肿瘤坏死因子α对系膜增生性肾小球肾炎的作用

临床确诊为系膜增生性肾小球肾炎（ＭｓＰＧＮ）的１１８例分为轻，中，重３组，从每组中随机抽取８例作为实验组，取３例正常肾组织作为对照组，然后对所选取的２７例进行免疫电镜检查，结果显示：正常及空白对照组肾小球内示见金颗粒，轻度ＭｓＰＧＮ的系膜细胞（ＭＣ）内Ｇｏ，ＲＥＲ附近有少量散在分布的金颗粒，中度ＭｓＰＧＮ增生的ＭＣ内金颗粒数增多，Ｇｏ，ＲＥＲ及Ｌｙ附近与轻度比较有显著性差异（Ｐ〈０．００１），重度     

地塞米松对肾小球系膜细胞肿瘤坏死因子α产生和基因表达的影响

为观察地塞米松对内毒素诱导的肾小球系膜细胞肿瘤坏死因子α（TNFα）的产生及其mRNA表达的影响，采用免疫学和分子生物学方法，对正常、内毒素诱导后及加入地塞米松的内毒素诱导后大鼠系膜细胞的TNFα水平及TNFαmRNA表达进行了检测。结果：（1）TNFα在正常系膜细胞中分泌量极微，TNFαmRNA的表达处于低水平；（2）内毒素诱导系膜细胞TNFα的产生及mRNA表达增加；（3）地塞米松对内毒素诱导的系膜细胞TNFα的产生及其mRNA表达有明显的抑制作用，呈剂量依赖关系。结论：地塞米松是系膜产生细胞团子TNFα的较强抑制剂。     

曲格列酮对肿瘤坏死因子α诱导肾小球系膜细胞的作用及其机制

目的：探讨曲格列酮对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导肾小球系膜细胞增殖的影响及机制。方法将体外培养的大鼠肾小球系膜细胞分为空白组,TNF-α组、TNF-α+曲格列酮组,MTT法检测各组系膜细胞的增殖情况,ELISA法测定各组系膜细胞上清液中细胞间粘附分子1(ICAM-1)蛋白表达,免疫组化法测定各组系膜细胞核因子κB (NF-κB)的表达情况。结果 TNFα组肾小球系膜细胞6 h、12 h、24 h和48 h增殖的OD值分别为(0.198±0.025)、(0.241±0.028)、(0.286±0.030)、(0.267±0.042),空白组分别为(0.159±0.021)、(0.161±0.019)、(0.164±0.023)、(0.170±0.020),TTNF-α+曲格列酮组分别为(0.187±0.023)、(0.184±0.017)、(0.172±0.018)、(0.168±0.026),TNF-α组肾小球系膜细胞增殖的OD值明显高于空白组,TNF-α+曲格列酮组明显低于TNF-α组,差异均有统计学意义(P<0.05);TNF-α组肾小球系膜细胞NF-κB蛋白阳性率为(62.34±10.26)%,空白组为(29.97±4.88)%,TNF-α+曲格列酮组为(45.67±8.36)%,TNF-α组肾小球系膜细胞NF-κB蛋白阳性率明显高于空白组,而TNF-α+曲格列酮组则明显低于TNF a组,高于空白组,差异均有统计学意义(P<0.05);TNF-α组肾小球系膜细胞ICAM-1蛋白浓度为(967.8±77.4) pg/mL,空白组为(571.2±69.6) pg/mL,TNFα+曲格列酮组为(787.5±81.2) pg/mL,TNF-α组肾小球系膜细胞ICAM-1蛋白浓度明显高于空白组,TNF-α+曲格列酮组明显低于TNF-α组,但仍高于空白组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 TNF-α能够促进肾小球系膜细胞增殖,促进NF-κB蛋白和ICAM-1蛋白表达,曲格列酮能够抑制肾小球系膜细胞增殖,降低NF-κB蛋白和ICAM-1蛋白表达。     

肿瘤坏死因子α在系膜增生性肾小球肾炎中的表达及其在发病中的作用

目的 探讨肿瘤坏死因子（TNF－α）在人系膜增生性肾小球肾炎中的表达及其在发病中的作用。方法 采用HE，PAS，PASM及免疫组织化学方法对13例系膜增生性肾小球肾炎进行染色观察。结果 TNF－α阳性反应见于肾近曲小管上皮细胞和肾小球内，且阳性反应强度与HE，PAS等显示的病变程度一致。结论 TNF－α在肾小球系膜组织增生及肾小球间质纤维化中起重要作用。     

