转染wt-53基因对SHG44细胞恶性表型的影

目的：转染ｗｔ－ｐ５３基因对ＳＨＧ４４细胞恶性表型的影响。方法脂质体介导法,将ｗｔ－ｐ５３基因转导入ＳＨＧ４４人胶质瘤细胞,斑点霜交证实转染成功;观察阳性转染细胞在体外常规培养中生长速率,细胞培增时间;平板集落形成率,结果转染ｗｔ－ｐ５３的细胞生长速度明显减慢,倍增时间延长（Ｐ〈０．０１）;细胞集落形成数明显减少（Ｐ〈０．０１）,结论外源性野生型Ｐ５３基因对ＳＨＧ４４细胞的恶性表型有抑制作用。     

抑癌基因MTS1对卵巢癌细胞增殖的影响

目的：探讨多肿瘤抑制基因１（ＭＴＳ１）对卵巢癌细胞系增殖的影响。方法;绘制细胞生长曲线图,比较卵巢癌细胞系ＨＯ－８９１０（无ｐ１６基因的表达）与８９１０－ｐ１６（转染ｐ１６基因）,８９１０－ｐｃＤＮＡ３（转染空载体ｐｃＤＮＡ３）的生长特性;采用＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入实验比较３种细胞的ＤＮＡ合成情况。结果：８９１０－ｐ１６细胞在转染ｐ１６基因后其增殖特性受到抑制,ＤＮＡ８９１０－ｐ１６细胞在转染ｐ１６基     

去甲二氢愈创木酸对恶性胶质瘤细胞增殖和分化的影响

观察去甲二氢愈创木酸对人恶性胶质瘤细胞系ＳＨＧ－４４细胞增殖和分化的影响。方法细胞培养、免疫组化、光镜和电镜观察及流式细胞仪检测。结论：ＮＤＧＡ对ＳＨＧ－４４细胞有明显的增殖抑制和诱导分化作用,且这种作用有周期特异性。     

人脑胶质瘤细胞系CHG-5的建立及其生物学特性的分析

目的：建立一人脑胶质瘤细胞系并探讨其生物学特性。方法：取胶质瘤新鲜手术标本,经组织块法培养并克隆、建株,采用光镜、电镜、免疫组化、流式细胞术、染色体分析及异种移植瘤实验对细胞株生物学特性进行观察。结果：原位肿瘤、细胞株及移植瘤标本经电镜证实为星形细胞源性,免疫组化呈ＧＦＡＰ、Ｖｉｍ ｅｎｔｉｎ及ＶＥＧＦ阳性,异种移植成瘤率高。与ＳＨＧ－４４细胞比较,ＧＦＡＰ表达强,Ｖｉｍ ｅｎｔｉｎ 表达弱。结论：ＣＨＧ－５为一恶性胶质瘤细胞系,且其生物学特性可能与ＳＨＧ－４４细胞有所不同。该细胞高表达血管生成因子     

抑癌基因MTS1真核表达载体的构建及其在卵巢癌细胞系HO-8910中的表达

目的：构建多肿瘤抑制基因１（ＭＴＳ１）的真核表达载体,将其转入人源性卵巢癌细胞株ＨＯ－８９１０中,并得到稳定表达,为进一步研究其对卵巢癌细胞的影响奠定实验基础．方法：利用ＢａｍＨⅠ与ＥｃｏＲⅠ从ｐＵＣ１９－ｐ１６质粒上切下ＭＴＳ１ｃＤＮＡ片段并克隆到真核表达载体ｐｃＤＮＡ３上,构建成ＭＴＳ１真核表达载体ｐｃＤＮＡ３－ｐ１６;利用脂质体（Ｆｕ－ＧＥＮＥＴＭ６）介导的基因导入法将ｐｃＤＮＡ３－ｐ１６导入人源性卵巢癌细胞株ＨＯ－８９１０中;采用ＡＢＣ法对转染后的不同代数细胞进行免疫细胞化学检测,观察ｐ１６蛋白的表达．结果：成功构建了ＭＴＳ１真核表达载体ｐｃＤＮＡ３－ｐ１６,并进行酶切鉴定;转染后经Ｇ４１８筛选２ｗｋ出现阳性克隆８９１０－ｐ１６,并检测到其中有ｐ１６蛋白的稳定表达．结论：成功构建ＭＴＳ１真核表达载体ｐｃＤＮＡ３－ｐ１６,并可在人源性卵巢癌细胞株ＨＯ－８９１０中得到稳定表达．     

