蓝莓下调Toll样受体4表达减轻肝损伤的作用机制

目的研究蓝莓对Toll样受体4(TLR4)表达的调节,进一步探讨其在急性肝损伤中的作用。方法 48只SD大鼠随机分为空白对照组(对照组)、CCl4急性肝损伤组(模型组)、蓝莓低剂量组、蓝莓高剂量组和胸腺肽组。蓝莓低剂量组、蓝莓高剂量组造模开始前先分别给予蓝莓果汁(0.5 ml/100 g、1.0 ml/100 g)灌胃7 d。实验结束时测定肝脏指数、血清ALT、AST含量,WesternBlot检测肝组织TLR4蛋白表达量。结果模型组大鼠的肝脏指数、血清ALT、AST含量(0.047 30±0.002 85、4536.00±535.39,7959.33±108.89)高于对照组(0.031 90±0.002 87,48.00±5.57,137.00±12.53)(P<0.05);蓝莓低、高剂量组上述指标(0.040 80±0.003 77,0.040 80±0.003 81;2138.00±980.32,4049.67±466.01;1247.00±609.00,2063.33±1357.32)均低于模型组,模型组肝组织TLR4蛋白表达量(1.392±0.204)显著高于对照组(0.781±0.132)(P<0.05)。蓝莓低剂量组、高剂量组和胸腺肽组大鼠肝组织TLR4蛋白表达量(1.273±0.203,1.110±0.168,0.943±0.161)低于模型组(1.392±0.204)(P<0.05)。结论蓝莓可能通过下调肝组织中TLR4的表达,起到减轻急性肝损伤的作用。     

蓝莓对免疫性肝纤维化大鼠细胞色素P4502E1表达的影响

目的 观察蓝莓对大鼠免疫性肝纤维化的预防作用及其对细胞色素P4502E1 (CYP2E1)表达的影响.方法 将50只健康清洁级Wistar大鼠随机分为正常对照组(A组)、肝纤维化模型组(B组)、蓝莓原浆预防组(C组)、复方鳖甲软肝片预防组(D组)、蓝莓原浆加复方鳖甲软肝片预防组(E组)共5组,每组10只.除正常对照组外,其余各组均腹腔注射猪血清制备大鼠肝纤维化模型,各预防组在造模同时分别给予蓝莓原浆或(和)复方鳖甲软肝片灌胃,1次/d,共12周.12周末处死大鼠,行肝脏病理组织学检查,测定各组大鼠血清ALT水平、肝组织匀浆超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)及羟脯氨酸(Hyp)含量,采用实时荧光定量聚合酶联反应、Western blot和免疫组织化学法检测大鼠肝组织CYP2E1的mRNA及蛋白质表达. 结果 12周末处死大鼠,A、B、C、D、E各组大鼠血清ALT水平分别为(37.9±4.5) U/L、(49.2±9.8) U/L、(39.9±6.3) U/L、(40.5±5.7) U/L及(38.2±8.4)U/L,各组间差异无统计学意义;各预防组大鼠肝纤维化程度较B组明显减轻(F=95.097,P＜0.05); C、D、E各组大鼠肝组织匀浆Hyp分别为(472.7±44.1)μg/g、(416.1±39.4)μg/g和(429.5±55.1)μg/g,低于B组的(603.2±68.9) μg/g,F=39.315,P＜0.05,差异有统计学意义; SOD水平分别为(2.5±0.4) U/mg、(2.0±0.5)U/mg、(2.2±0.2) U/mg,高于B组的(1.6±0.4) U/mg,F=25.557,P＜0.05,差异有统计学意义;MDA分别为(0.83±0.06) mol/mg、(0.96±0.08) nmol/mg、(0.85±0.06)nmol/mg,低于B组的(1.24±0.15)nmol/mg,F=46.376,P＜0.05,差异有统计学意义;B、C、D、E组大鼠肝组织CYP2E1的mRNA及蛋白质表达高于A组,C、D、E组大鼠肝组织CYP2E1的mRNA及蛋白质表达低于B组,但差异均无统计学意义.结论 蓝莓对猪血清所致大鼠肝纤维化有一定的预防作用;免疫性肝纤维化时,大鼠肝组织CYP2E1的表达无明显改变;蓝莓对CYP2E1的表达无明显影响.     

