长白白眉蝮蛇类凝血酶的研究Ⅱ：理化,酶学性质的鉴定

长白白眉蝮蛇类凝血酶分子量为39 000,是一种糖蛋白。氨基酸组成分析表明,此酶共含303个氨基酸残基,其中酸性氨基酸含量较高,等电点为4.25。该酶对BAEE(苯甲酰-L-精氨酸乙酯)水解活力的最适pH值为8左右,Km为3.53×10~(-4)mol/L,其活性可被DFP(二异丙基氟磷酸)及PMSF(苯甲基磺酰氟)所抑制。催化降解纤维蛋白原过程中,只释放纤肽A,不释放纤肽B,形成的纤维蛋白可被5 mol/L尿素液溶解。     

四种蝮蛇类凝血酶对纤维蛋白原作用方式的研究

本文采用高效液相色谱法对我国四种蝮亚科蛇毒(长白白眉蝮蛇、长白黑眉蝮蛇、江浙蝮蛇、蛇岛蝮蛇)类凝血酶对纤维蛋白原的作用方式进行了研究。结果表明:这四种酶在催化降解纤维蛋白原过程中,都只释放纤肽A,而不释放纤肽B。     

一种检测凝血酶、类凝血酶的新方法—纤维蛋白原平板法

目的：创建一种定量检测凝血酶（Thrombin）、类凝血酶（Thrombin-likeenzymes）活性的新方法—纤维蛋白原平板法。方法：采用纤维蛋白原作为底物,用琼脂糖与纤维蛋白原制作成纤维蛋白原平板,以凝血酶、类凝血酶标准品分别在该平板上的扩散反应,制作相应的标准曲线及回归曲线,并对凝血酶、类凝血酶活性作定量测定。结果：本法制作的凝血酶、类凝血酶检测标准曲线具有良好的线性关系（r=0.9994、r=0.9997）。结论：纤维蛋白原平板法可用于凝血酶、类凝血酶定量测定。具有操作简便、直观、稳定、敏感度高,不受检品浊度或颜色干扰且成本低廉等特点。     

蛇毒溶栓素对动物凝血功能的影响

本文报道蛇毒溶栓素(ATE)对家犬、猕猴体内外凝血作用的影响.体外实验表明:ATE具有类凝血酶样作用,能使去钙血浆和纤维蛋白原直接凝固,它不激活Ⅻ因子,产生是非交联的纤维蛋白,并且有纤溶酶样作用,能直接溶解纤维蛋白,产生抗凝作用.体内实验表明:ATE显著延长全血凝固时间、凝血酶时间和凝血酶原时间,注射ATE后血浆中纤维蛋白原降低,优球蛋白溶解时间缩短,三P试验阳性,血小板减少.体内外实验表明,ATE具有去纤、纤溶、抗血小板功能和抗凝效应.     

蛇毒类抗血栓蛋白酶的研究进展

血栓栓塞性疾病严重威胁人类健康,研究具有优势的抗栓药物是当代医学的重点和热点之一。蛇毒中存在3类具有抗栓作用的蛋白酶,分别为蛇毒类凝血酶、纤维蛋白（原）溶解酶、纤溶酶原激活剂。对这3类抗血栓蛋白酶进行了综述,分别介绍了各类酶的分布、结构、生化性质以及作用机制,并结合其性质及机制分析在抗栓方面存在的优点和不足。另外,还介绍了蛇毒类抗血栓蛋白酶的研究现状,临床应用情况,以及临床常用的一些成熟药物。     

蝰蛇(缅甸亚种)毒凝血因子X激活物FVe-1的分离纯化与理化活性的研究

[目的]从蝰蛇(缅甸亚种)毒分离纯化一种凝血活性因子X激活物FVe-1,并研究其理化性质、序列测定以及凝血活性.[方法]应用阳离子交换层析、分子凝胶过滤层析分离纯化蛇毒,采用MALDI质谱测定法测定分子质量,等电聚焦电泳测定等电点,Edman降解法测定蛋白N末端氨基酸序列,发色底物法和SDS-PAGE等方法测定FVe-1的酶学特征和凝血活性.[结果]从蝰蛇(缅甸亚种)毒分离得到的F Ve-1为单体蛋白,相对分子质量为13 808,等电点4.6,0.5 mg FVe-1的凝血活性与1.5625 u的凝血酶或与54.93 ng RVVX的凝血活性相当;可激活FX,但对凝血酶和纤维蛋白原无作用;酶活性的适宜pH为6.5～ 7.5,适宜温度为25 ～ 60℃;为钙依赖性,凝血活性可被EDTA和DTT抑制;FVe-1的N端序列为NH2-N-L-Y-Q-F-G-E-M-I-N;具有呈剂量依赖性的促血浆凝固作用.[结论]从蝰蛇(缅甸亚种)毒纯化出一种F Ve-1是一个凝血因子X的激活物,可激活凝血因子X,但对凝血酶和纤维蛋白原的作用微弱.     

