生物芯片在生命科学研究领域中的应用

生物芯片技术是近年来出现的分子生物学与微电子技术相结合的最新的核酸分析检测技术,它将大量遗传信息固定于硅片上,再与荧光标记的DNA或cDNA样品杂交,通过检测杂交信号而对样品的基因信息进行分析。由于它携带信息量大,体积小,分析过程自动化,分析速度快及所需样品和试剂量少,因而在生命科学研究领域有着广泛的应用。     

基因芯片与卫生微生物检验

基因芯片又称DNA微阵列，是采用原位合成或显微点样技术，将数以万计的DNA探针固化于支持物表面，有序地集成一系列可寻址识别的基因片段，与标记的样品进行杂交后，通过检测杂交信号来实现对生物样品的快速检验或医学诊断，它具有高通量、可并行检测的特点。根据载体上核酸分子的不同，分为cDNA芯片和寡核苷酸芯片等。它在临床微生物检测中的应用为其在卫生微生物检验中的应用奠定了良好的基础。     

基因芯片技术检测丁型肝炎病毒的研究

目的制备检测丁型肝炎病毒(HDV) 基因芯片。方法针对HDV基因保守区域设计多对PCR引物。用芯片点样仪将PCR产物点到玻片上制成基因芯片。样品标记采用限制性显示技术,样品标记后进行杂交。结果运用PCR技术得到多个HDV特异性基因片段,序列分析表明,所扩增的片段均属于HDV特异基因。杂交结果显示,样品和HDV诊断基因芯片杂交的敏感性和特异性均佳。结论用基因芯片检测HDV具有敏感、高效、检测结果可靠的优点,有着较大的应用前景。     

基因芯片技术及其肾移植临床中的发展与应用

目的:基因芯片是指在固相支持物上将大量DNA探针以微阵列的方式固化,已标记的样品与之杂交,通过检测杂交信号,计算分析,得出样品的基因信息〔1〕。它包括DNA芯片和cDNA芯片,该技术包括4个方面:芯片的制备、样品的制备,分子杂交和检测分析。由于它具有高通量的特点,为解析肾移植中复杂的基因调控网络提供了一项崭新的技术手段。本文综述了基因芯片技术在肾移植组织配型、排斥反应、免疫抑制剂肾毒性、术后感染等方面的初步应用。     

痘苗病毒寡核苷酸检测芯片的设计及研制

目的对痘苗病毒进行寡核苷酸检测芯片的初步研究,为建立寡核苷酸芯片检测该类病毒提供初步研究依据。方法根据痘苗病毒特异基因设计寡核苷酸探针,人工合成探针后制备寡核苷酸芯片。在病毒感染的不同阶段提取病毒样品DNA及阴性样品DNA,采用限制性显示技术标记,标记样品与芯片杂交后,用Agilent芯片扫描仪检测杂交结果。结果芯片与病毒样品杂交有较强的杂交信号,而与阴性样品杂交除阳性探针外均无信号。结论病毒样品与阴性样品杂交信号区别明显,在病毒感染的各个时段也都有明显的杂交信号,反映了寡核苷酸芯片具有较高的特异性和灵敏度。     

痘苗病毒寡核苷酸检测芯片的设计及研制

目的 对痘苗病毒进行寡核苷酸检测芯片的初步研究，为建立寡核苷酸芯片检测该类病毒提供初步研究依据。方法 根据痘苗病毒特异基因设计寡核苷酸探针，人工合成探针后制备寡核苷酸芯片。在病毒感染的不同阶段提取病毒样品DNA及阴性样品DNA，采用限制性显示技术标记，标记样品与芯片杂交后，用Agilent芯片扫描仪检测杂交结果。结果 芯片与病毒样品杂交有较强的杂交信号，而与阴性样品杂交除阳性探针外均无信号。结论 病毒样品与阴性样品杂交信号区别明显，在病毒感染的各个时段也都有明显的杂交信号，反映了寡核苷酸芯片具有较高的特异性和灵敏度。     

基因芯片技术在脑创伤研究中的应用

基因芯片(gene chip)是将大量的靶基因片段用点样仪有序地、高密度地(点与点之间的距离一般＜500μm)固定在玻璃、硅等固相载体上的一项技术.它将待测样品用荧光染料标记成探针与芯片杂交,杂交后的信号用激光扫描仪检测,计算机分析检测结果,可获得类似于传统的点杂交的分子杂交数据,比较各组织间靶基因表达谱的差异,以达到快速、高效、高通量及平行性地分析生物信息的目的.     

