延胡索乙素对低O2高CO2肺动脉高压大鼠c-jun、c-fos表达的影响

目的: 研究延胡索乙素(dl-THP)对慢性低O2高CO2性肺动脉高压大鼠血管重构的影响及其机理.方法: 大鼠每天置于低O2高CO2舱中8小时造型.4周后,右心导管法测肺动脉压(mPAP);光镜下测定肺细小动脉管壁面积/管总面积(WA/TA )、肺细小动脉中膜平滑肌细胞核密度(SMC)、肺细小动脉中膜厚度(PAMT )等反映肺血管重建情况的指标;免疫组化法检测Ⅰ型胶原的表达量;原位杂交法检测c-jun mRNA、c-fos mRNA的表达量.结果:模型组的mPAP显著增高,光镜下WT/TA 、PAMT、SMC显著增高;肺细小动脉I型胶原的相对含量显著增高;肺细小动脉c-jun mRNA、c-fos mRNA的表达显著增高.dl-THP治疗可抑制上述病变发生.结论:延胡索乙素能明显抑制肺动脉血管的重构,而抑制c-jun mRNA、c-fos mRNA表达可能是其重要的机制之一.     

隔药灸脐对卵巢早衰模型大鼠Bcl-2、Bax蛋白和mRNA表达的影响

目的观察隔药灸脐对卵巢早衰模型大鼠Bcl-2和Bax表达的影响,探讨其对卵巢的保护机制。方法采用腹腔注射环磷酰胺建立大鼠卵巢早衰模型。48只雌性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、隔药灸脐组、西药组,每组12只。隔药灸脐组大鼠隔药灸"神阙",30 min/d,隔日1次,连续14 d;西药组大鼠予戊酸雌二醇灌胃,每日1次,连续14 d。采用免疫组化、Western blot和实时荧光定量PCR检测大鼠卵巢凋亡相关因子Bcl-2、Bax蛋白和mRNA的表达。结果模型组大鼠卵巢质量明显低于正常组(P0.05)。Bcl-2、Bax蛋白主要表达在细胞胞浆中,隔药灸脐组和西药组较模型组卵泡颗粒细胞Bax表达范围明显缩小,Bcl-2表达范围明显增加。与正常组比较,模型组大鼠卵巢Bcl-2蛋白和mRNA表达明显降低(P0.05,P0.01),Bax蛋白和mRNA表达显著升高(P0.05,P0.01);与模型组比较,隔药灸脐组和西药组大鼠卵巢Bcl-2蛋白和mRNA表达显著升高(P0.05,P0.01),Bax蛋白和mRNA表达明显降低(P0.05,P0.01)。结论隔药灸脐可能通过上调卵巢早衰模型大鼠卵巢Bcl-2和下调Bax的表达,改善卵巢功能。     

肺心汤对低氧性肺动脉高压模型大鼠低氧诱导因子-1α及血管内皮生长因子的影响

目的探讨肺心汤对低氧性肺动脉高压(hypoxic pulmonary hypertension,HPH)模型大鼠低氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的影响及其治疗HPH的作用机制。方法将40只健康雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、肺心汤组和硝苯地平组,每组10只。采用常压间断缺氧法复制HPH大鼠模型。除正常对照组外,其余各组均置于自制的有机玻璃缺氧舱中饲养,每天缺氧8h,持续14天后,正常对照组及模型组以30mL/kg蒸馏水灌胃;肺心汤组及硝苯地平组以相应药物灌胃(28g/kg、20mg/kg),均每天1次,连续灌胃14天,且在给药同时继续间断缺氧14天。末次给药后次日行平均肺动脉压力(mean pulmonary arter ypressure,mPAP)检测、肺小动脉形态学检测,测定肺动脉管壁面积/管总面积比值(WA%);分别采用免疫组织化学及原位杂交技术检测HIF-1α和VEGF的蛋白及mRNA表达。结果与正常对照组比较,模型组mPAP、WA%、HIF-1α和VEGF蛋白及mRNA表达明显增加(P<0.01,P<0.05);与模型组比较,肺心汤组mPAP、WA%、HIF-1α和VEGF蛋白及mRNA表达明显减少(P<0.01,P<0.05)。结论肺心汤通过降低HIF-1α的表达而下调其靶基因VEGF的表达,部分逆转肺血管平滑肌重塑可能是其治疗HPH的作用机制之一。     

