细胞增殖抑制基因调控慢性阻塞性肺疾病大鼠 Wnt/PCP通路抑制气道成纤维细胞增殖

目的探讨细胞增殖抑制基因(HSG)在大鼠慢性阻塞性肺疾病(COPD)气道重建中Wnt/PCP通路的作用及其机制。方法将大鼠分为对照组和COPD模型组;采用烟熏+气道内注射脂多糖建立;取气管做小气道成纤维细胞原代培养,第3代细胞系用于实验。HE染色鉴定肺组织是否造模成功。ELISA检测培养上清液中MMP-9、PDGF和TGF-β1的表达;real-time PCR检测成纤维细胞中HSG、PDGF、TGF-β1和RhoA的mRNA的表达;Western blot法检测成纤维细胞HSG和RhoA蛋白表达。结果模型组成纤维细胞上清液中PDGF、TGF-β1和MMP-9表达显著高于对照组(P0.01);模型组成纤维细胞中HSG mRNA及蛋白表达显著低于对照组(P0.01);RhoA蛋白及PDGF、TGF-β1和RhoA mRNA表达显著高于对照组(P0.01)。HSG表达与MMP-9、PDGF、TGF-β1和RhoA表达呈负相关(P0.01)。结论 HSG可能通过调控Wnt/PCP通路,抑制大鼠气道成纤维细胞的增殖从而参与气道重建。     

转化生长因子β1对香烟诱导的大鼠肺泡巨噬细胞γ-谷氨酰半胱氨酸合酶表达的影响

目的:探讨转化生长因子(TGF)-β1对香烟诱导的大鼠肺泡巨噬细胞?-谷氨酰半胱氨酸合酶(γ-GCS)和活化蛋白(AP)-1亚单位c-fos mRNA及其蛋白表达的影响.方法:通过支气管肺泡灌洗获取大鼠肺泡巨噬细胞,随机分为对照组、香烟组和TGF-β1组.TGF-β1组加入终浓度为3μg/L的TGF-β1,2 h后除对照组外,余2组均加入香烟烟雾提取物,对照组加入磷酸盐缓冲液.分别用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和免疫细胞化学方法检测肺泡巨噬细胞中γ-GCSh(重链亚单位)及c-fos mRNA和蛋白的表达.结果:香烟组γ-GCSh和c-fos mRNA及其蛋白表达水平显著高于对照组(分别P＜0.05,P＜0.01).TGF-β1组γ-GCSh mRNA及其蛋白表达水平明显低于香烟组(均P＜0.01);而c-fos mRNA及其蛋白表达水平明显高于香烟组(均P＜0.01).结论:转化生长因子-β1参与香烟所致慢性阻塞性肺疾病肺氧化/抗氧化失衡的发病机制.     

红霉素对吸烟大鼠肺内TGF-β1和γ—GCS表达的影响

目的:探讨红霉素对吸烟大鼠肺内转化生长因子-β1(TGF-β1)和γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)的影响以及在慢性阻塞性肺疾病治疗中的抗氧化作用。方法:Wistar大鼠30只,随机抽取20只被动吸烟4周后,10只继续吸烟8周作为吸烟组、10只吸烟加红霉素灌胃作红霉素治疗组,另10只作对照组。测定气道阻力和肺顺应性,采用免疫组织化学法、免疫细胞化学法和原位杂交法检测气道上皮细胞TGF-β1和γ-GCS蛋白、肺泡巨噬细胞两者蛋白及其mRNA表达。结果:吸烟组大鼠气道阻力增高,肺顺应性降低,TGF-β1和γ-GCS蛋白及其mRNA表达均明显增高(P<0.05),红霉素治疗组气道阻力有所降低、肺顺应性增高,TGF-β1和γ-GCS蛋白及其mRNA表达均低于吸烟组,但高于对照组(P<0.05)。吸烟组TGF-β1与γ-GCS表达呈正相关(P<0.05),而红霉素治疗组无明显相关性。结论:红霉素干预后吸烟大鼠肺内TGF-β1和γ-GCS表达降低,提示红霉素可能在COPD治疗中发挥一定的抗氧化作用。     

