原位杂交法检测胃癌组织中IL-6及其受体mRNA的表达

胃癌是最常见的癌肿之一,应用原位杂交技术检测胃癌组织中IL—6及其受体mRNA的表达情况,具有灵敏度高、特异性强的特点,而且较直观地在组织原位和转录水平对标本中IL—6及其受体进行研究,这使得形态学观察与功能学检测相结合,更能反映胃粘膜不同病变细胞分泌IL—6及其受体的情况。     

解偶联蛋白-2 mRNA在LPS致热小鼠肝脏中的表达

目的：在细胞水平上精确定位解偶联蛋白－2（uncoupling protein-2,UCP2)在肝脏组织中的表达，同时观察腹腔内注射细菌胆多糖（lipopolysaccharide,LPS)后不同时程UCP2mRNA在肝脏中的表达，借此进一步探讨UCP2在LPS引起的内毒素(endotoxin,ET)性发热中的作用。方法：应用原位杂交（in-situ hybridization,ISH)技术和计算机图像分析技术检测能够反应小鼠肝脏中UCP2mRNA表达的3项重要参数值。结果：LPS诱导肝细胞表达UCP2mRNA，使UCP2mRNA在LPSD致热小鼠肝脏中的表达显著高于同时期对照的表达。结论：在LPS引起的ET性发热中，LPS诱导肝细胞表达UCP2mRNA，使UCP2mRNA在肝脏中的表达增加。     

催化信号放大系统的制备及其在免疫组化和原位杂交中的应用

目的：应用本实验室制备的催化信号放大（ｃａｔａｌｙｚｅｄ　ｓｉｇｎａｌ　ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ,ＣＳＡ）试剂,提高免疫组化（ＩＨＣ）和原位杂交（ＩＳＨ）的敏感性。方法：ＣＳＡ法应用于ＩＨＣ检测５０例１０种不同类型的肿瘤切片中４０种不同的抗原和ＩＳＨ检测６种不同的ＲＮＡ成分,并与相应的常规方法进行敏感性比较。同时分析了存在的问题。结果：ＣＳＡ－ＩＨＣ法较传统的ＰＡＰ法、ＡＢＣ法和 ＬＳＡＢ法敏感 ５００～１０００倍,较 ＥｎＶｉｓｉｏｎ法敏感 ２０～１００倍。 ＣＳＡ－ＩＳＨ法可使探针浓度从 ３ μｇ／ｍｌ降到 ０． ５～１μｐ／ｍｌ,杂交时间从 ２ ｄ缩短到 １ｄ,杂交阳性率明显提高。结论：本实验室制备的 ＣＳＡ系统与常规方法相比具有较高的敏感性、稳定性和低背景等优点,完全可取代进口试剂,非常适合于一抗昂贵、抗原性弱的ＩＨＣ检测,还可作为常规ＩＳＨ染色方法。     

癫癎小鼠海马内活化素βA mRNA表达的变化

目的探讨匹鲁卡品(pilocarpine,PC)诱导的癫癎小鼠海马内活化素(activin,ACT)β A mRNA表达的变化.方法应用逆转录-聚合酶链反应研究癫癎持续状态(status epilepticus,SE)与非持续状态(NSE)小鼠不同时间海马ACT βAmRNA的表达;原位杂交技术研究SE后不同时间小鼠海马ACT βAmRNA表达的分布.结果 NSE组各时间点间及与相应对照组间ACT βAmRNA表达无显著差异(P＞0.05);SE开始前(0 h)的抽搐小鼠ACT β AmRNA表达显著低于正常与相应NSE组,在SE 1 h时已较0 h显著增高(P＜0.01),但与正常及相应NSE组无差异.于SE1 h控制癫癎发作之后仍继续增高,6 h达高峰,48 h下降至略高于对照水平.与对照组及NSE组相比,3、6、24 h增高有极显著差异(6 h P＜0.001,3、24 h P≤0.01).ACT β A mRNA表达明显上调的部位最早于SE后3 h出现于海马CA2与DG区,6 h后CA3区也见明显表达,24 h后仅CA2、CA3区有表达,48 h后与对照组相似未见明显表达.结论 PC诱导的SE能明显上调海马ACT β A mRNA的表达,而NSE对之无明显上调作用;ACT βA mRNA表达的上调很可能是神经元对抗兴奋性损害的一种内源性保护效应.     

LMO3 mRNA在小鼠脑发育过程中的表达

目的:研究不同发育时期小鼠脑内LMO3的表达.方法:采用以SYBR Green I为荧光染料的定量RT-PCR及以地高辛标记的cRNA为探针的原位杂交组织化学法检测LMO3基因在小鼠脑发育过程中的表达.结果:FQ RT-PCR结果表明,LMO3在出生前高表达,P7d后表达水平急剧下降,至成年都维持在一个较低的水平. LMO3 mRNA在小鼠胚胎期E10.5d即有表达,但仅限于整个脑泡组织内,胚体其他区域均为阴性;E11.5d脑区信号逐渐加强,无核团及脑区的特异性,胚体其他部分仍为阴性;E15.5～P0d期LMO3阳性信号在几乎所有观察的脑区均有广泛而较强的着色;P7d LMO3阳性信号较出生前变弱,分布逐渐集中;P14～P60d LMO3 mRNA表达范围较P7d逐渐缩小,但仍有广泛表达,阳性信号主要集中于不同核团,表达有强弱之分.结论:LMO3基因可能与小鼠出生前脑的发育以及出生后特定脑区神经元的特化及特性维持有关.     

