黄芪水蛭及其不同比例配方含药血清对大鼠系膜细胞增殖和分泌Ⅳ型胶原影响的比较研究

目的:探讨黄芪(RA)、水蛭(H i)及其不同比例配方对大鼠肾小球系膜细胞(GMCs)增殖和分泌Ⅳ型胶原含量的影响。方法:应用ELISA法测定GMCs增殖和Ⅳ型胶原(Col-Ⅳ)的含量。结果:水蛭和黄芪均可抑制GMCs增殖和降低Col-Ⅳ的含量,但黄芪的作用弱于水蛭(P<0.01)。结论:水蛭和以水蛭为主的配方在抑制体外培养的大鼠GMCs增殖和Col-Ⅳ的分泌作用方面强于黄芪和以黄芪为主的配方。     

黄芪、水蛭、水蛭素及水蛭黄芪配方含药血清对大鼠肾小球系膜细胞生长周期及凋亡的影响

目的:比较黄芪、水蛭、水蛭素及水蛭黄芪配方对大鼠肾小球系膜细胞(GMCs)生长周期、凋亡的影响及凋亡的形态学观察。方法:应用流式细胞仪检测GMCs生长周期与凋亡;用瑞氏染色,显微镜观察凋亡细胞的形态。结果:水蛭、水蛭素、黄芪、水蛭黄芪配方含药血清均能使大量GMCs处于G0/G1期,与对照组比较有显著性差异(P<0.01);均能提高GMCs凋亡率,水蛭、水蛭黄芪配方与对照组比较有显著性差异(P<0.01)。结论:水蛭、水蛭素、黄芪、水蛭黄芪配方含药血清均能阻止GMCs进入S期从而达到抑制增生的目的,且能提高GMCs的凋亡率,水蛭黄芪配方效果最优,水蛭次之。     

黄芪、水蛭及其配方含药血清对大鼠肾小球系膜细胞NF-кB、MMP-2、Fas、FasLmRNA表达的影响

目的 研究黄芪、水蛭及其配方含药血清干预系膜增生性肾小球肾炎的可能作用机制。方法 20只SD大鼠随机分为黄芪高血清组、水蛭高血清组、黄芪高水蛭高血清组、黄芪低水蛭高血清组,每组5只。大鼠给药量5 g/(kg·d)为低浓度,2倍剂量为高浓度,各组均配成0.5 g/ml混悬液,每天早晚各灌胃1次,连续灌胃5天,末次灌胃1.5 h后制备含药血清。检测各组不同浓度(10%、20%、40%、80%)的含药血清对大鼠系膜细胞增殖的影响,计算细胞存活率,筛选出各组最佳浓度。系膜细胞以1×105个/孔接种于6孔板中,每孔2 ml,分为正常组、模型组、黄芪高血清组、水蛭高血清组、黄芪高水蛭高血清组、黄芪低水蛭高血清组,除正常组外其余各组加入脂多糖诱导大鼠肾小球系膜细胞增殖,再分别加入筛选出的不同浓度的含药血清进行干预,检测各组系膜细胞中核转录因子(NF-кB)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、Fas、Fas L mRNA转录水平。结果 黄芪高血清组、水蛭高血清组、黄芪高水蛭高血清组、黄芪低水蛭高血清组含药血清最佳浓度分别为10%、20%、40%、20%。与正常组比较,模型组系膜细胞中NF-кB、MMP-2、Fas、Fas L mRNA表达明显升高(P<0.05),而各含药血清组NF-кB、MMP-2、Fas、Fas L mRNA表达较模型组显著降低(P<0.01)。结论 黄芪、水蛭及其配方含药血清可抑制大鼠系膜细胞增殖,其作用机制可能与下调NF-кB、MMP-2、Fas、Fas L mRNA表达水平有关。     