HSG通过Wnt/β-catenin通路抑制COPD大鼠气道成纤维细胞增殖

目的研究增殖抑制基因(HSG)在大鼠慢性阻塞性肺疾病(COPD)气道重建中与Wnt/β-catenin信号传导通路的关系及其调控气道重建的机制。方法将大鼠随机分为对照组及COPD模型组,模型组采用气道内注射脂多糖加烟熏方法建立。HE染色鉴定COPD组织,测定气道管壁总面积/气道基底膜周长(WAt/Pbm)评价气道重建情况。组织块贴壁法培养大鼠气道成纤维细胞,real time-PCR检测成纤维细胞HSG和β-catenin mRNA表达。Western blot联合ELISA法检测HSG、β-catenin、GSK-3β、TGF-β1和MMP-9蛋白表达。分析HSG、β-catenin基因表达与TGF-β1和MMP-9细胞因子分泌的相关性。结果模型组大鼠小气道重建显著。COPD大鼠气道成纤维细胞中HSG mRNA和蛋白表达均低于对照组。β-catenin mRNA和蛋白表达均高于对照组,P-GSK-3β、TGF-β1和MMP-9蛋白表达也高于对照组。HSG mRNA的表达与β-catenin mRNA表达及与TGF-β1和MMP-9细胞因子分泌呈负相关。结论 HSG可能通过调控Wnt/β-catenin信号通路,抑制大鼠气道成纤维细胞的增殖从而参与气道重建。     

红霉素对吸烟大鼠肺内TGF-β1和γ-GCS表达的影响

目的： 探讨红霉素对吸烟大鼠肺内转化生长因子-β₁（TGF-β₁）和γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶（γ-GCS）的影响以及在慢性阻塞性肺疾病治疗中的抗氧化作用。方法: Wistar大鼠30只，随机抽取20只被动吸烟4周后，10只继续吸烟8周作为吸烟组、10只吸烟加红霉素灌胃作红霉素治疗组，另10只作对照组。测定气道阻力和肺顺应性，采用免疫组织化学法、免疫细胞化学法和原位杂交法检测气道上皮细胞TGF-β₁和γ-GCS蛋白、肺泡巨噬细胞两者蛋白及其mRNA表达。结果: 吸烟组大鼠气道阻力增高，肺顺应性降低，TGF-β₁和γ-GCS蛋白及其mRNA表达均明显增高（P<0.05），红霉素治疗组气道阻力有所降低、肺顺应性增高，TGF-β₁和γ-GCS蛋白及其mRNA表达均低于吸烟组，但高于对照组（P<0.05）。吸烟组TGF-β₁与γ-GCS表达呈正相关（P<0.05），而红霉素治疗组无明显相关性。结论: 红霉素干预后吸烟大鼠肺内TGF-β₁和γ-GCS表达降低，提示红霉素可能在COPD治疗中发挥一定的抗氧化作用。     

长期烟雾暴露对大鼠肺血管重塑及转化生长因子-β1表达的影响

目的:观察长期吸烟对大鼠肺血管重塑及转化生长因子-β1(TGF-β1)的影响,探讨其发生的可能机制。方法:将36只健康SD雄性大鼠随机分为对照组、烟雾暴露2周(S-2W)和烟雾暴露12周(S-12W)组。苏木精-伊红染色和α-平滑肌肌动蛋白染色切片观察肺血管重塑的程度,免疫组化法检测增殖细胞核抗原(PCNA)和TGF-β1在肺动脉的相对表达;RT-qPCR检测肺动脉TGF-β1的mRNA表达。结果:随烟雾暴露时间延长,模型组血管壁厚度和血管直径比值(WT%)和完全肌化血管比例均较对照组明显增大,差异具有统计学显著性(P0.01)。模型组的PCNA及TGF-β1蛋白表达水平均较对照组增大,且两模型组之间差异有统计学显著性(P0.01)。与对照组比较,模型组TGF-β1的mRNA表达均显著增加(P0.05),其中S-2W组和S-12W组之间的差异亦有统计学显著性(P0.05)。TGF-β1的mRNA表达与WT%和完全肌化血管比例呈显著正相关(P0.01);TGF-β1的mRNA表达与PCNA蛋白表达呈显著正相关(P0.01)。结论:长期烟雾暴露可导致大鼠肺血管重塑的形成,其机制可能与吸烟上调大鼠肺血管TGF-β1的mRNA表达,诱导肺血管平滑肌细胞增殖有关。     

