小鼠骨髓瘤细胞系(SP_(2/0)—Ag_(14))及鼠一鼠淋巴细胞杂交瘤细胞系的超微形态观察

不分泌型的小鼠骨髓瘤细胞与其产生特异性抗体的杂交瘤细胞在光镜下难以区别其形态特征。但在电镜下,两种细胞系的细胞大小。胞浆内分泌细胞器的形态及数量均有明显差别:杂交瘤细胞的胞体明显增大,胞浆更为丰富,粗面内质网池扩张明显,高尔基区分泌小泡的数量明显增加,线粒体增大增多,暗细胞数量增加等。这些变化暗示,杂交瘤细胞系的分泌细胞器更为发达,分泌力增强。不分泌型的亲本细胞已转变成了分泌旺盛的细胞。但仅从形态上鉴别分泌物的性质较为困难。必须进一步结合免疫电镜技术验证。     

分泌抗破伤风类毒素人单克隆抗体的人鼠杂交瘤细胞系的建立

作者采用小鼠骨髓瘤细胞系与破伤风类毒素免疫的人外周血淋巴细胞进行融合,对影响人-鼠杂交瘤细胞制备人单抗成功的因素进行了探讨。按免疫时间(天)及体外刺激与否分为四组、其中以 PWM+TT 体外刺激 PBL(比体外不刺激)的细胞融合率高,且易建成稳定分泌抗体的细胞系。经5次克隆化后获得5株抗 TT 的人单抗杂交瘤细胞系。经双扩确定 IgG2株,IgM3株。冻存10个月后复苏,传代及适当的克隆化后仍为阳性。上清液中人 IgM 的分泌量为0.42～1.15μg/ml。经染色体鉴定确为人-鼠杂种细胞。     

分泌抗破伤风类毒素人单克隆抗体的人鼠杂交瘤细胞系的建立

作者采用小鼠骨髓瘤细胞系与破伤风类毒素免疫的人外周血淋巴细胞进行融合，对影响人一鼠杂交瘤细胞制备人单抗成功的因素进行了探讨。按免疫时间(天)及体外刺激与否分为四组、其中以PWM TT体外刺激PBL(比体外不刺激)的细胞融合率高，且易建成稳定分泌抗体的细胞系。经5次克隆化后获得5株抗TT的人单抗杂交瘤细胞系。经双扩确定IgG2株，IgM3株。冻存10个月后复苏，传代及适当的克隆化后仍为阳性。上清液中人IgM的分泌量为0．42～1．15μg/ml。经染色体鉴定确为人-鼠杂种细胞。     

用(BALB/c×SSB)F_1小鼠制备单克隆抗体的经验

制备单克隆抗体的免疫原——杂交瘤细胞之亲代细胞系,目前大多取自BALB/c系小鼠。另据Brader等报道,应用BALA/c×Swiss Webster/HPB杂交一代小鼠制备单克隆抗体,取得了腹水量大、连续收获时间长的良好结果。且雄鼠得率不亚于雌鼠。我们于1986年6月应用BALB/c系(?)与SSB系(?)杂交的F_1小鼠制备单克隆抗体,取得了一定收获,     

大鼠抗小鼠重组膜联蛋白A2单克隆抗体的制备与鉴定

目的 建立能够分泌特异性抗小鼠膜联蛋白A2( AnxA2)的大鼠—小鼠融合单克隆抗体杂交瘤细胞系.方法 利用重组小鼠AnxA2蛋白作为抗原免疫Wistar大鼠,通过细胞融合和杂交瘤筛选技术建立特异分泌抗小鼠AnxA2蛋白的大鼠—小鼠融合单抗杂交瘤细胞株.采用酶联免疫吸附方法确定单克隆抗体亚型,免疫印迹和流式细胞术验证所筛选的单克隆抗体的特异性.结果 通过对30多个分泌抗体的融合细胞克隆的筛选,获得一株分泌特异性抗小鼠AnxA2的大鼠—小鼠融合单克隆抗体杂交瘤细胞系SZ-158,连续培养传代后染色体分析证实,Wistar大鼠脾细胞与小鼠SP2/0细胞稳定融合;免疫印迹和流式细胞术显示该单克隆抗体可以特异识别小鼠AnxA2重组蛋白.结论 该研究所获得的大鼠—小鼠融合单克隆抗体特异性针对小鼠AnxA2蛋白,可用于AnxA2转基因小鼠中AnxA2表达的检测,为深入研究AnxA2的功能提供了物质保障.     

