聚合酶链反应检测血液病患者合并丙型肝炎病毒感染

聚合酶链反应检测血液病患者合并丙型肝炎病毒感染杨桂玲，陈文 ，杨碧云，曹瑞生，文艺丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染是输血后非甲非乙型肝炎的主要原因。在免疫抑制群体如恶性血液病，尤其是化疗或骨髓移植治疗后，以及再生障碍性贫血，常需输血治疗，大大增加了感染的机...     

原位反转录PCR检测慢性丙型肝炎患者外周血单个核细胞中HCV

目的研究慢性丙型肝炎患者外周血单个核细胞（ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｂｌｏｏｄｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒｃｅｌ，ＰＢＭＣ）中丙型肝炎病毒的定位分布及复制。方法直接原位反转录－ＰＣＲ（标记引物）对２０例慢性丙型肝炎患者的ＰＢＭＣ内丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）的分布、定位及存在形式进行研究。结果１６例患者外周血单个核细胞的胞浆内发现ＨＣＶＲＮＡ阳性信号，并有一例患者的胞浆内发现ＨＣＶＲＮＡ负链信号。结论ＨＣＶ可感染ＰＢＭＣ并在其中复制。原位ＲＴ－ＰＣＲ为进一步研究ＨＣＶ进入人体内的分布、潜伏、复制状况以及丙型肝炎治疗、药物研究奠定了基础。     

慢性丙型肝炎患者外周血单个核细胞中负链HCV RNA的检测及意义

19例临床诊断慢性丙型肝炎患者,检测其外周血单个核细胞中丙型肝炎病毒(HCV)RNA的存在及复制状态。所选检测对象血清标本抗-HCV及HCV RNA均为阳性。采用逆转录-套式PCR法检测其外周血单个核细胞中HCV正、负链RNA,结果19例患者外周血单个核细胞中14例HCV正链RNA阳性;6例HCV负链RNA阳性。实验结果证实部分慢性丙型肝炎患者外周血单个核细胞中存在HCV复制,表明肝细胞并非为HCV感染与复制的唯一场所。HCV感染慢性化与其外周血单个核细胞中存在HCV复制可能有一定关系。     

丙型肝炎病毒感染与原发性肝癌关系的研究

本文应用ＰＣＲ调查了ＨＣＶ感染与原发性肝癌发生的相关性，发现：①约三分之一肝癌的发生可能与ＨＣＶ感染有关；②约四分之三ＨＢＶ五项免疫标志全阴性肝癌的发生可能与ＨＣＶ或（和）隐匿性ＨＢＶ感染有关；③肝癌组织中确有ＨＣＶ的复制；④蜡块组织可获得与血清大致相似的定性ＨＣＶＰＣＲ结果；③Ⅱ型ＨＣＶ在ＨＣＶ相关性肝癌的发生中可能起着主导作用。     

隐匿性丙型肝炎病毒感染与慢性丙型肝炎的比较分析

目的:比较隐匿性丙型肝炎病毒(HCV)感染者与慢性丙型肝炎(CHC)患者的特点.方法:选择51例隐匿性HCV感染者和52例未经治疗的CHC患者,两组患者的年龄、性别、肝功能异常的持续时间相匹配,分别比较两组患者的肝功能指标和外周血单个核细胞(PBMCs)中的丙型肝炎病毒核酸(HCV RNA)含量.结果:CHC患者的天门冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)、甲胎蛋白(AFP)显著高于隐匿性HCV感染者(P<0.01),而胆固醇(Ch)和甘油三酯(TG)则显著低于后者(P<0.01),γ谷氨酰转肽酶(GGT)在两组感染者中差异无显著性意义(P>0.05);CHC患者的PBMCs中HCV RNA平均含量显著高于隐匿性HCV感染者(P<0.01).结论:隐匿性HCV感染者病情严重程度不如CHC患者,这可能与其PBMCs中的病毒载量高低相关.     