强的松联合依那普利对实验性IgA肾病小鼠肾组织表达TGF-β1的影响

目的 探讨强的松联合依那普利对IgA肾病(IgAN):b鼠肾组织TGF-β1含量及其mRNA表达的影响.方法 用"口服牛血清白蛋白联合尾静脉注射葡萄球菌肠毒素B"法复制小鼠IgAN模型,设正常对照组、模型对照组、强的松组、依那普利组和强的松联合依那普利治疗组.荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法分别检测各组小鼠.肾组织TGF-β1 mRNA表达、免疫组化SABC法检测各组小鼠肾组织TGF-β1的含量.结果 模型组小鼠.肾组织TGF-β1含量及其mRNA表达显著高于正常组(P＜0.05);强的松组、依那普利组和强的松联合依那普利治疗组小鼠肾组织TGF-β1含量及其mRNA表达分别低于模型组,差异均有显著性(P＜0.05);强的松联合依那普利治疗组TGF-β1含量及其mRNA表达分别低于强的松组和依那普利组(P＜0.05);强的松组TGF-β1含量及其mRNA表达低于依那普利组(P＜0.05).结论 IgAN肾组织TGF-β1含量及mRNA的表达明显增加;在抑制IgAN小鼠肾组织TGF-β1表达方面,单用强的松疗效优于单用依那普利、合用强的松和依那普利疗效优于单用强的松或单用依那普利.     

抗SH2-Bβ抗体可减轻哮喘小鼠气道炎症和气道高反应性

目的:研究SH2-Bβ在支气管哮喘发病中的作用.方法:SH2-Bβ被阻断后,观察哮喘小鼠肺泡灌洗液中细胞数、应用酶联免疫吸附实验肺泡灌洗液、血清及脾细胞培养液中IgE、IL-4含量变化.应用小鼠肺功能仪检测气道阻力的变化.结果:同哮喘组比,anti-SH2-Bβ组:1)气道阻力明显降低(P＜0.01);2)肺泡灌洗液中细胞总数及嗜酸细胞数明显降低(P＜0.01);3)血清IgE及脾细胞培养液中IgE、IL-4含量明显降低(P＜0.01).结论:SH2-Bβ参与哮喘小鼠气道炎症和气道高反应性的发病机制.阻断SH2-Bβ可能成为治疗过敏性哮喘的有效新方法.     

TGF-β1 shRNA真核表达质粒抑制人肺成纤维细胞TGF-β1的表达

目的:观察构建成功的三个针对人转化生长因子β1(TGF-β1)的小发夹RNA(shRNA)真核表达质粒抑制人肺成纤维细胞TGF-β1的表达.方法:将真核表达载体psiSTRIKE-RNAi1、psiSTRIKE-RNAi2、psiSTRIKE-RNAi3和对应的阴性对照载体经酶切鉴定和测序分析后,以Lipofectamine2000介导转染人肺成纤维细胞,48小时后应用实时荧光定量PCR检测人肺成纤维细胞TGF-β1 mRNA的表达并用ELISA检测细胞上清液中TGF-β1蛋白质的浓度.结果:重组质粒经酶切和DNA测序证实插入片段的碱基序列与预期设计一致.转染组细胞TGF-β1表达受到明显抑制,以psiSTRIKE-RNAi2的抑制效应最为显著(P＜0.01).结论:三个针对TGF-β1shRNA的重组质粒均能抑制TGF-β1在人肺成纤维细胞中的表达.     