CD44V6 mRNA在大肠癌组织及大肠癌细胞株中的表达

ＣＤ４４Ｖ６是肿瘤转移的相关受体之一，其基因可能是一种肿瘤转移相关基因，但与人类大肠癌转移的关系尚不明确［１］，我们采用敏感、特异的原位逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）间接法，检测人类大肠癌组织及大肠癌细胞株中ＣＤ４４Ｖ６ｍＲＮＡ的表达，以探讨其与...     

IL-6 mRNA在脑胶质瘤中的表达及意义

目的 :研究白细胞介素 6 (IL 6 )在人脑胶质瘤发病中的作用和意义。方法 :采用RT PCR半定量法检测IL 6mRNA在 34例胶质瘤及 8例正常脑组织中的表达。结果 :IL 6mRNA在胶质瘤和正常脑组织的表达率分别为 79.4 %和 12 .5 % ,差异十分显著 (P <0 .0 1) ,且与胶质瘤的病理分级相关。结论 :IL 6可能在胶质瘤的发生过程中发挥重要作用。     

小鼠脑发育中CDK5 mRNA表达变化的研究

目的观察周期素依赖性蛋白激酶5 (CDK5)mRNA在脑发育中的表达与分布.方法采用胚胎期至老年期小鼠全胚胎及脑切片的原位杂交染色.结果①全胚胎原位杂交染色发现脑内CDK5 mRNA从胚胎10.5 d(E10.5)开始表达,主要分布于神经上皮的套层细胞内; ②脑切片的原位杂交染色观察到从E14到成年期脑内均见CDK5 mRNA阳性信号,主要定位于神经元的胞浆与核周,于新生期前后表达达高峰;分布于包括大脑皮层、海马、丘脑、下丘脑、小脑及许多神经核团.在老年期上述区域CDK5表达均有减弱,部分区域呈阴性.结论表明脑内CDK5作用贯穿了整个脑的发育阶段,且主要参与了神经系统的早期发育;成年后CDK5可能继续保持对某些区域中神经元的功能调节.     

原位逆转录PCR间接法检测人大肠癌组织和细胞株中CD44V6 mRNA的应用研究

目的探讨用原位逆转录ＰＣＲ间接法检测人类大肠癌组织及大肠癌细胞株内ＣＤ４４Ｖ６ｍＲＮＡ的表达。方法在大肠癌组织冰冻切片及ＨＴ２９和ＬｏＶｏ大肠癌细胞爬片上，先作蛋白酶Ｋ及ＤＮａｓｅ消化处理，再行逆转录、原位ＰＣＲ扩增和扩增后原位杂交检测，分析扩增产物与Ｖ６探针结合显色情况。结果ＬｏＶｏ细胞较ＨＴ２９细胞显色快而着色深，大肠癌癌灶较癌旁组织及远端正常大肠粘膜组织显色速度及强度均有显著性差异；反应液内有特异的ｃＤＮＡ扩增产物渗出；自制的原位ＰＣＲ模具性能稳定，封闭和防渗漏效果好。结论用原位逆转录ＰＣＲ间接法检测大肠癌组织及大肠癌细胞株内ＣＤ４４Ｖ６ｍＲＮＡ的表达，特异性强，定位性好，显色效果达到了光镜下分析的要求；反应液内的扩增产物还可作Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交及基因分析；自制的原位ＰＣＲ模具经济、方便，具有广泛的应用价值     

应用原位杂交技术分析ZNF216基因在成年小鼠各主要组织中的表达模式

目的：获得ZNF216基因的表达模式。方法：体外转录方法合成地高辛标记的CRNA探针,利用原位杂交技术检测ZNF216基因在成年小鼠各主要组织中的表达模式。结果：在小鼠脑、心脏、骨骼肌和睾丸细胞内可检测到很强的ZNF216的杂交信号,在肾脏细胞内也可检测到杂交信号,但在脾脏和肝脏细胞内仅检测到少许杂交信号和未能检测到杂交信号。结论：ZNF16基因表达于几种组织细胞内,具有一定的组织特异性。     

应用原位杂交技术检测鼻咽癌p16 mRNA基因表达研究

目的:研究p16 mRNA在鼻咽癌组织中的表达情况，探讨p16 mRNA与鼻咽癌生物学行为的关系。方法:应用生物素标记RNA探计的原位杂交技术，对20例散发性鼻咽癌(NPC)患者及3个NPC家系中NPC患者的组织标本进行mRNA检测，探讨p16 mRNA的异常表达在NPC的发生发展中的作用，以20例鼻咽炎患者的鼻咽部组织做为对照。结果:20例NPC标本原位杂交阳性8例，p16 mRNA阳性表达为40％(8／20)，3个高发家系的NPC标本无阳性表达，20例对照(鼻咽炎患者的标本)全部有p16 mRNA阳性表达。结论:p16 mRNA在鼻咽癌组织中呈低表达，提示p16基因作为一种重要的抑癌基因，它的突变或缺失可能与鼻咽癌的发生发展及恶性行为起一定的作用。     