黄芪、水蛭及其配方含药血清对大鼠系膜细胞生长周期及凋亡的影响

目的 比较黄芪、水蛭及其配方含药血清对大鼠系膜细胞生长周期、凋亡的影响. 方法制备水蛭高浓度(水蛭组)、黄芪高浓度(黄芪组)和水蛭高黄芪低浓度(配方组)含药血清,并对大鼠系膜细胞(MC)进行干预培养,应用流式细胞仪检测MC生长周期与凋亡,显微镜观察凋亡细胞的形态. 结果各组含药血清均能使大量MC处于G0/G1期,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);各组亦均能提高大鼠MC凋亡率,水蛭组、配方组与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01).结论 水蛭、黄芪及其配方含药血清均能阻止MC进入S期从而达到抑制增生的目的 ,且能提高MC的凋亡率.     

黄芪、大黄、雷公藤多苷对大鼠MsC增生及表达TGF-β_1的影响

目的：通过观察黄芪、大黄、雷公藤多苷对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞（glomerular mesangial cells,MsC）增生及对MsC表达转化生长因子β1（Transforming growth factor-β1,TGF-β1）的影响,探讨黄芪、大黄、雷公藤多苷对肾小球系膜细胞增生的抑制效果。方法：在细胞培养的基础上,利用脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱发的大鼠肾小球系膜细胞增生模型,将系膜细胞分为控制组、模型组、对照组、黄芪组、大黄组、雷公藤多苷组。通过四甲基偶氮唑盐比色分析法（MTT）检测黄芪、大黄、雷公藤多苷对MsC增殖的影响,采用ELISA法检测黄芪、大黄、雷公藤多苷对MsC表达TGF-β1的影响。结果：模型组MsC增生活跃,OD值明显高于控制组（P〈0.01或P〈0.05）;模型组TGF-β1含量明显升高,与控制组相比差异有统计学意义（P〈0.01）,说明造模成功。中药黄芪、大黄、雷公藤多苷均能抑制MsC的增殖,降低TGF-β1过表达,而且在12 h黄芪抑制作用较强,24 h大黄抑制作用较强,48 h三者相比无显著性差异。结论：中药黄芪、大黄、雷公藤多苷三者均能够抑制体外培养的大鼠肾小球系膜细胞的增生,抑制其对TGF-β1过表达,但在作用时间上有所差异。     

黄芪水蛭制剂对糖尿病肾病大鼠TGF-β_1表达的实验研究

目的研究黄芪水蛭制剂对糖尿病肾病大鼠TGF-β1表达的影响,探讨其在糖尿病肾病大鼠肾脏的保护机制。方法采用高脂饲料喂养加STZ腹腔注射制作糖尿病肾病大鼠模型。分为正常对照组、模型对照组、中药治疗组(黄芪水蛭制剂)、雷公藤治疗组(雷公藤)、西药治疗组(洛汀新)、中西药治疗组(黄芪水蛭制剂加洛汀新),观察各组大鼠治疗后血糖变化,并于实验结束前进行留尿,测24 h尿蛋白定量。免疫组化方法测定大鼠TGF-β1的表达。结果经黄芪水蛭制剂治疗2个月后,各治疗组空腹血糖、24 h尿蛋白定量均明显低于模型对照组。模型对照组TGF-β1表达显著高于各治疗组。结论黄芪水蛭制剂对糖尿病肾病大鼠的肾保护作用可能与其抑制TGF-β1表达有关。     