平喘宁对哮喘大鼠Bcl-2,Bax,EGF mRNA及PDGF mRNA表达的影响

目的:观察平喘宁对寒性哮喘大鼠的肺功能、气道形态学、肺组织中B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),表皮生长因子(EGF)mRNA及血小板衍生生长因子(PDGF)mRNA表达的影响。方法:将105只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、桂龙咳喘宁组、地塞米松组、平喘宁高、中、低剂量组,每组15只。以卵蛋白致敏及寒冷刺激复制大鼠寒哮模型,造模21 d后,各给药组分别给予桂龙咳喘宁组(10 g·kg~(-1)·d~(-1)),地塞米松组(0.4 mg·kg~(-1)·d~(-1)),平喘宁高、中、低剂量组(19.6,9.8,4.9 g·kg~(-1)·d~(-1)),ig给药,正常组、模型组每天ig给予等量蒸馏水,连续给药4周,处死前测定肺功能,处死后解剖大鼠并取出肺组织。采用免疫组化法测定肺组织中Bcl-2及Bax的表达。采用苏木素和伊红(HE)染色行病理形态学改变观察,采用逆转录—聚合酶链式反应(RT-PCR)半定量检测EGF mRNA,PDGF mRNA表达丰度。结果:与正常组比较,模型组大鼠支气管炎性细胞浸润明显,显著变窄,平滑肌增厚;肺功能下降(P0.01)。Bcl-2表达升高,Bax表达降低(P0.01);EGF mRNA,PDGF mRNA表达升高(P0.01)。与模型组比较,各给药组的肺组织病理改变减轻;肺功能有不同程度的好转(P0.01,P0.05)。各给药组肺组织中Bcl-2表达降低,Bax表达增加(P0.01,P0.05)。各给药组EGF mRNA,PDGF mRNA表达水平降低(P0.01,P0.05)。结论:平喘宁可降低哮喘大鼠Bcl-2蛋白的表达,升高Bax蛋白的表达;抑制EGF mRNA,PDGF mRNA表达,从而抑制细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)通路活化,减轻炎性反应,改善肺功能,抑制气道平滑肌增生,延缓气道重塑而治疗哮喘。     

燧心胶囊对慢性心力衰竭大鼠凋亡相关基因Bcl-2和Bax表达的影响

目的:以慢性心力衰竭大鼠为研究对象,测定心肌组织Bcl-2、Bax mRNA水平及其蛋白表达,以探究燧心胶囊干预心室重塑的作用机制。方法:将60只大鼠随机分为假手术组、模型对照组、地高辛组、卡托普利组、燧心胶囊低剂量组、燧心胶囊高剂量组。采用腹主动脉缩窄术建立大鼠慢性心力衰竭模型,连续给药12周。Real time PCR检测心肌细胞凋亡基因Bcl-2 mRNA、Bax mRNA水平;免疫组化法观察大鼠心肌细胞凋亡蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果:与模型对照组比较,卡托普利组、燧心胶囊低、高剂量组大鼠Bcl-2 mRNA水平及其蛋白表达增高,Bax mRNA水平及其蛋白表达降低,Bcl-2/Bax则显著性增高,差异具有统计学意义(P0.05或P0.01)。其中燧心胶囊高剂量组对Bcl-2和Bax mRNA及其蛋白的调控程度较低剂量组显著(P0.05)。结论:高剂量燧心胶囊能够调控凋亡基因Bcl-2和Bax mRNA水平及其蛋白表达,抑制心肌细胞程序性死亡,延缓心力衰竭的进程。     