肿瘤坏死因子α在肾小球系膜细胞中的基因表达及蛋白合成

目的：探讨肾小球系膜细胞（MC）与肿瘤坏死因子α（TNFα）的关系。方法：用逆转录-多聚酶链反应（RT-PCR），原位杂交及免疫组织化学方法，对培养的大鼠及人MC检测了TNFα的基因表达及蛋白合成；用原位杂交方法，观察5例人系膜增生性肾小球肾炎肾穿刺组织的TNFα基因表达。结果：培养的大鼠和人MC有TNFαmRNA表达并有TNFα蛋白的合成，肾小球肾炎增生的MC内有TNFαmRNA表达。结论：MC可以产生TNFα，说明TNFα可通过套分泌和自分泌两种途径作用于MC。     

HBV X蛋白对大鼠肾小球系膜细胞增殖及促炎性细胞因子表达的影响

目的探讨HBV X基因表达的蛋白(HBVx)对体外培养的大鼠系膜细胞表达肿瘤坏死因子(TNF)-α、白介素(IL)-1β、IL-6及细胞增殖的影响。方法构建含HBV X基因的真核表达载体pCI-neo-X,采用脂质体法将pCI-neo-X转染给体外培养的大鼠系膜细胞,Western blot测定HBx的表达,以半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定体外培养大鼠系膜细胞TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定培养上清液中TNF-α、IL-1β、IL-6水平,四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞增殖。结果转染pCI-neo-X的系膜细胞(MC+pCI-neo-X组),HBx在36、48 h表达明显。同时TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA表达量较未转染和转染空载体组明显增高。上清液中TNF-α、IL-1β、IL-6水平在MC+pCI-neo-X组较未转染和转染空载体组均增高,差异均有统计学意义(P<0.05);细胞增殖在36、48 h MC+pCI-neo-X组最明显,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 HBx可诱导大鼠系膜细胞高表达TNF-α、IL-1β和IL-6,促进系膜细胞增殖。HBx对系膜细胞的增殖作用可能与TNF-α、IL-1β、IL-6的高表达有关。     

肾复宁对肿瘤坏死因子诱导大鼠肾系膜细胞增殖的干预作用

目的探讨肾复宁提取液干预肿瘤坏死因子诱导后肾小球系膜细胞增殖的作用。方法采用大鼠肾小球系膜细胞培养进行体外研究,用肿瘤坏死因子(TN F-α)刺激系膜细胞增殖,再加入不同浓度肾复宁提取液对细胞进行干预,用M TT法测定细胞增殖,流式细胞仪分析细胞周期。结果加入肾复宁提取液后,系膜细胞的增殖程度受到显著抑制(P<0.05),流式细胞仪DNA图示S期细胞数显著减少(P<0.05)。结论肾复宁提取液对肿瘤坏死因子诱导后肾小球系膜细胞的增殖具有抑制作用,从而为临床应用治疗慢性肾脏病提供实验依据。     

肿瘤坏死因子α介导内皮素所致人肾小球系膜细胞增殖

目的:探讨内皮素-1(endothelin-1,ET-1)致人肾小球系膜细胞(human mesangial cell, HMC)增殖的介导途径.方法:用ET-1和抗肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α,TNFα)中和抗体孵育HMC,3H-胸腺嘧啶参入法测定HMC增殖,Northern杂交方法测定mRNA表达及放射免疫法测定TNFα蛋白质水平.结果:10-7 mol·L-1 ET-1能刺激HMC增殖,使TNFα mRNA表达上调及TNFα蛋白质分泌增多(12、24 h两组与对照组比较,差异有显著性);抗TNFα中和抗体(0.10～1.00 mg·L-1)能部分抑制ET-1所致HMC增殖,但对ET-1所致HMC TNFα mRNA表达上调无明显影响.结论:ET-1能够刺激HMC增殖并使HMC合成和分泌TNFα;ET-1所致HMC该增殖效应可能部分由TNFα介导.     

