RNA干扰在口腔肿瘤基因治疗中的应用

肿瘤的发生和发展涉及原癌基因的激活、抑癌基因的失活、凋亡相关基因的异常表达等,是涉及多基因、多因素的过程.现有的治疗手段已不能完全满足临床肿瘤治疗的要求,因此探索新的治疗方法已经成为人们的共识,基因治疗已成为研究的热点之一.目前,RNA干扰技术作为基因研究的新手段,可以针对细胞癌变过程中发挥主导作用的基因,在不影响正常基因功能的前提下抑制癌变基因表达,从而达到在基因水平治疗肿瘤的目的,是有前途的新疗法之一.     

RNA干扰技术及其在口腔肿瘤研究中的进展

RNA干扰（RNAinterference,RNAi）首先由Fire等提出,为双链RNA（double strandRNA,dsRNA）介导的细胞内序列特异性转录后基因沉默过程,是生物体在进化过程中,抵御病毒感染及由于重复序列和突变引起基因组不稳定性的保护机制。RNAi技术现已广泛应用于逆基因分析和基因治疗等领域,并日益成为口腔肿瘤患者分子病因和基因治疗研究的重要工具。     

RNA干扰技术在口腔医学领域应用的研究进展

RNA干扰技术是过去几年分子生物学领域最重要的发现之一。目前,RNA干扰已经成为研究基因功能、细胞信号传导、细胞分化、发病机制和基因治疗的一种有力工具。下面就RNA干扰的作用机制,RNA干扰在口腔医学中的研究应用作一综述。     

RNA干扰技术及其在口腔医学领域中的应用

传统认为RAN在遗传过程中只起着信息传递作用。但最近研究发现,小RNA也有基因调控作用。小RNA能关闭基因的表达或改变基因表达的水平,从而指导细胞的定向分化。本文从目前研究较多的RNA干扰的作用机制、siRNAs的制备方法及RNA干扰技术在口腔医学领域中的应用等方面作一综述。     

RNA干扰技术及其在口腔医学领域中的应用

传统认为PAN在遗传过程中只起着信息传递作用。但最近研究发现，小RNA也有基因调控作用。小RNA能关闭基因的表达或改变基因表达的水平，从而指导细胞的定向分化。本文从目前研究较多的RNA干扰的作用机制、siRNAs的制备方法及RNA干扰技术在口腔医学领域中的应用等方面作一综述。     

RNAi的作用机制及其在口腔医学领域的研究进展

RNA干扰是由双链RNA诱发的使特定序列基因沉默的现象,存在小干扰RNA(siRNA)和微小RNA(miRNA)两种不同的途径,主要有转录水平基因沉默,转录后水平基因沉默和翻译水平基因沉默三种机制,具有高效性和高特异性的特点。本文就RNAi的途径、技术路线及RNA干扰在牙齿发育、唇腭裂研究、牙周组织和口腔肿瘤中的研究进展作一综述。     

BimS慢病毒RNA干扰载体的构建及其感染效率和干扰效果的实验研究

目的:应用RNA干扰技术构建BimS慢病毒RNA干扰载体,探讨其感染效率和干扰效果.方法:针对人BimS设计3个干扰靶点,将单链引物退火成双链oligo序列,连接入Age Ⅰ和EcoR Ⅰ双酶切线性化载体中.将重组质粒进行病毒包装、并且通过感染ACC-2细胞观察其感染效率,定量PCR检测其对BimS mRNA干扰效果.结果:PCR产物经扩增电泳后阳性克隆得到337bp条带,插入序列片段与DNA测序结果完全相符.重组慢病毒载体在293T细胞中包装获得滴度为2×10s TU/ml的病毒颗粒,MOI=20,转染效率为85％.转染pFU-GV-BmS-1组、pFU-GV-BmS-2组及对照组BmS mRNA相对表达水平分别为:0.743±0.025、0.466±0.023、1.266±0.042(组间两两比较,P＜0.05).结论:BimS慢病毒RNA干扰载体构建成功,并能高效感染ACC-2细胞及下调BmS mRNA表达.     

环状RNA研究进展及其在口腔疾病中的研究展望

环状RNA（circular RNA）是一类共价闭合环状结构的RNA,具有保守性高、稳定性高、组织特异、广泛存在的特点。环状RNA能发挥miRNA海绵体的作用,调控相应的通路;能与RNA结合蛋白结合,调控基因的表达;环状RNA在疾病组织中的特异性表达,使它有望成为新的疾病诊断标志物和治疗靶点。本文就环状RNA的研究进展作一综述,并展望其在口腔病方面的研究前景。     

环状RNA在肿瘤放射治疗中的研究展望

肿瘤细胞放射性抵抗是目前抗癌治疗中难以解决的一大难点,但其抵抗的分子机制至今尚不明确。环状RNA（circRNA）是真核生物内的一类封闭环形RNA分子,具有组织特异性、稳定性和易于检测等特点,与肿瘤的早期诊断和放疗抵抗密切相关。circRNA能发挥微小RNA（miRNA）海绵吸附作用,调控与肿瘤放疗抵抗相关的miRNA和信号转导通路,使其有望成为提高肿瘤放疗敏感性的新型生物标记物及治疗靶点。本文综述了circRNA的研究进展,并展望其在肿瘤放射治疗应用中的研究前景。     