大鼠胰腺促性腺激素释放激素受体mRNA的原位杂交

目的 研究大鼠胰腺促性腺激素释放激素（GnRH)受体mRNA的存在及细胞定位。方法 采用原位杂交组织化学法。结果 胰脏的外分泌部腺上皮细胞、胰导管上皮细胞及内分泌部胰岛细胞内可检测到较强的GnRH受体mRNA杂交信号,杂交阳性信号物质均分布在胞质内,胞核呈阴性。结论 大鼠胰脏内、外分泌部均能合成GnRH受体。GnRH也是一种消化激素,它由胰脏自身合成,又作用于胰脏,可能参与胰脏内、外分泌功能的调节。     

原位杂交法检测视网膜色素上皮细胞炎前因子mRNA的表达

目的　观察视网膜色素上皮细胞 ( RPE)在炎性介质刺激下炎前因子 m RNA的表达 .方法　培养的人 RPE经IL - 1β ( 10μg· L- 1 )和脂多糖 ( 1m g· L- 1 )的刺激后 ,用生物素标记的寡核苷酸探针进行原位杂交 ,检测 RPE炎前因子IL - 1β,IL - 6,IL - 8和 TNF-α m RNA表达 .杂交结果使用图像分析法进行比较 .结果　原位杂交显示 RPE细胞质中均呈现浓淡不一的淡蓝色着色 ,胞核不着色 .其中 IL - 6m RNA在脂多糖刺激下染色较浅 ,增加脂多糖的剂量不能提高其表达 .图像分析显示在 IL - 1β ( 10μg· L- 1 )和脂多糖 ( 1m g· L- 1 )刺激下 ,RPE表达 IL - 6m RNA的吸光度分别为 10 8± 18和3 5± 14 ,二者之间有显著性差异 ( P<0 .0 1) .结论　在 IL - 1β和脂多糖刺激下 ,人 RPE可以表达炎前因子 IL - 1β,IL - 6,IL - 8和 TNF-α的 m RNA .     

原位杂交测肿瘤坏死因子mRNA在宫颈细胞及子宫内膜组织的定位表达

目的观察肿瘤坏死因子(mRNA)在宫颈细胞及子宫内膜组织的表达及其在不同病变组织中的分布特点。方法采用非同位素原位杂交法对3个传代的宫颈细胞系(HiSa、W12、NCx)、石蜡包埋的宫颈组织96例、子宫内膜组织75例进行了TNFmRNA定位表达的研究。结果TNFαmRNA在SiHa和W12细胞中有阳性表达,NCx细胞未见阳性表达;在宫颈组织中阳性表达见于上皮、间质、血管壁及平滑肌;子宫内膜癌组织中阳性表达见于间质单个核细胞和平滑肌细胞,对照组未见阳性表达。结论宫颈尖锐湿疣及宫颈鳞癌来源的上皮为TNF生成细胞之一;TNFmRNA表达强度与细胞增生程度有关;宫颈HPV感染对细胞内TNFmRNA表达有促进作用。     

原位杂交检测肝组织中的TTV

选取非甲-非庚型肝炎后肝病死亡患者肝组织,制备地高辛标记的特异性TTV DNA探讨,应用原位杂交方法检测肝组织中TTV,观察TTV对肝组织感染的形态学特点,为TTV的致病性研究提供依据。通过本研究建立了可靠而稳定的TTV原位杂交检测方法,8例肝组织标本中4例原位杂交阳性,TTV阳性杂交信号呈核型,阳性细胞在肝组织中散在分布,部分肝小叶可有较密集的阳性细胞,提示TTV可能是一种致肝病的病毒。     

小鼠Connexin 31基因组克隆的筛选及荧光原位杂交定位

Connexin 31 (Cx31 )是人类遗传性疾病基因 ,利用小鼠Cx31基因的cDNA序列探针从小鼠的基因组文库筛选出Cx31的gDNA克隆 ,并用荧光原位杂交技术将其定位于小鼠 4号染色体的中部 ,为小鼠Cx31的基因结构和功能的研究以及转基因小鼠和基因剔除小鼠的研究打下了良好的基础     

成骨肉瘤组织中stathmin基因的表达意义

目的 明确stathmin基因在人成骨肉瘤组织有高表达并对其进行组织学定位。方法 用地高辛标记全长stathmin基因，原位杂交方法检测stathmin基因在45例人成骨肉瘤组织及10例正常组织中的表达情况。结果 在45例成骨肉瘤组织中有24例stathmin基因呈阳性表达（阳性率53％），阳性颗粒可见于胞质及胞核；10例正常组织中2例呈弱阳性表达，差异显著（P＜0．05）。结论 stathmin基因在骨肉瘤中的高表达与骨肉瘤的发生，发展有重要的相关性，该基因有望成为人成骨肉瘤生物治疗中的重要靶基因。