中国蕲蛇毒试剂的临床检验应用

中国蕲蛇毒试剂具类凝血酶作用,其作用性质和临床用途与国外同类蛇毒产品Reptilase和Atroxin reagent相同。经临床应用,本试剂可用于鉴别受检血标本中有无肝素或类肝素抗凝物质的存在,检查异常纤维蛋白原血症和受检血标本中纤维蛋白降解产物(F D P)。     

蝰蛇(缅甸亚种)毒凝血因子Ⅹ激活物FⅤe-1的分离纯化与理化活性的研究(英文)

【目的】从蝰蛇(缅甸亚种)毒分离纯化一种凝血活性因子Ⅹ激活物FⅤe-1,并研究其理化性质、序列测定以及凝血活性。【方法】应用阳离子交换层析、分子凝胶过滤层析分离纯化蛇毒,采用MALDI质谱测定法测定分子质量,等电聚焦电泳测定等电点,Edman降解法测定蛋白N末端氨基酸序列,发色底物法和SDS-PAGE等方法测定FⅤe-1的酶学特征和凝血活性。【结果】从蝰蛇(缅甸亚种)毒分离得到的FⅤe-1为单体蛋白,相对分子质量为13 808,等电点4.6,0.5 mg FⅤe-1的凝血活性与1.5625 u的凝血酶或与54.93 ng RVVⅩ的凝血活性相当;可激活FⅩ,但对凝血酶和纤维蛋白原无作用;酶活性的适宜pH为6.5～7.5,适宜温度为25～60℃;为钙依赖性,凝血活性可被EDTA和DTT抑制;FⅤe-1的N端序列为NH2-N-L-Y-Q-F-G-E-M-I-N;具有呈剂量依赖性的促血浆凝固作用。【结论】从蝰蛇(缅甸亚种)毒纯化出一种FⅤe-1是一个凝血因子Ⅹ的激活物,可激活凝血因子Ⅹ,但对凝血酶和纤维蛋白原的作用微弱。     

长白山白眉蝮蛇类凝血酶基因特异片段的制备与分挝

目的分离和纯化长白山白眉蝮蛇类凝血酶cDNA片段,为克隆全长类凝血酶cDNA奠定基础.方法应用RT-PCR方法获得长白山白眉蝮蛇类凝血酶cDNA片段,克隆于pGEM-T载体上,进行测序和NCBI数据库同源性分析.结果获得长白山白眉蝮蛇类凝血酶cDNA片段长度为289bp,该片段与其他种蝮蛇类凝血酶DNA片段有同源性.结论本实验克隆了长白山白眉蝮蛇类凝血酶基因片段.根据不同种属蛋白质家族成员的保守性和同源性设计引物可以有效地克隆家族成员的DNA片段.     

短尾蝮蛇毒磷脂结合抗凝蛋白的抗凝作用及其机理研究

目的:研究短尾蝮蛇毒磷脂结合抗凝蛋白的抗凝作用及机理.方法:用薄层层析方法确定抗凝蛋白与磷脂酰胆碱结合.按试剂盒说明进行活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)、凝血酶原时间(PT)、纤维蛋白原(FIB)含量以及对凝血因子的测定.结果:短尾蝮蛇毒磷脂结合抗凝蛋白具有精氨酸酯酶活性,能明显地延长活化部分凝血活酶时间(APTT)和稀释的蝰蛇毒时间(DRVVT),减少组织凝血活酶抑制试验(TTI)试剂的磷酯浓度,能加速其抗凝作用,其抗凝活性与磷脂结合及干扰Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ、Ⅻ因子活性有关.结论:短尾蝮蛇毒磷脂结合抗凝蛋白能够抗凝、抑制Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ、Ⅻ因子活性并与磷脂结合.     

胞宫虚寒证与胞宫寒凝证的诊治

从临床角度,对胞宫虚寒证和胞宫寒凝证的诊断要点和治疗方法进行了论述和区别,对二者所属的妇科常见病一一作了分析,并提出相应的治则和方药,为临床妇科病的诊治提供了经验和方法。     

论中医腹诊源流与原理

论述了腹诊的起源与发展,并从脏象、经络、气血津液三个方面分析了胸腹的生理、病理意义。胁腹与脏象、经络的关系,对诊腹以判断病位尤为重要,而气血津液理论可以说明证候的虚实,鉴别某些病邪性质。认为作为局部诊法的腹诊,能够反映整体功能状況及其病理变化,体现了整体观的特点。     

