应用分子杂交法直接检测急、慢性肝炎血清乙肝病毒脱氧核糖核酸临床研究

本研究应用P~(32)标记HBV-DNA探针结合血清学标志分析急、慢性肝炎病毒复制与传染性,着重探讨HBs系统与HBV-DNA及临床的关系。资料和方法急肝10例,慢迁肝30例,慢活肝13例,肝硬化26例,重肝8例,肝癌6例。其中25例经病理学诊断。血清学检     

脱氧核糖核酸分子杂交检测乙肝病毒脱氧核糖核酸概述

目前国内外对乙型肝炎病原学的研究已进入到病毒分子生物学的水平。开展这方面的工作将有助于提高乙肝诊断、治疗、研究水平;特别对于判断乙肝表面抗原HBsAg携带者是否有感染性;研究乙肝病毒(HBV)子宫内传播途径的存在;监测应用HBsAg疫     

应用Digoxigenin标记探针定量检测血清HBV DNA

本文报道采用非同位素Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ标记探针定量检测血清ＨＢＶ ＤＮＡ。显色膜经空气干燥，液体石蜡透明处理后，即可置酶联免疫检测仪上测定各斑点的光密度值，液长６３０ｎｍ。结果发现已各含量的ＨＢＶ ＤＮＡ在２－５００ｐｇ／样点范围内与其相应的ＯＤ值有着良好的线性关系。标本测得ＯＤ值后，便可知其含量，该法重复性试验试验结果良好，１１份ＨＢＶ ＤＮＡ阳性的血清经定量测定，其ＨＢＶ ＤＮＡ含量在２０     

应用生物素标记的DNA探针通过菌落杂交试验检测沙门氏菌

本实验应用Bio-11-dUTP标记的两个沙门氏菌属特异性核酸探针(Bio-8-0kb探针和Bio-3.4kb探针)成功地通过菌落杂交试验检测了60个血清型中的100株沙门氏菌。生长在硝酸纤维素滤膜上的菌落,经过溶菌酶,蛋白酶K、RNase及苯酚-氯仿严格的处理程序处理后,可以有效地消除内源性生物素、糖蛋白及生物素类似物等易与链亲和素结合产生非特异性反应的物质,从而获得了特异的杂交结果。此试验有利于使沙门氏菌核酸探针检测技术在基层得到推广应用。     

应用DNA探针直接检测结核分枝杆菌DNA

由于ＤＮＡ探针杂交反应特异性高 ,国内外研究者已采用ＤＮＡ探针杂交技术检测结核分枝杆菌。但该检测方法敏感性较低 ,通常采用与聚合酶链反应 (ＰＣＲ)扩增相结合的方法。但这样增加了实验的费用和交叉污染的机会。我们在对ＤＮＡ探针与ＰＣＲ结合检测临床标本进行系统研究的基础上 ,发现临床标本简化法处理 ,即ＤＮＡ探针化学发光检测 ,ＤＮＡ损失较少 ,还可提高检测的敏感性 ,现将结果报道如下。材料与方法一、菌种来源受试分枝杆菌标准株来自中国药品生物制品检定所。二、标本收集结核患者痰标本 2 31份 ,血液标本 85份 ,脑脊液、胸、…     

生物素标记HBV、HEV DNA探针原位分子杂交技术

目的 探索适合肝穿标本石蜡切片核酸性原位杂交的方法。方法 利用本实验室摸索出一套原位杂交处理程序,以生物素标记的HBV、HEV DNA探针,检测肝穿组织内的HBV、HEV病毒核酸。结果 肝组织内HBV、HEV杂交阳性部位呈紫蓝色。结论 本方法既灵敏、特异、直观、又简便、安全,适合大多数实验室开展。     

结核杆菌DNA探针板杂交方法及其应用研究

我们建立了一种在酶标板上进行ＤＮＡ：ＤＮＡ杂交的方法，该方法与ＥＬＩＳＡ类似，简单、易操作、可半定量，便于临床实验室推广应用。对其杂交条件及影响因素进行了详细的探讨。通过该方法，地高辛标记的结核分支杆菌全染色体ＤＮＡ探针和１２种分支杆菌、７种非分支杆菌个染色体ＤＮＡ的杂交百分率有显著差别，除卡介苗、堪萨斯分支杆菌杂交百分率超过３０％，其余受试菌株均低于１０％。结果表明在酶标板上进行核酸杂交是完全可行的，利用已知细菌ＤＮＡ定量包被板，与未知的带标记的细菌ＤＮＡ杂交，可达到菌种鉴定的目的。     

