慢性乙型肝炎患者乙型肝炎病毒前C区基因突变与干扰素的关系

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术扩增乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ前Ｃ和部分Ｃ区基因，快速检测ＨＢＶ前Ｃ终止密码突变方法，对慢性乙型肝炎患者干扰素治疗与ＨＢＶ前Ｃ突变关系作了初步研究。６例干扰素治疗后４例ＨＢＶＤＮＡ转阴，２例阳性者均检出突变株。１１例非干扰素治疗者中，检出突变株３例。１例干扰素治疗１个月后ＨＢＶｅ抗累（ＨＢｅＡｇ）转阴，优势病毒株已由突变株与野生株共存状态替代原有野生株，提示干扰素治疗后ＨＢｅＡｇ转阴并不意味着ＨＢＶ被清除，而有潜在ＨＢＶ前Ｃ突变的可能。     

国产基因工程干扰素α1治疗慢性乙型肝炎的临床研究

２２５例慢性乙型肝炎分三组治疗，Ａ和Ｂ组７４例配对随机用干扰素α１及安慰剂双盲对照观察，Ｃ组１５１例为干扰素α１４０微克连用三个月，ＨＢｅＡｇ、ＨＢＶ－ＤＮＡ、ＨＢｅＡｇ和ＨＢＶ－ＤＮＡ双转阴率及抗ＨＢｅ转阳率分别为４０．５％、５７．１％、３９．３％及２９．７％，与对照组差异有非常显著性（Ｐ＜０．０１）。扩大治疗组结果与Ａ组相似，均明显优于对照组。治疗组随访半年和一年ＨＢｅＡｇ及ＨＢＶ－ＤＮＡ转阴率与治疗结束时相似，表明有较持久的效果。     

52例慢性乙型肝炎 HBV 前C区基因突变研究

本文采用多聚酶链反应－－单链构象多态分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）银染技术检测了５２例ＨＢＶＤＮＡ阳性慢性乙型肝炎口才的ＨＢＶ前Ｃ区基因突变。结果有前Ｃ区突变株感染３２例，突变株检出率为６１．５％；突变株的检出以慢性下肝炎最高，其次是慢性乙肝重度、中度口才慢性乙肝轻度患者量低；抗－ＨＢｅ阳性２１前Ｃ区突变株检出率高于ＨＢｅＡｇ阳性患者。表明ＨＢＶ前Ｃ区突变与病情轻重及ｅ系统血清标志有关。     

抗HBe(+)慢性乙型肝炎的重组干扰素治疗应答及其影响因素

目的探讨抗ＨＢｅ／ＨＢＶＤＮＡ（＋）慢性乙型肝炎（ＣＨＢ）的干扰素治疗效果及其影响因素。方法对１５例ＨＢｅ（＋）和２５例ＨＢｅＡｇ（＋）ＣＨＢ患者用重组干扰素α－１ｂ治疗，治疗前、后和随访半年后检测ＨＢＶ及前Ｃ区Ａ１８９６终止变异。结果抗ＨＢｅ（＋）慢性乙型肝炎干扰素治疗近期应答率为７３％（１１／１５），与ＨＢｅＡｇ（＋）组比较差异无显著性（Ｐ＞００５）；治疗前抗ＨＢｅ（＋）组ＨＢＶＤＮＡ含量明显低于ＨＢｅＡｇ（＋）组（Ｐ＜０００５）；但前Ｃ区Ａ１８９６变异检出率４７％（７／１５）显著高于ＨＢｅＡｇ（＋）组的１６％（４／２５），Ｐ＜００５；４例复发者都是Ａ１８９６变异感染。结论血清ＨＢＶＤＮＡ水平可能是影响其应答的重要因素，前Ｃ区Ａ１８９６变异并不影响干扰素的近期应答率，但可能是其复发的一个重要因素。     

慢性乙型肝炎干扰素疗法的适应证选择

目前用于慢性乙型肝炎抗病毒治疗的干扰素主要是ＩＦＮ α，其适应证基本只有一个，即ＨＢＶ复制活跃的活动性慢性乙型肝炎。 慢性乙型肝炎有经典型（ｃｌａｓｓｉｃａｌ）和异型（ａｔｙｐｉｃａｌ）之分。经典型的血清病毒学标志特征是血清Ｈ ＢｓＡ ｇ ＋、ＨＢｅＡｇ＋和抗－ＨＢｃ＋、血清ＨＢＶＤＮＡ十，由野生株ＨＢＶ感染所致，也称ＨＢｅＡｇ阳性慢性乙型肝炎；异型的血清病毒学标志特征是血清ＨＢＳＡｇ＋、抗ＨＢｅ＋和抗ＨＢｃ＋，血清ＨＢＶ ＤＮＡ＋，主要由前Ｃ基因变异株或Ｘ区Ｃ基因启动子变异株ＨＢＶ感染所致，也称抗－…     

