猪苓多糖对膀胱癌细胞TLR2/4-NF-κB信号通路相关基因影响

目的:研究猪苓多糖(PPS)对膀胱癌细胞(T739)TLR2/4-NF-κB通路相关基因表达的影响及其与TLR2/4关系.方法:应用qRT-PCR、Western blot和流式细胞术(FCM)等方法检测PPS作用T739细胞后IKKB、NF-κB p65、ICAM1和CCL2 mRNA与蛋白表达变化;应用标记探针结合酶联免疫吸附法检测PPS作用T739细胞后NF-κB p65 DNA结合活性改变;应用免疫组化方法观察PPS作用T739细胞后NF-κBp65胞核表达变化.结果:PPS作用T739细胞后,IKBKB(IKKβ)、Rel A(NF-κB p65)、ICAM1和CCL2 mRNA表达均显著下降,IKKB、CCL2蛋白表达也下调,ICAM1蛋白表达无明显变化,并且沉默TLR4后能抑制上述基因表达下调,沉默TLR2作用不明显.同时PPS能减弱T739细胞胞核的NF-κBp65 DNA结合活性及下调NF-κB p65胞核表达;沉默TLR4后能抑制NF-κB p65的DNA结合活性的降低与NF-κB p65胞核表达的下调.结论:猪苓多糖主要经TLR4信号通路抑制相关基因表达、NF-κB p65 DNA结合活性与胞核表达,TLR2信号通路也参与了2个基因表达的介导作用.     

右美托咪定抑制单肺通气兔肺组织炎性细胞TLR4、NF-κB和ICAM-1mRNA的表达

目的观察右美托咪定对兔单肺通气期间肺组织损伤及Toll样受体4(TLR4)、核因子κB p65(NF-κB p65)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)mRNA表达的影响。方法 30只新西兰白兔随机分为3组:双肺通气组(T组)、单肺通气组(O组)、右美托咪定联合单肺通气组(D-O组),每组10只。T组行双肺通气3.5 h,O组、D-O组于双肺通气30 min后行右单肺通气3 h。D-O组于气管切开前静脉泵注右美托咪定1μg/kg(10 min泵注完毕),随后以1μg/(kg·h)的速度持续泵注;T组、O组则持续泵注等容量的生理盐水。各组于实验结束后处死动物,取下左侧肺组织,进行肺组织湿/干(W/D)质量比测量;采用HE染色,光镜下观察双侧肺组织病理学改变;并采用实时定量PCR法检测左侧肺组织TLR4、NF-κB p65、ICAM-1 mRNA的表达。结果与T组比较,O组和D-O组左肺W/D比均显著增加;与O组比较,D-O组左肺W/D比显著降低。与T组比较,O组、D-O组肺组织病理学损伤程度均明显加重,但D-O组肺损伤程度明显较O组减轻。与T组比较,O组肺组织中TLR4、NF-κB p65、ICAM-1 mRNA的表达均显著升高,而D-O组肺组织中TLR4、NF-κB p65、ICAM-1 mRNA表达则显著低于O组。结论右美托咪定通过抑制TLR4、NF-κB p65 mRNA的水平,减轻炎症和兔单肺通气所致的肺组织损伤。     

生殖支原体脂质相关膜蛋白诱导宫颈上皮细胞表达人β防御素2

目的观察生殖支原体脂质相关膜蛋白(LAMP)能否诱导宫颈上皮细胞表达人β防御素2(hBD-2),并探讨其可能的调控机制。方法体外培养End1/E6E7人宫颈上皮细胞,用不同浓度的LAMP作用细胞48 h,反转录PCR检测hBD-2 mRNA的表达,Western blot法检测hBD-2蛋白的表达;用Toll样受体2(TLR2)和TLR6中和抗体孵育End1/E6E7细胞,并用TLR2、TLR6和MyD88负显性突变体转染细胞,以明确TLR2、TLR6和MyD88在介导hBD-2表达中的作用;Western blot法检测核因子κB(NF-κB)p65亚基核转位情况,电泳迁移率实验(EMSA)分析LAMP处理前后NF-κB的DNA结合活性;采用NF-κB抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)处理,观察对hBD-2表达的影响。结果生殖支原体LAMP可诱导End1/E6E7细胞表达hBD-2mRNA和蛋白。TLR2和TLR6中和抗体以及其负显性突变体转染后,能降低hBD-2表达;MyD88负显性突变体也能显著抑制LAMP诱导的hBD-2表达。Western blot结果显示,LAMP处理后可诱导p65核转位,并能增强NF-κB的DNA结合活性。而NF-κB抑制剂PDTC处理后,hBD-2表达降低。结论生殖支原体LAMP可诱导End1/E6E7细胞表达hBD-2,可能受TLR2、TLR6/MyD88/NF-κB调控。     