结核杆菌DNA探针板杂交方法及其应用研究

我们建立了一种在酶标板上进行了ＤＮＡ：ＤＮＡ杂交的方法，该方法与ＥＬＩＳＡ类似，简单，易操作，可半定量，便于临床实验室推广应用。对其杂交条件及影响因素进行了详细的探讨。通过该方法，地高辛标记的结核分支杆菌全染色体ＤＮＡ探针和１２种分地杆菌，７种非分支杆菌全染色ＤＮＡ的杂交百分率有显著差异，除卡介苗，堪萨斯分支杆菌杂交百分率超过３０％，蓁受试菌株均低于１０％。     

PCR荧光定量检测血清结核杆菌DNA在临床的应用

结核病的诊断主要靠临床及X线影像资料,通过痰涂片诊断阳性率低,结核菌培养虽能诊断结核,但培养时间长,不能满足临床需要。PCR技术操作简单,出结果时间短,但目前主要应用在乙肝病毒和性病检测上。作者通过检测结核患者血清中的TB-DNA,或许能为结核病的早期诊断提供帮助。     

定量聚合酶链反应检测血清中HBV DNA及其临床应用

为探讨乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）基因含量与干扰素治疗效果的关系，采用信号引物能量转移定量ＰＣＲ方法，检测了２５例慢性乙型肝炎（慢乙肝）患者干扰素治疗前后的血清ＨＢＶＤＮＡ含量。结量显示，慢乙肝血清ＨＢＶ基因含量范围在１０４至１０１１拷贝／毫升之间；干扰素完全反应组治疗前血清ＨＢＶＤＮＡ含量（１０６．１３±２．４）显著低于（Ｐ＜０．０１）部分反应（１０７．８４±３．３）和无反应组（１０６．６８±４．８），表明血清ＨＢＶＤＮＡ含量与干扰素治疗效果有关，而与ＡＬＴ水平关系不明８显。研究结果提示定量检测ＨＢＶＤＮＡ是预测和评价干扰素治疗效果的重要指标之一。     

血清乙肝病毒DNA煮沸抽提法的建立和应用

目的 建立一种简便的血清HBVDNA抽提方法一煮沸抽提法，并将其应用于巢式PCR扩增。方法 选取16份CHB血清，分别应用直接煮沸法和异硫氰酸胍-酚／氯仿法进行HBVDNA抽提后，进行荧光定量PCR测定；并以煮沸法抽提样品为模板，进行HBVDNAP区部分片段巢式PCR扩增。结果 将上述两种抽提方法的荧光定量PCR结果取对数后进行直线相关分析和配对样本I检验，结果显示：两种方法的定量PCR结果之间存在良好的相关性(r=0．696，P=0．003)，且二者定量PCR结果无差异(P=0．663)。16份标本巢式PCR扩增均为阳性，PCR产物分子量大小与预期值相符。结论 直接煮沸法抽提HBVDNA，简便、快速、效果好，适用于HBV的科研和临床检测工作。     

应用DNA杂交检测牛巴贝虫

体外培养的感染牛巴贝虫或恶性疟原虫的红细胞经溶解、消化后,用酚、酚-氯仿和氯仿抽提DNA。然后,建立质粒库。牛巴贝虫和PBR 322 DNA用Cla Ⅰ和Bam Ⅲ限制性内切酶混合物分别消化,其中质粒     

应用DNA探针检测蚊体内疟原虫的研究

本文用生物素标记的克隆ＤＮＡ探针，以斑点杂交法检测蚊体内恶性疟原虫。将一组蚊虫在还原性缓冲液中研磨后集体检测时，在２５只蚊中有１只感染蚊即可检出，亦可将单个蚊虫直接压在硝酸纤维素膜上进行检测。本技术的高特异性、敏感性以及试剂的稳定性等表明，它可作为一个适用的流行病学调查工具。     