Pyrin重组蛋白对支气管哮喘小鼠气道炎症的影响

目的 探讨Pyrin重组蛋白对支气管哮喘小鼠气道炎症的抑制作用及机制的研究.方法 40只雄性清洁级BALB/c小鼠,随机分为4组,每组10只.分别为生理盐水对照组、卵蛋白(OVA)哮喘组、Pyrin重组蛋白治疗3d组和Pyrin重组蛋白治疗7d组.在末次激发24h后所有小鼠取左肺组织行苏木精-伊红(HE)染色,Masson三色染色;用图像分析软件测定支气管壁厚度(WAt/Pbm)、支气管平滑肌厚度(WAm/Pbm)及胶原纤维面积;用酶联免疫吸附法( ELISA)检测支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中IL-4、IL-5、TNF-α及IFN-γ含量;用RT-PCR检测肺组织中结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)和转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)的mRNA表达;用Western blot方法检测核转录因子(nuclear factor kappa B,NF-kB)的表达.结果 哮喘模型组小鼠BALF中细胞总数、IL-4、IL-5、TNF-α水平增高和IFN-γ水平降低;肺组织支气管管壁厚度、气道平滑肌厚度、胶原纤维面积,CTGF、TGF-β1的转录和表达水平以及NF-kB表达水平均显著高于生理盐水对照组(P＜0.05).Pyrin重组蛋白3d和7d干预组小鼠BALF中细胞总数、IL-4、IL-5、TNF-α水平和肺组织支气管管壁厚度、气道平滑肌厚度、胶原纤维面积、NF-kB表达水平显著降低,与哮喘模型组比较差异均具有统计学意义(P＜0.05),而BALF中IFN-γ水平明显上升,与哮喘模型组比较,差异均具有统计学意义(P＜0.05);Pyrin重组蛋白7d干预组CTGF、TGF-β1的转录和表达水平显著低于哮喘组(P＜0.05).结论 我们推测Pyrin重组蛋白可能部分是通过抑制NF-kB信号途径来阻断TGF-β1和CTGF的过度表达而实现抑制气道炎症,进而抑制气道重构的发生.     

气道内高压力促进3种气道重塑相关因子的表达

目的探讨机械通气情况下气道内不同压力水平对气道重塑相关因子表达的影响。方法手术室经全麻行机械通气的42例慢性阻塞性肺疾病(COPD)作为COPD组和33例无基础肺疾病患者作为对照组。机械通气根据吸气峰压(PIP)水平又分为高、中、低压力组(分别为24、22和20 cm H_2O),呼气末正压均为5 cm H_2O。机械通气前及3 h后收集支气管肺泡灌洗液(BALF)。酶联免疫吸附法和Western blot法检测BALF中气道重塑相关因子成纤维生长因子2(FGF-2)、转化生长因子-β1(TGF-β1)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达水平。结果 1)机械通气前COPD组BALF中的FGF-2、TGF-β1和MMP-9蛋白水平明显高于对照组(P0.01)。2)机械通气后对照组在高压力刺激下FGF-2、TGF-β1和MMP-9表达水平升高(P0.05);而COPD组压力刺激下上述3种蛋白表达升高更明显(P0.05),且高压力组中及低压力组(P0.05)。3)相关性分析显示,COPD组BALF中FGF-2、TGF-β1、MMP-9表达水平与气道压力成正相关(P0.01)。结论机械通气时气道内的持续高压力可能通过作用于气道上皮细胞内压力敏感通道进而提高气道重塑因子FGF-2、TGF-β1、MMP-9的表达水平,COPD患者尤为显著。     