人胰腺腺癌细胞系中p16基因、cyclin D1基因和pR6蛋白的改变

目的：研究胰腺腺癌细胞系ｐＲｂ－ｐ１６细胞调节途径相关因子的异常情况。方法：用ＰＣＲ及单链构象多态性（ＳＳＣＰ）的方法检测５株人胰腺腺癌细胞系ｐ１６基因的缺失和突变;用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹分析ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１基因的扩增;用Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹分析检测ｐＲｂ基因的表达。结果：２株胰腺腺癌细胞系存在ｐ１６基因第１外显子纯合性缺失,未发现第１、２外显子的基因突变;１株细胞系有ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１基因的扩增;ｐＲｂ基因在５株细胞系中均呈高磷酸化的表达。结论：胰腺腺癌细胞系中存在ｐＲｂ－ｐ１６细胞调节途径的异常,主要表现为ｐ１６和ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１基因的改变。     

N—ras和C—myc反义寡核苷酸与p53和p16基因联合抑制人肝 …

目的：研究反义癌基因与抑癌基因联合抑制肝癌细胞生长的效果。方法：利用基因重组方法构建携带ｐ１６基因、ｐ５３基因的融合表达载体（ｐｃＤＮＡ１６￣５３）,利用基因合成仪体外合成Ｎ－ｒａｓ、Ｃ－ｍｙｃ反义寡核苷酸、并将Ｎ－ｒａｓ,Ｃ－ｍｙｃ反义寡核苷酸与ｐｃＤＮＡ１６￣５３融合表达载体转染到人肝癌细胞系ＳＭＭＣ７７２１细胞中,观察肝癌细胞生长情况及软琼脂集落形成能力。结果：联合治疗组肝癌细胞增殖速度最慢     

人骨形成蛋白-2对人脑胶质瘤细胞周期和增殖的影响

目的 探讨人骨形成蛋白（ｒｈＢＭＰ－２）对体内,外人脑胶质瘤ＳＨＧ４４细胞周期和增殖的影响。方法 体外培养人脑胶质瘤细胞,绘制ｒｈＢＭＰ－２作用前、后的ＳＨＧ４４细胞生长曲线,ＭＴＴ法测定ｒｈＢＭＰ－２对ＳＨＧ４４细胞的增殖影响;以流式细胞仪、电镜和琼脂糖凝胶电泳分别检测其细胞周期、超微结构和ＤＮＡ片段改变,观察局部注射ｒｈＢＭＰ－２对裸鼠皮下ＳＨＧ４４胶质瘤增长的影响,结果 ｒｈＢＭＰ－２可抑制     

外源性血管抑素K(1-3)基因在人脑胶质瘤中的表达意义

目的 探讨外源性血和抑素Ｋ（１－３）基因「ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎＫ９１－３）,ＡＫ（１－３）」在人脑胶质瘤中的表达及其作用。方法 应用ＰＣＲ法,使人Ｉｇｋａｐｐａ链分泌信号肽序列Ｓ中装在ＡＫ（１－３）基因上－ＳＡＫ（１－３）;构建ＳＡＫ（１－３）基因的真核表达载体ｐｃＤＮＡ－ＳＡＫ（１－３）。经脂质体法将其转染入ＳＨＧ４４人脑胶质瘤细胞,行Ｇ４１８筛选获得转基因瘤细胞克隆,比较转基因和内皮细胞抑制     