黄芪、水蛭及其配方含药血清对脂多糖诱导增生的大鼠GMCs中NF-κB?p65、MMP-2?mRNA表达的影响

目的:观察黄芪、水蛭及其配方含药血清对脂多糖(LPS)诱导增生大鼠肾小球系膜细胞(GMCs)表达核转录因子p65(NF-κB p65)、金属蛋白酶组织抑制剂-2(MMP-2)的影响,探索益气化瘀药物及其配方含药血清治疗系膜增生性肾小球肾炎的可能机制。方法:LPS诱导大鼠GMCs(HBEH)增殖,分别采用黄芪高剂量血清、水蛭高剂量血清、黄芪高剂量水蛭高剂量血清、黄芪低剂量水蛭高剂量血清进行干预,24h后收集细胞,用CCK-8法观察含药血清对GMCs增殖的影响,Real time PCR法测定NF-κB p65、MMP-2因子的表达变化。结果:LPS诱导系膜细胞增殖后,NF-κB p65mRNA表达较正常组明显升高(P0.01),表达量达到正常细胞的2.07倍,各含药血清组NF-κB p65mRNA表达量与LPS组比较均显著下降(P0.01)。LPS诱导GMCs增殖后,MMP-2 mRNA表达较正常组明显升高(P0.01),表达量达到正常细胞的2.0倍,而各含药血清组MMP-2 mRNA表达量与LPS组比较均显著下降(P0.01)。上述指标各含药血清组组间比较差异无统计学意义(P0.05)。结论:黄芪、水蛭及其配方含药血清能够通过影响NF-κB65、MMP-2的表达减少GMCs的增殖及细胞外基质的沉积,益气化瘀含药血清的应用有利于缓解系膜增生性肾小球肾炎的进展。     

建中理劳汤含药血清对TGF-β1诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖及基质金属蛋白酶表达的影响

目的：通过观察建中理劳汤含药血清对转移生长因子-β1（TGF-β1）诱导的大鼠肾小球系膜细胞（HBZY-1）增殖、基质金属蛋白酶及其抑制酶表达的影响,探讨建中理劳汤治疗慢性肾衰纤维化的机制。方法：体外培养HBZY-1细胞,制备理劳汤含药血清,实验分为空白对照组、TGF-β1诱导组、空白血清组、建中理劳汤低、高剂量组和尿毒清组,通过乳酸脱氢酶（LDH）检测方法观察含药血清对HBZY-1细胞的毒性作用;通过CCK8方法观察各组HBZY-1细胞形态和增殖的情况;通过ELISA方法检测各组HBZY-1细胞中基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9及其抑制酶TIMP-1、TIMP-2表达的情况。结果：建中理劳汤含药血清对HBZY-1细胞无毒性作用（P>0.05）;与模型组相比,建中理劳汤可明显抑制TGF-β1诱导的HBZY-1细胞的增殖（P<0.05）;建中理劳汤可明显增加MMP-2、MMP-9的表达（P<0.05）,同时抑制TIMP-1、TIMP-2的表达（P<0.05）。结论：建中理劳汤含药血清可明显抑制TGF-β1诱导的大鼠肾小球系膜细胞的增殖,并通过影响基质金属蛋白酶及其抑制酶的表达改善慢性肾衰纤维化。     

黄芪、水蛭及其不同比例配方含药血清对大鼠系膜细胞外纤维连接蛋白和Ⅳ型胶原的影响

在肾小球疾病中,随着病变的进展,肾小球系膜细胞(GMCs)增生,细胞外基质(ECM)增加,作为ECM主要成分的Ⅳ胶原(Col-Ⅳ)、纤维连接蛋白(FN)含量也明显增加,肾小球内Col-Ⅳ、FN的含量可直接反映肾小球硬化的程度[1]。抑制GMCs增殖,进而抑制ECM的产生和积聚,可能是中药治疗肾病的重要     

黄芪、水蛭、大黄及其复方含药血清影响大鼠MC产生FN及Col-Ⅳ的研究

目的:研究黄芪、水蛭、大黄及其复方抑制大鼠系膜细胞(mesangial cells,MC)产生纤维连接蛋白(fibronec-tin,FN)及Ⅳ型胶原(typeⅣcollagen,Col-Ⅳ)的强弱。方法:在大鼠MC体外培养的基础上,将脂多苷糖(lipopolysac-charide,LPS)刺激的MC增生模型分为9组:控制组、模型组、对照组、黄芪组、水蛭组、大黄组、雷公藤多苷组、复方组、复方+雷公藤多苷组。采用ELISA法检测黄芪、水蛭、大黄及其复方等含药血清对MC表达FN及Col-Ⅳ的影响。结果:各含药血清组均能明显降低经LPS刺激后的大鼠MC产生FN及Col-Ⅳ的量,以复方+雷公藤组作用最佳,水蛭组、大黄组抑制作用较强,优于黄芪组。结论:证实了化瘀、泄浊中药水蛭、大黄在抑制MC产生FN及Col-Ⅳ方面优于益气类中药黄芪,复方+雷公藤组作用效果最佳。     