转化生长因子β1对香烟诱导的大鼠肺泡巨噬细胞γ-谷氨酰半胱氨酸合酶表达的影响

目的：探讨转化生长因子（TGF）-β1对香烟诱导的大鼠肺泡巨噬细胞γ-谷氨酰半胱氨酸合酶（γ-GCS）和活化蛋白(AP)-1亚单位c-fos mRNA及其蛋白表达的影响。方法:通过支气管肺泡灌洗获取大鼠肺泡巨噬细胞，随机分为对照组、香烟组和TGF-β1组。TGF-β1组加入终浓度为3 μg/L的TGF-β1,2 h后除对照组外，余2组均加入香烟烟雾提取物,对照组加入磷酸盐缓冲液。分别用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）和免疫细胞化学方法检测肺泡巨噬细胞中γ-GCSh(重链亚单位)及c-fos mRNA和蛋白的表达。结果:香烟组γ-GCSh和c-fos mRNA及其蛋白表达水平显著高于对照组(分别P<0.05,P<0.01)。TGF-β1组γ-GCSh mRNA及其蛋白表达水平明显低于香烟组(均P<0.01)；而c-fos mRNA及其蛋白表达水平明显高于香烟组(均P<0.01)。结论:转化生长因子-β1参与香烟所致慢性阻塞性肺疾病肺氧化/抗氧化失衡的发病机制。     

HMGB1RNAi抑制TGF-β1诱导的A549细胞系EMT

目的探讨HMGB1在肺泡上皮细胞间质转分化中的作用。方法设计并合成针对HMGB1的小干扰RNA(siRNA),体外培养Ⅱ型肺泡上皮细胞系细胞-A549细胞,将细胞分为4组:1)对照组,2)TGF-β1刺激组,3)RNAi组(TGF-β1+HMGB1 siRNA),4)RNAi阴性对照组(TGF-β1+siRNA阴性对照);倒置相差显微镜观察细胞形态学;RT-PCR法检测HMGB1和α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的mRNA表达;Western blot法检测α-SMA和HMGB1蛋白表达。结果 TGF-β1刺激组细胞HMGB1和α-SMA的mRNA和蛋白表达均较对照组显著增加(P0.01);RNAi组HMGB1、α-SMA mRNA和蛋白表达均较正常对照组显著下降(P0.01)。结论 HMGB1可能参与了TGFβ1诱导的肺泡上皮细胞转分化。     

抗IgE抗体对哮喘模型小鼠的气道高反应和Th2类细胞因子的影响

目的探讨抗IgE抗体在哮喘小鼠模型中对气道高反应及Th2类细胞因子变化的影响及其可能机制。方法雌性Balb/c小鼠30只随机分成3组,即正常对照组、哮喘模型组和抗IgE抗体干预组。分别采用酶联免疫吸附法(ELISA)和蛋白质印迹检测支气管肺泡灌洗液(BALF)和肺组织中IL-4、IL-5、IL-13、IL-10、TGF-β1含量以及蛋白表达。应用小鼠肺功能仪检测气道阻力的变化。结果抗IgE抗体治疗组与哮喘模型组比较气道阻力明显降低。哮喘模型组小鼠BALF和肺组织中IL-4、IL-5、IL-13、IL-10、TGF-β1含量和蛋白表达明显升高,与正常对照组比较,显著差异(P<0.05)。抗IgE抗体干预组小鼠BALF和肺组织中IL-4、IL-5、IL-13含量和蛋白表达水平均明显降低;IL-10、TGF-β1含量和蛋白表达水平上升不明显,与哮喘模型组比较,没有显著差异(P>0.05)。结论抗IgE抗体对哮喘小鼠的治疗作用,其机制可能与调节Th2细胞所分泌的炎症细胞因子有关。     

长期烟雾暴露对大鼠肺泡上皮超微结构及转化生长因子-β1表达的影响

目的:观察长期烟雾暴露对肺泡上皮超微结构和转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响,探讨TGF-β1在长期烟雾所致肺病理变化中的作用。方法:建立Wistar大鼠烟雾暴露模型,电镜下观察烟雾暴露对大鼠肺泡上皮超微结构的影响,应用免疫组织化学及RT-PCR-检测TGF-β1及TGF-β1 mRNA在肺组织中的表达。结果:与对照组比较,随着烟雾暴露时间的延长,实验组大鼠肺泡上皮细胞细胞器出现损伤并逐渐加重,5月末最重;随着烟雾暴露月份的增加,熏烟组肺组织TGF-β1和TGF-β1 mRNA表达增多,至5月末时表达最多,6月表达减少。结论:烟雾暴露可导致肺泡上皮细胞超微结构破坏和TGF-β1表达增强,说明肺组织破坏与TGF-β1表达正相关。     