丙型肝炎病毒感染与各类肝病关系的探讨

为了解肝病患者丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）的感染状况，用ＲＴＰＣＲ及ＥＬＩＳＡ法测定肝炎病毒标志。有受血史者，急性丙肝（６０５３％）高于急性乙肝（１０５３％，Ｐ＜００１）。无受血史者，急性肝炎以甲、乙型肝炎为主（４１６７％、３０５６％），高于丙肝（４１７％，Ｐ＜００１）。有受血史者的急、慢性丙肝及无症状ＨＣＶ感染者（６０５３％、２０３４％，２９１７％），高于无受血史者的４２％、８７４％，３３３％（Ｐ＜００１～００５）。慢性及重型肝炎、肝硬化、肝癌及无症状感染者乙肝病毒（ＨＢＶ）感染均高于ＨＣＶ感染（Ｐ＜００１）。提示ＨＣＶ感染多与血制品有关；慢性及重型肝炎、肝硬化及肝癌主要由ＨＢＶ所致。     

肾移植患者丙型肝炎病毒感染的临床研究

目的：了解肾移植患者丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）的感染情况及ＨＣＶ感染后的临床影响。 方法：对６７例肾移植患者进行至少１年的随访，用第二代ＥＬＩＳＡ法和Ｎｅｓｔ－ＰＣＲ测定血清中抗ＨＣＶ和ＨＣＶ ＲＮＡ。 结果：抗ＨＣＶ的阳性率５０．７％（３４例），ＨＣＶ ＲＮＡ的阳性率为４７．８％（３２例）。ＨＣＶ ＲＮＡ阳性组术前血透时间和输血量及丙氨酸转移酶（ＡＬＴ）水平明显高于ＨＣＶ ＲＮＡ阴性组，ＨＣＶ ＲＮ     

恶性肿瘤患者丙型肝炎病毒感染的分析

自1989年国外建立了血清丙型肝炎病毒抗体(抗HCV)检测方法以来,文献中报道大部分慢性肝炎、肝硬化及肝癌患者血清中可检出抗HCV。但对常见恶性肿瘤中丙型肝炎病毒(HCV)感染的情况报道甚少。本文对401例确诊为恶性肿瘤的住院患者进行了抗HCV检测,希图了解HCV感染与常见恶性肿瘤的关系,并对试验结果及实验过程中的有关问题进行分析。 材料与方法 一、检测对象 1991年12月以来确诊为恶性肿瘤的住院患者401例,其中男255例,女146例,年龄最小12岁,最大70岁,平均年龄34.14±10.32。401例患者中肝癌67例,乳腺癌59例,肺癌54例,结肠癌46例,恶性淋巴瘤32例,宫颈癌32例,胃癌     

肝炎患者中庚型肝炎病毒感染的PCR检测

应用逆转录套式ＰＣＲ法检测了４８例丙型肝炎，２６例乙型肝炎及１２例甲乙丙丁戊型肝炎病毒感染标志均阴性的肝炎患者血清中的庚型肝炎病毒ＲＮＡ。结果表明，我国肝炎患者存在ＨＧＶ感染；ＨＧＶ可单独感染或与其他肝炎病毒混合感染。丙型肝炎患者中，ＨＧＶ ＲＮＡ的检出率为１０．４％，乙型肝炎患者中的检出率为３．８％，而在甲乙丙丁戊型肝炎标志均阴性的肝炎患者中的检出率为３３．３％，ＨＧＶ与其他肝炎病毒的混合感染可     

聚合酶链反应技术对丙型肝炎病毒感染献血员的筛查

目的 对国内献血者丙型肝炎病毒“窗口期”感染的PCR筛查技术应用的调查。方法 卫生部临床检验中心组织全国12家血站，按统一标准采集上万份样品，分为两组，分别为A组（7173份）和B组（7477份），使用试剂按统一标准进行了本项调查研究，其中基因拷贝数≥10^3拷贝数/ml判为阳性。结果 A组中阳性样本数为21，百分比为0.29%，B组中未检测到阳性样本数。结论 血站有必要采用PCR技术筛查丙型肝炎病毒“窗口期”感染的献血者。但需规范采血术方法和评价适合血站筛查用的试剂。     