蓝莓对酒精性肝损伤大鼠肝组织TLR4表达的影响

目的:探讨蓝莓对酒精性肝损伤大鼠的保护作用及可能机制.方法:48只健康SD大鼠随机均分为4组:正常组、蓝莓组、异甘草酸镁组及模型组.除正常组不灌胃乙醇溶液,给予等体积生理盐水外,其余各组均使用560 mL/L的乙醇溶液灌胃.蓝莓组与异甘草酸镁组在灌乙醇溶液1 h后分别灌服蓝莓原浆及异甘草酸镁溶液.4 wk后处死所有大鼠.HE染色观察各组肝脏形态变化,采用自动生化仪检测血清谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、甘油三酯(triglyceride,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)含量;Elisa法测定肝组织匀浆中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)及白介素-8(interleukin8,IL-8)的含量;RT-PCR、Western blot检测大鼠肝组织中Toll样受体4(Toll-likereceptor 4,TLR4)的表达.结果:正常组大鼠HE染色未见异常,模型组HE病理切片出现弥漫性空泡,部分区域出现炎症细胞浸润,蓝莓组与异甘草酸镁组明显少见.与蓝莓组及异甘草酸镁组比较,模型组大鼠血清ALT、AST、TG、TC含量明显升高(F=47.984,14.974,149.338,94.896,均P0.01);蓝莓组及异甘草酸镁组肝组织中SOD的蛋白活性明显高于模型组(F=35.390,P0.01),而TNF-α、IL-8含量、TL R4 mRNA和蛋白质的表达明显低于模型组(F=76.250,37.971,141.932,62.750,均P0.01).结论:蓝莓对酒精性肝损伤大鼠有较好的保护的作用,其机制可能与下调肝组织中TLR4的表达,并降低肝组织中TNF-α、IL-8的含量,提高SOD活性相关.     

四氯化碳诱导大鼠肝纤维化过程中TLR4的作用机制研究

目的 动态观察Kupffer细胞(KCs) Toll样受体4(TLR4)及其蛋白在四氯化碳(CCl4)致大鼠肝纤维化过程中的表达及作用.方法 用40％四氯化碳花生油溶液皮下注射建立肝纤维化模型,于第0、4、6、8、10周收集血液和肝脏组织.检测血清内毒素、Ⅳ型胶原(collagenⅣ,CⅣ)、转化生长因子β1(TGF-β1)水平,并检测KCsTLR4 mRNA表达水平,免疫组化SP法检测肝脏TLR4蛋白、核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)蛋白和组织金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)蛋白表达.结果 大鼠4、6、8、10周组肝组织TLR4蛋白、NF-κB蛋白、纤维化积分和KCs TLR4 mRNA以及血清内毒素、TGF-β1、CⅣ型胶原水平明显升高,同0周组比较差异有统计学意义(P＜0.01).NF-κB蛋白、TLR4蛋白和KCs TLR4 mRNA在第10周时较第8周有轻度下降;肝KCs TLR4 mRNA的表达与血浆内毒素水平呈正相关(r=0.845,P＜0.01),与血清TGF-β1水平成正相关(r=0.665,P＜0.01).结论 在CCl4诱导的肝纤维化过程中,内毒素可上调Kupffer细胞TLR4的表达,其可能为通过TLR4信号途径在肝纤维化中起重要作用.     