MG132抑制TGF-β1诱导的人肺成纤维细胞活化

目的探讨泛素-蛋白酶体抑制剂MG132对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人肺成纤维细胞活化的影响及机制。方法体外培养人胚肺成纤维细胞(MRC-5),随机分为对照组、TGF-β1组(10μg/L)和MG132(0.5μmol/L)处理组。Western blot法检测细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原α1(COL1A1)的表达;RT-PCR和Western blot法分别检测细胞Smad7、核转录共抑制因子SnoN、TGF-βI型受体(TβRI)、Smad2和Smad3 mRNA及蛋白的表达。结果与对照组比较,TGF-β1促进了α-SMA和COL1A1蛋白表达(P0.05),MG132抑制了TGF-β1的上述作用(P0.05)。TGF-β1组Smad7和SnoN mRNA表达较对照组增加(P0.05)。TGF-β1组Smad7和SnoN蛋白表达较对照组减少(P0.05),而MG132组Smad7和SnoN蛋白水平较TGF-β1组增加(P0.05)。结论 MG132可能通过阻止Smad7和SnoN蛋白泛素化降解,抑制TGF-β1诱导人肺成纤维细胞活化。     

地塞米松对哮喘小鼠肺组织中GPR43表达的调节作用

目的 研究G蛋白耦联受体43(GPR43)在哮喘小鼠肺组织内的表达,同时探讨地塞米松对GPR43表达的影响.方法 30只BALB/C6小鼠随机分为对照组、哮喘组、地塞米松组,每组10只;卵清白蛋白(OVA)致敏和激发建立哮喘小鼠模型;肺泡灌洗液(BALF)细胞计数;HE染色观察各组气道炎症发生及气道结构改变情况;RT-PCR测定各组小鼠肺组织GPR43mRNA的表达变化;免疫组化观察肺中GPR43的表达及定位.结果 哮喘组BALF嗜酸性粒细胞(EOS)与对照组相比明显增高,地塞米松组明显低于哮喘组(P＜0.01);HE染色提示哮喘组气道上皮出现EOS等大量炎性细胞浸润,管壁厚度较对照组明显增加(P＜0.01);RT-PCR结果提示GPR43受体mRNA的表达量在哮喘组最低,与对照、地塞米松组相比有统计学差异(P＜0.01);免疫组化图像分析提示GPR43蛋白表达哮喘组明显降低,与对照组、地塞米松组相比均有显著性差异(P＜0.01).结论 哮喘小鼠肺组织中GPR43表达下降,地塞米松能部分上调其表达,从而减轻气道炎症反应.     

IL-33/ST2激活人肺成纤维细胞表达纤维黏连蛋白1和1型胶原蛋白参与哮喘气道重塑

目的检测IL-33刺激下人肺成纤维细胞(HLF-1)纤维黏连蛋白1(FN1)及1型胶原蛋白(Col1)的表达。方法选取哮喘组28例,健康对照组25例,ELISA检测血清IL-33的表达;同时对其中8例哮喘患者及8例健康对照者行电子气管镜下气道黏膜活检,HE染色观察哮喘患者气道重塑,免疫组织化学染色观察IL-33在气道黏膜的分布;培养HLF-1人肺成纤维细胞,分别给予不同浓度IL-33细胞因子刺激,通过实时定量PCR和Western blot法分别检测人肺成纤维细胞FN1和Col1的mRNA、蛋白表达。结果 ELISA检测结果显示哮喘病人组血清IL-33表达水平明显高于健康对照组(P0.01);HE染色显示哮喘患者基底膜明显增厚且哮喘患者基底膜厚度与血清IL-33成正相关性(r=0.829,P0.05);免疫组化结果显示IL-33主要来自受损的气道上皮细胞;不同浓度IL-33细胞因子刺激下的HLF-1人肺成纤维细胞FN1、Col1的表达呈浓度依赖性增高(P0.05),丙酸氟替卡松及阻断IL-33受体ST2可以部分抑制FN1和Col1的表达(P0.05)。结论 IL-33/ST2可能通过激活人肺成纤维细胞过度表达FN1和Col1参与哮喘气道重塑。     