人骨形成蛋白-2诱导人脑胶质瘤细胞凋亡的实验研究

目的 探讨重组人骨形成蛋白－２（ｒｈＢＭＰ－２）对体内、外人脑胶质瘤ＳＨＧ４４细胞生物学特性的影响。方法 绘制ｒｈＢＭＰ－２作用前、后的ＳＨＧ４４细胞生长曲线,ＭＴＴ法测定ｒｈＢＭＰ－２对ＳＨＧ４４细胞增殖的作用;以流式细胞仪、电镜和琼脂糖凝胶电泳分别检测其细胞周期、超微结构和ＤＮＡ片段改变;观察局部注射ｒｈＢＭＰ－２对裸鼠皮下ＳＨＧ４４胶质瘤增长的影响。结果 流式细胞检测显示,ｒｈＢＭＰ－２可抑     

外源性p16基因稳定转染对喉癌细胞周期和增殖的影响

目的：探索p16基因在喉癌细胞内的表达作用及基因治疗方面的应用前景。方法：采用亚克隆技术，构建p16真核表达载体pCDNA3-p16.利用lipofectamine介导，将外源野生型p16基因导入喉癌细胞系Hep-2，筛选阳性克隆，采用打点杂交技术、免疫荧光、免疫组化、图像分析法观察和分析p16基因的表达。同时以空载体质粒pCDNA3为对照，用流式细胞仪分析瘤细胞生长周期、荧光染色检测细胞凋亡。结果：打点杂交、免疫荧光、免疫组化及图像分析法分析证实转染p16基因的Ｈep-2细胞有外源p16基因的表达，外源基因p16在Hep-2细胞系中的表达能抑制Hep-2细胞系的生长。流式细胞仪计数和免疫荧光检测证实p16能诱导喉癌细胞系Hep-2发生凋亡并导致其发生G1期阻滞。结论：导入外源野生型p16基因可抑制喉癌细胞恶性增殖。     

外源性p21WAF1/CIP1基因转染对人胶质瘤细胞生长和细胞周期的影响

目的：探讨外源性p21^WAF1／CIP1基因对胶质瘤细胞生长和细胞周期的影响．方法：采用脂质体介导法将p21^WAF1／CIP1基因质粒转导人人胶质瘤细胞系SHG44细胞，然后用电镜、流式细胞仪等技术对细胞形态、生长及细胞周期进行观察。结果：酶切电泳和斑点杂交显示p21^WAF1／CIP1基因成功的转染至SHG44细胞。转染p21^WAF1／CIP1基因的细胞光镜及电镜下可见凋亡产生；生长速度明显慢于亲代细胞，其倍增时间约是对照细胞的二倍；细胞周期发生明显改变，G1期明显增多，S期明显减少．结论：外源性p21^WAF1／CIP1基因对SHG44细胞的生长和细胞周期有明显的抑制作用，并可诱导细胞凋亡产生。     

外源性p16基因对人前列腺癌的作用

目的:研究外源性p16基因对人前列腺癌PC-3M细胞系生长及致瘤性的抑制作用,探索前列腺癌基因治疗的新途径.方法:利用携带约800 bp的外源性p16 cDNA的真核表达质粒,通过脂质体介导将其导入人前列腺癌PC-3M细胞系中,用G418筛选阳性克隆,经流式细胞仪及细胞生长曲线测定等方法研究p16基因对人前列腺癌细胞周期生长特性的影响,并观察导入外源性p16基因的人前列腺癌细胞PC-3M对裸鼠致瘤能力的影响.结果:野生型p16基因转染到有p16基因缺失的人前列腺癌细胞PC-3M上,细胞周期明显变化,细胞从G1期到S期发生抑制,细胞增殖活性降低.结论:转染外源性p16基因可阻止人前列腺癌细胞由G1期进入S期,并使肿瘤恶性增殖受到抑制.     