TLR4与TLR9在原发性肝癌组织中的表达及意义

目的探讨Toll样受体4(TLR4)、TLR9在肝癌发生、发展中的作用。方法搜集临床经病理证实的肝癌及相应癌旁组织标本、肝血管瘤组织标本,分别用免疫组化法及流式细胞术检测TLR4、TLR9表达。结果肝癌组织中TLR4表达明显低于癌旁及肝血管瘤组织,而TLR9表达明显高于癌旁及肝血管瘤组织,P均<0.05。结论TLR4、TLR9与肝癌的发生、发展有关;乙肝病毒可能通过拮抗TLR4表达、激活TLR9通路促进肝癌的进展。     

TLR2、TLR4和TLR9在慢性重型肝炎患者及肝衰竭大鼠中的表达

目的:观察重型肝炎患者及肝衰竭大鼠中TLR2、TLR4和TLR9的表达,为重型肝炎肝衰竭发病机制的研究提供思路.方法:免疫组织化学法检测慢性重型肝炎患者肝组织及外周血单个核细胞(PBMC)中TLR2、TLR4和TLR9表达,同时平行设立慢性乙型肝炎、肝硬化患者和正常人作为对照.免疫组织化学法检测急性肝衰竭、慢加急性肝衰竭及正常大鼠肝组织中TLR2、TLR4和TLR9表达.阳性对照为大鼠结肠组织.结果:正常人、慢性乙型肝炎和肝硬化患者肝组织中TLR2和TLR9未见表达;慢性重型肝炎患者肝组织中TLR2和TLR9有表达;正常人及慢性乙型肝炎患者PBMC中TLR2、TLR9未见表达,慢性重型肝炎患者PBMC中TLR2和TLR9有表达;正常大鼠肝组织TLR2、TLR9未见表达,急性肝衰竭和慢加急性肝衰竭大鼠肝组织中TLR2、TLR9有表达;TLR4在所有标本中均未见表达,但在阳性对照中有表达;TLR2、TLR9的表达多见于炎性细胞中,在肝实质细胞上表达很少.结论:TLR2、TLR9的高表达与机体的免疫状态密切相关,可能参与了重型肝炎和肝衰竭的发病过程.     

保肝复功水煎剂对急性肝损害大鼠肝组织Toll样受体2、4表达的影响

目的:观察保肝复功水煎剂对急性肝损害大鼠肝脏Toll样受体(TLR)2、4基因表达的影响.方法:采用脂多糖(LPS)腹腔注射制作大鼠急性肝损害模型,将60只大鼠分为正常组、模型组及保肝复功水煎剂低、中、高剂量组.RT-PCR检测肝组织TLR2、TLR4基因表达水平.结果:模型组TLR2、TLR4基因相对表达量均明显高于正常组(P＜0.05);保肝复功水煎剂中、高剂量组TLR2相对表达量明显低于模型(P＜0.05);保肝复功水煎剂高剂量组TLR4相对表达量明显低于模型组(P＜0.05).结论:保肝复功水煎剂对急性肝损害具有防护作用;对TLR2、TLR4基因表达有抑制作用,这可能是其肝脏保护作用的机制之一.     

口服抗生素对NASH大鼠肝组织TLR4信号通路的影响

目的观察口服抗生素对非酒精性脂肪性肝炎大鼠代谢性内毒素血症激活肝脏4型Toll样受体(TLR4)信号通路的影响。方法将30只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组和干预组,后者给予高脂饮食喂养,正常组予普通饲料喂养。干预组大鼠自第9周起给予环丙沙星灌胃。造模12周末,比较各组门静脉血内毒素、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、甘油三酯和空腹血糖水平;计算非酒精性脂肪性肝病评分;采用Real time PCR及Westernblot法检测大鼠肝脏TLR4、胰岛素受体底物-1(IRS-1)mRNA及蛋白表达水平;采用ELISA法检测血清和肝匀浆肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)水平。结果模型组动物门静脉内毒素为0.361±0.018EU/ml,而正常组为0.324±0.013EU/m(l P<0.05);肝脏TLR4 mRNA水平为正常组的7.7倍,IRS-1 mRNA水平下降69%,血清及肝脏TNF-α分别为105.7±30.1pg/ml和608.7±78.8pg/ml,IL-6分别为60.9±12.5pg/ml和756.4±90.8pg/ml,均显著高于正常组(P<0.05);与模型组比,干预组门静脉血内毒素为0.341±0.016EU/m(lP<0.05),NAS积分为4.40±0.26(P<0.05),肝脏TLR4 mRNA和蛋白表达水平分别下降44%和14%,肝脏IRS1 mRNA和蛋白表达水平分别增加2.3倍和1.6倍,TNF-α和IL-6水平分别为531.1±64.6pg/ml和575.1±84.5pg/m(lP<0.05)。结论 NASH大鼠肝脏TLR4信号通路被激活,口服抗生素可减少肠源性内毒素血症,减轻肝脏炎症。     