哮喘小鼠肺组织中转录因子RORγt的表达与气道炎症的关系

目的:探讨Th17细胞转录因子RORγt在支气管哮喘小鼠肺组织中的表达及其与哮喘气道炎症的关系.方法:采用卵清蛋白(OVA)致敏方法建立支气管哮喘小鼠模型;BALB/c小鼠30只随机分为对照组、哮喘组、地塞米松治疗组各10只.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测小鼠肺泡灌洗液(BALF)、血清中白细胞介素17(IL-17)水平;HE染色评价各组小鼠气道炎症情况;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测肺组织IL-17、RORγt mRNA表达水平;免疫印记(Western blot)方法检测肺组织RORγt蛋白表达水平.结果:哮喘组小鼠肺组织RORγt mRNA、蛋白水平及IL-17水平均明显高于对照组和地塞米松治疗组(P＜0.05),RORγt蛋白表达量与嗜酸性粒细胞数、淋巴细胞数、中性粒细胞数、BALF、外周血中IL-17含量、肺组织IL-17 mRNA表达量均呈正相关关系(r＝0.789、0.795、0.902、0.669、0.806、0.883,P值均＜0.01).结论:RORγt在支气管哮喘小鼠肺组织呈高表达,其表达水平与气道炎症密切相关,参与了哮喘气道炎症的发生过程.     

丹皮酚通过抑制miR-21表达减轻博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化

目的研究丹皮酚(PAE)通过抑制微小RNA-21(miR-21)减轻博莱霉素(BLM)诱导肺纤维化的相关机制。方法将SD大鼠随机分为对照组、BLM组、阳性对照(PC)组、PAE组,比较各组大鼠的肺纤维化相关指标,miR-21、Smad7的mRNA相对表达水平,及Smad7、TGF-β1、COLIA1、α-SMA蛋白水平;将制备好的纤维细胞分为对照组,TGF-β1组,PAE-L组,PAE-M组,PAE-H组,miR-21抑制剂组,检测各组细胞中miR-21、Smad7的mRNA相对表达水平及Smad7、COLIA1、α-SMA蛋白水平,并验证miR-21与Smad7的靶向关系。结果与对照组相比,BLM组大鼠的肺系数、羟脯氨酸、肺纤维化程度,miR-21mRNA表达水平,TGF-β1、COLIA1、α-SMA蛋白表达水平显著升高均显著升高(P0.01),Smad7的mRNA及蛋白表达水平显著降低(P0.01),与BLM组相比,PC组和PAE组大鼠的肺系数、羟脯氨酸、肺纤维化程度均显著降低(P0.01);与BLM组相比,PC组和PAE组大鼠肺组织中miR-21 mRNA水平,TGF-β1、COLIA1、α-SMA蛋白水平显著降低,Smad7的mRNA及蛋白水平显著升高(P0.01);与对照组相比,TGF-β1组成纤维细胞中miR-21的mRNA及COLIA1、α-SMA蛋白水平显著升高(P0.01),Smad7的m RNA及蛋白水平显著降低(P0.01);与TGF-β1组相比,PAE-L组、PAE-M组、PAE-H组、miR-21 inhibitor组成纤维细胞中miR-21的mRNA水平及COLIA1、α-SMA蛋白水平显著降低(P0.01),Smad7的mRNA及蛋白表达水平显著升高(P0.01);靶基因数据库预测及双荧光素酶报告实验表明,miR-21靶向抑制Smad7。结论 PAE可能通过抑制miR-21表达靶向促进Smad7表达,并抑制TGF-β1表达来减轻BLM诱导的肺纤维化。