生殖支原体脂质相关膜蛋白诱导宫颈上皮细胞表达人β防御素2北大核心CSCD

目的观察生殖支原体脂质相关膜蛋白(LAMP)能否诱导宫颈上皮细胞表达人β防御素2(hBD-2),并探讨其可能的调控机制。方法体外培养End1/E6E7人宫颈上皮细胞,用不同浓度的LAMP作用细胞48 h,反转录PCR检测hBD-2 mRNA的表达,Western blot法检测hBD-2蛋白的表达;用Toll样受体2(TLR2)和TLR6中和抗体孵育End1/E6E7细胞,并用TLR2、TLR6和MyD88负显性突变体转染细胞,以明确TLR2、TLR6和MyD88在介导hBD-2表达中的作用;Western blot法检测核因子κB(NF-κB)p65亚基核转位情况,电泳迁移率实验(EMSA)分析LAMP处理前后NF-κB的DNA结合活性;采用NF-κB抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)处理,观察对hBD-2表达的影响。结果生殖支原体LAMP可诱导End1/E6E7细胞表达hBD-2mRNA和蛋白。TLR2和TLR6中和抗体以及其负显性突变体转染后,能降低hBD-2表达;MyD88负显性突变体也能显著抑制LAMP诱导的hBD-2表达。Western blot结果显示,LAMP处理后可诱导p65核转位,并能增强NF-κB的DNA结合活性。而NF-κB抑制剂PDTC处理后,hBD-2表达降低。结论生殖支原体LAMP可诱导End1/E6E7细胞表达hBD-2,可能受TLR2、TLR6/MyD88/NF-κB调控。     

生殖支原体脂质相关膜蛋白经Toll样受体2激活NF-κB

目的 探讨生殖支原体(Mg)脂质相关膜蛋白(LAMPs)能否经Toll样受体2(TLR2)激活核转录因子κB(NF-κB).方法 提取MgLAMPs刺激THP-1细胞,ELISA检测NF-κBp65活化水平,RT-PCR检测THP-1细胞TLR2 mRNA的表达,随后ELISA检测TLR2中和抗体对LAMPs激活NF-κBp65的影响,最后用LAMPs刺激瞬时共转染pFLAG-TLR2、pNF-κB-luc、pRL-TK的293T细胞,双荧光素酶报告基因分析TLR2在LAMPs激活NF-κB中的作用.结果 LAMPs能诱导THP-1细胞激活NF-κBp65,并且与LAMPs浓度呈明显的剂量依赖性,当LAMPs为4.0μg/ml时NF-κBp65活化程度最高;LAMPs能上调THP-1细胞TLR2 mRNA的表达;TLR2中和抗体能使LAMPs激活NF-κBp65的活化程度降低60%;共转染pFLAG-TLR2浓度的增加,NF-κB的活化程度明显增加,并且与TLR2的转染量呈剂量依赖性.结论 Mg LAMPs能经TLR2激活NF-κB,TLR2介导的激活在LAMPs发挥致病性过程起着重要作用.     

