鲫鱼卵唾液酸糖蛋白对小鼠破骨细胞活性的影响

目的研究鲫鱼卵唾液酸糖蛋白(Carassius auratus sialyglycoproteins,CA-SGP)对破骨细胞活性的影响。方法通过M-CSF和RANKL体外诱导小鼠骨髓造血细胞分化,建立破骨细胞模型,以MTT法检测CA-SGP对破骨细胞前体细胞及破骨细胞增殖活性的影响;采用TRAP染色和TRAP含量测定法评价其对小鼠骨髓细胞向破骨细胞分化的影响;利用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测CA-SGP对小鼠破骨细胞促炎症因子IL-6、IL-1β和TNF-α分泌的影响。结果 CA-SGP对破骨细胞前体细胞和破骨细胞的增殖活性无影响,可明显抑制小鼠骨髓造血细胞向破骨细胞的分化,且在早期抑制作用最强。ELISA试剂盒检测结果表明,CA-SGP能明显降低小鼠破骨细胞IL-6、IL-1β和TNF-α的含量。结论鲫鱼卵唾液酸糖蛋白可明显抑制小鼠骨髓造血细胞向破骨细胞的分化以及破骨细胞炎症因子的分泌。     

锌对TCP颗粒诱导骨细胞损伤的保护作用

目的观察磷酸三钙(tricalciumphosphate,TCP)颗粒与锌(zinc,Zn)掺杂TCP(Zn TCP)颗粒对骨细胞MLO-Y4活性和功能影响及Zn对TCP颗粒诱导骨细胞损伤的作用。方法骨细胞MLO-Y4分别与TCP颗粒(0.1 mg/ml)和Zn TCP颗粒(0.1 mg/ml)共培养,应用实时荧光定量PCR和Western blot等方法检测Zn干预后骨细胞硬化蛋白SOST(sclerostin)和牙本质基质蛋白1(dentin matrix protein 1,DMP-1)m RNA水平及蛋白表达的变化,研究Zn对TCP磨损颗粒诱导骨细胞功能损伤的影响;通过Calcein-AM标记、MTT和流式细胞术定量分析Zn对TCP颗粒诱导骨细胞活性和凋亡的影响;利用Western blot方法检测Zn干预后骨细胞Akt、phospho-Akt(p-Akt Ser473)和phospho-Akt(p-Akt Thr308)等蛋白的表达变化,探讨Akt信号分子在Zn对TCP颗粒诱导骨细胞损伤保护中的作用,阐明其分子机理。结果 Zn可明显抑制TCP颗粒诱导的骨细胞功能损伤,阻止骨细胞凋亡;同时Zn干预能显著减弱TCP颗粒诱导的骨细胞Akt蛋白失活,表现为上调p-Aktser473和p-Akt Thr308等蛋白表达(P0.05)。结论 Zn可阻止TCP颗粒诱导的骨细胞损伤,可能与抑制TCP颗粒诱导骨细胞Akt蛋白的失活密切相关。     

水溶性大豆异黄酮对破骨细胞分化和功能的影响

目的:研究水溶性大豆异黄酮(WSSI)对1,25-二羟基维生素D3诱导兔骨髓细胞分化形成破骨细胞样细胞以及兔成熟破骨细胞骨吸收功能的影响。方法:通过TRAP染色对骨髓细胞诱导分化形成的TRAP阳性多核巨细胞计数;用显微摄影结合计算机图像分析测定骨吸收造成的陷窝数目及表面积,以评价破骨细胞活性;用扫描电镜观察骨吸收陷窝的形态。结果:浓度为20.0、4.0、2.0和0.4μg/ml的水溶性大豆异黄酮既能抑制破骨细胞样细胞的形成(P<0.001),还能抑制成熟破骨细胞的骨吸收功能(P<0.001),具体表现在随着浓度的升高骨吸收陷窝数目及表面积减少。结论:WSSI可以明显抑制破骨细胞样细胞的形成和成熟破骨细胞的骨吸收功能。     