慢性乙型肝炎患者肝组织Toll样受体2、3的表达水平及临床意义

目的研究慢性乙型肝炎(CHB)患者肝组织Toll样受体(TLR)2、3的表达变化与肝脏炎症活动度、肝纤维化程度的相关性及其临床意义。方法收集桂林市第三人民医院肝病科自2013年1月-2016年12月住院且初次诊断为CHB的患者104例,运用1秒钟快速肝穿刺活组织检查方法获取CHB患者的肝组织,分别进行TLR2、TLR3免疫组化染色,10例肝血管瘤者趋于正常的瘤旁肝组织作为对照组。比较两组TLR2、TLR3与肝脏炎症活动度、肝纤维化程度的相关性。等级资料多组间比较采用KruskalWallis H检验,相关性分析采用Spearman相关分析。结果对照组未见明显的TLR2、TLR3阳性表达;TLR2在CHB患者肝组织中表达较弱,TLR2表达强度与肝组织炎症活动度分级、肝纤维化程度分级无相关性(rs值分别为-0.086和-0.112,P值均>0.05);TLR3在CHB患者肝组织中表达较强,TLR3的表达强度与肝组织炎症活动度分级呈显著的正相关性(rs=0.528,P<0.01),亦与肝组织纤维化分级呈显著的正相关性(rs=0.510,P<0.01)。结论 TLR3可能参与了CHB的某些免疫发病机制和肝纤维化的病理过程。     

蓝莓对肝纤维化大鼠肝组织自噬相关蛋白LC3和Beclin1表达的影响

目的:观察蓝莓对免疫性肝纤维化大鼠肝组织微管相关蛋白轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)及Beclin1表达的影响.方法:60只健康♂SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、蓝莓原浆高剂量组、蓝莓原浆中剂量组、蓝莓原浆低剂量组及复方鳖甲软肝片组.除正常对照组外,其余各组均采用腹腔注射无菌猪血清复制大鼠肝纤维化模型.造模同时各蓝莓组给予不同浓度蓝莓原浆(0.25 m L/100 g、0.5 m L/100 g、1.0 m L/100 g)灌胃,复方鳖甲软肝片组用复方鳖甲软肝片灌胃(0.054 g/100 g),1次/d.12wk处死大鼠,测定血清谷丙转氨酶(alanine transaminase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate transaminase,AST)含量,行肝组织病理学检查;Western blot检测LC3-Ⅱ、Beclin1、Ⅰ型胶原(ColⅠ)的蛋白水平;实时定量PCR(realtime quantitative PCR,q RT-PCR)检测LC3-Ⅱ、Beclin1的m RNA水平.结果:各组大鼠血清ALT、AST水平差异无统计学意义(均P0.05).与正常对照组比较,模型组肝纤维化程度明显(P0.05),LC3-Ⅱ、Beclin1的m RNA及蛋白表达、ColⅠ的蛋白表达明显增高(均P0.01).与模型组比较,蓝莓原浆高、中剂量组肝纤维化程度明显减轻(P0.05),胶原表达减少;LC3-Ⅱ、Beclin1的m RNA、蛋白表达及ColⅠ的蛋白表达明显降低(均P0.01).结论:猪血清所致的大鼠免疫性肝纤维化中自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、Beclin1升高,蓝莓对大鼠免疫性肝纤维化的干预作用可能与下调LC3和Beclin1的基因及蛋白表达,进而抑制自噬有关.     