丙型肝炎患者血清和外周血单个核细胞中HCV RNA检测及意义

目的 了解丙肝患者血清和外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）中ＨＣＶＲＮＡ存在情况及有其临床意义，方法 应用套式ＰＣＲ检测４６例急性丙型肝炎（丙型肝炎以下简称丙肝）和４２例慢性丙型肝炎患者血清和ＰＢＭＣ中ＨＣＶＲＮＡ。结果 慢性丙型肝炎患者ＰＢＭＣ中ＨＣＶＲＮＡ检出率显著高于急性丙型患者（Ｐ〈０．００１），急，慢性丙型肝患者血清和慢性丙肝患者ＰＢＭＣ中ＨＣＶ ＲＮＡ检出率显著高于ＡＬＴ正常的抗－ＨＣＶ阳性     

慢性丙型肝炎患者血清HCVRNA定量分析：竞争性聚合酶链反应

目的：探讨ＨＣＶ复制水平与肝病进展的关系。方法：用竞争性逆转录聚合酶链反应（ＣＲＴ－ＰＣＲ）定量检测２７例慢性丙肝患者（ＣＨＣ）血清ＨＣＶＲＮＡ。结果：ＣＨＣ患者血清ＨＣＶＲＮＡ水平变化范围１０２～１０６ｃｏｐｉｅｓ／５０ｕｌｓｅｒｕｍ。１３例慢性迁延性肝炎（ＣＰＨ）患者血清ＨＣＶＲＮＡ平均水平（５．０６８±１．０４，Ｌｏｇ１０ｃｏｐｉｅｓ／５０μｌｓｅｒｕｍ）明显低于１０例慢性活动性肝炎患者（ＣＡＨ）（５．７９±０．２５）和４例肝硬化（Ｃｉｒ）患者（５．８３±０．７５），Ｐ值均＜０．０５。血清ＨＣＶＲＮＡ水平同ＡＬＴ水平间呈正相关（ｒ＝０．４９９７，Ｐ值＜０．０５）。结论：表明丙肝病毒感染后病毒血症水平低，ＨＣＶ复制水平与肝损伤相关，在慢性感染中ＨＣＶ仍活跃复制，并与肝病进展相关。     

HCV感染的慢性肝病患者肝组织HCV RNA和HCV C33c检测

为探讨丙型肝炎病毒在肝组织分布和致病机理，用地高辛标记的 ＨＣＶ５＇－ＮＣ区ｃＤＮＡ探针和抗ＨＣＶ Ｃ３３ｃ单克隆抗体对２４例ＨＣＶ感染的慢性肝病患者肝组织进行了原位核酸杂交和免疫组化研究，发现ＨＣＶ ＲＮＡ和Ｃ３３ ｃ阳性信号主要定位于肝细胞浆，ＨＣＶ感染的阳性肝细胞呈散在、局灶和弥漫三种形式分布，与丙氨酸转氨酶水平、肝组织学类型没有明显联系：ＨＣＶ感染的细胞周围有较多的淋巴细胞和单核细胞浸润。     

“急性非甲非乙型”肝炎的病原学分析

对抗－ＨＡＶ－ＩｇＭ、ＨＢｓＡｇ和抗－ＨＢｃ－ＩｇＭ均（一）、临床诊断为急性非甲非乙肝炎７２例进一步病原学鉴定。以聚合酶链反应检出乙型和丙型肝炎病毒；血清学包括酶免疫法检测抗－ＨＣＶ、抗－ＨＤＶ－ＩｇＭ、抗ＨＥｖ－ＩｇＧ（Ｇｅｎｅｌａｂｓ）、抗－ＣＭＶ－ＩｇＭ和抗－ＥＢＶ－ＩｇＭ。结果诊断丙型肝炎１７例（２３．６％），戊型肝炎１４例（１９．５％），最多的竟是慢性无症状ＨＢＶ感染的急性活动（３４例，４７．２％），其中合并ＨＣＶ例、ＨＤＶｌ例、ＨＥＶ１０例和自发性活动１７例。因而，我国“急性非甲非乙”肝炎的病原学可能相当复杂。     