基质Gla蛋白对骨量的调节作用及其机制

目的 检测基质Gla蛋白（MGP）对小鼠骨量的影响,分析其作用机制。 方法 利用腺相关病毒干涉小鼠体内MGP基因表达,microCT扫描分析检测小鼠骨量,利用抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色检测小鼠股骨破骨细胞的数目,利用ELISA检测骨转换标志物TRAP5b水平。 结果 与对照组相比,经过MGP干扰处理的小鼠骨体积分数显著降低,骨小梁数目和骨小梁厚度也显著减少,骨小梁间隔显著增高,差异均有统计学意义（均P<0.01）。小鼠股骨切片TRAP阳性破骨细胞数目增多,血清TRAP5b水平显著增加（P<0.01）。 结论 MGP可能通过抑制破骨细胞形成和骨吸收来维持骨量。     

聚乙烯颗粒对糖尿病模型兔假体周围骨溶解中TNF-α变化影响的实验研究

目的 了解TNF-α在聚乙烯颗粒诱导糖尿病模型假体周围骨溶解中的作用及其机理.方法 糖尿病模型造模成功后,向兔子的一侧股骨下端置入一枚假体,每2周向实验组手术侧膝关节注射超高分子聚乙烯颗粒混悬液,向对照组注射生理盐水,取兔子的膝关节进行观察,然后取双组股骨下端和关节囊、滑膜分别做组织学检查.ELISA法测定假体周围界膜组织TNF-α的浓度.结果 实验组邻近假体的滑膜组织增生,模拟假体周围有骨坏死,可以见到多核巨细胞及破骨细胞存在;对照组临近假体周围可见成熟的骨组织,有成骨细胞生成,未见异物颗粒和多核巨细胞生成,对照组的滑膜组织正常.实验组TNF-α含量明显高于对照组.结论 超高分子聚乙烯颗粒可抑制糖尿病模型假体周围新生骨组织形成,激活单核巨噬细胞,使之释放多量的TNF-α,在诱导糖尿病模型假体周围发挥骨溶解作用.     

四种小鼠破骨细胞体外诱导培养方法的比较

[目的]比较不同的破骨细胞体外诱导培养方法,为研究外源性因素对骨代谢影响提供方法学基础。[方法]采用骨髓基质细胞和骨髓单核细胞三维共育、骨髓基质细胞培养液转移刺激骨髓单核细胞、重组核因子-κB受体激活物配基（RANKL）诱导骨髓单核细胞和RANKL诱导单核巨噬细胞株RAW264．7四种方法体外诱导破骨细胞。活细胞示踪剂CM-DiI标记RAW264．7后,用激光共聚焦显微镜扫描观察破骨细胞形成过程;抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色法染色破骨细胞。[结果]四种方法均成功地诱导培养出由多个细胞互相融合的TRAP阳性多核破骨细胞。加入RANKL的方法诱导出的破骨细胞较大,数量也较多,方法简单。正常骨髓基质细胞诱导形成的破骨细胞形态较小,数量也相对较少,过程复杂,但可以用来研究干预因素作用于骨髓基质细胞后对破骨细胞分化的间接影响。在对照组及诱导培养体系中均可观察到一类不互相融合的TRAP阳性细胞,含1～3个核,TRAP染色多集中在胞核周围,此类细胞可能是尚未分化的破骨细胞前体。而互相融合的破骨细胞TRAP染色见于整个胞浆。[结论]各种破骨细胞体外诱导培养方法各有优势,应根据不同的实验目的选用不同的破骨细胞诱导培养方法。     

