Periodontal regeneration enhanced by the application of cancellous bone matrix scaffolds seeded with periodontal ligament cells

目的 观察牙周膜细胞(PDLCs)接种松质骨基质(CBM)支架复合移植对牙周组织再生修复的影响和意义.方法 将体外培养的狗自体PDLCs接种到CBM三维支架上,体外进行细胞计数和扫描电镜观察,并植入狗人工牙周组织缺损处,表面覆盖聚四氟乙烯膜(e-PTFE),以单纯翻瓣组和只覆盖e-PTFE组作为对照.术后8周对动物组织标本进行组织学观察和测量,分析比较各组牙周组织的再生情况.结果 PDLCs在CBM支架材料上形成良好的贴附并增殖,扫描电镜可见CBM具有良好的多孔网状结构,细胞在CBM上生长旺盛,伸展充分.自体PDLCs/ CBM / e-PTFE膜复合植入组较单纯翻瓣组和e-PTFE组有更多的新生牙槽骨、新生牙周膜和新生牙骨质生成,且未见上皮长入.结论 PDLCs接种松质骨基质支架复合移植能更有效地促进牙周组织再生和重建,CBM有望用作牙周组织工程的支架材料.     

松质骨基质作为细胞载体应用于牙周组织工程的实验研究

目的 研究评价松质骨基质(CBM)作为细胞载体应用于牙周组织工程的可行性及意义。方法 将体外培养的犬自体牙周膜细胞(PDLCs)接种到CBM三维支架上,扫描电镜观察PDLCs在CBM支架上的生长、附着情况;同时,将PDLCs/CBM复合植入动物牙周组织缺损,以空白组及仅植入CBM组为对照组,术后8周观察评价其牙周组织的再生情况。结果 扫描电镜显示PDLCs在CBM上伸展充分,生长旺盛,而CBM具有良好的多孔网状结构。动物实验结果可见PDLCs/CBM复合植入组较对照组有更多的新生牙骨质、新生牙周膜和新生牙槽骨生成,缺损处牙周组织几近完全再生,且未见上皮长入。结论 CBM可作为细胞载体用于牙周组织工程研究,有望用作牙周组织工程的支架材料。     

应用细胞-支架构建方式的组织工程方法促进牙周组织再生的实验研究

目的:观察评价细胞 -支架构建方式的组织工程方法对牙周组织再生修复的影响和意义,探讨自体牙周膜细胞(PDLCs)和纳米羟基磷灰石材料 -纳米羟晶 -胶原仿生骨材料 (nHAC)分别用作牙周组织工程种子细胞和支架材料的可行性。方法:改良组织块法体外培养动物自体PDLCs,传代扩增后接种到nHAC三维支架上,再植入动物人工牙周组织缺损,表面覆盖聚四氟乙烯 (e-PTFE)膜,以单纯翻瓣组和单纯GTR组作为对照。术后 8周进行组织学观察和测量,分析评价其牙周组织的再生情况。结果:自体PDLCs-nHAC-膜复合植入组较单纯翻瓣组和单纯GTR组有更多的新生牙槽骨、新生牙周膜和新生牙骨质生成,且未见上皮长入。结论:应用细胞-支架构建方式的牙周组织工程方法能更有效地促进牙周组织再生和重建,而自体PDLCs可作为牙周组织工程的种子细胞,nHAC可作为牙周组织工程的支架材料。     

细胞-支架构建方式的牙周组织工程实验研究

目的　观察评价细胞 支架构建方式的组织工程方法对牙周组织再生修复的影响和意义。方法　体外培养动物自体牙周膜细胞 (PDLCs) ,传代扩增后接种到纳米羟基磷灰石材料 (nHAC)三维支架上 ,扫描电镜观察PDLCs在nHAC支架上的附着及生长情况 ;同时 ,将PDLCs nHAC复合物植入动物牙周组织缺损中 ,术后 8周观察 ,评价其牙周组织的再生情况。结果　扫描电镜显示 ,nHAC具有良好的多孔网状结构 ,PDLCs在nHAC上贴附牢固 ,生长旺盛。动物实验可见 ,PDLCs nHAC植入组较对照组有更多的新生牙槽骨、新生牙周膜和新生牙骨质生成 ,缺损处牙周组织几乎完全再生 ,且未见上皮长入。结论　应用细胞 支架构建方式的牙周组织工程方法能获得理想的牙周组织再生和重建。     