应用不对称PCR技术提高寡核苷酸基因芯片杂交效率

目的：比较采用常规PCR和不对称PCR分别进行样品的掺入荧光标记，应用于60met寡核苷酸芯片杂交，分析其对芯片杂交效率的影响。方法：以A／T克隆分别将NS1、NS2a、NS2b、NS4a和NS4b基因片段与pMD18-T载体连接，应用常规PCR和不对称PCR两种方法进行掺入荧光标记，将荧光标记样品与寡核苷酸芯片杂交，在相同条件下完成杂交清洗和芯片的扫描检测。结果：与常规PCR标记方法相比，采用不对称PCR技术标记单链样品与寡核苷酸芯片杂交，能提高芯片的杂交效率。结论：应用不对称PCR技术对样品进行荧光标记后，与寡核苷酸芯片杂交能提高芯片的杂交效率，有利于检测型寡核苷酸基因芯片的应用。     

SARS冠状病毒检测60 mer寡核苷酸基因芯片的设计及应用

目的设计并应用60 mer寡核苷酸基因芯片实现对SARS冠状病毒的检测.方法根据寡核苷酸基因芯片的设计原则设计出30条60 mer的寡核苷酸片段,覆盖SARS冠状病毒(以TOR2株为参考序列,GENEBANK索取号:AY274119)全基因组,点样制备成12×12的寡核苷酸基因芯片,将临床诊断SARS患者痰液标本抽提病毒RNA,采用限制性显示技术进行标记,将标记好的样品与芯片杂交,洗脱,扫描.初步探索寡核苷酸芯片诊断SARS冠状病毒的敏感性及特异性,并对芯片做进一步的优化.结果来自SARS患者样品与芯片上的多个SARS探针杂交,出现了明显的荧光信号;阴性和空白对照探针上没有杂交信号,而对照样品仅与一个SARS探针有杂交.结论采用60 mer寡核苷酸基因芯片可以从基因水平实现对SARS冠状病毒多段序列的平行检测,对于提高检出率有一定意义,此外,尚可用于监测在发病过程的各个阶段中病毒基因的活动状况.     

毛蚶传播甲型肝炎的病原学证据——核酸分子杂交和免疫电镜初步结果

本文应用cDNA-RNA分子杂交技术和免疫电镜法,检测上海市1988年初甲型肝炎(甲肝)流行期前的市售毛蚶。将毛蚶鳃和消化腺研碎,经酚-氯仿提取和乙醇沉淀法提取RNA,用~(32)P标记的pHAV(LB) 228甲肝病毒cDNA探针进行杂交。从7份毛蚶样品中检出一份甲肝病毒RNA阳性。另外将毛蚶鳃和消化腺的粗制悬液与甲肝病人恢复期血清孵育后电镜观察,看到形态大小一致的成堆病毒样颗粒,直径约为27mm,与甲肝病人粪便样品中所见病毒样颗粒相似。在7份毛蚶样品中还见到几种不同形态颗粒,大的病毒样颗粒直径可达45mm。     

肺炎支原体PCR产物杂交检测技术的应用

目的:考察PCR产物杂交检测技术在诊断支原体肺炎中的价值。方法:采用肺炎支原体PCR产物分子杂交技术对106例呼吸道感染患儿的鼻咽分泌物进行检测。结果:106份标本中,检出肺炎支原体19例,阳性率17.92%。结论:肺炎支原体核酸分子杂交检测技术为一种快速、简捷,敏感性高、特异性强的检验技术。     

时间分辨荧光核酸杂交分析体系的建立及其初步应用

建立时间分辨荧光核酸杂交分析体系应用于临床乙型肝炎病毒ＤＮＡ检测。采用本室自制螯合剂异硫氰酸苯基－ＥＤＴＡ制备铕离子标记的链霉亲和素,抽提患者血清中的ＤＮＡ,包被于聚苯乙烯微滴板中,与生物素化ＨＢＶ ＤＮＡ杂交后,以Ｅｕ＾３＋－ＳＡ为检测物,应用时间分辨荧光技术检测血清样本中的ＨＢＶ ＤＮＡ。     

地中海贫血基因检测的研究进展

地中海贫血是一组高度异质性的遗传性溶血性疾病。它是由于珠蛋白基因突变,使珠蛋白生物合成受阻、产量不足或缺如所致。我国对地中海贫血的基因诊断和产前诊断始于20世纪80年代初,先后经历了DNA点杂交、限制性内切酶酶谱分析、限制性片段长度多态性(RFLP)连锁分析、寡核苷酸(ASO)探针杂交和PCR体外基因扩增等阶段,特别是PCR技术的不断发展和改进,使地贫基因诊断检测技术日趋成熟。目前,在应用于这种高度异质性遗传病的各种分子诊断方法中,快速简便的基因芯片技术引人注目。     