复方鳖甲软肝片对肝纤维化大鼠肝脏低氧诱导因子1α及其下游分子mRNA表达的影响

[目的]观察复方鳖甲软肝片对肝纤维化大鼠肝组织低氧诱导因子1α(HIF-1α)及其下游分子血管内皮生长因子(VEGF)及结缔组织生长因子(CTGF)mRNA表达的影响,探讨复方鳖甲软肝片抗肝纤维化的作用机制.[方法]采用40％ CCL4 诱导大鼠肝纤维化模型,同时以1 g/(kg·d)的复方鳖甲软肝片灌胃干预6周,常规苏木精-伊红和Masson染色观察大鼠肝组织炎症和纤维化程度,RT-PCR法检测肝组织HIF-lα、VEGF、CTGF基因mRNA表达.[结果]模型组大鼠肝组织炎症和纤维化程度计分较正常组明显增高(P＜0.01),肝组织HIF-1α mRNA、VEGF mRNA及CTGF mRNA的表达较正常组明显增强(P＜0.01,＜0.05),肝组织纤维化程度与HIF-1αmRNA、VEGF mRNA及CTGF mRNA表达均呈明显正相关(均＜0.01),肝组织HIF-1α mRNA与VEGF mRNA、CTGF mRNA表达也呈明显的正相关(均P＜0.01);应用复方鳖甲软肝片干预后,大鼠肝组织炎症和纤维化程度显著减轻(P＜0.01,＜0.05),肝组织HIF-1α mRNA、VEGF mRNA及CTGF mRNA表达明显下降(P＜0.05).[结论]复方鳖甲软肝片下调肝纤维化大鼠肝组织HIF-1α及其下游分子 mRNA 表达可能是其抗肝纤维化作用的机制之一.     

复方鳖甲软肝片治疗免疫性肝纤维化大鼠肝细胞质膜蛋白质组分的变化

目的研究复方鳖甲软肝片治疗肝纤维化大鼠肝细胞质膜蛋白质组分的变化,以寻找与肝纤维化逆转相关的质膜蛋白质。方法以猪血清腹腔注射大鼠8周制备肝纤维化模型,再以复方鳖甲软肝片灌胃治疗8周。采用蔗糖密度梯度离心获得肝组织匀浆和质膜组分,采用免疫印迹法检测质膜的纯度,分析差异蛋白质组学变化。结果病理学检查发现实验8周后,大鼠肝脏发生中度肝纤维化;经鳖甲软肝片治疗8周后肝纤维化程度减轻,基本恢复到正常水平;免疫印迹检测显示质膜组分得到了较好的富集,其中线粒体等其他细胞器蛋白减少;通过差异蛋白质组学分析发现,治疗组中有22个3倍以上差异蛋白质点,准确鉴定了9个蛋白质,通过免疫印迹验证发现了Ⅱ型细胞支架蛋白8和膜联蛋白A2的差异表达。结论鳖甲软肝片治疗后,大鼠肝纤维化发生了逆转,并伴随一些质膜蛋白质的表达变化。     