纳米羟基磷灰石材料复合碱性成纤维细胞因子促进牙周组织再生的实验研究

目的:探讨新型纳米羟基磷灰石材料—纳米羟晶/胶原仿生骨材料(nHAC)作为生长因子载体和牙周组织工程支架材料应用的可行性,观察评价其对牙周组织再生修复的影响和意义。方法:将人牙周膜细胞(HPDLCs)接种于nHAC三维支架上复合培养,体外扫描电镜观察HPDLCs在nHAC支架上的附着、生长情况,并将碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)与nHAC复合植入动物人工牙周组织缺损,表面覆盖聚四氟乙烯(e-PTFE)膜,以空白对照组和单纯置膜组作为对照。术后8周进行组织学观察和测量,分析评价其牙周组织的再生情况。结果:扫描电镜可见nHAC具有良好的多孔网状结构,PDLCs在nHAC支架上贴附紧密,生长旺盛,伸展充分,动物实验结果显示nHAC/bFGF/膜复合植入组较空白对照组和单纯置膜组有更多新生的牙槽骨、牙周膜和牙骨质生成,结果具有显著性差异。结论:nHAC具有良好的三维空间结构和细胞相容性,与bFGF复合植入牙周缺损后可显著促进牙周组织再生,提示nHAC有望成为理想的生长因子载体和牙周组织工程支架材料。     

狗牙周膜细胞三维立体培养的体外实验研究

目的 :探讨异体脱矿松质骨基质 (CBM )和纳米羟基磷灰石材料 (nHAC)两种支架材料应用于牙周组织工程的可行性 ,为建立牙周组织工程的动物模型及下一步进行牙周组织工程的动物实验奠定实验基础。方法 :组织块法培养狗牙周膜细胞 ,传代扩增后 ,接种于CBM和nHAC 2种三维支架上 ,体外继续培养 3d ,进行细胞计数和扫描电镜观察。结果 :狗牙周膜细胞在 2种支架材料上均能形成良好贴附并增殖 ,扫描电镜可见 2种支架材料均具有良好的多孔网状结构 ,细胞在支架材料上生长旺盛 ,伸展充分。结论 :CBM和nHAC均有望成为牙周组织工程的支架材料     

一种新型纳米羟基磷灰石材料应用于牙周组织工程的可行性研究

目的:对一种新型纳米羟基磷灰石材料 -纳米羟晶 -胶原仿生骨材料 (nHAC)进行细胞相容性和细胞毒性的研究,以初步探讨其应用于牙周组织工程的可行性。方法:将体外培养的人牙周膜细胞(PDLCs)接种于nHAC三维支架上复合培养,采用细胞计数和扫描电镜观察PDLCs在nHAC支架上的附着、生长情况,并通过MTT测试法和碱性磷酸酶(ALP)活性检测法研究nHAC浸提液对PDLCs增殖和功能表达的影响。结果:人PDLCs在nHAC支架上形成良好贴附并增殖,扫描电镜可见nHAC具有良好的多孔网状结构,细胞在nHAC上生长旺盛,伸展充分,而PDLCs在不同浓度的材料浸提液中的生长、增殖及ALP活性与空白对照组相比无显著性差异。结论:nHAC具有良好的三维空间结构和细胞相容性,且无细胞毒性,有望成为牙周组织工程的支架材料。     

