S/D法对人凝血因子Ⅷ产品中人免疫缺陷病毒灭活效果的研究

目的研究S/D法对人凝血因子Ⅷ中污染的人免疫缺陷病毒灭活效果。方法采用细胞培养法,对S/D处理人凝血因子Ⅷ灭活HIV的效果进行了检测。结果在常温(25℃)条件下,在污染有HIV的人凝血因子Ⅷ种混入体积分数9%S/D灭活剂,作用60 min,HIV灭活对数值为6.83。重复处理3批人凝血因子Ⅷ制品,对HIV均达到完全灭活,经细胞培养盲传三代,均未出现细胞病变。结论 S/D法能够完全灭活人凝血因子Ⅷ产品中污染的人免疫缺陷病毒,灭活效果可靠。     

酒精对同种骨植入材料中人类免疫缺陷病毒灭活效果的研究

目的研究75%酒精浸泡法对骨植入材料中污染的人免疫缺陷病毒灭活效果。方法采用细胞培养法,对75%的酒精浸泡处理骨植入材料中污染的H IV-1ⅢB毒株灭活效果进行检测。结果共对3个单位提供的9批骨植入材料样品进行了检测。用体积分数75%酒精浸泡处理30 m in,骨植入材料中H IV-1ⅢB毒株病毒滴度平均降低4.50 TC ID50,对检测标本盲传3代均未出现细胞病变。结论75%酒精浸泡能够完全灭活骨植入材料中污染的人免疫缺陷病毒。     

胶原蛋白海绵生产中的病毒灭活工艺效果观察

目的研究胶原蛋白海绵生产中病毒灭活工艺及其灭活病毒的效果。方法采用细胞培养法,对酸性酶解溶液和60Co-γ射线辐照法灭活病毒的效果进行了检测。结果酸性酶解溶液处理2 h,对接种在胶原蛋白海绵中的水疱性口炎病毒、伪狂犬病毒、脊髓灰质炎病毒和猪细小病毒灭活对数值分别为5.54、5.71、6.30和5.13。用照射剂量为25 kGy的60Co-γ射线对胶原蛋白冻干品中的水疱性口炎病毒、伪狂犬病毒、脊髓灰质炎病毒和猪细小病毒灭活对数值分别为6.00、5.75、6.00和5.00。灭活后的样品经细胞感染盲传3代均未见细胞病变。结论胶原蛋白海绵生产中采用酸性酶解溶液处理72 h或25kGy60Co-γ射线辐照灭菌工艺均可有效灭活所试验的4种指示病毒。     

钴~(60)-γ射线辐照法消毒冻干免疫球蛋白的效果观察

目的探讨钴60-γ射线辐照消毒法处理冻干免疫球蛋白的可行性。方法采用病毒定量检测方法,观察钴60-γ射线辐照法对免疫球蛋白中病毒灭活效果。结果含病毒的免疫球蛋白经30kGy剂量钴60辐照处理,对含不同蛋白保护剂的冻干IgG制品中辛德比斯病毒灭活对数值≥5.5TCID50。经30kGy剂量辐照灭菌处理,冻干IgG制品外观未见明显改变,各处理组之间的pH值与未处理组结果相近。蛋白电泳Native-PAGE分析各保护剂组之间无明显差别,保护剂浓度高低对试验结果无明显影响;SDS-PAGE分析,各处理组中的IgG经还原后其重链和轻链仍清晰可见,各保护剂组结果间无明显差别。高效液相色谱法检测结果显示,三种保护剂对IgG分子的保护效果较好,分子聚合和断裂峰明显减少。冻干IgG经辐照处理后抗原含量与对照相比均达80%以上,各保护剂组之间抗原含量基本一致。结论冻干血浆蛋白制品IgG经γ-射线照射后能够保持一定的结构和功能的完整性。     