HBV前C区突变株对干扰素治疗的应答反应

目的评价干扰素对ＨＢＶ前Ｃ区突变株的应答反应。方法对１０４例慢性乙型肝炎患者，应用克隆测序和快速检测ＨＢＶ前Ｃ区终止密码突变的方法，共检出２１例突变株，其中１６例曾应用干扰素治疗；野生株２１／２５例曾应用干扰素治疗。结果１６例ＨＢＶ前Ｃ区突变株对干扰素治疗有应答者６例；野生株２１例，对干扰素有应答者９例，二组相比差异无显著性。结论ＨＢＶ前Ｃ区突变株及野生株对干扰素均有部分应答，应答率分别为３７．５％和４２．９％，二组相比差异无显著性     

乙型肝炎病毒前C区基因变异和外周血单个核细胞增殖反应

一、资料与方法１．对象：选取１９９６－１９９７年宁波市传染病医院８４例住院乙型肝炎患者,按１９９５年（北京）全国肝炎诊断标准,急性肝炎６例,慢性肝炎轻度２２例,中度ＺＩ例,重度２２例,慢性重型肝炎１３例。ＨＢｓＡｇ和ＨＢＶＤＮＡ均阳性,其中６９例ＨＢｅＡｇ阳性,１１例抗一ＨＢｅ阳性,对照组１１例为健康献血员,ＨＢＶ血清学标志物均阴性。２．ＨＢＶ前Ｃ区基因１８９６位点突变的检测：用错配ＰＣＲ限制片段长度多态性分析［１］。ｐＣＲ产物按酶切后ＤＮＡ条带不同,分为野生株,野生株优势变异,变异株优势变异和…     

乙型肝炎病毒前C区突变株感染的临床和病理

探讨乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）前Ｃ区突变株（１８９６位点Ｇ→Ａ点突变）慢性感染患者的临床特点、病理特征及与干扰素疗效的关系。方法采用突变特异性ＰＣＲ检测１０８份慢性ＨＢＶ感染患者血清和／或肝组织中ＨＢＶ前Ｃ区突变株，按Ｋｎｏｄｅｌｌ方法评价肝组织病理损伤。结累ＨＢＶ前Ｃ区突变株在不同ｅ系统均存在，但ＨＢｅＡｂ（＋）组中单纯突变株感染或突变株感染占优势的混台感染（１４．２９％，４６．２３％）显著地高于ＨＢｅＡｇ（＋）组（０％，６．４５％）；突变株感染与肝脏疾病严重程度相关，慢性肝炎重度组检出率（１３．６４％，４０．９１％）极显著地高于慢性无症状携带者（０％，１０．２６％）。５例前Ｃ区突变株感染者应用干扰素治疗可产生应答和无应答２种结果。临床症状较轻的ＨＢＶ前Ｃ区突变株感染者的肝脏病理损伤程度无明显加重。结论前Ｃ区突变株感染普遍存在，但更常见于ＨＢｅＡｂ阳性者。【关键词】##4乙型肝炎病毒;;突变;;病理学;;治疗     

中老年乙型肝炎病毒DNA的动态变化

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）和酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）动态检测了中老年乙型肝炎病人不同时期的血清标志。结果表明，ＨＢｅＡｇ阳性的血清其ＰＣＲ检测ＨＢＶＤＮＡ均阳性，两者呈平行关系，１～４ｗ后有２０％病人血清ＨＢＶＤＮＡ转阴，同时伴有部分病人ＨＢｅＡｇ消失或ＨＢｅＡｂ出现，其他ＨＢＶ血清学标志物阳性的病人血清ＨＢＶＤＮＡ阳性率明显低于ＨＢｅＡｇ阳性血清，且ＨＢＶＤＮＡ暂转阴率高于ＨＢｅＡｇ阳性血清，ＨＢＶＤＮＡ转阴的时间也短（１～４ｗ）。动态检测ＨＢＶＤＮＡ可以动态观察ＨＢＶＤＡＮ的复制，对指导临床治疗具有很大的意义。     

α-干扰素治疗乙型肝炎病毒前C/C基因突变株感染的疗效

血清ＨＢｅＡｇ阴性、抗ＨＢｅ和ＨＢＶＤＮＡ阳性的肝炎被认为与ＨＢＶ前Ｃ／Ｃ（ｐｒｅＣ／Ｃ）基因突变株感染有关。患者多表现为重型或持续反复发作型肝炎,病程进展快,对α－干扰素（α－ＩＦＮ）治疗反应差。系统复习文献后提示,α－ＩＦＮ治疗ＨＢＶｐｒｅＣ／Ｃ...     