应用生长因子-支架构建方式的组织工程方法再生牙周组织的实验研究

目的：观察评价生长因子-支架构建方式的组织工程方法对牙周组织再生修复的影响和意义，探讨纳米羟基磷灰石材料(nHAC)和重组人骨形成蛋白-2(rhBMP-2)用于牙周组织工程的可行性。方法：将rhBMP-2与nHAC复合植入动物人工牙周组织缺损，表面覆盖聚四氟乙烯(e-PTFE)膜，以卒白对照组和单纯GTR组作为对照。术后8周进行组织学观察和测量，分析评价其牙周组织的再生情况。结果：rhBMP-2-nHAC-膜复合植入组较空白对照组和单纯GTR组有更多的新生牙槽骨、新生牙周膜和新生牙骨质生成，且未见上皮长入。结论：应用生长因子-支架构建方式的牙周组织工程方法能更有效地促进牙周组织再生和重建，而rhBMP-2和nHAC有望用作牙周组织工程的生长因子和支架材料。     

预培养比格犬干细胞的牙本质片复合牙周膜细胞膜片裸鼠体内移植研究

目的：探索预培养干细胞的牙本质片复合牙周膜细胞（PDLCs）膜片对牙周组织再生的可行性。方法：将比格犬牙根制成牙本质片,其上接种骨髓基质干细胞（BMSCs）或PDLCs,应用成骨诱导液或α-MEM培养液培养,电镜观察牙本质片表面细胞附着与基质形成情况。并构建细胞／牙片／膜片／煅烧陶瓷牛骨CBB复合体,裸鼠体内皮下移植,8周后取材HE染色观察。结果：预培养干细胞的牙本质片,电镜检测到表面有足够的细胞和细胞外基质分布。裸鼠体内结果显示牙本质片接种BMSCs或PDLCs经成骨诱导组可见类牙骨质基质形成,但无类牙周膜纤维,未经成骨诱导组无类牙骨质基质形成,但有明显的类牙周膜纤维样组织形成;空白组无类牙骨质基质及类牙周膜纤维样组织形成。结论：在牙本质片上预培养BMSCs或PDLCs,复合PDLC膜片和CBB后异位移植,有利于类牙周膜纤维的形成。加入成骨诱导液诱导,有利于基质的形成。     

自体牙周膜细胞移植对狗牙周组织再生的影响

目的　对应用自体牙周细胞移植结合e PTFE膜引导的牙周组织再生的动物实验进行评价。方法　将 6只成年狗的 36颗牙分为实验组和对照组 ,每组 18颗牙。在人工制造的牙周缺损中 ,进行体外培养的自体牙周细胞移植结合GTR法为实验组 ,单纯应用GTR法为对照组。 6周后切片行牙周组织学观察。结果　实验组新生牙槽骨、牙周膜组织及牙骨质的修复再生效果明显好于对照组 (P <0 0 5 ) ;实验组牙槽骨再生高度平均为 (4 0 0± 0 13)mm ,对照组为 (3 0 9± 0 2 8)mm。结论应用自体牙周膜细胞移植结合e PTFE膜引导牙周组织再生可促进狗牙周组织的再生     

电纺聚己内酯/Ⅰ型胶原蛋白/纳米锆酸钙复合支架的制备及其生物相容性的研究

目的:制备聚己内酯(PCL)/Ⅰ型胶原(COLI)/纳米锆酸钙(nCZ)复合支架用于骨组织再生,评价其性能及对人牙周膜细胞(PDLCs)生物相容性及成骨分化的影响.方法:用静电纺丝法制备PCL/COLI、PCL/COLI/纳米羟基磷灰石(nHA)和PCL/COLI/nCZ复合支架,通过扫描电子显微镜表征支架形貌,能量色...     

Bone repair using periodontal ligament progenitor cell-seeded constructs

The success of tissue-engineering therapies is dependent on the ability of scaffolds to guide differentiation of progenitor cells. Here we present a new approach using a biomimetic construct composed of hydroxyapatite modified with an in vitro-derived extracellular matrix (HA-ECM) and seeded with periodontal ligament progenitor cells (PDLCs). The study aimed to investigate the effect of HA-ECM on osteogenic differentiation of PDLCs and in vivo evaluation of the PDLC-seeded HA-ECM constructs using a rat calvarial critical-sized defect model. After flow-cytometric phenotyping of PDLCs for typical mesenchymal stem cell markers, the PDLCs were cultured on HA-ECM or HA alone in osteogenic media and assessed by MTT, alkaline phosphatase (ALP) assays, and real-time qPCR at different time intervals after seeding. New bone formation induced by PDLC-seeded constructs was assessed by histomorphometric analysis at 12 weeks post-operatively. The PDLCs seeded on HA-ECM showed significantly higher ALP activity and up-regulation of bone-related genes. The treatment with PDLC-seeded HA-ECM significantly improved calvarial bone repair, with the highest amount of newly formed bone elicited by cell-seeded constructs cultured for 14 days. Our results highlight the PDLC-seeded HA-ECM constructs as a promising tool for craniofacial bone regeneration.     