参麦注射液对急性束缚性应激大鼠大脑皮质Bcl-2/Bax表达及炎症因子的影响

目的观察参麦注射液预处理对急性束缚性应激大鼠大脑皮质Bcl-2/Bax及炎症因子表达的影响,并探讨其作用机制。方法将24只雄性SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组、参麦对照组、模型组、参麦预处理组,每组6只。采用专业大鼠固定器束缚大鼠2h来模拟急性应激状态。参麦预处理组于制模前30min、参麦对照组于相应时间腹腔注射参麦注射液15mg/kg;正常对照组和模型组则给予等量0.9%氯化钠注射液。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测制模前、后血浆促肾上腺皮质激素(ACTH)和皮质酮(CORT)水平;制模后,采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测大脑皮质Bcl-2、Bax mRNA表达,蛋白质免疫印迹试验(Western Bolt)检测大脑皮质组织Bcl-2、Bax蛋白表达,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大脑皮质组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)表达水平。结果大鼠急性束缚性应激后血浆ACTH和CORT水平均明显高于应激前(P0.01)。与正常对照组比较,模型组大脑皮质组织Bcl-2 mRNA表达明显降低,Bax mRNA和蛋白表达明显增高(均P0.01),炎症因子TNF-α和IL-6表达量明显增加(均P0.01)。与模型组比较,参麦预处理组大脑皮质组织Bcl-2 mRNA表达明显增高(P0.01),Bax mRNA和蛋白表达明显降低(均P0.01),炎症因子TNF-α和IL-6表达量明显降低(均P0.01)。各组间大脑皮质Bcl-2蛋白表达差异均无统计学意义(P0.05)。参麦对照组各指标影响与正常对照组比较差异均无统计学意义(P0.05)。结论参麦注射液预处理可以维持急性束缚性应激大鼠皮质组织Bcl-2/Bax和炎症因子TNF-α和IL-6表达,从而缓解急性束缚性应激后的急性脑损伤。     

补肾壮督方对大鼠退变髓核组织中miR-155-5p及凋亡相关蛋白的影响

目的 观察大鼠退变椎间盘髓核组织miR-155-5p及凋亡相关蛋白表达差异，及补肾壮督方对其的影响。方法 SD雄性大鼠，采用纤维环全层针刺造模，随机分为空白对照组，模型组，低剂量中药组、中剂量中药组及高剂量中药组。中药干预4周后，TUNEL法检测退变椎间盘中髓核细胞凋亡率，qRT-PCR检测miR-155-5p及Bax、Bcl-2、Cytc mRNA的表达；Western Blot检测髓核组织中active Caspase-3，Bcl-2、Cytc及Bax蛋白表达水平。结果 模型组大鼠髓核细胞凋亡率明显增加(P < 0.05)，Cytc和Bax mRNA及其蛋白表达量均显著增加(P < 0.05)，Bcl-2 mRNA及其蛋白表达量显著下降(P < 0.05)，Bax/Bcl-2比值显著增加(P < 0.05)。中药干预后检测，髓核细胞凋亡率明显减少(P < 0.05)，Cytc和Bax mRNA及其蛋白表达量均明显下降(P < 0.05)，Bcl-2 mRNA及其蛋白显著增加(P < 0.05)，Bax/Bcl-2比值显著减小(P < 0.05)。结论 补肾壮督方可能通过减少active Caspase-3、Cytc和Bax蛋白表达，增加Bcl-2蛋白表达，抑制线粒体凋亡通路，从而改善椎间盘退变；miR-155-5p可能参与髓核细胞凋亡的线粒体凋亡通路。     