维生素D_3抑制电离辐射引起的小鼠破骨细胞激活

目的研究维生素D3(VD3)对电离辐射引起破骨细胞代谢改变的保护作用。方法 24只雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组、γ射线辐照组和1000IU VD3注射处理的γ射线辐照组。酶联免疫吸附双抗体夹心法测定小鼠血清中小鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)、小鼠抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRAP-5b)、小鼠可溶性核因子-κB受体活化因子配体(sRANKL)、小鼠Ⅰ型胶原C端肽(CTX-1);采用甲基百里香酚蓝比色法测定血清中钙离子浓度。抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色骨病理石蜡切片观察破骨细胞形态变化。用SPSS12.0统计软件分析数据。结果与对照组比,γ射线辐照组小鼠血清中TRAP-5b、CTX-1、sRANKL和TNF-α含量分别升高了37.30%、47.14%、19.55%和17.67%(P<0.05)。VD3注射处理的γ射线辐照组血清中TRAP-5b、CTX-1和sRANKL升高不明显(P>0.05)。VD3的保护率分别为42.06%、69.80%和68.12%,而TNF-α升高明显(P<0.05)。镜下γ射线辐照组小鼠骨内破骨细胞形态呈代谢增强改变;而VD3注射处理则明显改善γ射线辐照引起的破骨细胞的形态变化。结论 VD3通过降低破骨细胞活性关键因子sRANKL可以有效地减轻电离辐射引起的小鼠破骨细胞代谢增强。使用VD3是减轻放疗患者受电离辐射损害的一种潜在有效方法。     

松动人工髋关节界膜的免疫组化研究

目的 对髋翻修假体周围界膜进行免疫组化研究，探讨假体松动机理。方法 选取1995年2月～2003年12月因人工髋关节松动而行翻修术的29例患者，对人工全髋翻修假体周围界膜进行免疫组化检查，部分界膜行透射和扫描电镜检查。结果 （1）透射电镜检查见细胞线粒体肿胀。部分细胞胞浆见类脂质。扫描电镜检查：异物颗粒。（2）免疫组化结果：29例患者中共有22例翻修患者界膜内巨噬细胞、成纤维细胞、异物巨细胞IL-1β免疫组化阳性；29例翻修患者界膜内巨噬细胞、成纤维细胞、异物巨细胞均出现IL-6免疫组化阳性；TNF-α免疫组化未做出阳性结果。结论 （1）假体磨损产生磨损颗粒是引起生物学反应的重要因素。（2）界膜含有细胞因子IL-1β、IL-6，可能在假体周围骨溶解和假体松动中起重要作用。     

雄激素对女性骨质代谢的作用

雄激素对骨骼的作用因骨骼部位、物种、性别和年龄的不同而异。雄激素和雌激素都能保持松质骨量和完整性,且与年龄和性别无关。雄激素和雌激素一样都引起破骨细胞凋亡而抑制成骨细胞凋亡。虽然雄激素对松质骨的作用主要依赖于局部芳香化转变为雌激素发挥,但至少在啮齿动物中雄激素可以直接通过雄激素受体(AR)发挥作用。雄激素主要通过AR和雌激素受体α(ERα)也参与介导骨膜下成骨,高浓度雌激素通过ERβ介导则抑制骨膜下成骨。虽然雄激素表现出与雌激素类似的骨骼保护作用,但也有与雌激素不同的效应。     

雄激素对女性骨质代谢的作用

雄激素对骨骼的作用因骨骼部位、物种、性别和年龄的不同而异.雄激素和雌激素都能保持松质骨量和完整性,且与年龄和性别无关.雄激素和雌激素一样都引起破骨细胞凋亡而抑制成骨细胞凋亡.虽然雄激素对松质骨的作用主要依赖于局部芳香化转变为雌激素发挥,但至少在啮齿动物中雄激素可以直接通过雄激素受体(AR)发挥作用.雄激素主要通过AR和雌激素受体α(ERα)也参与介导骨膜下成骨,高浓度雌激素通过ERβ介导则抑制骨膜下成骨.虽然雄激素表现出与雌激素类似的骨骼保护作用,但也有与雌激素不同的效应.     