蓝莓对肝纤维化大鼠血红素加氧酶-1表达的影响

目的 观察蓝莓对大鼠肝纤维化的预防作用及对血红素加氧酶-1(HO-1)表达的影响.方法 45只SD大鼠随机分为生理盐水对照组(A组)、模型组(B组)、蓝莓汁预防组(C组)、丹芍化纤胶囊预防组(D组)及蓝莓汁加丹芍化纤胶囊预防组(E组),每组9只.CCl4复合因素制备大鼠肝纤维化模型,各预防组给予蓝莓汁或(和)丹芍化纤胶囊灌胃,共饲养8周.测定各组大鼠血清ALT水平及肝组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的表达,并进行肝组织病理学检查.采用实时荧光定量聚合酶链反应、免疫组织化学法和Western blot分析大鼠肝组织HO 1的mRNA及蛋白质表达.多组间数据比较用单因素方差分析,等级资料用秩和检验.结果 B组大鼠血清ALT水平高于A组[(203.25±31.62)U/L比(57.25±6.88)U/L,F=92.498,P＜0.05)],各预防组较B组明显减少[C、D和E组分别为(149.44±16.51)U/L、(136.88±10.07)U/L和(127.38±11.03)U/L,F=92.498,P＜0.05)].C、D、E组大鼠肝组织匀浆SOD水平分别为(1.36±0.09)U/mg、(1.42±0.13)U/mg、(1.50±0.15)U/mg,高于B组的(1.08±0.19)U/mg(F=13.671,P＜0.05);MDA水平分别为(0.294±0.026)nmol/mg、(0.285±0.025)nmol/mg、(0.284±0.028)nmol/mg,低于B组的(0.335±0.056)nmol/mg(F=20.809,P＜0.05).各预防组肝纤维化程度较B组也有所减轻(x2-24.956,P＜0.05).B组大鼠肝组织HO-1的mRNA和蛋白质表达高于A组(F值分别为4.549和22.926,P值均＜0.05),各预防组大鼠肝组织HO-1的mRNA和蛋白质表达均高于B组,但差异无统计学意义(P＞0.05).结论 蓝莓对CCl4所致大鼠肝纤维化有一定的预防作用;在慢性肝损伤时,蓝莓对HO-1的表达无明显影响.     

复方鳖甲软肝片抗肝纤维化疗效的系统评价

目的运用循征医学的方法，对复方鳖甲软肝片抗肝纤维化的疗效进行系统评价。方法采用Jadad评分标准，并利用RevMan4．2软件对多个研究结果的总体效应进行Meta分析，用漏斗图分析发表性偏倚。结果9篇临床试验包含307例符合纳入标准，所有试验被评为低质量试验。复方鳖甲软肝片抗肝纤维化的疗效与对照组比较，差异均有统计学意义。结论复方鳖甲软肝片有明显的抗纤维化作用并可使代偿性肝硬化在一定程度上逆转，但在研究的方法学上有待完善。     

调肝颗粒剂对大鼠人血白蛋白肝纤维化模型的治疗作用

目的：观察调肝颗粒剂对大鼠人血白蛋白肝纤维化模型治疗作用。方法：将85只大鼠分为正常对照组、模型组、调肝颗粒大、中、小3个剂量组（即观察组）和鳖甲软肝片对照组。人血白蛋白免疫致敏法建立大鼠肝纤维化模型，观察组大鼠分别灌服调肝颗粒3g·kg^-1·d^-1、1．5g·kg^-1·d^-1、0．75g·kg^-1·d^-1，1次／d，鳖甲软肝片对照组每日灌服鳖甲软肝片0．7g·kg^-1·d^-1，1；L／d，治疗给药均在模型制备完毕后给药1个月药，股动脉取血，测定血清HA、PIIIP、IV—C和LN，取肝组织，Masson染色，并用MPEAS-500型图像分析仪进行图像分析。结果：治疗后，3个观察组HA含量均比模型组低，其中中剂量组与模型组比较差异有统计学意义（P=0．012）；IV-C含量3个观察组均比模型组低，差异有统计学意义（P=0．001）；PⅢP、LN含量3个观察组均比模型组低，但差异尚无统计学意义（P〉0．05）。胶原相对含量3个治疗组均比模型组低，差异有统计学意义（P〈0．01）；以上指标，在3个观察组与鳖甲软肝片对照组之间比较，差异均无统计学意义。肝组织纤维化病理表现，在3个观察组与模型组之间比较，均有不同程度的改善。结论：调肝颗粒剂能降低人血白蛋白诱发免疫损伤性肝纤维化大鼠血清HA、PⅢP、LN和Ⅳ型胶原含量，并能改善大鼠肝脏的纤维化病理状况。     

Role of nitric oxide in Toil-like receptor 2 and 4 mRNA expression in liver of acute hemorrhagic necrotizing pancreatitis rats