肺炎支原体核酸分子杂交检测技术的应用评价

目的 通过对呼吸道感染儿童鼻咽分泌物肺炎支原体核酸分子杂交技术的检测与运用，为临床早期诊断肺炎支原体感染，及时治疗，缩短病程。方法 对106例呼吸道感染儿童进行鼻咽分泌物肺炎支原体核酸分子杂交技术检测。结果 106例标本，男47例，女62例，检出肺炎支原体19例，阳性率为17．92％。结论 肺炎支原体核酸分子杂交检测技术为一种快速、简捷、敏感性高，特异性强的检验技术。     

Bio-DNA探针斑点分子杂交检测血清中HBV-DNA的应用

近年来,国内外对乙型肝炎的临床研究已进入到病毒分子生物学水平,开展这方面的工作要建立最灵敏的病毒 DNA 分子检测方法,现今首选的是分子杂交技术。国内由北京医科大学附属人民医院肝病研究所报道了生物素(Bio)DNA 探针斑点分子杂交检测血清中 HBV-DNA 的实验方法和试剂制备,我科于1989年将该技术应用于临床。本文就血清 HBV-DNA 检测及其与 HBV 免疫学标志的相互关系和意义作一比较和分析。     

HIV基因芯片的初步研究

目的建立HIV基因检测芯片的分析技术。方法分离HIV1U26942基因限制性显示片段作探针,应用PixSys 5500点样仪将探针打印在氨基包被的玻片上制作基因芯片。然后与随机引物荧光标记的HIV样品进行杂交,以分析限制性显示基因片段的杂交动力学。经杂交后清洗和干燥,扫描芯片进行检测。结果对基因检测芯片的制作与检测的实验条件进行了初步研究并筛选了12个限制性显示基因探针。结论建立的检测芯片的实验方法可行且较特异。     

电化学DNA生物传感器的指示方法及其临床研究进展

电化学DNA生物传感器是很有前景的核酸分析技术,由于它操作简便快速、信号灵敏,能与DNA生物芯片兼容等优点,受到了广泛的关注,成为当今生物学、医学领域的前沿性课题。它利用杂交原理及电化学标志物为杂交检测信号,既可以用标记法又可以用非标记法进行检测,不受颜色影响,可对痕量样品测定,仪器设备易于集成化和自动化且价格低廉,正朝向便携式商业化方向发展。实现电化学DNA生物传感器的准确检测,实验中所用到的指示方法发挥很大作用。该文着重阐述在DNA传感器工作中所运用的指示方法以及其在临床中的研究进展。     

HIV基因芯片的初步研究

目的：建立HIV基因检测芯片的分析技术，方法：分离HIV 1U26942基因限制性显示片段作探针，应用PixSys 5500点样仪将探针打印在氨基包被的玻片上制作基因芯片，然后与随机引物荧光标记的HIV样品进行杂交，以分析限制性显示基因片段的杂交动力学，经杂交后清洗和干燥，扫描芯片进行检测。结果：对基因检测芯片的制作与检测的实验条件进行了初步研究并筛选了12个限制性显示基因探针。结论：建立的检测芯片的实验方法可行且较特异。     

基因芯片技术研究现状

基因芯片技术是同时将大量的探针分子固定到固相支持物上 ,借助核酸分子杂交的特性对DNA样品的序列信息进行高效的解读和分析。它可用于DNA测序、基因表达图谱的分析及突变检测等很多方面 ,具有广阔的潜在应用价值 ,在未来的生命科学领域中必将发挥重要的作用。     

基于错配杂交化学发光定量检测MGMT基因过甲基化

目的利用错配杂交和化学发光技术,建立一种检测MGMT基因启动子区过甲基化的定量分析方法。方法基因组DNA经过亚硫酸氢钠修饰,所有未甲基化的胞嘧啶都被转变为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶则不发生变化。设计特异的PCR引物(不含CpG位点),同时扩增含有CpG位点甲基化或非甲基化目的 MGMT基因启动子区,用两条分别与甲基化及非甲基化CpG位点互补的寡核苷酸探针与扩增产物杂交,化学发光检测,通过两条探针的杂交信号强度之比确定样品DNA中MGMT甲基化的程度。结果检测混合样品中MGMT基因的甲基化水平与结果完全相符,并可用于肿瘤组织样品的MGMT甲基化定量检测。结论与现有方法相比,本法是一种检测快速、操作简便的MGMT基因甲基化的定量检测方法。