γ-射线辐照对蛋白制品中病毒灭活作用研究进展

血浆蛋白制品是从混合的多份血浆中分离制备而成,因此,理论上经血浆成分传播的疾病一般也可经血浆蛋白制品传播〔1〕。现有蛋白制品的病毒灭活/去除方法有其局限性,如S/D法(有机溶剂/表面活性剂法)只对包膜病毒有效,因而导致蛋白制品的应用仍有一定的风险。有研究报道静脉注射免疫球蛋白(IVIG)产品可能传播丙肝病毒〔2〕,输注血浆蛋白制品可能传播人类细小病毒B19〔3〕。因此寻找一种能灭活所有病毒,且对蛋白制品活性影响较小、操作方便的方法,将有助于提高蛋白制品应用的安全性,γ-射线辐照法是近年来研究的热点。1γ-射线灭活病原体的…     

热力与亚甲蓝光化学法联合应用灭活辛德毕斯病毒效果的研究

目的研究热力与亚甲蓝光化学法联合应用灭活辛德毕斯病毒的效果。方法采用细胞培养法和基因检测技术,对热力与亚甲蓝光化学法联合应用灭活辛德毕斯病毒的效果进行了评价。结果经56℃水浴中热力预灭活处理1.5 h,辛德毕斯病毒滴度≤0.5 TCID50/ml,灭活对数值达到6.33 TCID50/ml;未经预灭活的辛德毕斯病毒在1μmol/L亚甲蓝+光照(MB+L)处理中随光照时间的延长,病毒残余滴度逐渐下降至检测限(TCID50/ml=0.5)。经热力灭活预处理的辛德毕斯病毒与未经预处理的病毒核酸载量之间具有相关性(R20.98,显著性F0.01)。结论热力灭活预处理的辛德毕斯病毒能够反映活病毒的亚甲蓝病毒灭活效果,有望成为安全而有效的病毒灭活效果评价制品。     

^(60)Co-γ辐照对板层人工角膜中指示病毒灭活效果的研究

目的研究^(60)Co⁃γ辐照对板层人工角膜中模拟污染指示病毒的灭活效果。方法板层人工角膜放入经预先精确测定病毒滴度的辛德毕斯病毒、脑心肌炎病毒和猪细小病毒中,4℃浸泡角膜8 h吸附病毒。经-0.75 kPa减压干燥6 h,进行5~25 kGy不同剂量的^(60)Co⁃γ辐照。辐照后每只角膜用稀释液浸泡释放病毒(4℃,5 h)、剪碎、研磨离心取上清,用蚀斑法或微量细胞病变法分别测定3种病毒的残余病毒滴度,验证^(60)Co⁃γ辐照对3种病毒的灭活效果。结果经5~25 kGy ^(60)Co⁃γ辐照,辛德毕斯病毒滴度下降对数值≥5.32~5.41 lg pfu/mL,脑心肌炎病毒下降对数值≥4.68~5.00 lg TCID_(50)/0.1 mL和猪细小病毒下降对数值≥4.06~4.44 lg TCID_(50)/0.1 mL。结论^(60)Co⁃γ辐照对板层人工角膜中的脂包膜病毒和非脂包膜病毒均有较好的灭活效果。     

基于阻断膜金属蛋白酶TRABD2A的HIV储存库检测方法的建立

目的探究人源化膜金属蛋白酶——含有TRAB结构域的蛋白2A(TRABD2A)单克隆抗体对接受联合抗逆转录病毒疗法(cART)的人免疫缺陷病毒(HIV-1)感染者储存库细胞的作用效果, 建立基于TRABD2A阻断抗体的全新HIV-1储存库检测方法。方法 2021年5—12月于中国医科大学附属第一医院收集研究对象51例。其中健康者2名, 接受cART的HIV-1感染者(cART组)41例, 未接受cART的HIV-1感染者(no-cART组)8例。采用噬菌体展示库技术构建人源化TRABD2A单克隆抗体, 分别处理HIV-1感染者、未接受cART的HIV-1感染者及健康对照者的外周血单个核细胞(PBMC)和CD4+T淋巴细胞, 利用荧光素酶报告系统、单分子免疫阵列检测技术等方法检测细胞培养上清中病毒含量, 同时使用流式细胞术、荧光实时定量聚合酶链式反应检测处理后细胞的活化和病毒基因表达情况, 比较不同处理组之间病毒释放量和表面活化标志CD25、CD69、HLA-DR(人类白细胞DR抗原)表达量的差异。结果接受cART的HIV-1感染者的PBMC经人源化TRABD2A单克隆抗体处理后检测HIV...     