红景天苷对常压肺心病大鼠保护作用的研究

目的:研究红景天苷对常压慢性低O2诱发的肺动脉高压、肺心病的保护作用。方法:将SD大鼠50只随机分为正常对照组、低O2、低O2+红景天苷(低、中、高)组。采用图像分析、免疫组化技术,透射电镜等方法,检测各组大鼠肺动脉平均压(mPAP)、右心指数、肺小动脉显微和超微结构,Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的变化。结果:低氧组mPAP、右心指数、肺小动脉显微结构指标:管壁面积/管总面积、肺细小动脉中膜平滑肌细胞核密度、肺细小动脉中膜厚度较对照组明显升高,肺血管重建,肺小动脉Ⅰ型胶原表达增加。红景天苷可减轻上述改变,高剂量组尤为显著;但Ⅲ型胶原各组间无明显差别。结论:红景天苷可降低慢性低O2诱导的肺动脉高压,减轻肺血管结构重建,其机制与抑制肺动脉Ⅰ型前胶原增殖有关。     

参芪利心汤对心力衰竭大鼠心肌细胞的保护作用及机制研究

目的研究参芪利心汤对阿霉素诱导心力衰竭大鼠心肌细胞的保护作用及机制。方法雄性Wistar大鼠随机分为对照组、模型组、依那普利(2.1 mg/kg)组以及参芪利心汤低、中、高剂量(9.975、19.950、39.900 g/kg)组,除对照组外,其余大鼠ip阿霉素诱导心力衰竭模型;各给药组ig相应药物,对照组和模型组ig等体积蒸馏水,1次/d,连续4周。给药结束后,采用心脏彩色多普勒超声仪测定各组大鼠左室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF)、左室短轴缩短率(left ventricular fractional shortening,LVFS)以及每搏心输出量(stroke volume,SV);采用苏木素-伊红(HE)染色法观察各组大鼠心肌组织病理变化;采用透射电镜观察各组大鼠心肌细胞超微结构;采用ELISA法检测各组大鼠血浆N端B型利钠肽(N-terminal B-type natriuretic peptide,NT-pro BNP)及心肌组织三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)含量;采用流式细胞仪检测各组大鼠心肌细胞凋亡情况;采用qRT-PCR法检测各组大鼠心肌组织B淋巴细胞瘤2(B-cell lymphoma 2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2associated X protein,Bax)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子-1α(peroxisome proliferator activated receptorγcoactivator-1α,PGC-1α)m RNA表达情况;采用Western blotting法检测各组大鼠心肌组织Bcl-2、Bax、Caspase-3和p53蛋白表达情况。结果与对照组比较,模型组大鼠LVEF、LVFS和SV显著降低(P0.01),血浆NT-pro BNP含量显著升高(P0.01),心肌组织ATP含量显著降低(P0.01),心肌细胞凋亡率显著升高(P0.01);心肌组织Bcl-2和PGC-1αmRNA表达水平显著降低(P0.01),Bax和Caspase-3 mRNA表达水平显著升高(P0.01);心肌组织Bcl-2蛋白表达显著降低(P0.01),Bax、Caspase-3和p53蛋白表达水平显著升高(P0.01)。与模型组比较,参芪利心汤中、高剂量组和依那普利组大鼠LVEF、LVFS和SV均显著升高(P0.01);血浆NT-pro BNP含量显著降低(P0.01),心肌组织ATP含量显著升高(P0.01),心肌细胞凋亡率显著降低(P0.01);心肌组织Bcl-2和PGC-1αmRNA表达水平均显著升高(P0.01),Bax和Caspase-3 mRNA表达水平均显著降低(P0.01);心肌组织Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P0.01),Bax、Caspase-3和p53蛋白表达水平均显著降低(P0.05、0.01)。结论参芪利心汤能够改善心力衰竭大鼠的心肌结构、能量代谢及心功能,并减少心肌细胞凋亡,其作用机制可能与调控PGC-1α和线粒体凋亡通路相关蛋白表达有关。     