逆转录病毒介导PTEN基因抑制人肝癌细胞系的生长

目的 研究外源性PTEN基因对人肝癌细胞系HHCC的细胞周期、增殖及裸鼠致瘤能力的影响，探索肝癌基因治疗新途径。方法 将携有PTEN基因的真核表达载体体外转染HHCC细胞，筛选稳定转染的细胞克隆并扩增培养，以免疫组化方法检测PTEN基因的表达情况，应用流式细胞仪、电子显微镜、生长曲线测定等方法研究PTEN基因对肝癌细胞周期、超微结构、生长速率等特性的影响。结果 稳定转染PTEN基因的HHCC肝癌细胞中PTEN蛋白稳定表达，细胞周期明显改变，细胞从G1期到S期发生抑制，细胞超微结构有退行性改变，细胞增殖活性下降70．6％裸鼠致瘤能力抑制率72．2％。结论 转染外源性PTEN基因可阻止HHCC肝癌细胞由G1期进入S期，并抑制肿瘤细胞增殖。     

P16基因重组质粒的构建及其对人脑胶质瘤细胞的抑制作用

目的：探讨P16基因对人胶质瘤细胞的抑制作用,为胶质瘤致瘤机理的研究和基因治疗提供理论基础。方法：运用分子克隆技术构建重组人P16基因功体（pcDNA3-P16),通过脂质体介导法将P16cDNA转染到存在P16基因纯合缺失的人胶质瘤细胞系SHG－44。结果：PCR证实含P16cDNA质粒DNA已转入SHG－44细胞,Western blot显示有P16蛋白表达。细胞生长曲线显示转杂P16基因的SHG－44细胞（SHG－44－P16）生长明显受到抑制,基抑制率达84．27％。在软琼脂上克隆形成能力下降约6倍。细胞周期分析表明,处在G1期细胞由30．70％提高到66．21％。结论：野生型P16基因导入P16基因功能缺失的肿瘤细胞,能恢复其抑制肿瘤细胞生长的功能。     

PTEN基因诱导人脑胶质瘤SHG-44细胞凋亡及bcl-2表达下调

目的 探讨PTEN基因对人脑胶质瘤SHG－44细胞凋亡及凋亡相关基因bcl-2表达的影响，阐明PTEN基因抑制肿瘤细胞增殖的机制。方法PTEN基因体外转染SHG－44细胞，筛选阳性细胞克隆，以原位杂、免疫组化方法检测PTEN基因的表达情况；采用透射电镜、流式细胞仪和核DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞的凋亡情况；以免疫荧光法检测bcl-2基因的表达。结果 PTEN基因转染的SHG－44细胞有PTEN蛋白的表达。透射电镜下可见转染PTEN基因后细胞核染色质浓缩边集、胞质浓缩、核破裂及凋亡小体形成等典型的凋亡表现；流式细胞仪显示细胞周期从G1期到S期发生抑制，并且在G1期峰前出现一明显的凋亡峰（15．9％）；细胞核DNA琼脂糖凝胶电泳呈现凋亡细胞特有的梯状条带；bcl-2的表达也显著下调。结论 PTEN基因可诱导SHG－44细胞凋亡，并下调bcl-2蛋白的表达，这可能是PTEN基因抑制肿瘤细胞增殖的分子机制之一。     

脑胶质瘤p16基因转染对细胞生长及放射敏感性的影响

目的　探索p16基因在脑胶质瘤发生发展过程中的作用及p16基因与肿瘤细胞放射敏感性间的关系。方法　将外源野生型p16基因导入胶质瘤细胞株U251、C6,筛选阳性克隆。同时以空载体质粒pCDNA3为对照,免疫组化检测p16基因表达,用MTT法测定细胞生长曲线及肿瘤杀伤率。结果　转染p16基因的U251、C6细胞有外源p16基因的整合及表达,克隆形成率减少,生长速度明显减慢,对辐射的敏感性增强。结论　导入外源野生型p16基因可抑制胶质瘤细胞恶性增殖,提高胶质瘤细胞对辐射的敏感性。     

Inhibitory effects and mechanism of rhBMP-2 on the proliferation of SHG44 human glioma cells

Bone morphogenetic protein (BMP) has been denominated by its artivity of inducing bone formation. Re-cently, it was found to be a multifunctional factor andhave a key role in the regulation of elnbmpis andembryo deVelopment, hssue and cell ~ation andPndiferation. BMP could also inhibit many kinds of tumorcell growth and induce their apoptOSisL',']. the of BMPgenes were successop cloned and ~ssed in aam,such as BMP-2, BMP4 and BMP-7. The bone ~C Pmtein-2 is a htllnan P~ exPansed in vi…