~(60)Coγ-射线对冻干血浆中病毒灭活效果的研究

为提高冻干血浆临床应用的安全性,采用细胞感染法对人工污染病毒的新鲜冰冻血浆经60Co辐照灭活处理的效果进行了检测,同时用凝胶电泳和凝血因子分析仪检测60Co照射对冰冻血浆生物活性物质的影响。结果,60Coγ-射线经30 kGy的辐照剂量能完全灭活冻干血浆中的指示病毒;照射后的血浆白蛋白等成分含量略有下降,凝血因子活性减少了30%~40%。结论,60Coγ-射线辐照能有效灭活冻干血浆中的有包膜病毒和无包膜病毒,但对血浆蛋白活性有一定影响。     

将真空冷冻干燥后的凝血因子制剂置于100℃加热其细小病毒B19的传染情况

背景:人们已采用在真空冷冻干燥后通过双灭活法来提高Ⅷ和Ⅸ因子制品的病毒安全性,尤指无类脂外壳类病毒,此双灭活法指用溶剂/去污剂处理法加上100℃加热30分钟。本研究的目的在于评估采用这些病毒灭活的方法后其制剂的安全性。研究设计与方法:通过类脂和非类脂病毒(人类免疫缺陷病毒1型和2型;甲、乙、丙型肝炎病毒,B19细小病毒抗体及B19DNA),的血清学和病毒学标志物对26例未经治疗的血友病患者进行为期12个月的随访性前瞻性     

X射线辐照对淋巴细胞的灭活能力及对单采血小板质量的影响研究

目的 探讨25Gy X射线辐照单采血小板后对其淋巴细胞的灭活能力及对单采血小板质量的影响。方法 选取本中心2021年1～5月的健康无偿献血者20名,每人捐献单采血小板2袋,分为2组,分别用25Gy的X、γ射线辐照10 min;将上述辐照前后的单采血小板标本经淋巴细胞分离液分离出淋巴细胞,培养后分析比较X射线、γ射线辐照灭活单采血小板内淋巴细胞的能力;检测单采血小板辐照前及辐照后1、3 d的CD41b、CD62p、血常规、pH值。应用SPSS统计软件进行独立样本t检验分析比较组间差异。结果 25Gy X射线、γ射线辐照后对淋巴细胞的抑制率分别为(98.034±1.778)%与(97.882±1.915)%。25Gy X射线辐照单采血小板后,与γ射线辐照组相比,1、3 d的Plt、PDW、MPV、P-LCR、PCT、pH、CD41b和CD62p值比较,差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论 25Gy X射线辐照能有效灭活单采血小板内的淋巴细胞,其灭活效果与γ射线相当,对淋巴细胞的增殖抑制率均能达到95%以上,且对单采血小板的质量没有显著影响。     

血制品的病毒灭活

病毒、尤其是肝炎病毒及嗜人 T 淋巴细胞病毒(HTLV-Ⅲ,AIDS 的致病因子)可通过输入受污染的全血、血细胞及血浆制品传播,是接受上述治疗患者所面临的主要危险之一.有多种方法司用于灭活这类制品中的病毒。作者对其中最常用的方法之一一一加热法的灭活效果进行了研究.将10(?)~7/0.5ml 感染单位 HLTV-Ⅲ培养物以1/10比例加至人血清白蛋白溶液中,将其分作若干份,置60℃,分别加温10、20、40及60分钟,取出置一80℃冻存。取此冻存物,融化后吸附至 HT-H 9细胞上,培养28天后收集上清进行逆转录酶活性测定,并据此确定病毒的感染滴度.同时采用类似方法处理其他病毒以作为对照。实验结果表明,HTLV-Ⅲ对热稳定性     