黄芪、水蛭有效成分对大鼠肾小球系膜细胞凋亡的影响

目的探讨黄芪、水蛭有效成分对大鼠肾小球系膜细胞凋亡的影响。方法脂多糖诱导大鼠系膜细胞增殖,黄芪(黄芪多糖、黄芪甲苷、毛蕊异黄酮)、水蛭(水蛭素)进行干预,24 h后收集细胞,采用4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)染色法观察细胞核的变化,链霉亲和素-生物素复合物测定Bcl-2的定性及定量表达。结果黄芪、水蛭有效成分均能诱导大鼠肾小球系膜细胞凋亡,并能降低Bcl-2的表达。结论黄芪、水蛭有效成分可通过下调Bcl-2表达来诱导系膜细胞凋亡,可用于治疗系膜增生性肾小球肾炎。     

益气化瘀清热方及其拆方对大鼠肾小球系膜细胞TGF-β1/Smad3信号通路的影响

目的:对益气化瘀清热方进行拆方,通过观察各类含药血清对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导下体外培养的大鼠肾小球系膜细胞(primary mesangial cells,Ms C)表达TGF-β1及Smad3蛋白的影响,探讨不同类中药的作用强度以及益气化瘀清热方治疗肾小球肾炎的作用机制。方法:采用Wersten Blot法检测各组含药血清对大鼠Ms C表达TGF-β1及Smad3蛋白的影响。结果:Wersten印迹结果显示:各组含药血清均能抑制体外培养的Ms C表达TGF-β1及Smad3蛋白,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);其中复方组作用最强,与其他含药血清组比较差异有统计学意义(P<0.05),清热组与化瘀组比较无明显差异(P>0.05),但优于益气组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:益气化瘀清热方及其拆方、雷公藤多苷均能抑制体外培养的大鼠Ms C表达TGF-β1及Smad3蛋白的表达。复方组作用明显优于其他组,清热组及化瘀组次之,益气组最弱。     

益肾蠲湿合剂对TGF-β_1诱导的肾小球系膜细胞分泌细胞外基质的影响

目的探讨中药复方益肾蠲湿合剂对TGF-β1作用下肾小球系膜细胞（GMC）分泌细胞外基质的影响。方法将含不同剂量益肾蠲湿合剂的药物血清与TGF-β1（终浓度5μg/L）共同培养GMC 24,48,72 h,收集培养上清并用ELISA法检测纤维连结蛋白（FN）、层黏连蛋白（LN）及Ⅳ型胶原（ColⅣ）含量。结果益肾蠲湿合剂的药物血清可抑制TGF-β1刺激GMC分泌FN、LN和ColIV,而且随着药物浓度的增加,其对GMC分泌FN、LN和ColIV的抑制率也相应增加。结论益肾蠲湿合剂对TGF-β1诱导的GMC分泌FN、LN和ColIV有明显的抑制作用,提示抑制TGF-β1刺激GMC分泌细胞外基质是本复方治疗慢性肾小球疾病的重要机制之一。     