雄激素对女性骨质代谢的作用

雄激素对骨骼的作用因骨骼部位、物种、性别和年龄的不同而异。雄激素和雌激素都能保持松质骨量和完整性，且与年龄和性别无关。雄激素和雌激素一样都引起破骨细胞凋亡而抑制成骨细胞凋亡。虽然雄激素对松质骨的作用主要依赖于局部芳香化转变为雌激素发挥，但至少在啮齿动物中雄激素可以直接通过雄激素受体（AR）发挥作用。雄激素主要通过AR和雌激素受体α（ERα）也参与介导骨膜下成骨，高浓度雌激素通过ERβ介导则抑制骨膜下成骨。虽然雄激素表现出与雌激素类似的骨骼保护作用，但也有与雌激素不同的效应。     

99Tc-MDP治疗绝经后骨质疏松的临床研究

目的:研究99Tc-MDP治疗绝经后骨质疏松的效果。方法:选择明确诊断的绝经后骨质疏松患者231例,监测99Tc-MDP治疗前及治疗后12个月血清骨特异性碱性磷酸酶(BALP)、骨钙素(BGP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-6(IL-6)及骨密度(BMD)的变化。结果:治疗后两周患者腰背疼痛及胫膝酸软症状明显缓解。治疗后1个月80%的患者自述骨痛症状消失。治疗前血清BALP、TNF-α、BGP、IL-1和IL-6水平分别为(15.98±4.62)ng/ml、(2.51±0.52)mg/ml、(6.57±1.83)ng/ml、(0.65±0.13)pg/ml和(128.95±21.39)ng/ml;治疗后12个月血清BALP、TNF-α、BGP、IL-1和IL-6水平分别为(7.06±3.21)ng/ml、(1.36±0.43)mg/ml、(5.19±1.51)ng/ml、(0.33±0.08)pg/ml和(92.17±25.76)ng/ml,与治疗前比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。治疗前后BMD比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论:99Tc-MDP对骨生成区具有明显的导向性,可进入骨组织参与骨代谢调节,具有抑制破骨细胞活性、抑制骨丢失及增加BMD的作用。     

氟化钠对体外培养破骨细胞的影响

目的 :探讨氟对体外培养破骨细胞的影响。方法 :从新生兔四肢长骨中分离出破骨细胞 ,将其与盖玻片、骨片共同培养 ,于培养 6 h后加入不同浓度 (10 - 7～ 10 - 3mol/L)的氟化钠 (Na F) ,用酶组织化学染色法测定 Na F对破骨细胞的作用 ,用倒置相差显微镜和图像分析处理系统对骨吸收陷窝的数目和面积进行检测。结果 :Na F使抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色阳性的多核细胞 ,即破骨细胞数目减少。染氟 10 - 5m ol/L、 10 - 4mol/L、 10 - 3mol/L 时 ,破骨细胞数目与对照组相比差异有显著性 (P<0 .0 5 ) ,细胞体积缩小 ,胞浆空泡增多 ,其中 10 - 3m ol/L Na F组破骨细胞改变尤为明显。与对照组相比 ,10 - 5mol/L、 10 - 4mol/L、 10 - 3mol/L Na F组骨片上骨吸收陷窝数量和面积均减少 (P<0 .0 5 ) ,而且陷窝周缘也变得模糊。结论 :在本实验浓度和时间范围内 ,Na F可直接损伤破骨细胞并抑制破骨细胞的骨吸收功能。     