AIM: To investigate the role of nitric oxide (NO) in Tolllike receptor 2 (TLR2)/4mRNA expression in livers of acute hemorrhagic necrotizing pancreatitis (AHNP) rats.METHODS: One hundred and ten SD male rats were randomly divided into sham-operated group (n= 10),AHNP group (n = 30), chloroquine (CQ)-treated group(n= 30) and L-Arg-treated group (n =40). TLR2/4mRNA expression in the liver of AHNP rats was measured by RT-PCR.RESULTS: Expression of TLR2/4mRNA could be detected in the liver of AHNP rats in sham-operated group (0.155E-5±0.230E-6 and 0.115E-2±0.545E-4),but was markedly increased at 3 h in AHNP group(0.197E-2±0.114E-3 and 0.175±0.349E-2) peaking at 12 h (0.294E-2±0.998E-4 and 2.673±2.795E-2,P＜0.01). Hepatic injuries were aggravated, TNF-αconcentration in the liver was increased and NO concentration was decreased (P＜ 0.05 or P＜ 0.01).When TLR2/4mRNA expression was inhibited by CQ(3 h: 1.037E-4±3.299E-6 and 0.026±3.462E-3;6 h: 1.884E-4±4.679E-6 and 0.108±6.115E-3; 12 h:2.443E-4±7.714E-6 and 0.348±6.807E-3; P＜ 0.01),hepatic injuries were relieved, NO concentration in the liver was increased and TNF-α concentration was decreased (P＜0.05 or P＜0.01). When rats with AHNP were treated with L-Arg, TLR2/4mRNA expression in the liver could be effectively inhibited (50 mg-T:0.232E-2 ± 0.532E-4 and 0.230 ± 6.883E-3; 100 mg-T:0.210E-2±1.691E-4 and 0.187±0.849E-2; 200 mg-T:0.163E-2±0.404E-4 and 0.107±0.195E-2; 400 mg-T:0.100E-2±0.317E-4 and 0.084±0.552E-2; P＜0.01)and hepatic injuries were relieved. At the same time,NO concentration in the liver was markedly increased and TNF-α concentration was decreased (P＜0.05 or P＜0.01).CONCLUSION: The expression of TLR2/4mRNA is increased and hepatic injuries are aggravated in the liver of AHNP rats. TLR2/4mRNA gene expression in the liver of AHNP rats can be markedly inhibited by NO, leading to the relief of hepatic injuries.     

TLR4和肠道菌群在原发性肝癌进展中动态变化及与预后的关系

目的探讨Toll-样受体4(TLR4)和肠道菌群在原发性肝癌进展中动态变化情况,并分析其与预后之间的关系。方法选取100例慢性乙肝患者、80例肝硬化合并乙型肝炎患者和60例肝癌合并乙型肝炎患者作为研究对象,并分别命名为乙型肝炎组、肝硬化组和肝癌组,另选取年龄及性别与其匹配的100名健康体检者作为对照组。采用流式细胞术检测各组外周血单核细胞表面TLR4表达情况,收集各组新鲜粪便,并检测其肠道菌群的分布,并分析两者之间的关系。比较各组外周血单核细胞表面TLR4表达和肠道菌群分布差异,并分析其与肝癌患者预后之间的关系。结果对照组、乙型肝炎组、肝硬化组和肝癌组外周血CD14+TLR4+单核细胞阳性率分别为(34.92±4.79)%、(41.92±7.46)%、(49.21±8.83)%和(57.62±10.58)%,4组比较差异有统计学意义(F=78.624,P<0.01);双歧杆菌含量分别为(10.73±2.91)lg CFU/g、(8.15±2.04)lg CFU/g、(6.33±1.32)lg CFU/g和(5.21±0.87)lg CFU/g,4组比较差异有统计学意义(F=15.932,P<0.01);肠球菌含量分别为(4.91±0.78)log CFU/g、(6.44±1.29)log CFU/g、(8.11±2.08)log CFU/g和(10.21±2.77)log CFU/g,4组比较差异有统计学意义(F=12.372,P<0.01)。经Pearson相关分析得知,单核细胞表面TLR4表达与乳酸杆菌和双歧杆菌呈负相关(P<0.05),其相关系数分别为-0.643和-0.672;与肠球菌和大肠埃希菌呈正相关(P<0.05),其相关系数分别为0.771和0.734。随访1年,60例肝癌患者中,18例复发,15例死亡。复发者和未复发者外周血CD14+TLR4+单核细胞阳性率分别为(59.32±9.17)%和(55.21±5.23)%,两者比较差异有统计学意义(t=2.200,P=0.032);死亡者与生存者外周血CD14+TLR4+单核细胞阳性率分别为(61.04±10.23)%和(53.29±8.11)%,两者比较差异有统计学意义(t=2.998,P=0.004)。与未复发者和生存者比较,复发者和死亡者双歧杆菌和乳酸杆菌含量明显减少,但肠球菌和大肠埃希菌含量则明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论TLR4可促进HBV进展为肝癌,与肠道菌群变化明显相关,两者在肝癌预后监测中有一定价值。     