白藜芦醇对惊厥持续状态大鼠海马Toll样受体4、核因子-κB、Caspase-3表达的影响

目的观察大鼠惊厥持续状态(SC)后脑组织海马中Toll样受体4(TLR4)、核因子-κB(NF-κB)和半胱氨酸门冬氨酸特异性蛋白酶3(Caspase-3)的表达及神经细胞凋亡的变化,并探讨白藜芦醇(Res)对三者的影响。方法 106只SD大鼠随机分为对照组(A)、SE组(B)和白藜芦醇干预组(C),其中B组再随机分为B1~B4组(分别于惊厥后4h、24h、48h和72h处死),B组和C组采用氯化锂-匹罗卡品法制作大鼠SC模型,C组在大鼠惊厥终止后30min,给予30 mg/kg白藜芦醇腹腔注射,每天1次,连用3d,于惊厥后72 h处死。免疫组织化学法检测海马TLR4、NF-κB/p65蛋白的表达变化;RT-PCR技术检测海马TLR4、Caspase-3 mRNA表达的动态改变;TUNEL法检测神经细胞凋亡数的变化。结果免疫组织化学显示,B组各时间点TLR4蛋白的表达均明显高于A组(P0.05),并随时间延长明显增高;C组TLR4蛋白表达较B4组显著降低(P0.01)。B组可见NF-кB/p65蛋白在胞核内有不同程度表达,与A组比较差异有统计学意义(P0.05)。C组与B4组比较,NF-κB/p65蛋白表达水平明显降低(P0.01)。RT-PCR显示,B组各时间点TLR4、Caspase-3 mRNA的表达均较A组高(P0.05),且随时间延长逐步升高,惊厥后72h达高峰;C组海马TLR4、Caspase-3mRNA的表达明显低于B4组(P0.05)。B组在惊厥24h后海马CA1区TUNEL阳性细胞数已显著高于A组(P0.01),72h达高峰,而C组TUNEL阳性细胞数较B4组显著下降(P0.01)。结论 SC后大鼠海马TLR4、NF-κB/p65和Caspase-3的表达增强。白藜芦醇可下调匹罗卡品致惊厥持续状态大鼠海马TLR4、NF-κB/p65和Caspase-3的表达,并使神经细胞凋亡减少;提示白藜芦醇对SC引起的脑损伤可能有保护作用。     

LPS诱导MC3T3-E1成骨细胞增殖并增加NF-κB p65蛋白的表达

目的： 研究LPS-NF-κB信号通路在骨形成过程中的作用。方法: MC3T3-E1成骨细胞常规培养,待细胞融合率为80%时,分别加入100 μg/L和500 μg/L LPS处理6 h。流式细胞仪检测细胞周期,计算细胞DNA相对增殖指数;RT-PCR法检测LPS处理成骨细胞后NF-κB mRNA的表达;蛋白质印迹法（Western blotting）检测LPS处理成骨细胞后NF-κB p65蛋白的表达;细胞免疫荧光法检测LPS处理成骨细胞后NF-κB p65的核易位情况;电泳迁移率变动分析（EMSA）LPS处理MC3T3-E1细胞后NF-κB活力的变化情况。结果: 100 μg/L和500 μg/L LPS可诱导MC3T3-E1成骨细胞增殖;LPS处理成骨细胞后NF-κB mRNA的表达与正常组比较无显著变化（P>0.05）,而NF-κB p65蛋白的表达明显高于对照组（P<0.01）;LPS处理成骨细胞后免疫荧光法可明显观察到NF-κB p65从细胞质转移入细胞核,且EMSA结果显示LPS处理组细胞核内NF-κB结合活性增加。结论: 低浓度的LPS可促使成骨细胞增殖,此过程中并不影响NF-κB p65的基因表达水平,但能增加NF-κB p65蛋白的表达并提高细胞核内NF-κB的结合活性。     