大鼠正中神经和桡神经纤维起始细胞的分布与分布模式

将辣根过氧化物酶(HRP)注入大鼠正中神经或桡神经干内,标记细胞出现在注射侧脊髓前角和脊神经节内。正中神经组:出现在脊髓C_4～T_2节段,在前角外侧群中的分布偏向背侧;在脊神经节分布于C_6～T_2节段。桡神经组:出现在脊髓C_4～T_1节段,在前角外侧群中的分布偏向腹侧;在脊神经节分布于C_6～T_1节段。     

胰体尾部肿瘤早期诊断与治疗

目的探讨胰腺体尾部肿瘤的早期诊断和选择合适的治疗方法。方法总结1998年9月—2012年10月收治的29例胰腺体尾部肿瘤患者的临床资料并进行回顾性分析。结果 29例均进行手术治疗,治愈28例,死亡1例。致死原因为胰瘘和多器官功能障碍综合征。胰瘘和腹腔感染是主要的并发症。结论胰腺体尾部肿瘤早期诊断困难,腹部B超和CT检查有助于早期发现本病。手术是胰体尾部肿瘤最佳的治疗方式。关键是采取个体化的手术方式,选择合理的治疗方法可提高治愈率。     

糖尿病大鼠HDL-C和LDL-C的变化及丝胶的调节作用

目的：探讨丝胶对2型糖尿病大鼠低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)的调节作用。方法：48只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、糖尿病模型组、丝胶治疗组和阳性对照组,每组12只大鼠。25mg/kg链脲佐菌素腹腔注射3d(1次/d)建立2型糖尿病大鼠模型;模型成功建立后,糖尿病模型组大鼠不再做任何处理,丝胶治疗组大鼠给予丝胶(2.4g/kg/d)灌胃35d,阳性对照组大鼠给予二甲双胍(55.3mg/kg/d)灌胃35d。分别检测各组大鼠的血糖以及血清HLD-C和LDL-C的水平。结果：与正常对照组大鼠比较,模型组大鼠的血糖、LDL-C明显升高,HDL-C明显降低(P＜0.01,P＜0.05);与模型组大鼠比较,丝胶治疗组、阳性对照组大鼠的血糖、LDL-C明显降低,HDL-C明显升高(P＜0.01)。结论：丝胶可通过提高HDL-C水平、降低LDL-C水平改善糖尿病时血脂代谢紊乱。     

心机械图血流动力学微机自动监测系统的设计与应用

本文报道作者自行设计软件程序与接口,将修复后的生理记录仪与AppleⅠ型微机进行联机监测,组成一个全自动无创性血流动力学智能化监测系统。多道生理记录仪将同步的心电、心音、心尖搏动和颈动脉搏动图输入计算机,进行测量及计算分析,最后打印诊断报告。可自动分析诊断24种心功能状态。通过临床110例应用表明其与临床综合观察诊断符合率达98/%,人机采点相关系数为0.90,人机分析相关系数为0.98,能满足临床及科研要求。     

月之盈缺与气血盛衰实验研究

通过血象实验研究月之盈缺与青少年气血盛衰的规律,结果表明,青少年女性气血盛衰与月节律变化(即月之盈缺),有明显的同步性。即呈中—高—低的变化规律;而青少年男性,呈高—中—低的变化规律。上述青少年气血盛衰的规律,反映了随月之盈缺时问,人体防御外邪能力的变化。说明青少年处于生长发育盛期,阴阳属性明显,易受天时影响,亦是祖国医学“天人相应”理论科学性的有力证据。     

食管癌与结肠癌及其癌旁组织端粒酶活性的检测

①目的 建立测定端粒酶活性的PCR－TRAP方法，并探讨其对食管癌、结肠癌诊断的意义。②方法 应用PCR－TRAP方法，对36例食管癌、40例结肠癌及其癌旁组织进行了粒酶活性的检测。③结果 36例食管鳞状细胞癌组织端粒酶活性阳性检出率为80．50％，癌旁组织阳性检出率为6．00％，二者相比，差异有极显著意义（χ^2＝41．3，P＜0．001）。其中17例伴淋巴结转移中端粒酶活性均呈阳性，而未伴随淋巴结转移的病人中端粒酶活性阳性检出率为63．15％，二者差异有极显著性（χ^2＝7．02，P＜0．01）。40例结肠腺癌组织中端粒酶活性阳性检出率为91．75％，癌旁组织中阳性检出率为5．00％，两者相比差异有极显著性（χ62＝60．26，P＜0．001）；40例结肠癌均为腺细胞癌，其中12例伴淋巴结转移的标本中10例检测出活性，而29例未伴随淋巴结转移的病人中，有27例均为腺细胞癌，其中11例伴淋巴结转移的标本中10例检测出活性，而29例未伴随淋巴结转移的病人中，有27例检出端粒酶的活性，两者相比差异无显著性（P＞0．05）。④ 结论 端粒酶活性增高可能是致食管、结肠组织癌变的重要因素；端粒酶活性的检出可作为食管癌、结肠癌诊断的指标之一。