牙周韧带细胞在商用纯钛表面生物学行为的实验研究

目的采用形态学、计量学和免疫组织学方法,观察牙周韧带细胞(periodontalligamentcells,PDLCs)在商用纯钛(commerciallypuretitanium,cpTi)表面的附着和分化特征,探讨牙种植体与PDLCs之间的界面关系。方法PDLCs在cpTi表面接种后,分别采用荧光显微镜、扫描电子显微镜观察细胞的附着形态,MTT法分析细胞粘附,免疫荧光观察细胞骨钙素(osteoclin,OC)的表达。结果PDLCs在cpTi边缘逐步伸展,扫描电子显微镜示细胞呈长梭形,并逐渐以“伪足”沿cpTi表面伸展;荧光显微镜显示,细胞附着早期有多种附着相;细胞计数显示,细胞数量在2h后趋于稳定,4h内持续增加。7d后细胞形成与cpTi打磨方向一致的单层。细胞及基质成分中表达OC。结论PDLCs在cpTi表面的粘附过程有一定的规律性,细胞的早期附着是一个动态过程,附着后期具有矿化趋势。     

Guided periodontal regeneration using bilayered collagen membranes and bovine bone mineral in fenestration defects in the canine

This study was performed to evaluate the effect of deproteinized bovine porous bone mineral (BBM) and BBM-collagen (BBMC) used alone or in combination with a bilayer collagen membrane in guided periodontal regeneration. In 12 dogs, contralateral surgical circular fenestration defects 5 mm in diameter were produced at the midbuccal aspect of the alveolar bone in 24 maxillary canines. Bone, periodontal ligament, and cementum were completely removed. Experimental sites were filled with BBM or BBMC. Bilayered collagen membranes covered half the experimental sites (BBM+M and BBMC+M), and the other half were left uncovered. Control sites remained empty; half were covered with collagen membranes (cont+M) and the underlying space spontaneously filled with blood, and half were left uncovered (cont). Three months postsurgery, undecalcified sections were prepared. Measurements were made using a caliper on a projection microscope, and the surface area of new bone and BBM particles within the healed surgical defect was evaluated using the point-counting method. In the experimental defects, new cementum covered 31% to 67% of the exposed dentin, with a significant difference between defects covered with membranes and defects that were not covered (P < .05). New cementum in the control (unfilled) defects also differed significantly between covered and uncovered defects. New bone growth presented a pattern similar to the cementum. There was no statistical difference between defects treated with BBM and BBMC, within both covered and uncovered groups. There was less connective tissue in the covered defects than in the uncovered defects (P < .05). The defects were filled with new bone, new connective tissue/bone marrow, and bovine bone particles. New bone area fraction was 23.4% to 25.2% in defects filled with BBMC and BBM, respectively (P = NS). Bone fraction area in membrane-covered defects ranged from 34.4% to 36.8% in experimental defects (P = NS). All membrane-treated defects showed higher values for bone area fraction in comparison to the uncovered control defects. Particle area fraction ranged between 17.4% and 26.2%, with only BBMC and BBM+M defects showing a statistically significant difference (P < .05). Defects filled with submembranous blood clot exhibited significantly more new cementum and bone regeneration than experimental defects filled with BBM or BBMC. Treatment of defects with BBM or BBMC showed similar influences on bone and cementum regeneration in fenestration periodontal defects. The presence or absence of bilayered collagen membranes was the predominant factor influencing bone and cementum regeneration.