丁型肝炎病毒载体携带核酶在小鼠体内抑制乙型肝炎病毒复制

目的:研究用丁型肝炎病毒(HDV)作为载体携带乙型肝炎病毒(HBV)特异性的锤头状核酶所构建的重组体,在细胞体系及转染动物模型中对HBV基因表达和复制的影响.方法:将HDV-核酶重组体和HBV的共表达质粒转染Huh-7细胞以分析HDV-核酶重组体对HBV基因表达的影响;用小鼠尾静脉快速注射法将共表达质粒转染到小鼠体内,检测重组体在动物体内对HBV基因表达和复制的抑制作用.结果:转染细胞中,重组体对HBsAg的抑制与HDV重组位点和核酶靶位都有关;水压法注射的质粒在小鼠肝内得到表达,与对照相比重组HDV-核酶可有效抑制在肝和血清中HBV的基因表达以及复制,与细胞中的结果一致.结论:此项体内实验为进一步构建治疗性重组HDV病毒,发现靶向性抗病毒基因治疗手段奠定基础.     

RNA干扰抑制乙型肝炎病毒复制的实验研究

目的 以乙型肝炎病毒(HBV)核心区为靶位，构建表达小干扰RNA(siRNA)的质粒载体pSilencer3．1-Hlhygro，体外观察siRNA抗HBV的效果。方法 以HepG2 2．2．15细胞为靶细胞，利用脂质体Metafectene与表达siRNA的质粒载体pSilencer3．1-Hlhygro共转染，用定量聚合酶链反应检测细胞上清液中DNA，用逆转录聚合酶链反应检测HBV C-mRNA。结果 成功构建了表达siRNA的转录质粒载体，两条siRNA均可抑制HBV的复制，而且与siRNA浓度成正相关。结论 靶向HBV核心区的siRNA能抑制HBV的复制。     

丁型肝炎

丁型肝炎病毒基因组RNA包埋锤头状核酶的活性研究——李晓娟等（广东深圳市东湖医院、深圳市肝病研究所518020）：《中华实验和临床病毒学杂志》，2005，19（1）：12-15[目的：探讨用丁型肝炎病毒（HDV）基因组来包埋HBV靶向性核酶对核酶体内外活性产生的影响。方法：用和HBV靶基因体外转录产物在不同反应条件下温育对HDV-核酶重组体的体外切割活性定量分析：     

乙醇对乙型肝炎病毒转基因小鼠病毒复制和基因表达的影响

乙型肝炎病毒(HBV)在体内的持续感染、复制和基因表达是急、慢性乙型肝炎发病机制的重要环节。嗜酒明显影响乙型肝炎的预后，使其易于重型化、慢性化，且肝癌发生率升高。嗜酒与HBV感染对肝脏损伤有协同作用。本研究旨在通过对HBV转基因小鼠的乙醇干预，探讨它对HBV复制和基因表达的影响及其机制，以利于对乙型肝炎及酒精相关性肝病的防治。     

DNA芯片技术检测乙型肝炎病毒及丁型肝炎病毒的初步研究

现分别针对乙型肝炎病毒（HBV），丁型肝炎病毒（HDV）基因保守区域设计多对聚合酶链反应（PCR）引物，打印制备成芯片，并用限制性显示（RD）技术标记样品，探索此方法制备基因芯片的可行性。     

商陆抗病毒蛋白体外抑制乙型肝炎病毒复制的研究

商陆抗病毒蛋白（pokeweed antiviral protein，PAP）是从美洲商陆种子或叶子中提取的一种碱性蛋白，具有抑制流感病毒、脊髓灰质炎病毒、疱疹病毒、巨细胞病毒、HIV等多种病毒复制的作用。我们先前的研究发现：天然PAP种子体外直接作用于HepG2．2．15细胞，显示有较强的抗HBV作用，但在高剂量时对细胞有一定毒性。本研究旨在探讨PAP真核表达质粒体外对HBV的抑制作用。[第一段]     