S/D法用于人凝血因子Ⅷ病毒灭活效果验证

人凝血因子Ⅷ(FⅧ)浓制剂是用于甲型血友病治疗的血液制品,患者需终身输注.本所用低温乙醇法制备了纯度>3IU/mg蛋白的FⅧ浓制剂,为减少该剂品传播病毒的危害并保证制品的质量,在制作过程中采用了Solvent/detergent (S/D) 法[1]进行病毒灭活.S/D法是由美国纽约血液中心[2]于20世纪8 0年代中期开发的,采用有机溶剂和表面活性剂进行协同处理,用于灭活血浆制品中的脂包膜病毒而不影响蛋白质的性质,已获得美国FDA认可.为验证该方法的效果,笔者对制品在处理前后的活性和理化性质进行了比较,采用HIV、VSV、Sindbis 3个指示病毒对S/D处理人凝血因子Ⅷ进行病毒灭活验证. 1 材料与方法     

采用~(137)CSγ射线辐照灭活红细胞血液制品中大肠杆菌的实验研究

目的探讨不同剂量γ射线辐照对红细胞血液制品中大肠杆菌的灭活作用,确定红细胞血液制品灭菌的最佳辐照剂量。方法制备含102-106不同数量级大肠杆菌的红细胞血液制品,应用强度为0、15、20、25、30和35Gy的γ射线进行照射,并于照射后0、7、14d检测血液中大肠杆菌的含量。结果红细胞血液制品经照射后大肠杆菌数量发生了不同程度的改变,当细菌量≤103cfu/ml时,25Gy的γ射线强度足以灭活样本内的所有细菌。结论25Gy的γ射线辐照剂量能有效灭活红细胞血液制品中的细菌,是一种安全有效的红细胞血液制品灭菌剂量。     

人免疫缺陷病毒Ⅰ型gag、env、rev mRNA检测

目的动态检测人免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)基因gag、env、rev mRNA水平.方法将插入有HIV-1竞争模板的pSPI质粒DNA转化入感受态菌STBL-2,进行扩增.以T7 RNA聚合酶体外转录出HIV-1 mRNA竞争模板.用3对引物对HIV-1 RNA标本进行定量竞争聚合酶链反应(QC-RT-PCR), 检测HIV-1 gag、env、rev mRNA 水平.结果 HIV-1 ⅢB感染的标本中,HIV-1 gag、env和rev mRNA的水平分别为36 000拷贝/μl,9 800拷贝/μl和9 100拷贝/μl.此方法可动态定量检测HIV-1 gag、env、rev mRNA水平.结论该方法简便易行,费用低廉,适用于实验室HIV致病机理、药物筛选和病毒复制状况的研究.     

加热灭活抗凝血酶Ⅲ溶液中的人免疫缺陷病毒

作者从感染的外周血淋巴细胞培养物中,分离出人免疫缺陷病毒(HIV),加到高纯化的抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)溶液中,该溶液以1M的枸橼酸盐和17%的蔗糖为稳定剂.将AT-Ⅲ虽的HIV与培养基中的HIV进行60℃加热灭活效果比较.测定病毒HIV相关的逆转录酶(RT)活性和通过ID_(50)分析测定病毒感染量.对加有稳定剂的AT-Ⅲ和培养基进行60℃加热灭活HIV的动力学比较.     

家用消毒器对口罩表面人工污染病毒的灭活效果研究

目的观察家用消毒器对口罩表面人工污染病毒的灭活效果,为复用口罩提供参考。方法采用载体定量检测,对一次性医用外科口罩及KN95口罩上人工污染的脊髓灰质炎病毒(PV-1)和鼠肝炎冠状病毒(MHV)的灭活效果进行观察。结果家用微波炉低、中、高3组功率照射条件下对两种口罩上污染的MHV均不能达到全部灭活;中功率照射10 min和高功率照射5 min可以完全灭活KN95口罩上污染的PV-1病毒。经浓度为5 mg/m~3臭氧处理30 min,两种口罩上污染的病毒均未完全灭活。紫外线消毒柜和紫外线灯照射60 min,均对一次性医用外科口罩上污染的PV-Ⅰ病毒达到全部灭活,其余各组均检测到部分存活病毒。结论紫外线消毒柜对两种口罩表面污染的PV-1病毒和MHV病毒的消毒效果最好,微波炉和臭氧消毒柜对两种口罩表面污染的病毒灭活效果有限。     