归芪益元膏对重离子辐射诱发体内旁效应中Cyt-C，Bax及Bcl-2表达的影响

目的:探讨归芪益元膏对重离子辐射旁效应大鼠肺肾组织中细胞色素-C(Cyt-C)及Bax,Bcl-2基因表达的影响。方法:Wistar雄性大鼠随机分为7组,归芪益元膏组预先灌胃归芪益元膏2周(灌胃剂量为3.28 g·kg~(-1)·d~(-1)),正常组和辐射组灌胃等量生理盐水。2周后辐射组和归芪益元膏组大鼠右肺予2Gy~(12)C~(6+)离子束单次照射,正常组不予照射。照射后6,12,24 h处死各组大鼠,蛋白免疫印迹(Western blot),免疫组化及实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测各组大鼠右肺、左肺、左肾组织中Cyt-C,Bax,Bcl-2蛋白及mRNA表达。结果:右肺、左肺、左肾中Cyt-C,Bax mRNA表达在照射后6,12,24h均明显上调,而蛋白表达只在照射后24 h明显上调,与正常组比较,差异有统计学意义(P0.01);右肺中,Bcl-2蛋白及mRNA表达只在照射后24 h明显下调,而左肺、左肾中照射后6,12,24 h均明显下调,与正常组比较,差异有统计学意义(P0.01)。右肺、左肺、左肾中,归芪益元膏组Cyt-C,Bax mRNA表达在照射后6,12,24 h较辐射各组明显下调,归芪益元膏组Cyt-C,Bax蛋白表达在照射后24 h较辐射组明显下调,差异有统计学意义(P0.01);右肺中,归芪益元膏组Bcl-2 mRNA及蛋白表达在照射后24 h较辐射组明显上调,左肺、左肾中,归芪益元膏组Bcl-2 mRNA及蛋白表达在照射后6,12,24 h较辐射各组明显上调,差异有统计学意义(P0.01)。结论:重离子辐射大鼠右肺后,左、右肺和左肾组织中Cyt-C,Bax,Bcl-2基因表达异常,归芪益元膏通过延缓Bcl-2表达的下调而抑制Bax,Cyt-C表达的上调,从而起到预防肺肾细胞凋亡,发挥其对重离子辐射诱发体内旁效应损伤的防护作用。     

PBNA-413对心肌缺血/再灌注损伤大鼠凋亡相关蛋白及基因表达的影响

目的:探讨拳参正丁醇提取物-413(Bistortae Rhizoma n-butyl alcohol extract,PBNA-413)对大鼠心肌缺血/再灌注损伤(myocardial ischemia/reperfusion,MI/R)细胞凋亡的影响。方法:将30只SD雄性大鼠随机分为5组,假手术组,MI/R模型组,PBNA-413低剂量组(0.1 mg·kg~(-1)),PBNA-413中剂量组(0.3 mg·kg~(-1)),PBNA-413高剂量组(1.0 mg·kg~(-1))。采用结扎左冠状动脉前降支40 min,恢复血流60 min,复制MI/R模型,记录肢体Ⅱ导联心电图。采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组大鼠心肌组织凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),Caspase-9 mRNA及蛋白表达。结果:大鼠心肌缺血后,模型组大鼠心电图ST段及T波较假手术组明显升高(P0.05,P0.01),PBNA-413处理后ST段及T波降低(P0.01),以中剂量和高剂量的效果好。与假手术组比较,模型组大鼠心肌组织Bax,Caspase-3及Caspase-9蛋白表达升高(P0.05,P0.01),Bcl-2蛋白表达降低(P0.01);与模型组比较,PBNA-413中剂量组Bax及Caspase-3和Caspase-9蛋白表达降低(P0.05,P0.01),Bcl-2蛋白表达升高(P0.01)。除Caspase-9外,Bax,Bcl-2和Caspase-3的基因水平出现与蛋白类似变化。结论:PBNA-413可能通过抑制细胞凋亡从而有效保护MI/R心肌。     