成釉细胞瘤中MMP-2的表达及RNA干扰的抑制作用

目的：研究MMP-2存成釉细胞瘤中的表达和RNA干扰对成釉细胞瘤细胞中MMP-2基因的沉默效应。方法：培养成釉细胞瘤细胞，应用免疫组织化学方法检测成釉细胞瘤中MMP-2的表达；体外构建MMP-2靶向siRNA质粒表达载体，将siRNA质粘表达载体转染原代培养的成釉细胞瘤细胞，激光共聚焦显微镜检测siRNA质粒表达载体的转染效率，RT-PCR检测成釉细胞瘤细胞中MMP-2 mRNA的改变，明胶酶谱法检测MMP-2的变化．应用SPSSI 1．0统计软件中的t检验对结果进行统计学分析。结果：成釉细胞瘤中MMP-2呈阳性表达．siRNA质粒表达载体对原代培养的成釉细胞瘤细胞的转染半为41.8％；转染后，成釉细胞瘤细胞的MMP-2 mRNA表达水平显著降低，酶原性MMP-2和活性MMP-2显著减少，P〈0．05结论：体外构建的MMP-2靶向siRNA质粒表达载体可以转染体外培养的成釉细胞瘤细胞，并导致MMP-2基因沉默。     

改良梭形切口在颌面部皮肤良性肿瘤切除中的应用

目的 设计一种改良梭形切口,用于切除颌面部皮肤良性肿瘤。方法 经尸体实验。方法 经尸体实验、计算,证实此改良切口具有多方面优点后,用于切除24例颌面部皮肤良性肿瘤。结果 按肿瘤半径为0.5cm、1.0cm、1.5cm计算,改良梭形切口节省切除皮肤面积分别为17．22％、15．42％、16．98％;缝合切口时无张力（或张力小）,切口对合线平整,隐于皱纹线中,无“猫耳”。经1－7a随访,切口瘢痕愈合良好。结论 此改良切口优于传统松形切口,可推广应用于切除颌面部皮肤良性肿瘤。     

Tumour of the juxtaoral organ

The juxtaoral organ is a normal and constant structure of the oral cavity. It consists of benign epithelial nests. We describe an intraoral tumour of the juxtaoral organ in a child. The tumour was not diagnosed after clinical and radiological examinations because it is extremely rare. A histological examination revealed a tumour of the juxtaoral organ, presumed to be neuroid hamartoma. This is only the second time that a tumour of the juxtaoral organ has been described in a child. We also describe the location, the embryology, the histology and the function of this organ. This is important because this structure can be confused with carcinomas of the oral cavity when examining frozen sections.     

Tumour necrosis factor-alpha and apoptosis in the rat temporomandibular joint

The purpose of this investigation was to investigate the roles that tumour necrosis factor-alpha (TNF-alpha) and apoptosis play during acute inflammation of the temporomandibular joint (TMJ). Adult male Sprague-Dawley rats were injected with complete Freund's adjuvant (CFA) into the TMJ or kept as uninjected controls. The TMJ tissues were removed 2 days post-injection to mimic conditions of acute inflammation and analysed for changes in expression of TNF-alpha, the receptor TNF-R1, caspase-3 and -8, and apoptosis. Concentrations of TNF-alpha, TNF-R1, caspase-3 and -8, and apoptosis were significantly elevated in CFA-injected animals compared to uninjected controls. Tissue incubation with TNF-alpha caused a significant increase in caspase-3 and -8. Also, levels of apoptosis were significantly increased during inflammation, which could be inhibited by the addition of either anti-TNF-alpha neutralising antibody or caspase inhibitors. TNF-alpha may play a significant role in the onset of acute CFA-induced TMJ inflammation, and activation of apoptosis signalling pathways may be involved.     

siRNA对鼠成纤维细胞株中HSP47表达的抑制作用

目的:构建小鼠热休克蛋白47(47 kDa heat shock protein,HSP47)基因的小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)表达载体,及HSP47第一外显子克隆表达载体,观察其在小鼠成纤维细胞(NIH3T3细胞株)中对HSP47基因表达的抑制作用。方法:针对小鼠HSP47的mRNA序列,在368、718位点分别设计两对21nt的,编码HSP47siRNA基因片断的寡核苷酸,退火成双链后将其连接到pSilencer1.0质粒的U6启动子下游,构建pSilencer-HSP47siRNA重组质粒;同时构建HSP47第一外显子重组质粒。经酶切、测序鉴定后,用脂质体介导的基因转染方法,转入NIH3T3细胞,用半定量RT-PCR法检测HSP47表达水平的变化。结果:经酶切、测序鉴定,成功构建了siRNA真核表达载体及靶基因克隆表达载体。经脂质体转染NIH3T3细胞后,RT-PCR显示NIH3T3细胞中HSP47基因的mRNA表达水平明显降低,所构建的HSP47-siRNA基因的真核表达载体,成功地抑制了目的基因的表达。结论:构建的小鼠HSP47基因的RNA干扰真核表达载体pSilencer-HSP47siRNA,在NIH3T3细胞中有效地发挥了对HSP47基因表达的干涉作用,从而提示HSP47特异的siRNA具有抑制皮肤瘢痕形成的潜力。     

Tumour markers and radiological examinations in the follow-up of patients with oral cancer.

In 1986, a new follow-up programme for patients with oral cancer was introduced in our department. The follow-up programme included liver function tests, tumour markers and radiological examination. 63 patients were monitored to the end of 1990. The results showed that serum Carcinoembryonic Antigen (CEA) assays were not sensitive enough to detect early cancer, recurrences or metastases. Neither was there any difference between the preoperative CEA levels of patients with and without recurrence during follow-up. The levels of salivary CEA, were similar to those of healthy individuals. Serum CA 19-9 values were consistently normal. In 1 patient, the first sign of liver metastases was a high 5-nucleotidase level. No recurrences were detected by radiological examination. In conclusion, the importance of frequent and careful clinical observation is emphasized; all 20 recurrences at the primary site and in local lymphnodes were detected by clinical examination. For detection of oral cancer recurrences, several laboratory and radiological examinations seem unnecessary. The cost-benefit of those examinations is significantly low.