异麦芽低聚糖对葡聚糖硫酸钠所致小鼠溃疡性结肠炎的改善作用研究

目的探讨异麦芽低聚糖(isomaltooligosaccharide,IMO)对葡聚糖硫酸钠(Dextran Sulfate Sodium,DSS)诱导的小鼠溃疡性结肠炎的改善作用。方法:C57BL/6型小鼠随机分为对照组(CN)、模型组(DSS)、IMO低(2g/kg IMO+DSS)及高剂量(4g/kg IMO+DSS)4组。小鼠饮用2%的DSS水溶液7d诱导溃疡性结肠炎,同时以10ml/kg给予双蒸水(ddH_2O)、低IMO和高IMO水溶液灌胃12d。HE染色观察结直肠组织病理改变及评分。实时定量PCR方法检测肠组织中相关炎症因子的mRNA表达。结果:与DSS组相比,IMO低及高剂量明显改善了小鼠的体质量下降程度及疾病活动指数;结、直肠的长度有显著增长(P0.05);HE染色结果表明:与DSS组比,IMO低及高剂量组小鼠受损结肠恢复较好;IMO低及高剂量组小鼠的肠组织表达的IL-1β、IL-6、IL-17a、IL-18、TNF-α及IL-10等炎症因子mRNA表达水平显著低于DSS组。结论:IMO可显著抑制炎症因子的表达水平从而缓解DSS诱导的溃疡性结肠炎。     

维生素K与骨代谢的研究进展

维生素K不仅与凝血功能有关 ,而且影响骨代谢。本文介绍维生素K对骨代谢的影响及发生机制 ,并概述了评价机体维生素K状况的指标。维生素K能向骨中转运 ,并且在骨中有较高的含量。它参与多种骨蛋白谷氨酸残基羧化反应 ,直接影响成骨细胞和破骨细胞的功能 ,间接影响与骨代谢有关的因素 ,从而促进骨形成代谢 ,减少骨量丢失 ,抑制软骨钙化     

孕酮对生殖支原体诱导单核细胞产生前炎症细胞因子的影响

目的:探讨孕酮(P4)对生殖支原体(Mg)诱导人单核细胞产生前炎症细胞因子IL-1β,IL-8和TNF-α的影响。方法:以人单核细胞系THP-1为研究对象,用不同浓度的P4孵育24 h后,再加入热灭活的Mg刺激,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测3种前炎症细胞因子的产生情况,MTT检测细胞活性。结果:Mg能诱导THP-1细胞产生IL-1β、TNF-α和IL-8,P4处理后能增强IL-1β和IL-8的量,但能抑制TNF-α的产生。结论:P4对Mg诱导的IL-1β、IL-8和TNF-α的产生具有不同调控作用。因此,其在早产预防中的使用并非抑制细胞因子的产生。     

心通颗粒对病毒性心肌炎小鼠炎症反应及心肌损伤的保护作用

目的探讨心通颗粒对柯萨奇病毒诱导的病毒性心肌炎小鼠炎症反应及心肌损伤的保护作用。方法健康雄性BALB/c小鼠150只按照随机数表分为对照组、心肌炎组、利巴韦林组、心通颗粒高、低剂量组,每组30只。利巴韦林组、心通颗粒高、低剂量组分别进行灌胃,其余两组给予生理盐水。第7天除对照组外,其余各组注射柯萨奇B组3型(CVB3)病毒,建立病毒性心肌炎小鼠模型;7～21 d,各组再次同前给药。使用酶联免疫吸附试验测定小鼠心肌肌钙蛋白I(cTnI)、肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)、肌酸激酶(CK)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素(IL)-4、IL-10以及心肌组织中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量以及CVB3 mRNA的表达量。结果与对照组相比,心肌炎组cTnT、CK、CK-MB、MDA、TNF-α、IFN-γ以及CVB3 mRNA增加(P0.05);SOD、GSH-Px、IL-4以及IL-10降低(P0.05)。与心肌炎组相比,心通颗粒高剂量和低剂量组cTnT、CK、CK-MB、MDA、TNF-α、IFN-γ以及CVB3 mRNA降低(P0.05);SOD、GSH-Px、IL-4以及IL-10升高(P0.05),且高剂量组变化更加明显(P0.05)。结论注射CVB3病毒成功建立小鼠心肌炎模型,通过心通颗粒(尤其高剂量)干预,检测到小鼠心肌各项生化指标以及炎症反应明显减轻,可能与炎症反应被抑制相关。     