乙肝病毒基因前C区突变株感染的检测及临床意义

应用突变特异性ＰＣＲ（ｍｕｔａｔｉｏｎｓｐｅｃｉｆｉｃＰＣＲ简称ｍｓＰＣＲ）技术对１１７例１４２份临床各型乙肝病毒（ＨＢＶ）感染者的血清标本进行了ＨＢＶ基因前ｃ区１８９６位已知Ｇ→Ａ点突变株的检测，发现２４例３０份标本有突变株感染，检出率为２０．５１％。其中重肝组３９．１３％（９／２３），慢活肝组１９．６４％（１１／５６），慢迁肝组１３．３３％（２／１５），无症状携带者组８．６９％（２／２３）。分析结果发现ＨＢＶ基因前Ｃ区突变株感染与重肝的发生、发展有一定的关系，对干扰素的疗效似有影响，与年龄，性别差异关系不大。     

丙型肝炎患者外周血单核细胞中丙型肝炎病毒复制的研究

９例临床诊断为丙型肝炎患者，研究其外周血单核细胞中ＨＣＶＲＮＡ的存在及复制。９例患者血清标本抗－ＨＣＶ及ＨＣＶＲＮＡ均为阳性，采用高敏感的逆转录一套式ＰＣＲ法测定其外周血单核细胞中ＨＣＶ正、负链ＲＮＡ，结果９例患者外周血单核细胞中７例ＨＣＶ正链ＲＮＡ阳性，３例ＨＣＶ负链ＲＮＡ阳性，证实部分丙肝患者外周血单核细胞中存在ＨＣＶ的复制，表明肝细胞并非为ＨＣＶ感染与复制的唯一场所。     

乙型肝炎表面抗原“免疫逃避”突变体在哺乳动物细胞中的表达

利用乙型肝炎病毒ＤＮＡ开放框架上的ＢａｍＨＩ和ＨｐａＩ位点，酶切消化质粒载体ＰＥｃｏｂ６（含双拷贝ＨＢＶＤＮＡ），得到约９００ｂｐ的ＨＢＶ－Ｓ基因片断。将其插入到噬菌粒载体ＰＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔｓｋ＋的ＳｍａＩ位点上。然后通过体外寡核苷酸介导的人工定点突变获得一系列（共１２种）Ｓ基因“免疫逃避”突变型。再通过ＥＢ病毒真核表达载体ｐＭＥＰ４上的ＢａｍＨＩ和Ｋｐｎｌ位点将噬菌粒ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｓｋ＋上的Ｓ基因突变型片断定向克隆到ＰＭＥＰ４上，从而构建了含乙肝Ｓ基因突变型的重组质粒ｐＭＥＰ４ＨＢＳＭ。用其转染人肝癌传代细胞系ＨｅｐＧ２，经潮霉素选择，三周后获得抗性细胞克隆。经用抗ＨＢｓ单克隆抗体（含针对ＨＢｓＡｇ“ａ”抗原决定簇）检测除含变异体１４５（即１４５位上甘氨酸为精氨酸替代）外其余抗变异体ＨＢｓＡｇ均为阳性。经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ证实变异体１４５，在分子量约为２３ＫＤ处有一特异ＨＢｓＡｇ蛋白带。     

原发性肝癌患者血清HBV一DNA及前C／C区变异的检测

对３１例原发性肝癌患者血清进行巢式聚合酶链反应扩增ＨＢＶ一ＤＮＡ，并对限阳性者之Ｃ基因前Ｃ区终２８、Ｃ区Ｌ９７位点进行限制性酶切片段长度多态性分析，同时与无症状ＨＢＶ携带者９例、慢性活动性乙型肝炎１４例对照。结果显示：３１例肝癌患者中１１例ＨＢＶ一ＤＮＡ阳性，其中终２８变异２例，Ｌ９７变异５例。研究认为一部分肝癌患者不仅存在病毒复制，且与对照组一样有变异毒株存在。     