活络效灵丹拆方对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用研究

目的探讨活络效灵丹含药血清对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤的保护作用及其机制。方法取体外培养的乳鼠心肌细胞,建立缺氧/复氧心肌细胞损伤模型。实验分为正常组、模型组(H/R组)、活络效灵丹拆方组和阳性药对照组(单硝酸异山梨酯组)。用MTT比色法检测活络效灵丹对H/R损伤心肌细胞存活率和细胞上清液中LDH漏出量的影响,优选活络效灵丹的最佳配伍组合,并测定各组细胞浆丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性;用RT-PCR法检测心肌细胞Bcl-2 mRNA、Bax mRNA的表达。结果实验优选出活络效灵丹全方、丹参当归配伍、丹参乳香配伍、丹参当归乳香配伍为最佳配伍。与正常组比较,模型组MDA含量升高、SOD活性降低(P<0.01),细胞Bcl-2 mRNA表达降低、Bax mRNA表达增高(P<0.01);与模型组比较,优选的活络效灵丹各配伍组胞浆SOD活性增高、胞浆MDA含量减少(P<0.01),心肌细胞Bax mRNA表达减少、Bcl-2 mRNA表达增高(P<0.01)。结论活络效灵丹对H/R损伤的心肌细胞具有保护作用,其作用机制可能与清除氧自由基、抗脂质过氧化、上调Bcl-2 mRNA和下调Bax mRNA表达等有关。     

电针对脑缺血再灌注损伤小鼠海马神经元凋亡及Bcl-2、Bax表达的影响

目的：观察电针对脑缺血再灌注损伤小鼠海马神经元凋亡及相关基因Bcl-2、Bax表达的影响。方法：复制脑缺血再灌注小鼠模型,电针肾俞、膈俞和百会穴,对照组灌胃喜得镇,分别于治疗第1天和第7天后,以流式细胞术（FCM）法检测小鼠海马细胞凋亡率、Bcl-2、Bax表达。结果：术后第1天,模型小鼠海马细胞凋亡率明显增高,术后第7天较术后第1天增高（P〈0.01）。说明海马细胞由于反复脑缺血再灌注而出现凋亡。模型组术后第1天,海马Bcl-2表达明显下降;术后第7天,则明显增高,并高于术后第1天（P〈0.01）。模型组术后第1天和第7天海马Bax表达均增高（P〈0.01）。电针在两个时点均可上调海马Bcl-2表达,下调Bax表达,降低凋亡率（P〈0.01）。结论：电针具有抑制细胞凋亡、保护神经元的作用。     

红芪总黄酮对离心运动大鼠骨骼肌细胞NF-κB信号通路相关凋亡蛋白表达的影响

目的:探讨红芪总黄酮对离心运动大鼠骨骼肌细胞NF-κB信号通路相关凋亡蛋白表达的影响。方法:健康雄性Wistar大鼠随机分为3组:安静对照组(CG)、离心运动组(EG)和离心运动+药物预处理组(DPG),每组8只。DPG组在离心运动前3 d给予红芪总黄酮灌胃,CG组、EG大鼠给予等量生理盐水灌胃。EG组、DPG组大鼠均采用恒定速度20 m/min,-16°下坡跑台离心运动,持续运动至力竭。RT-qPCR法检测骨骼肌细胞核转录因子kappa B(nuclear factor kappa-B,NF-κB)、B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,bcl-2)、Bcl-2相关X基因(Bcl-2 Associated X Protein,bax)、细胞色素C(cyt c)、半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)mRNA表达的影响,Western blotting法检测骨骼肌细胞pNF-κB、Bcl-2、Bax、Cyt c、Caspase-3蛋白的表达,TUNEL法检测骨骼肌细胞凋亡率。结果:EG组和DPG组NF-κB、Bax、Cyt c、Caspase-3 mRNA和蛋白的表达明显高于CG组(P<0.05),DPG组及EG组的Bcl-2 mRNA和蛋白表达显著低于CG组(P<0.05),Bcl-2/Bax比值也显著低于CG组(P<0.05);与EG组比较,DPG组NF-κB、Bax、Cyt c、Caspase-3 mRNA和蛋白的表达明显降低(P<0.05),DGP组的Bcl-2 mRNA和蛋白表达显著高于EG组(P<0.05),DGP组Bcl-2/Bax比值较EG组也显著增高(P<0.05)。TUNEL染色结果显示,与CG组比较,EG组、DPG组大鼠骨骼肌细胞凋亡指数显著升高(P<0.01);与EG组比较,DPG组大鼠骨骼肌细胞凋亡指数明显降低(P<0.05)。结论:一次离心力竭运动可激活大鼠骨骼肌细胞NF-κB信号分子,启动细胞的凋亡程序;红芪总黄酮能够降低高强度运动引发的应激反应,从而延缓离心运动后骨骼肌疲劳和损伤的发生,其机制可能与降低骨骼肌组织NF-κB、Bcl-2/Bax、Cyt c、Caspase-3表达水平、抑制骨骼肌细胞凋亡有关。     