应用DNA探针检测蚊体内疟原虫的研究

本文用生物素标记的克隆ＤＮＡ探针，以斑点杂交法检测蚊体内恶性疟原虫。将一组蚊虫在还原性缓冲液中研磨后集体检测时，在２５只蚊中有１只感染蚊即可检出，亦可将单个蚊虫直接压在硝酸纤维素膜上进行检测。本技术的高特异性，敏感性以及试剂的稳定性等表明，它可作一个适用的流行病学调查工具。     

聚合酶链反应和DNA探针联合检测临床标本中结核杆菌的研究

目的为提高聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测未培养临床标本中结核杆菌的敏感性和特异性，方法，首先通过琼脂糖凝胶电泳检测ＰＣＲ扩增产物，然后用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ法转移到至膜上，与地高辛标记的人型结核杆菌ＤＮＡ探针杂交。结果ＰＣＲ电泳检测的灵敏度为１ｐｇ而ＤＮＡ探针检测将灵敏度提高到１００ｆｇ。２４种受试菌株中，只有结核分支杆菌复合体和蟾分杆菌有２４５ｂｐ扩增带，其中牛型结核分支杆菌与１８８ｂｐ探针不杂交，对２     

血清乙肝病毒大蛋白在HBeAb阳性患者中检测的意义

目的:通过检测慢性乙型肝炎HBeAb阳性患者血清中乙肝病毒大蛋白(HBV-LP)、乙肝病毒DNA(HBV DNA)、前S1抗原(PreSl)、前S2抗原(PreS2)等4项指标,探讨其相关性,从而了解检测HBV-LP对乙型肝炎HBeAb阳性患者病毒复制状况的诊断价值.方法:收集慢性乙型肝炎患者HBeAb阳性血清308例,分别进行HBV-LP、HBV DNA、PreSl及PreS2的检测并进行比较分析.结果:308例HBeAb阳性患者中,HBV-LP和HBVDNA、PreS1、PreS2之间差异均存在显著性意义(x2=17.19、37.12、54.42,P＜0.05),阳性率分别为58.12％,28.90％、41.88％、40.91％,HBV-LP与PreSl、PreS2有82例共同阳性,93例共同阴性.结论:HBV-LP在慢性乙型肝炎患者HBeAb阳性血清中检测率较高,可以作为临床抗病毒治疗监测的一个良好指标.     

应用染色体DNA探针检测蓝氏贾第鞭毛虫

用放射标记的染色体DNA探针检测了蓝氏贾第鞭毛虫滋养体和包囊。该探针按锥虫DNA探针的方法制备。将待检样本(提取的贾第虫DNA,滋养体和包囊)直接点在尼龙滤膜上,再经碱变性处理及紫外线照射使之与滤膜共价结合。为提高杂交率,点样前,在室温下,可将包囊用1.7mol/L硫氰酸胍处理25min。置45℃预杂交2～4 h(预杂交液:50％甲酰胺,6×SSC,0.05mol/L磷酸钠缓冲液pH6.6,5×Denhardt's液,鲑精     

聚合酶链式反应与DNA探针检测临床标本中结核分支杆菌的评价

本文应用ＰＣＲ联合ＤＮＡ探针快速检测临床标本中结核杆菌ＤＮＡ。对临床３０７例标本同时进行ＰＣＲ和Ｓｏｕｅｈｅｒｎ杂交。其中临床确诊为结核病的１０９例，二者的阳性率分别为４９．６％、６０．６％。未确诊结核病的１９８例，二者均为阳性２例、单纯ＰＣＨ阳性３例。结果表明ＤＮＡ探针检测的灵敏性和特异性高于ＰＣＲ。二者联合使用，有助于对疑难电泳图谱的分析和判断，降低假阴性和假阳性率。     

现场应用DNA杂交试验检测恶性疟原虫

本文报道在冈比亚利用从坦桑尼亚恶性疟原虫株中得到的并在pBR322中克隆的21个碱基对重复排列的1.7Kb片段,用~(32)P进行放射性标记的DNA探针,对3组疟区10岁以下儿童检测恶性疟的研究结果。将采集的血标本放入加有肝素的试管内,离心弃上清,取50μl压积红细胞与100μl含1％ SDS和