体外永久培养的人鼠杂交瘤

小鼠骨髓瘤细胞SP2/0(HGPRT-)与人外周血淋巴细胞经PEG介导融合,HAT培养基选择,获得了体外永久培养的人鼠杂交瘤NJ84。细胞遗传学分析证实杂种群体中尚保留5～12个人染色体,未查见种间染色体易位。A_4单克隆中保留着人9、11、X、14、18、19、22号染色体。杂种细胞G_6PD同工酶电泳出现三带型酶谱,证实人和鼠的G_6PD在杂种细胞中均有表达。同时观察比较了杂种及其亲本对细胞松弛素B的反应。这种人鼠杂交细胞可望用于人类基因定位、制备人类免疫球蛋白链基因克隆和人类单克隆抗体,也可用于恶性表达分析等方面的研究。     

哮喘小鼠CD4~ CD25~ 调节性T细胞数量及功能的改变

目的观察哮喘小鼠脾脏CD4 CD25 调节性T细胞(简称Treg细胞)数量及功能的改变。方法以屋尘螨提取液复制小鼠哮喘模型后,分离小鼠脾脏CD4 T细胞,采用流式细胞仪检测Treg细胞占CD4 T细胞的比例;分离Treg细胞,与屋尘螨提取液共同培养后测定上清液中白细胞介素-4(IL-4)及IL-10的含量;将Treg细胞与CD4 T细胞共同培养,观察其对CD4 T细胞增殖及IL-4、IL-5、γ-干扰素(IFN-γ)分泌的影响。结果哮喘小鼠脾脏Treg细胞占CD4 T细胞比例明显下降;与正常组相比,哮喘小鼠脾脏Treg细胞IL-4、IL-10的分泌无明显差异;Treg细胞可显著抑制哮喘小鼠CD4 T细胞的增殖,并降低其IL-4的分泌,对IFN-γ的合成分泌无明显作用;使用anti-CD25 mAb后,哮喘和正常小鼠Treg细胞的作用均被显著抑制。结论哮喘小鼠Treg细胞功能与正常对照组小鼠无明显区别,但数量显著下降。哮喘发病过程中Th2型反应占优势,与Treg细胞数量减少,对Th2型反应的抑制作用降低有一定关系。     

鼠切牙牙胚发育晚期Shh及其受体的基因表达

目的 :观察信号分子Shh及其受体Ptc1、Ptc2在小鼠下颌切牙牙胚形态发育晚期的基因表达 ,以探讨Shh信号路径在细胞分化中的作用。方法 :制备昆明小鼠下颌切牙形态发育晚期标本 (E18.5～P 1.5 ) ,常规HE染色观察组织形态。以Shh、Ptc1、Ptc2cDNA为模板体外转录合成地高辛标记的cRNA探针 ,原位杂交法分析Shh、Ptc1、Ptc2mRNA在牙胚中的表达与分布。结果 :Shh与Ptc2mRNA表达方式相近 ,在钟状期切牙唇侧的前成釉细胞和中间层细胞呈阳性表达。Ptc1mRNA在钟状期切牙唇侧的前成釉细胞、中间层细胞及成牙本质细胞均呈阳性表达。结论 :在切牙牙胚形态发育晚期 ,Shh可能通过自分泌途径和旁分泌途径 ,参与了唇侧成釉细胞和成牙本质细胞分化。     

黄芪多糖对非肥胖糖尿病鼠胰岛超微结构及氧化凋亡因子表达的影响

目的探讨黄芪多糖(APS)对非肥胖糖尿病(NOD)小鼠1型糖尿病(DM)免疫干预的分子机制。方法20只NOD小鼠随机分为APS干预组和生理盐水(NS)对照组,观察两组NOD鼠DM发生率和胰岛电镜超微结构,应用RT-CPR检测两组小鼠胰腺内Fas、iNOS、Bcl-2、SOD mRNA的表达水平。结果APS组1型DM发生率较对照组明显降低(APS组3/10,30%;NS组9/10,90%),平均发病时间也明显延缓[APS组(26.25±5.68)周,NS组(21.8±6.78)周,P<0.05]。ASP组胰岛超微结构保存完好,β细胞胞核、核膜完整,内质网无扩张、线粒体无增多,分泌颗粒丰富。RT-PCR结果显示,APS组Fas、iNOS的mRNA表达水平明显下调,Bcl-2、SOD的mRNA表达水平明显上调。结论APS能纠正NOD小鼠氧化或凋亡的免疫失衡状态,预防或延缓1型糖尿病的发生。     