地黄多糖对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤后氧化应激和细胞凋亡的影响

目的:研究地黄多糖(polysaccharides from Rehmanniae Radix,PRR)对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤后氧化应激和细胞凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:分离并培养乳鼠心肌细胞72 h后随机分为空白组,缺氧/复氧(H/R)模型组,PRR 10,20,40 mg·L~(-1)干预组和舒血宁注射液(SXN,100 mg·L~(-1))干预组,每组设10个复孔。各组细胞经药物干预6 h后,采用噻唑蓝(MTT)检测细胞存活率;检测培养基中天门冬氨酸氨基转移酶(AST),肌酸激酶(CK),乳酸脱氢酶(LDH)活性;测定细胞中超氧化物歧化酶(SOD),过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)含量;采用流式细胞仪检测细胞凋亡状况并计算凋亡率,通过实时荧光定量-聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测凋亡相关基因B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)mRNA表达并计算Bcl-2/Bax表达,通过蛋白质免疫印迹(Western blot)方法检测细胞中凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达并进行半定量分析。结果:与正常组比较,H/R模型组细胞存活率显著降低(P0.01),培养基中AST,CK,LDH活性显著升高(P0.01),细胞中SOD,CAT活性显著降低,MDA含量显著升高(P0.01),细胞凋亡率显著升高(P0.01),细胞中Bcl-2和Bax mRNA表达明显升高(P0.05,P0.01),Bcl-2/Bax表达显著降低(P0.01),Caspase-3蛋白表达显著升高(P0.01);与H/R模型组比较,PRR 20,40 mg·L~(-1)干预组乳鼠心肌细胞存活率明显升高(P0.05,P0.01),培养基中AST,CK,LDH活性明显降低(P0.05,P0.01),细胞中SOD,CAT活性明显升高,且MDA含量明显降低(P0.05,P0.01),细胞凋亡率显著降低(P0.01),细胞中凋亡相关基因Bcl-2 mRNA明显上调而Bax mRNA明显下调,Bcl-2/Bax显著升高(P0.05,P0.01),Caspase-3蛋白表达量明显降低(P0.05,P0.01)。结论:PRR能够通过抑制氧化应激损伤和细胞凋亡而对H/R损伤乳鼠心肌细胞起到一定的保护作用;作用机制可能与其改善抗氧化酶活性,上调抑凋亡基因Bcl-2表达、下调促凋亡基因Bax表达,提高Bcl-2/Bax表达,以及抑制促凋亡蛋白Caspase-3表达有关。     