10-23脱氧核酶抑制乙型肝炎病毒基因表达的实验研究

目的在细胞水平上探讨10-23脱氧核酶（10—23DRz）成为新型乙型肝炎基因治疗药物的可能性。方法设计合成针对乙型肝炎病毒（HBV）ayw1亚型前C／C区的2031位点的1023DRz，并对其进行硫代磷酸化修饰，同时针对该位点设计一条未硫代化修饰的10—23DRz，经脂质体转染HePG22．2．15细胞（简称2．2．15细胞）中观察其对HBV基因表达的抑制效应。结果修饰与未修饰的1023DRz作用于2．2．15细胞后均可显著抑制乙型肝炎表面抗原（HBsAg）和乙型肝炎e抗原（HBeAg）的表达，最高抑制率分别可达93．75％和90．26％，有效抑制持续时间可达96h，修饰后的脱氧核酶在细胞内对HBsAg和HBeAg表达的抑制作用时间长于未修饰的DRz，其抑制率的最高值低于未修饰的DRz，但两者明显高于作为对照的反义脱氧寡核苷酸。对2．2．15细胞内HBVDNA复制无明显影响，未见明显的细胞毒性作用。结论经过硫代化修饰的1023DRz和未修饰的l023DRz在2．2．15细胞模型中能高效阻断HBVDNA的表达，是一种高度特异性的、高效的基因治疗剂。     

树突状细胞亚群相对数与乙型肝炎病毒复制及肝损伤的关系

目的探讨外周血树突状细胞(DC)亚群相对数量与慢性乙型肝炎(简称慢乙肝)患者血清乙型肝炎病毒(HBV)DNA水平和肝脏病理炎症损伤程度问的关系。方法定量聚合酶链反应法检测患者血清HBV DNA,利用流式细胞仪检测外周血DC亚群。结果血清HBV DNA<106拷贝/ml慢乙肝患者外周血DC2相对数量显著高于HBV DNA≥106拷贝/ml患者和健康者(P<0.05),而后两组间DC2的差异无统计学意义;上述三组中DC1相对数量差异无统计学意义;外周血DC亚群相对数与患者临床型别和肝内炎症损伤程度无关。结论外周血DC2亚群的升高与慢乙肝患者体内HBV低水平复制相关,提示DC2 可能在抑制HBV复制中发挥作用;外周血DC亚群相对数与肝组织炎症程度不相关。     

乙型肝炎病毒复制状态对轻度慢性乙型肝炎患者肝组织中转化生长因子β1表达影响的研究

慢性乙型病毒性肝炎（CHD）在我国发病率较高，危害较大，CHB患者体内病毒复制状况以及肝纤维化进程在临床倍受重视。目前认为，转化生长因子β1（TGF-β1）对细胞的增殖和发育、转化和分化有一定的调节作用，同时也是重要的肝纤维化递质，在肝硬化的形成中占有重要地位，细胞外基质（ECM）的合成和降解主要由TGF-β1调控。本实验研究的目的，在于了解轻度CHB体内HBV DNA不同复制状况时，肝组织中TGF-β1表达所受影响。     

白细胞介素-10抑制肝星状细胞Ⅰ、Ⅳ型胶原表达及分泌的体内研究

目的探讨白细胞介素-10(IL—10)基因对大鼠肝星状细胞(HSC)Ⅰ、Ⅳ型胶原表达及分泌的影响。方法将含有大鼠IL—10基因的腺病毒载体通过尾静脉转染四氯化碳肝损伤大鼠,用离体肝脏胶原酶灌注、消化以及密度梯度离心法分离HSC,应用逆转录聚合酶链反应法检测HSC的Ⅰ、Ⅳ型胶原mRNA 表达和酶联免疫吸附法检测HSC培养上清液中的Ⅰ、Ⅳ型胶原水平,用van Gieson染色检测胶原纤维在肝组织中的沉积情况。结果转染含IL—10基因腺病毒组HSC的Ⅰ、Ⅳ型胶原mRNA表达和分泌明显低于空载体组和空白对照组(P<0.05);van Gieson染色结果也显示胶原合成量明显少于空载体组和空白对照组。结论IL-10可以抑制HSC表达与分泌Ⅰ、Ⅳ型胶原。