六种八肽胆囊收缩素（CCK－8）类似物对豚鼠胆囊收缩活性的测定

测定了六种ＣＣＫ－８类似物对豚鼠胆囊肌条的收缩活性，在Ｅ０５０值的基础上与ＣＣＫ－８标准品比较。结果显示，其活性顺序为：类似物（２）＞类似物（１）＝ＣＣＫ一８标准品＝类似物（３）＞类似物（４），类似物（５）及类似物（６）在剂量高达１０－７ｍｏｌ／Ｌ时仍未显示其活性。实验表明：脱去Ｎ－端氨基的ＣＣＫ一８类似物即Ｓｕｃ－ＣＣＫ－７［类似物（２）］较ＣＣＫ一８活性明显增加，有临床价值，在类似物（３）中，甲硫氨酸被正亮氨酸取代，活性可完全保留，类似物（４）因ＧＬＹ２９被Ｄ－ＡＬａ取代，活性显著降低，但仍可表现其激动剂性质，当ＧＬＹ２９被β－ＡＬａ取代时，即类似物（５）失去了收缩胆囊的活性。     

胆道压力对重症急性胆管炎心血管活动的影响及其机理探讨

本文用日本长耳白兔复制成重症急性胆管炎（ＡＣＳＴ）模型，利用“盲囊”加压装置形成不同胆道压力（８～２０ｋＰａ），动态观察其心血管活动变化，结果发现：１２０分钟内，右内脏大神经放电频率增加（Ｐ＜０．０１），同时血压和心输出量均明显下降（Ｐ＜０．０１），且后二者呈明显相关（Ｐ＜０．０１），其中收缩压下降幅度比舒张压更明显。２０ｋＰａ（１５０ｍｍＨｇ）加压１２０分钟内，血内毒素水平无明显升高（Ｐ＞０．０５），而平均动脉压（ＭＡＰ）下降幅度超过４ｋＰａ（３０ｍｍＨｇ）；立行胆道减压后，ＭＡＰ和心输出量逐渐恢复，其中３只（３／１２）的血压未能恢复，于实验中死亡。作者认为：胆道压力急剧升高是引起ＡＣＳＴ血压下降的重要因素，而心输出量下降是其直接原因，甚至可以造成不可逆性休克。此种影响与内脏神经活动导致交感血管中枢活动受抑制有关。     

Age-dependent changes in the mitochondrial F0F1 ATP synthase

The age dependence of ATP hydrolase activity and oligomycin sensitive passive proton conduction in sonicated submitochondrial particles of rat brain and rat heart has been investigated. The results show an increase of Vmax of the ATP hydrolase activity and decrease of oligomycin sensitive passive proton conduction with increase of the age of rats from 3 to 6 months. Decrease of ATPase activity and increase of oligomycin sensitive proton conduction occur with further aging to 24 months. Immunoblot analysis shows that both the F(1) and F(0) contents of mitochondria vary with the age of rats, the former exhibiting relatively larger changes.     

冬虫夏草多糖脂质体对肝炎后肝硬化患者T细胞免疫调节作用的研究

应用脂质体包埋冬虫夏草多糖口服３个月治疗肝炎后肝硬化２８例，在治疗前、后第２、３个月分别检测外周血Ｔ细胞免疫功能指标和肝功能。结果：①ＰＨＣ患者外周血ＣＤ４细胞比例，ＣＤ４／ＣＤ８比值、自然杀伤细胞活性及经ＰＨＡ－Ｐ诱导的外周血淋巴细胞、膜白细胞介素２受体（ＭＩＬ－２Ｒ）的表达，白细胞介素２（ＩＬ－２）和＋γ－干扰素（ＴＦＮ－γ）的生成均显著低于正常对照（Ｐ值分别＜０．００１，＜０．０１，＜０．０     

枯否细胞在急性实验性肝功能衰竭发生中的作用

实验表明，单纯大剂量四氮化碳可严重损伤肝实质细胞，由于对枯否细胞的功能无明显影响，故未形成严重的内毒素血症。在四氯化碳损伤肝脏的同时，用二氧化硅抑制枯否细胞的功能则形成严重的内毒素血症，动物发生急性肝功能衰竭（肝昏迷与功能性肾衰竭）。从而进步证实了我们提出的肝功能衰竭发病机制——肠源性内毒素血症这一假说。