静脉注射人免疫球蛋白酸性孵放法灭活艾滋病病毒的效果研究

目的研究静脉注射人免疫球蛋白在生产过程中酸性孵放法灭活艾滋病病毒的效果。方法采用细胞培养法,对含有艾滋病病毒的静脉注射人免疫球蛋酸性孵化法灭活效果进行了实验室检测。结果将含有艾滋病病毒的静脉注射人免疫球蛋白酸度调整为pH4,于21～25℃条件下放置4d,其中艾滋病病毒的滴度(TCID50)由9.50log下降至2.00log以下,下降值达到7.00log以上。相同的样品在pH值7.0条件下放置14d,其中艾滋病病毒滴度仍在3.3log以上;经放置21d,所有样品中艾滋病病毒滴度均在2.0log以下。经过对3批样品重复测定,均未出现细胞病变;经过将样品盲传三代仍未出现细胞病变。结论采用酸性孵放法常温下放置21d,可使静脉注射人免疫球蛋白中艾滋病病毒完全失去活性。     

人胸腺组织原代培养细胞与人类免疫缺陷病毒间的相互作用

背景:人类免疫缺陷病毒能够结合人胸腺的细胞CD4受体,从而导致CD4细胞活性降低。目的:观察人胚胎胸腺组织原代培养与人类免疫缺陷病毒相互作用关系。方法:取人胎胸腺组织进行原代细胞培养,取胸腺的细胞与人类免疫缺陷病毒1ⅢB混合培养设为实验组,设置不加人类免疫缺陷病毒培养的胸腺的细胞为对照组。结果与结论:透射电镜观察显示,培养40h,人类免疫缺陷病毒诱导的胸腺的细胞内即可发现大量艾滋病病毒颗粒。MTT法和免疫组织化学染色检测结果显示,培养40h~22d,HIV诱导胸腺的细胞吸光度值均显著低于对照组(r=0.9733,P<0.05),人类免疫缺陷病毒诱导胸腺的细胞膜上和细胞浆Fas-L阳性表达率均升高(P<0.05)。说明人类免疫缺陷病毒可致原代培养的人胚胎胸腺的细胞活性降低。     

四种病毒灭活方法用于登革病毒灭活效果的比较

目的评价常用病毒灭活方法对血液制品中登革病毒(DENV)的灭活效果。方法将单采新鲜冰冻血浆(FFP),人凝血因子Ⅷ(FⅧ)和静脉注射免疫球蛋白(IVIG)3种血浆及其制品中加入高滴度(8.00-9.25)的登革病毒液,分别采用亚甲蓝(MB)光化学法灭活FFP、有机溶剂/去污剂(S/D)法灭活FⅧ、低pH常温孵化法和巴氏消毒法灭活IVIG;以1×10~6/mL A549细胞接种于T25的培养瓶中作为病毒传代及滴度滴定指示细胞,将灭活前后的血浆及制品接种于A549细胞并检测其DENV滴度,并通过qRT-PCR对DENV RNA做定量检测;评估不同的灭活方法对DENV的灭活效果。结果 DENV滴度下降:MB光化学法灭活FFP下降滴度≥5.92 log,S/D法灭活FⅧ下降滴度≥5.17 log、巴氏法和低pH法灭活IVIG均下降滴度≥5.92 log,其中MB光化学法灭活FFP、SD灭活FⅧ及巴氏法灭活IVIG后DENV RNA(cp/mL)降低1.25 log-2.25 log,低pH法灭活IVIG后DENV RNA(cp/mL)降低0.17 log。所有血浆和血液制品样品经灭活后,在DENV宿主细胞上3代盲传后均未检测到DENV RNA。结论 4种常用病毒灭活方法均能有效灭活血浆及血液制品中的DENV。