金黄色葡萄球菌对Bcap-37细胞TLR2和IL-1β、TNF-α以及NF-kB表达的影响

目的 观察金黄色葡萄球菌对Bcap-37细胞Toll样受体2(TLR2)的表达以及对促炎性细胞因子、核因子κB (NF-κB)的影响.方法 用金黄色葡萄球菌处理Bcap-37细胞,采用RT-PCR检测TLR2 mRNA的表达,流式细胞术检测TLR2蛋白的表达,ELISA分别检测IL-1 β和TNF-α的分泌,Western blot检测NF-κB的表达变化.结果 金黄色葡萄球菌作用于Bcap-37细胞后,TLR2 mRNA和蛋白水平的表达量随着作用时间延长而逐渐增高,分别在4h和6h达到高峰,之后又逐渐下降(P＜0.05).IL-1β、TNF-α的表达呈现明显的时间依赖性增高(P＜0.05),IL-1β在12 h到达峰值后下降,TNF-α在16 h表达仍然很高.NF-κB的表达随着刺激时间的延长也呈现时间依赖性增高,在12 h时表达量最高,14 h开始下降.结论 金黄色葡萄球菌能上调Bcap-37细胞TLR2 mRNA和蛋白的表达,激活Bcap-37细胞NF-κB的表达,促进IL-1β和TNF-α的分泌.     

匹诺塞林缓解大鼠肝细胞系BRL-3A低氧/复氧损伤

目的探讨匹诺塞林(PIN)对低氧/复氧(H/R)诱导的大鼠肝细胞损伤的保护作用及其可能机制。方法将大鼠肝细胞(BRL-3A细胞系)分为正常对照组、PIN实验组、低氧复氧损伤模型组和PIN预处理组。CCK-8检测细胞存活率;Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞计量术检测细胞凋亡;检测细胞培养液中谷丙转氨酶(ALT)活性;ELISA检测TNF-α和IL-1β含量;Western blot检测细胞中TLR4、IκB-α和NF-κB P65蛋白水平;RT-q PCR检测细胞中TLR4、IκB-α和NF-κB P65mRNA表达。结果在H/R条件下细胞存活率明显降低(P0.01),细胞凋亡率增高(P0.001),ALT活性升高(P0.01),IL-1β和TNF-α含量增多(P0.01),TLR4和NF-κB P65蛋白与mRNA表达水平显著提高(P0.01)而IκB-α降低(P0.05);经PIN预处理后,细胞存活率显著提高(P0.01),细胞凋亡率显著减小(P0.001),ALT活性降低(P0.01),IL-1β和TNF-α含量降低(P0.01),TLR4和NF-κB P65蛋白与mRNA表达水平明显降低(P0.01)而IκB-α升高(P0.05)。结论 PIN对H/R诱导的BRL-3A肝细胞的损伤具有保护作用,且该作用可能是通过TLR4/NF-κB信号通路实现的。     

猪苓多糖对膀胱癌细胞株T739 Toll信号通路相关基因mRNA表达的影响

目的 探讨猪苓多糖(PPS)对膀胱癌细胞株T739 Toll信号传导相关基因mRNA基因表达影响.方法 采用SYBR Green嵌合荧光定量Real Time-PCR,观察猪苓多糖(0.25 mg/mL)刺激T739不同时间点CD14、TLR2、TLR4、MD-2、My-dd88、TRAF6、TIRAP、IRAK1、TOLLIP、NFKB1、NFKB2、Rel A、CHUK、CCL2、ICAM1、ECSIT、MAP3K1和IKBKB等18个基因mR-NA相对表达量(Ratio),设LPS和空白组作对照.结果 猪苓多糖组CD14、TLR2、MD-2、NFKBI、CHUK、MAP3K1和IKBKBmRNA表达有显著性变化,Ratio分别为2.85、3.12、4.74、3.39、4.45、40.25和0.07,其它基因表达无明显变化;LPS组CD14、TLR4、ICAM1、NFKB1和IKBKB表达增加,2.0相似文献   