钩藤生物碱对自发性高血压大鼠胸主动脉成纤维细胞凋亡/增殖及FN、LN的影响

目的 研究钩藤碱、异钩藤碱和钩藤总生物碱对自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rat,SHR)胸主动脉血管外膜成纤维细胞(vascular adventitial fibroblasts, VAF)凋亡、增殖及Bcl-2、Bax、c-Fos、c-Myc、层黏连蛋白(laminin, LN)、纤维层黏连蛋白(fibronectin, FN)的影响。方法 选择8周龄雄性SHR 40只,随机分为模型组、卡托普利组(17.5 mg/kg)、异钩藤碱组(5.0 mg/kg)、钩藤碱组(5.0 mg/kg)和钩藤总生物碱组(50.0 mg/kg),每组8只。另选取8周龄雄性Wistar大鼠8只作为正常组。模型组和正常组灌胃给予等容量生理盐水。各组给药容积为每次10 mL/kg,每周给药6天,连续8周,随体重变化调整给药量。采用Annexin V-FITC结合PI染色、流式细胞术分析胸主动脉VAF凋亡率;免疫组化法检测胸主动脉VAF Bcl-2、Bax、c-Myc、c-Fos、FN及LN蛋白表达;原位杂交法检测胸主动脉VAF转化生长因子-β1(transforming growth factor, TGF-β1) mRNA表达。结果 与模型组比较,各用药组干预4、8周大鼠尾动脉收缩压均降低,胸主动脉VAF凋亡率、Bax蛋白均升高, Bcl-2、c-Fos、FN、LN蛋白及TGF-β1 mRNA均降低,钩藤碱组、异钩藤碱组及钩藤总生物碱组c-Myc蛋白表达均降低,差异均有统计学意义(P<0.05, P<0.01)。与卡托普利组比较,钩藤碱组、异钩藤碱组及钩藤总生物碱组大鼠尾动脉收缩压、c-Fos蛋白表达及TGF-β1 mRNA差异无统计学意义(P>0.05);胸主动脉VAF凋亡率升高, Bcl-2、c-Myc及LN蛋白表达均降低,差异均有统计学意义(P<0.05, P<0.01);钩藤碱组、异钩藤碱组Bax蛋白表达均升高,差异均有统计学意义(P<0.05, P<0.01);异钩藤碱组FN蛋白表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。钩藤碱组、异钩藤碱组及钩藤总生物碱组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 钩藤碱、异钩藤碱和钩藤总生物碱可能通过调节原癌基因Bcl-2和Bax蛋白表达,促进SHR 胸主动脉VAF凋亡,通过下调c-Fos、c-Myc蛋白和TGF-β1 mRNA表达途径抑制SHR 胸主动脉VAF增殖,并通过下调FN和LN蛋白表达而减轻细胞外基质的沉积,从而改善胸主动脉外膜重塑,降低尾动脉收缩压。     

养心康片通过(Akt/AMPK)-mTOR通路抑制心梗后心力衰竭模型兔心肌细胞凋亡的机制

目的:观察养心康片通过[蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)/腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated kinase,AMPK)]-乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)通路对心梗后心力衰竭模型兔心肌细胞凋亡的影响。方法:应用结扎冠脉的方法建立心梗后心力衰竭兔模型,随机分为模型组,养心康组,AMPK抑制剂组(10 mg·kg-1Compound C腹腔注射,每日2次),Akt抑制剂组(10 mg·kg-1casodex灌胃,每日2次)和mTOR抑制剂组(0.5 mg·kg-1rapamycin灌胃,每日2次),并设立正常组,每组5只,共30只。给予养心康片0.51 g·kg-1灌胃,每日1次,正常组和模型组给予等体积的蒸馏水灌胃,共4周。心脏彩超检测心功能,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测心肌B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达,原位末端凋亡法(TUNEL)检测心肌细胞凋亡。结果:与正常组比较,模型组的左室射血分数(LVEF)值降低(P0.01),Bcl-2,Bax蛋白表达量增高(P0.05,P0.01),Bcl-2/Bax降低(P0.01),心肌细胞凋亡率升高(P0.01);与模型组比较,养心康组的LVEF值升高(P0.01),Bax蛋白表达量降低(P0.01),Bcl-2/Bax升高(P0.01),心肌细胞凋亡率降低(P0.01)。与抑制剂各组比较,养心康组的LVEF值升高(P0.01),Bcl-2/Bax升高(P0.01),心肌细胞凋亡率降低(P0.01)。结论:养心康片可通过干预(Akt/AMPK)-mTOR通路调控心肌细胞Bcl-2,Bax蛋白表达水平减少心肌细胞凋亡,改善心梗后心衰模型的心脏功能。