竹荪醇提物对脂多糖诱导的RAW264.7细胞炎症反应的影响

目的探讨竹荪醇提物对LPS诱导的RAW264.7细胞肿瘤坏死因子(TNF-α)、一氧化氮(NO)的分泌,TNF-α、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素10(IL-10)的m RNA水平以及核转录因子(NF-κB)p65蛋白表达的影响及可能的抗炎机制。方法以不同浓度(100、200、400μg/ml)的竹荪醇提物作用于LPS(1μg/ml)诱导的RAW264.7小鼠巨噬细胞,采用ELISA法和Griess法检测炎性介质TNF-α和NO的分泌量;RT-PCR法测定促炎介质TNF-α、iNOS、IL-6和抗炎介质IL-10的m RNA水平;Western blot检测NF-κB p65蛋白的表达水平。结果与LPS组相比,200、400μg/ml的竹荪醇提物能显著抑制LPS诱导的RAW264.7细胞TNF-α和NO的释放(P0.01);且不同程度抑制RAW264.7细胞中促炎介质iNOS、TNF-α和IL-6的m RNA表达水平(P0.01),剂量依赖性的促进抗炎介质IL-10的m RNA表达水平(P0.01);不同浓度的竹荪醇提物均可显著抑制LPS诱导RAW264.7细胞中NF-κB p65蛋白的表达,差异有统计学意义(P0.01)。结论竹荪醇提物可抑制LPS诱导的RAW264.7细胞TNF-α和NO的释放,其抗炎作用的发挥可能与抑制NF-κB p65蛋白的表达,从而调节炎性介质的基因水平有关。     

俞氏安肠方治疗2,4,6-三硝基苯磺酸诱导的小鼠结肠炎的疗效检测

目的 通过分析俞氏安肠方（YST）对UC小鼠炎症因子、NLRP3炎症小体及结肠黏膜屏障的影响,来探讨其治疗UC的潜在机制。方法 实验小鼠随机分成对照组、模型组、YST低剂量组、高剂量组,用2, 4, 6-三硝基苯磺酸（TNBS）构建UC小鼠模型。记录所有小鼠的体质量、粪便黏度和粪便出血情况。处死后,用苏木精-伊红染色观察结肠组织病理变化。ELISA检测结肠组织TNF-α、IL-1β、IL-6的水平。Western Blot分析NLRP3炎症小体和结肠黏膜屏障相关的蛋白质的表达。结果 TNBS导致实验小鼠DAI值升高,引发严重的组织学损伤。YST可以降低小鼠结肠组织的TNF-α、IL-1β、IL-6水平。YST可以下调NLRP3炎症小体相关的蛋白（NLRP3、ASC、Caspase-1）表达水平。YST可以上调结肠黏膜屏障相关蛋白（ZO-1、Occludin、Claudin-1）的表达。结论 YST可以通过减少炎症反应、抑制NLRP3炎症小体和保护肠黏膜屏障来改善TNBS诱导的UC小鼠的症状及组织学损伤。     

唑来磷酸对成骨细胞功能影响研究进展

在成年人中,骨重塑是一个不断进行的过程,而且在正常情况下,破骨细胞活性与成骨细胞活性相当。骨重建周期中,由破骨细胞引起的“骨吸收”与成骨细胞引起的“骨形成”间的“偶联”,是维持骨结构完整性及合适骨强度的关键环节,两者失去平衡将引起一系列骨骼相关疾病。唑来膦酸是异环型第三代双膦酸盐类药物,是骨代谢的调节器,它能抑制骨吸收而减少骨基质生长因子的释放,抑制癌细胞粘附于骨基质,降低癌症患者的骨转移发生率。可用于预防恶性肿瘤引起的骨骼相关疾病,延缓骨转移的发生,还有望用于骨质疏松症和变形性骨炎的治疗。