鼠局灶性大脑中动脉(MCA)缺血／再灌注模型，TTC染色观察梗死灶的形成，分别用原位杂交及免疫组化技术检测鼠脑中Caspase-3 mRNA与活性蛋白的表达。结果 缺血2小时再灌注24小时，TTC染色见明显的梗死灶形成，正常脑组织、假手术组及MCAO缺血对侧脑中有少量的Caspase-3 mRNA表达，但活性蛋白几无表达；再灌注24小时后，缺血侧脑中Caspase-3 mRNA表达明显增强，蛋白质活化增多，再灌注48小时进一步增加。结论 细胞凋亡机制参与了缺血后迟发性神经元死亡，Caspase-3在其中起重要作用。     

褪黑素对癫痫状态大鼠海马Caspase-3 mRNA表达和脂质过氧化的影响

目的 探讨褪黑素（melatonin,Mel）神经元保护作用的机制.方法 采用匹罗卡品（pilocarpine,PILO）诱导大鼠癫痫持续状态（status epilepticus,SE）模型,用比色法检测海马丙二醛（malondialdehyde,MDA）、还原型谷光甘肽（glutathione,GSH）水平和谷光甘肽还原酶（glutathione reductase,GR）的活力,用RT-PCR技术检测海马caspase-3 mRNA的表达.结果 PILO组大鼠SE后6h～72h,海马MDA含量明显高于对照组（P＜0.01）;海马GSH含量和GR活力均明显低于对照组（P＜0.01）,SE后7d,海马MDA含量和GR活力基本恢复正常.PILO＋Mel组大鼠,在SE后各时相点海马MDA含量均明显低于PILO组大鼠（P＜0.01）;而海马GSH含量和GR活力均显著高于PILO组大鼠（P＜0.05）.SE后6h～72h,PILO组大鼠海马caspase-3 mRNA的表达明显高于对照组（P＜0.01）和PILO＋Mel组（P＜0.01）,提示给予Mel可明显抑制SE大鼠海马caspase-3 mRNA的表达.结论 Mel发挥神经元保护作用的机制是通过提高SE大鼠海马GSH水平和GR活力,来减轻脂质过氧化损伤;并通过抑制caspase-3 mRNA的表达,来干预细胞凋亡.     

氧、糖剥夺预处理后Caspase-3在体外培养大鼠神经元变化及意义

目的 观察Caspase-3蛋白在体外培养大鼠皮质神经元氧、糖剥夺预处理(OGD) 后表达的变化.方法 体外培养大鼠皮质神经元,培养至10～12d时.随机分为:A组,对照组(n=6);B组,单纯预处理组(n=6);C组,预处理缺血组(n=6);D组,致死缺血组(n=6).观察TUNEL染色和免疫组化(SP)法Caspase-3蛋白在不同时期的表达.结果 缺血预处理后出现TUNEL阳性细胞;Caspase-3表达在A组、B组和C组比较无显著性差异(P＞0.01);D组Caspase-3表达较A、B和C组有显著增高(P＞0.01).缺血预处理后TUNEL阳性细胞和Caspase-3的表达呈正相关(r=0.44 ,(P＜0.01)).结论 预处理能够减少神经细胞凋亡,其作用机制可能是抑制Caspase-3的表达,抗神经细胞凋亡.