LPS通过TLR4信号通路诱导人肾小管上皮细胞株(HK-2)表达hBD-2

目的研究LPS体外刺激人肾小管上皮细胞株(HK-2)是否诱导表达hBD-2,并进一步探讨该表达与TLR4/NF-κB信号传导通路的关系。方法给予不同质量浓度的LPS(0.01、0.1、1、10μg/ml)刺激HK-2细胞12 h,再应用TLR4及NF-κB阻断剂预处理HK-2细胞1 h后,给予质量浓度为1μg/ml的LPS作用12 h,采用实时荧光定量PCR检测HK-2细胞hBD-2 mRNA的表达,ELISA检测细胞上清中hBD-2的表达。结果 1)LPS能诱导HK-2细胞hBD-2 mRNA及蛋白的表达,且这种表达具有质量浓度依赖性;2)TLR4阻断剂能抑制LPS对HK-2细胞表达hBD-2的诱导作用,与未阻断之前相比差异具有统计学意义(P<0.01);3)NF-κB阻断剂能抑制LPS对HK-2细胞表达hBD-2的诱导作用,与未阻断之前相比差异具有统计学意义(P<0.01)。结论 LPS可能通过TLR4/NF-κB信号传导通路诱导HK-2细胞表达hBD-2,将为泌尿系统感染防治提供新靶点。     

LPS致大鼠肺泡巨噬细胞NF-κB促进TNF-α分泌

目的: 观察脂多糖（LPS）致大鼠肺泡巨噬细胞（AMs）中核因子NF-κB活性及其调控肿瘤坏死因子-α（TNF-α）分泌的作用。 方法: LPS作用大鼠AMs后，用电泳迁移率改变分析法（EMSA）测NF-κB活性；用特异的反义寡核苷酸阻断NF-κB亚基（p65）后，Western blotting检测p65表达变化；ELISA法检测细胞上清中TNF-α的含量。 结果: 于LPS作用AMs后4 h，NF-κB活性达到峰值，24 h仍维持在高水平；作用后4 h上清中TNF-α的含量达到峰值。反义寡核苷酸阻断NF-κB亚基（p65）表达后，LPS致AMs上清中TNF-α的含量显著低于未阻断组（P<0.01）。结论: LPS致大鼠AMs中NF-κB正向调控TNF-α分泌。     

TLR4-TRPC6在LPS致16HBE细胞内NF-κB P65表达和核转位的作用

目的:探讨Toll样受体4(TLR4)和瞬时受体电位通道蛋白6(TRPC6)信号通路在细菌脂多糖(LPS)诱导气道上皮细胞16HBE内NF-κB P65表达和核转位的作用,为气道炎症的发生机制提供实验依据。方法:用LPS(1mg/L)作用16HBE细胞0、0.5、2、6、12和24 h后,分别使用RT-PCR和Western blot法检测核因子κB (nuclear factor-κB,NF-κB) P65的mRNA和蛋白表达情况,并用免疫细胞化学染色法检测NF-κB P65的核转位。用RT-PCR、Western blot和免疫细胞化学染色法检测TLR4抑制剂CLI-095(5μmol/L)对LPS(1mg/L)诱导16HBE细胞NF-κB P65表达以及核转位的影响。用RT-PCR、Western blot和免疫细胞化学染色法检测TRPC6激动剂Hyp9(10μmol/L)对LPS(1mg/L)诱导16HBE细胞内NF-κB P65表达以及核转位的影响。结果:LPS上调16HBE细胞NF-κB P65的mRNA和蛋白表达及核转位。TLR4抑制剂CLI-095抑制LPS诱导的16HBE细胞内NF-κB P65的mRNA和蛋白表达及核转位。TRPC6激动剂Hyp9加重LPS诱导的16HBE细胞内NF-κB P65的mRNA和蛋白表达及核转位。结论:LPS通过TLR4-TRPC6信号通路诱导16HBE细胞内NF-κB P65表达和核转位。     

溶血磷脂酸对基质金属蛋白酶-9表达及活性的影响

目的观察溶血磷脂酸（Lysophosphatidie Acid,LPA）对人单核细胞株THP-1细胞基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinases-9）表达及活性和NF-κB p65表达活性的影响,探讨MMP-9在LPA致动脉粥样硬化中的作用及机制。方法以不同浓度水平LPA（0-10μmol/L）刺激人THP-1细胞4h,RT-PCR法测定MMP-9mRNA表达,酶谱法检测MMP-9活性,westernblot检测核蛋白NF-κB p65表达变化。结果随着LPA剂量的增加,MMP-9表达及活性,核蛋白NF-κB p65表达逐渐增强,在LPA1μmol/L时达到最高点,然后逐渐减弱,LPA以剂量依赖的方式激活NF-κB,上调THP-1细胞MMP-9表达,增加MMP-9活性。结论LPA可能通过激活NF-κB,在转录水平促进THP-1细胞MMP-9mRNA表达,并增强其活性,促进粥样硬化发生和发展。     