青蒿素对骨关节炎大鼠肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的探讨青蒿素对骨关节炎大鼠肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响。方法 32只骨关节炎模型大鼠随机分为对照组和青蒿素高剂量组、中剂量组、低剂量组,每组各8只,对照组给予生理盐水20 mL灌胃,每日1次,青蒿素高、中、低剂量组分别给予青蒿素400、300、200 mg.kg-1(均溶于20 mL生理盐水)灌胃,每日1次,连续7周,实验结束后右心房取血,放射免疫法检测血清TNF-α水平,反转录聚合酶链式反应、蛋白质印迹检测关节软骨组织中TNF-α的表达。结果青蒿素低、中、高剂量组血清TNF-α水平均较对照组下调(P<0.05),低剂量组水平高于中、高剂量组(P<0.05),中剂量组水平高于高剂量组(P<0.05);低剂量组组织mRNA水平与中剂量组比较差异无统计学意义(P>0.05),高剂量组的组织mRNA水平低于低、中剂量组和对照组(P<0.05);组织TNF-α蛋白水平中剂量组与高剂量组比较差异无统计学意义(P>0.05),但均低于对照组和低剂量组(P<0.05)。结论青蒿素可降低关节炎大鼠TNF-α的表达,有效控制炎症反应进程。     

乙型肝炎病毒X基因转染大鼠系膜细胞对细胞增殖及IL-1β,IL-6表达的影响

目的 探讨乙型肝炎病毒(HBV)X基因表达的蛋白(HBx)对体外培养的大鼠系膜细胞表达白细胞介素(1L)-1β、IL-6及细胞增殖的影响.方法 将HBV X基因扩增,与PCI-neo载体连接,构成PCI-neo-X真核表达载体.采用脂质体法将PCI-neo-X转染给大鼠系膜细胞,Western blot测定HBx的表达;以半定量反转录PCR测定体外培养大鼠系膜细胞IL-1βmRNA、IL-6mRNA袁达;MTT法测定细胞增殖.结果 转染PCI-neo-X的系膜细胞,HBx在36和48 h表达明显.同时IL-1βmRNA、IL-6mRNA表达量较未转染和转染空载体者明显增高.细胞增殖在36和48 h最明显,与未转染和转染空载体组有显著差异.结论 HBx可诱导大鼠系膜细胞高表达IL-1βmRNA和IL-6mRNA,促进系膜细胞增殖.HBx对系膜细胞的增殖作用可能与IL-1β、IL-6的高表达有关.     

肾舒胶囊对人系膜细胞增殖及分泌肿瘤坏死因子-α和纤连蛋白的影响

目的 :研究肾舒胶囊对人系膜细胞 (HMC)增殖及分泌肿瘤坏死因子 -α(TNF -α)和纤连蛋白 (FN)的影响。方法 :采用血清药理学方法 ,将肾舒胶囊含药血清加入培养的HMC中 ,MTT法测定HMC增殖情况 ,ELISA法测定HMC分泌TNF -α及FN情况。结果 :肾舒胶囊含药血清可明显抑制HMC增殖及其分泌TNF -α和FN ,且其抑制作用呈一定的浓度依赖性和时间依赖性。结论 :肾舒胶囊可能通过抑制MC增殖及其分泌TNF -α等炎症介质和FN等细胞外基质 (ECM)防治肾小球硬化     

系膜增生性肾小球肾炎TNF-α、IL-6水平的变化及意义

目的观察IL-6、TNF-α在系膜增生性肾小球肾炎中的作用。方法采用酶联免疫吸附实验,检测90例系膜增生性肾小球肾炎患者血清IL-6、TNF-α水平,与30例正常对照组比较,用SPSS软件对数据进行分析。结果系膜增生性肾小球肾炎病人TNF-α、IL-6水平明显升高（P〈0.01）,并与其严重程度相关。结论系膜增生性肾小球肾炎病人有细胞免疫功能紊乱,TNF-α、IL-6水平增高可能与其发生、发展有关,并可作为病情判断及疗效的观察指标。     