丹红软肝胶囊对肝纤维化患者血小板生长因子的影响

目的:研究丹红软肝胶囊对肝纤维化患者血小板生长因子(PDGF)的影响.方法:以108例慢性乙型肝炎肝纤维化患者为观察对象,随机分为两组,治疗组56例采用丹红软肝胶囊治疗,对照组52例服用复方鳖甲软肝片,均治疗6个月,观察治疗前后患者血清肝功能、肝纤维化指标及PDGF含量的变化.结果:治疗6个月时,治疗组患者肝纤维化血清指标透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)和Ⅲ型前胶原( PCⅢ)水平较治疗前均显著降低(P＜0.05);肝功能丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)与治疗前比较均显著改善(P＜0.05);PDGF含量较治疗前明显降低(P＜0.05).上述指标与对照组比较差异无显著性意义(P＞0.05).结论:丹红软肝胶囊可能通过抑制PDGF的分泌来抑制肝纤维化的发生发展.     

模拟代谢性内毒素血症对肝损伤小鼠肝组织TLR4信号通路的影响

目的：观察持续4 w的模拟代谢性内毒素血症对小鼠肝脏组织病理和4型Toll样受体（TLR4）信号通路的影响。方法将30只雄性C57BL/6J 小鼠随机分为正常组（n=10）和内毒素组（n=10）,均予以普通饲料喂养,和高脂组（n=10）,予以高脂饲料喂养。内毒素组小鼠同时经腹部皮下植入的微泵注入内毒素300μg·kg-1·d-1,连续4 w,正常组小鼠皮下微泵持续注入生理盐水作为对照。4 w后测定小鼠血清内毒素水平,对肝组织切片行HE染色后进行非酒精性脂肪性肝病评分（NAS）,采样Real time PCR法测定小鼠肝组织TLR4及其下游的MyD88和TRIF-related adaptor molecule （TRAM） mRNA水平。结果内毒素组小鼠血清内毒素水平（0.62±0.04 EU/ml）显著高于正常组（0.50±0.06 EU/ml,P〈0.05）和高脂组（0.49±0.05 EU/ml,P〈0.05）;内毒素组小鼠肝组织主要表现为单纯性脂肪变性,NAS积分为（2.30±0.49）,高脂组小鼠肝组织炎症较明显,NAS积分为（4.20±1.61）,显著高于内毒素组（P〈0.05）;与正常组相比,内毒素组小鼠肝组织TLR4 mRNA 水平上调5.12倍（P＜0.01）,TRAM mRNA水平上调3.46倍（P＜0.01）,而MyD88 mRNA水平与正常组比,无显著差别。结论持续4 w的模拟代谢性内毒素血症可诱导小鼠肝脏单纯性脂肪变性,TLR4 mRNA 和TRAM mRNA水平上调,而MyD88 mRNA水平无显著变化。