甘草酸对LPS 诱导的IEC-6 细胞NF-κB 通路及炎症因子表达的影响

目的:研究甘草酸(GA)对脂多糖(LPS)诱导肠上皮细胞IEC-6发生炎症应激的影响,并进一步探讨其炎症调控的作用机制。方法:以IEC-6细胞株为研究对象,实验分Control组、LPS模型组、LPS+GA组、GA组,Western blot法检测TLR4、CD14、MyD88、IκBα、p-IκBα、NF-κB p65表达变化; RT-qPCR和Western blot检测下游炎症基因的mRNA水平及蛋白表达。结果:与Control组相比,LPS诱导后IEC-6细胞中TLR4、CD14、MyD88的蛋白表达水平上调,IκBα的磷酸化水平显著升高及NF-κB p65的核转位增加(P0. 05),同时上调ICAM-1、COX-2、i NOS和IL-6炎症相关基因表达,并减少IL-10表达(P0. 05),甘草酸干预后可显著逆转上述改变,结果均具有统计学意义(P0. 05)。结论:甘草酸能抑制LPS活化的TLR4/NF-κB信号通路,进而下调LPS诱导的促炎基因表达,减轻肠上皮细胞的炎症性损伤。     

核因子κB p65反义寡核苷酸对大鼠肝星状细胞增殖和I型胶原表达的影响

目的 探讨核因子κB(NF-κB)p65反义寡核苷酸(ASOND)对大鼠肝星状细胞(HSC)增殖和I型胶原表达的影响.方法 Ⅳ型胶原酶消化密度梯度离心法分离培养大鼠HSC;脂质体介导的不同浓度的NF-κB p65 ASOND(0.001、0.01、0.1和1μmol/L)进入HSC;台盼蓝染色排斥法检测NF-κBp65 ASOND对HSC的毒性实验并检测各组乳酸脱氢酶(LDH)活性;MTT法测定NF-κB p65 ASOND对1mg/LTNF-α刺激后HSC增殖影响;RT-PCR法和ELISA法检测不同浓度NF-κB p65 ASOND对1mg/LTNF-α刺激后HSC I型胶原表达的影响.结果 转染NF-κB p65 ASODN后,HSC细胞NF-κB蛋白的表达下降,不同浓度(0.001、0.01、0.1和1 μmol/L)的NF-κB p65 ASOND对于体外培养HSC的存活率和LDH无明显影响(P>0.05),0.01～μmol/L的NF-κB p65 ASOND抑制HSC的增殖,lmg/L TNF-α刺激HSC的I型胶原蛋白和mRNA的表达,且随浓度的增加作用增强(P<0.05).结论 NF-κB p65 ASOND可通过抑制NF-κB活性减少HSC活化增殖及Ⅰ型胶原生成,从而减少细胞外基质的产生.     

Toll样受体4在高氧暴露对小胶质细胞功能影响中的作用

目的:探讨Toll样受体4(TLR4)在高浓度氧暴露对小胶质细胞功能的影响.方法:体外培养N9小胶质细胞(TLR4野生型)和EOC20小胶质细胞(TLR4敲除型),给予950 mL/L高氧分别暴露不同时段,建立高氧损伤细胞模型.RT-PCR检测N9细胞TLR4 mRNA表达时序变化;Western blot法检测N9细胞TLR4蛋白表达;通过抗氧化剂N-乙酰半胱氨(N-acetyl-L-cysteine,NAC)干预,观测950 mL/L高氧暴露后2h及6h的N9和EOC20小胶质细胞内的活性氧(ROS)含量、NF-κB核转录活性及细胞上清中TNF-α含量.结果:高浓度氧暴露的N9小胶质细胞TLR4的表达上调,并呈一定时间依赖性,同时ROS活性,核转录因子NF-κB活性,TNF-α表达明显增高(P＜0.05).抗氧化剂NAC干预后,ROS活性明显降低,核转录因子NF-κB活性明显降低,细胞上清内TNF-α水平亦显著下调(P＜0.05).与N9小胶质细胞相比,高氧暴露后各时间点EOC20细胞的ROS活性,核转录因子NF-κB活性以及TNF-α表达均较低(P＜0.05).结论:TLR4参与调控高氧导致的小胶质细胞ROS的形成及炎症因子的释放.     