黄芪复方对EAMG大鼠血清IL-4、IFN-γ、TGF-β水平的影响研究

目的:观察黄芪复方对实验性自身免疫性重症肌无力大鼠血清IL-4、IFN-γ、TGF-β水平的影响,以探讨其治疗重症肌无力的可能机制.方法:采用AChR加等量完全福氏佐剂,免疫Lewis大鼠,制备EAMG大鼠模型.40只Lewis大鼠随机分为4组,每组10只:福氏佐剂组、模型对照组、中药黄芪复方组和西药强的松组.各组给药治疗30天后,采用ELISA法分别测血清AChRab、IL-4、IFN-γ、TGF-β水平.结果:黄芪复方组、强的松组能明显改善EAMG大鼠肌无力症状,其血清AChRab、IFN-γ水平明显下降,TGF-β水平明显升高,与模型组相比,有显著性差异(P<0.05);但用药组间比较无显著性差异 (P>0.05).结论:中药黄芪复方可能是通过调控血清中IFN-γ、TGF-β水平,抑制AChRab的生成或增加其降解而达到治疗EAMG大鼠的作用.     

益肾蠲湿合剂对TGF-β1诱导的肾小球系膜细胞分泌细胞外基质的影响

目的探讨中药复方益肾蠲湿合剂对TGF-β1作用下肾小球系膜细胞(GMC)分泌细胞外基质的影响。方法将含不同剂量益肾蠲湿合剂的药物血清与TGF-β1(终浓度5μg/L)共同培养GMC 24,48,72 h,收集培养上清并用ELISA法检测纤维连结蛋白(FN)、层黏连蛋白(LN)及Ⅳ型胶原(ColⅣ)含量。结果益肾蠲湿合剂的药物血清可抑制TGF-β1刺激GMC分泌FN、LN和ColIV,而且随着药物浓度的增加,其对GMC分泌FN、LN和ColIV的抑制率也相应增加。结论益肾蠲湿合剂对TGF-β1诱导的GMC分泌FN、LN和ColIV有明显的抑制作用,提示抑制TGF-β1刺激GMC分泌细胞外基质是本复方治疗慢性肾小球疾病的重要机制之一。     

人参对大鼠创面及血清TNF-α、IL-1β、TGF-β1的影响

目的:研究人参对大鼠创面愈合的作用及血清TNF-α、IL-1β、TGF-β1的影响.方法:30只SPF级8周龄SD大鼠随机均分为健康对照组、模型安静组、模型人参组,雌雄各半.麻醉及消毒后切除大鼠背部2 cm方形全层皮肤造模.伤后第3天开始人参灌胃,持续14 d.常规观察和测量创面愈合情况;伤后第10天、第17天断尾取血备血清,ELISA法测IL-1β、TNF-α、TGF-β1.结果:人参使皮肤创面愈合时间加快(2±0.5)d,愈合质量较好;伤后第10天、第17天人参组血清TNF-α、IL-1β水平均明显低于模型安静组(P＜0.05);TGF-β1水平在第10天明显高于模型安静组(P＜0.05),第17天与模型安静组比较无显著性差异(P＞0.05).结论:人参可能通过改善创面炎症免疫反应及TGF-α、IL-1β、TGF-β1相关通路促进创面愈合.     

消癥散结扶正活络方药对TGF-β1诱导的HMCs增殖及Ⅳ型胶原分泌的影响

目的观察消癥散结、扶正活络方药对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人肾小球系膜细胞增殖及Ⅳ型胶原分泌的影响。方法采用TGF-β1诱导肾小球系膜细胞增殖和Ⅳ型胶原表达作为肾纤维化的细胞模型,实验分为5组:空白组,TGF-β1处理组,消癥散结、扶正活络方药高、中、低剂量(终浓度分别为50 mg/L、100 mg/L和200 mg/L)组。MTT法检测肾小球系膜细胞的增殖抑制率,ELISA法检测肾小球系膜细胞Ⅳ型胶原的表达。结果与空白对照组比较,TGF-β1处理组细胞经TGF-β1诱导后,HMCs增殖明显,细胞内ECM物质Ⅳ型胶原含量显著提高,差异均具有统计学意义。与TGF-β1处理组比较,消癥散结、扶正活络方药组可抑制TGF-β1诱导的HMCs的增殖及Ⅳ型胶原的表达,差异均具有统计学意义。结论消癥散结、扶正活络方药对TGF-β1诱导的HMCs的增殖及Ⅳ型胶原的表达具有抑制作用,抑制TGF-β1刺激HMCs分泌细胞外基质可能是其抗纤维化形成的机制之一。     