慢性乙型肝炎患者血清及肝组织中乙型肝炎病毒核心基因的研究

３６例肝穿刺诊断为慢性乙型肝炎患者的肝组织及血清，用ＨＢＶ全基因核酸杂交法及聚合酶链反应（ＰＣＲ）法扩增了病毒的ＰｒｅＣ／Ｃ区基因片段。发现ＰＣＲ法扩增后再经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ吸印转移及核酸杂交（ＰＣＲ－ＳＢＨ）可显著提高检出ＨＢＶ基因的敏感性。对５例无任何血清ＨＢＶ标记者证实在其肝内存在ＨＢＶ基因。用ＡｖａⅡ，ｓａｕ３ＡＩ，ＸｍｎＩ，ＢｓｔＮＩ及ＴａｑＩ酶切图谱分析上述病例的ｃ基因，与ｐＡＤＲ－１Ｃ基因比较，有４例（５份标本）有Ｓａｕ３ＡＩ的异常酶切位点，提示ＨＢＶ不仅ＰｒｅＣ区存在变异株，Ｃ基因中亦可有变异。     

有偿供血员,丙型肝炎及肝癌患者HCV基因分型

为了解本地区ＨＣＶ基因亚型的分布情况，作者对采自６６例有偿供血员、８７例输血后丙型肝炎、１５例散发性丙型肝炎和９例原发性肝癌患者的共１７７份ＨＣＶＲＮＡ阳性的血清标本，进行了ＨＣＶ基因亚型分析。结果发现除２例输血后丙肝患者系ＨＣＶ－Ⅲ感染外，其余被检者均为ＨＣＶ－Ⅱ感染。此结果表明ＨＣＶ－Ⅱ是本地区的ＨＣＶ伏势株     

肝细胞癌组织中HCV复制中间体的研究

本文报道在逆转录反应时仅加入与负链（复制中间体）ＨＣＶＲＮＡ互补的有义外引物，待将逆转录酶变性灭活后，再加入反义外引物，然后进行两轮聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增。用这种逆转录反应和套式ＰＣＲ方法，检测了ＨＣＣ组织和对照血清中负链ＨＣＶＲＮＡ的存在状况。结果负链ＨＣＶＲＮＡ在１０例（其中３例为已测血清总ＨＣＶＲＮＡ阳性，余７例为随机选择）ＨＣＣ组织中检出５例，而在５例（其中３例与组织配对）总ＨＣＶＲＮＡ的ＨＣＣ阳性病人血清则均阴性。表明ＨＣＣ组织中确有ＨＣＶ复制，从而进一步提示ＨＣＶ感染与我国ＨＣＣ的发生密切相关。     

庚型肝炎病毒感染对慢性丙型肝炎的影响

研究慢性丙型肝炎患者中庚型肝炎病毒(UGV)的感染及其对丙型肝炎临床表现、肝功能和对干扰素应答的影响。以HGV的5′非编码区引物建立了检测HGV RNA的RT-PCR法,检测51例慢性丙型肝炎病人中的HGV感染。结果51例病人中,11例为HGV RNA阳性。慢性丙型肝炎病人的临床表现与是否感染HGV不相关,肝功能试验结果也无统计学差异。29例接受干扰素治疗的病人中,有6例病人(20.7％)合并HGV感染。HGV阳性组6人中1例完全应答,HGV阴性组23人中,有3例完全应答,在这有限的病例中,两组应答率没有统计学差异。提示在我国丙型肝炎病人中,混合HGV较为常见,HGV感染对丙型肝炎的临床表现无明显影响,也不影响其对干扰素的应答。     

34例庚型肝炎病毒感染的临床特点

庚型肝炎病毒(HGV)是最近证实的一种新型肝炎病毒。我们以血清中检测到HGV RNA作为诊断HGV感染的指标,以了解HGV感染的临床特征。本文对34例HGV感染者进行临床分析,结果显示:在各类肝病人群中HGV总感染率为8.6％。在34例感染者中,有32例与其它类型肝炎病毒重叠感染。而且在各类急慢性肝病人群中均可有不同程度的HGV感染。HGV感染(含重叠感染)的临床表现各异,大多数症状较轻、恢复较快,但部分可导致肝病慢性化。HGV感染与肝硬变关系值得进一步探讨。