替比夫定对体外培养大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响

目的探讨不同浓度替比夫定对大鼠肾小球系膜细胞(RMCs)增殖的影响。方法将RMCs分为空白对照组和10、20、40、60、100、150 mmol·L-1替比夫定组,分别作用24、48、72 h,通过细胞形态学和4-甲基偶氮唑蓝法检测替比夫定对RMCs增殖的影响。结果空白对照组细胞胞质透亮,折光性强,细胞呈梭形、不规则星形或多角形,细胞密集时可呈网状排列。10、40和150 mmol·L-1替比夫定组细胞形态随药物浓度增加及作用时间的延长出现皱缩,细胞核缩成点状,甚至出现胞质空泡。10、20、40、60、100和150 mmol·L-1替比夫定组作用RMCs 24、48、72 h后,RMCs增殖抑制率随药物浓度的增加和作用时间的延长而增高,且呈剂量和时间依赖性(P<0.01)。结论替比夫定对RMCs有显著的抑制作用,并且具有时间和剂量依赖性。     

蟾蜍灵对大鼠肾小球系膜细胞增殖和细胞外基质分泌的影响

目的:探讨蟾蜍灵(bufalin)对脂多糖(LPS)诱导的大鼠肾小球系膜细胞(GMC)增殖及细胞外基质(ECM)分泌的影响.方法:体外培养大鼠肾小球系膜细胞,分为对照组、LPS刺激组(LPS5mg/L)和蟾蜍灵干预组(LPS5mg/L和蟾蜍灵1×10-8mol/L),应用台盼蓝拒染法检测蟾蜍灵对GMC的细胞毒性作用,通过MTT、流式细胞技术检测GMC增殖变化,RT-PCR检测转化生长因子-β1(TGF-β1)的mRNA的表达,ELISA法检测GMC培养上清中纤维连接蛋白(FN)及TGF-β1的表达.结果:MTT结果显示蟾蜍灵浓度在1×10-8mol/L及以上时呈剂量依赖性抑制GMC增殖(P<0.01).细胞周期分析显示蟾蜍灵组S期细胞比例较脂多糖组降低(P<0.01).蟾蜍灵干预组与脂多糖组相比TGF-β1的mRNA相对表达量减少(P<0.05),FN,TGF-β1蛋白分泌量减少(P<0.01).结论:蟾蜍灵对LPS作用后肾小球系膜细胞增殖及细胞外基质分泌具有抑制作用.     

IL-1对肾小球系膜细胞增殖和周期素依赖激酶2表达的影响

目的 探讨白细胞介素－１（ＩＬ－１）对肾小球系膜细胞增殖及周期素依赖激酶２（ＣＤＫ２）表达的影响。方法 利用体外培养的大鼠肾小球系膜细胞,分别采用噻唑蓝掺入法、流式细胞仪检测、免疫细胞化学等观察ＩＬ－１作用前后系膜细胞增殖民政部以及ＣＤ听表达变化。结果 ＩＬ－１可以明显促进系膜细胞增殖,同时伴有ＣＤ听表达增高。结论ＩＬ－１对系膜细胞有明显的促增殖春机制可能与影响ＣＤＫ２的表达有关。     

稳定表达饰胶蛋白聚糖基因的大鼠肾小球系膜细胞株的建立

目的 研究将饰胶蛋白聚糖（decorin,DCN）基因转染大鼠肾小球系膜细胞的可行性。方法 RT-PCR法扩增大鼠DCN基因,构建重组真核表达质粒pcDNA3.1A-DCN,采用脂质体将其转入大鼠MsC,经G418筛选阳性克隆,Western blot及RT-PCR法鉴定。结果 成功构建重组真核表达质粒pcDNA3.1A-DCN,转染MsC并筛选出2个阳性克隆株。结论 构建载有DCN基因的MsC载体,为其开展对肾小球疾病模型的基因治疗提供了良好的实验基础。     

肿瘤坏死因子α对正常大鼠胰岛素敏感性的影响

目的：探讨注射肿瘤坏死因子α(TNFα)对正常大鼠胰岛素敏感性及其相关状态的影响。方法：给正常大鼠注射小剂量TNFα后,以葡萄糖-胰岛素耐量试验(G-InsTT)检测其胰岛素敏感性的变化,并观察血浆胰高血糖素(GC)、促肾上腺皮质激素(ACTH)、血脂水平及组织中糖原、三酰甘油(TG)含量的变化情况。结果：发现TNFα可致正常大鼠出现高胰岛素血症,G-InsTT的K值下降,血浆GC,ACTH和血脂水平升高,肝脏和红色股四头肌糖原含量减少,肝脏TG含量升高。结论：TNFα可致正常大鼠发生明显的胰岛素抵抗(IR),这可能与血中胰岛素拮抗激素水平升高或糖代谢、脂代谢紊乱有关。