补阳还五汤大鼠含药血清对肺成纤维细胞TGF-β1及其基因表达的影响

目的:观察补阳还五汤大鼠含药血清对博莱霉素诱导的肺纤维化大鼠肺成纤维细胞中TGF-β1及其基因表达的影响。方法:含药血清的制备:24只SPF级SD大鼠,雄性,随机分为3组,即补阳还五汤水煎液组(简称补阳还五汤组,1 g生药/m L),强的松水溶液组(简称阳性组,5 mg/m L)和生理盐水组(简称模型组),每组8只,补阳还五汤组以9.24 g/(kg·d)(临床等效剂量)进行灌胃,阳性组及模型组以1 m L/100 g灌服相应溶液,1次/d,连续灌服7 d,采血前禁食12 h,于末次灌胃1 h后,腹主动脉取血,离心后分离血清,将收集到的补阳还五汤含药血清配制成含药血清浓度分别为5%,10%,20%的培养液备用;体外培养的肺成纤维细胞,分别加入含5%,10%,20%浓度的补阳还五汤药物血清干预,72 h后收集细胞及上清,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测上清中TGF-βl的表达,采用实时荧光定量PCR(Real-Time PCR)检测细胞中的TGF-βl蛋白基因的表达。结果:与模型组比较,阳性组和20%含药血清组,10%含药血清组肺纤维化大鼠成纤维细胞中TGF-β1的表达均有显著减少(P0.01),5%含药血清组细胞中TGF-β1的表达有减少趋势,3组不同浓度的补阳还五汤含药血清作用效果表现出一定的量效关系;与模型组比较,阳性组和20%含药血清组肺纤维化大鼠成纤维细胞中TGF-β1蛋白基因的表达均有显著减少(P0.01);10%含药血清组TGF-β1蛋白基因的表达减少(P0.05),5%含药血清组TGF-β1蛋白基因的表达有减少趋势,三组不同浓度的补阳还五汤含药血清作用效果表现出一定的量效关系。结论:补阳还五汤含药血清能够有效抑制TGF-βl及TGF-βl蛋白基因的表达,这可能是其防治肺纤维化作用的机制之一。     

黄芪后处理对大鼠肝纤维化中的影响及TGF-β1/Smad2、p38MAPK 作用

目的：研究黄芪对CCl4 诱导的大鼠肝纤维化肝组织中TGF-β1、Smad2 和p38MAPK 表达的影响,探讨TGF-茁信号通路在黄芪后处理中可能的抗纤维化机制。方法：60 只Wistar 大鼠被随机分成对照组、模型组、黄芪后处理组及鳖甲软肝片组,其中黄芪后处理组又分为小剂量组、常规剂量组和大剂量组,大鼠背部皮下注射CCl4 构建肝纤维化模型,分别用HE 和VG 染色法染色,肝纤维化程度直接在光学显微镜下观测。同时采用SABC 免疫组化方法检测各实验组TGF-β1、Smad2 和p38MAPK 的表达情况。结果：与对照组比较,模型组TGF-β1、Smad2 表达明显增强（P < 0.05）,而p38MAPK 表达显著下降（P <0.05）。与模型组比较,黄芪后处理各组中大鼠肝组织中TGF-β1 表达均有减弱（P < 0.05）,且随着黄芪剂量的增加而减少;随着黄芪剂量增加逐步下调Smad2 的表达（P < 0.05）、上调p38MAPK 的表达（P <0.05）。此外,黄芪组大鼠肝脏病理变化显著改善。结论：黄芪后处理明显影响大鼠肝组织TGF-β1 信号表达,且对CCl4 诱导的大鼠肝纤维化的作用呈剂量依赖性增强,其可能的机制为负性调节TGF-β1,减少Smad2 及增强p38MAPK 的表达。