白藜芦醇抑制肾移植大鼠肾损伤

目的探究白藜芦醇对肾移植大鼠肾损伤的改善作用及作用机制。方法将40只大鼠分为假手术组、模型组(同种异体肾移植手术)、白藜芦醇高和低剂量组[40和20 mg/(kg·d),腹腔注射,连续7 d]。术后24 h,检测血清Cr、BUN、SOD和MDA水平,RT-qPCR检测肾组织Bax和Bcl-2 mRNA表达,Western blot检测IKKα、p-IκBα和NF-κB p65蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组血清Cr、BUN和MDA含量增高,SOD活性降低,肾组织Bax mRNA表达增加,Bcl-2 mRNA表达降低,IKKα、p-IκBα和NF-κB p65蛋白表达增加(P0.05);与模型组比较,白藜芦醇显著降低血清Cr、BUN和MDA含量,提高SOD活性,降低Bax mRNA、IKKα、p-IκBα和NF-κB p65蛋白表达,提高Bcl-2 mRNA表达(P0.05)。结论白藜芦醇对肾移植大鼠肾损伤具有保护作用,其作用机制与抑制NF-κB信号通路的活化有关。     

乳酸抑制脂多糖介导的核因子-κB p65入核转录及环氧化酶-2转录

目的 探讨嗜酸乳杆菌代谢产物乳酸(LA)对内毒素(LPS)介导的NF-κB p65入核、转录及环氧化酶-2(COX-2)转录的抑制作用.方法 以体外培养的大鼠肠黏膜微血管内皮细胞(RIMMVECs)为材料,设对照组、LPS组、LA预处理组和NF-κB特异性阻断剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)预处理组4个实验组.LPS作用30min后,Western blotting检测不同实验组细胞核、细胞质内NF-κB p65蛋白水平,LPS作用9h后,实时荧光定量PCR法检测NF-κB p65、COX-2 mRNA水平.结果 LPS作用30min后,各实验组细胞NF-κB p65蛋白总量差异不显著,但LA和PDTC预处理组细胞核内NF-κB p65比例显著低于LPS组;LPS作用9h后,LA和PDTC预处理组细胞NF-κB p65和COX-2 mRNA水平显著低于LPS组.结论 乳酸具有类似NF-κB阻断剂的作用,可以抑制LPS介导的NF-κB p65入核、转录,抑制NF-κB下游靶基因如COX-2的转录,从而发挥抗炎作用.     

抑制TLR4信号降低Raji淋巴瘤细胞的增殖及侵袭

目的探讨Toll样受体4(TLR4)是否通过核因子κB(NF-κB)信号途径下调Bcl2和基质金属蛋白酶9(MMP-9)而抑制淋巴瘤细胞的增殖与侵袭力。方法先采用CCK-8法检测(10、35、60、110、170、230)μmol/L TLR4抑制剂TAK-242处理人淋巴瘤Raji细胞2、6、24h,确定最佳处理浓度和时间。随后将Raji细胞分为对照组和(10、60)μmol/L TAK-242处理24 h,Transwell~(TM)法检测细胞侵袭情况,反转录PCR法检测TLR4、NF-κBp65的mRNA水平,Western blot法检测TLR4、NF-κBp65、Bcl2和MMP-9的蛋白水平。结果与对照组相比,TAK-242处理24h,Raji细胞的增殖和侵袭能力降低,抑制TLR4后,NF-κBp65的mRNA和蛋白水平降低,Bcl2、MMP-9蛋白水平降低。结论抑制TLR4下调NF-κB信号途径降低Bcl2和MMP-9抑制淋巴瘤细胞的增殖与侵袭力。