金糖宁对链脲霉素糖耐量异常小鼠糖代谢及胰岛β细胞功能的影响

目的研究金糖宁(JTN)对链脲霉素(STZ)诱导的糖耐量异常(IGT)小鼠糖代谢及胰岛β细胞功能的影响。方法单次腹腔注射小剂量STZ诱导形成IGT小鼠模型。STZ-IGT小鼠分别饲以含JTN(8或16 g/kg饲料)的高蔗糖(蔗糖:普通饲料为1:1)饲料作为低、高剂量组;实验期间进行口服葡萄糖耐量试验,测定空腹血糖和非禁食血糖;采用高血糖钳夹技术评价JTN对STZIGT小鼠β细胞功能的影响;胰腺组织切片HE和Gomori染色,观察胰岛形态及β细胞数量的变化;检测胰腺中与β细胞增殖及胰岛素分泌相关因子mRNA的水平改变。结果长期给予JTN后,可显著降低STZ-IGT小鼠的摄食和饮水量,降低非禁食血糖及空腹血糖,降低糖负荷后血糖曲线下面积,改善IGT;增加高血糖钳夹的GIR值和最大胰岛素分泌能力;高剂量组小鼠胰腺病理形态明显改善,胰腺中PDX-1、AKT以及INS-1的mRNA水平均显著上调。结论金糖宁能显著改善STZ-IGT小鼠的糖代谢紊乱和胰岛β细胞功能。     

人乳头瘤病毒16型E6基因表达产物单克隆抗体的制备研究

将含有人乳头瘤病毒１６型（ＨＰＶ_（１６））Ｅ_６基因的重组质粒ＰＡＳ１－ＨＰＶ_（１６）Ｅ_６转染大肠杆菌ＡＲ１２０，在萘啶酮酸诱导下进行表达，表达产物经分离、纯化和鉴定获得一种分子量为１９０００的Ｅ_６表达蛋白。用纯化后的Ｅ６蛋白免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，免疫脾细胞与骨髓瘤细胞ＳＰ２／０－Ａｇ１４在ＰＥＧ_（４０００）作用下进行融合，经ＨＡＴ培养基筛选杂交瘤细胞株，甲基纤维素半固体培养基克隆，克隆筛选，ＥＬＩＳＡ检测和再克隆，得到一株持续稳定分泌抗ＨＰＶ_（１６）Ｅ_６蛋白特异性单克隆抗体的杂交瘤株ＲＡＣ_６。     

分泌抗马来丝虫成虫单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立

应用杂交瘤枝术,以小鼠骨髓瘤 SP~z/O 与用马来丝虫成虫免疫成功的BALB/C 小鼠脾细胞融合后,成功地建立了一株名 XM—H_7的杂交瘤细胞。间接免疫荧光试验检测其上清中特异性抗体的存在,用有限稀释法2次克隆化。XM—H_7的核型,染色体为85—104条,40%为92条。细胞生长良好,至今持续培养6个月以上仍不失其分泌特异抗体的效应。     

分泌抗活化小鼠T细胞抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用Con A活化的小鼠脾脏细胞免疫同品系动物(BALB/c鼠),取免疫鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,选择了一株有分泌抗活化小鼠T细胞抗原抗体的杂交瘤细胞,经有限稀释法连续4次克隆化。采用ELISA法分析,初步证实该杂交瘤细胞所分泌的单克隆抗体(McAb)与Con A 活化的小鼠脾细胞的结合反应明显高于与未经活化的其他细胞(胸腺细胞、肠系膜淋巴结细胞、脾细胞)的反应。用琼脂双扩散法证明该MeAb属于小鼠IgG类。     

A human monoclonal antibody HMD4 against ovarian carcinoma associated antigen.

Lymphocytes from regional lymph nodes of patients with ovarian carcinoma were immortalized by fusing them with a nonsecreting cell line of murine myeloma (Sp2/0-Ag14). The fusion rate was 0-87.5%. By early cloning and recloning, a hybrid cell line, named HMD4, was established. It has stably secreted human IgG for more than 15 months. Chromosome analysis showed the characteristics of human-mouse hybridoma. The cells of HMD4 were injected into the abdominal cavities of nude mice and 2-3 weeks later large quantities of ascites were obtained. Human IgG of lambda light chain was detected and purified from the ascites. The specificity of HMD4 human McAb was tested by ABC or PAP immunoperoxidase stainings of paraffin-embedded tissue sections, cryostat sections, cell smears of various tissues and different cancer cell lines. 60.5% (26/43) of epithelial ovarian cancers was positive, while nonepithelial ovarian cancers, most cancers from other organs and almost all nonmalignant and normal tissues were negative. The molecular weight of the antigen recognized by HMD4 was 55 KDa determined by Western blotting. The problems of maintaining the IgG secreting function of human-mouse hybridoma and its screening were also discussed.

     

抗卵巢上皮癌人单克隆抗体HMD_4的制备及其特性的研究

本文报道用人-鼠杂交技术制备出一株分泌人IgG型单克隆抗体的人-鼠杂交瘤细胞系,通过早克隆化和反复再克隆化等使该株细胞已稳定分泌15月以上。染色体核型分析符合人-鼠杂交瘤特征。免疫印迹和免疫组化等方法证实该抗体可识别分子量为55KDa的卵巢上皮癌相关抗原,命名为HMD_4。本文还对如何保持种间杂交瘤分泌功能和人单抗筛选中如何克服内源性Ig问题进行了讨论。     

MOUSE AND HUMAN MONOCLONAL ANTIBODIES AGAINSTGASTRIC CANCERPREPARATION AND CLINICAL APPLICATION

Ten clones of mouse and two clones, oF hu-man phybridoma cell producing monoclonal an- tibodies against gastric cancer were established. The nature, specificity and affinity of these mo- noclonal antibodies for gastric cancer associated antigens were demonstrated. They were used preliminarily in the diagnosis of gastric carcino- ma with encouraging results. Cultivated gastric cancer cells or tumor cells from surgically resected gastric cancer or affected lymph nodes were used to immunize Balb/c mice. The lymphocytes harvested from the spleen after immunization were fused with mouse myeloma cell line SP2/0. Ten kinds of mouse monoclonal antibodies reactive with different histopathologi- cal types of gastric carcinomas have been prepar~ ed. Two kinds of human monoclonal antibodies have also been produced by fusion of the lym- phocytes from the draining lymph nodes with mouse-human heteromyeloma cell line SHM-D33. Considerable amounts of McAbs can be obtained from the cell culture supernatant or from ascitic fluid of mice with intraperitoneally transplanted hybridoma cells.     

抗人胰岛素样生长因子-1单克隆抗体的制备与鉴定

目的:制备稳定分泌抗人胰岛素样生长因子-1(hIGF-1)单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞系,并对其分泌的mAb进行鉴定.方法:用纯化后的hIGF-1重组蛋白免疫Balb/c小鼠,利用杂交瘤细胞融合技术制备抗hIGF-1的mAb,用Western blot法鉴定mAb的特异性,用间接ELISA法检测mAb腹水效价及mAb的亲和力,杂交瘤细胞染色体分析,鉴定Ig亚类.结果:获得2株能稳定分泌抗hIGF-1的mAb杂交瘤细胞系,Western blot分析显示,该mAb能与具有生物学活性的成熟IGF-1蛋白结合.腹水mAb效价可达6×104.mAb相对亲和力为2.1×109/mol～7.8×109/mol.2株单抗属IgM亚类.染色体分析符合杂交瘤细胞特征.结论:成功制备出抗hIGF-1的2株mAb杂交瘤细胞,为进一步用于hIGF-1的临床检测和实验研究创造了条件.     

抗人子宫颈癌单克隆抗体的制备及其特征的初步研究

应用单克隆抗体技术制备具有未经纯化的肿瘤细胞抗原中某种特异或相对特异抗原的单克隆抗体,这对肿瘤免疫的理论研究和实际应用均有重要意义。关于人宫颈癌单克隆抗体国外已有报道并已有人—人细胞融合产生的抗宫颈癌单克隆抗体,但国内尚无报道.本研究以人子宫颈癌细胞株CC-801为抗原免疫小鼠,制备出抗人子宫颈癌杂交瘤细胞株CEB9,并对其分泌的单克隆抗体进行了初步的鉴定.