应用PCR-RFLP技术进行ABO基因分型研究

目的建立PCR-RFLP技术鉴定ABO血型基因型的方法。方法应用PCR技术扩增ABO基因第六外显子上分别包含258位核苷酸和700位核苷酸的两个DNA片段，分别用KpnI和AluI酶解PCR扩增产物，电泳分离鉴定ABO血型基因型，同时对上述两种PCR扩增的DNA片段进行序列测定。结果用PCR-RFLP技术鉴定的ABO基因分型结果与PCR扩增产物的序列测定结果完全符合，可鉴定出AA、AB、AO、BB、BO、OO等6种ABO血型基因型。结论PCR-RFLP技术操作简便，重复性和稳定性好，可作为鉴定ABO血型基因型的可行方法。     

复合PCR技术在ABO血型基因分型中的应用

目的 探讨复合PCR技术在ABO血型基因分型方法中的应用.方法 通过实验研究摸索复合PCR的条件和规律,采用单管同时扩增出ABO基因的第6、7外显子后,使用限制性内切酶对复合PCR产物进行酶切消化.结果 通过最佳实验反应条件的获得,可建立ABO血型基因分型方法.结论 复合PCR技术在建立ABO血型基因分型方法的应用中,具有其特殊性.     

血小板特异性抗原(HPA)的PCR-SSP基因分型研究

血小板是最常用的血液成分之一，在临床上具有重要意义。血小板特异性抗原（Ｈｕｍａｎｐｌａｔｌｅｔｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｏａｎｔｉｇｅｎｓ，ＨＰＡ）是人类血小板所独有的抗原系统。目前ＨＰＡ的检测，包括其相应抗体的检测，主要还是血清学方法。但血清学试验有很...     

脐血HLA—I类抗原PCR—SSP分型的研究

目的 探讨PCR－SSP（聚合酶链反应－序列特异性引物）分型方法在脐血HLA－I类抗原分型中的应用价值。方法 53例脐血用免疫磁珠分离T淋巴细胞，单克隆抗体配型板作血清学分型，其中38例脐血用DNA快速抽提技术提取DNA后进行PCR－SSP基因分型，对两种方法分型结果进行对比研究。结果 38例脐血中，HLA－A位点PCR－SSP方法与血清学分型方法结果符合率100％，HLA－B位点血清学方法分型误差率为13．2％，其中1个抗原错误（占1．3％），9个抗原漏检（占11．8％）。脐血采集后24小时内作血清学分型较理想，超过24小时则半数以上不能进行血清学分型。抽提脐血DNA一次成功率100％，不受时间限制。结论 在脐血HLA－I类抗原分型中，PCR－SSP方法准确、省血、标本限制少，明显优于血清学方法，适用于脐血库。     

类孟买血型OHmB的血型血清学及家系调查

目的：发现类孟买血型OHm^B先证者家系中其他表现型个体,为紧急输血时寻找相合供者．方法：对类孟买血型OHm^B先证者家系成员进行ABO血型正反定型、Lewis血型鉴定、吸收放散试验检测红细胞表面的ABH抗原及血清中抗-A、抗-B及抗-H,中和抑制试验检测唾液中血型物质．结果：类孟买血型OHm^B先证者及其2位同胞兄弟均被鉴定为类孟买血型OHm^B,其中2例检出抗-H抗体,1例未检出抗-H抗体,先证者及其兄弟的子女中均未发现类孟买血型OHm^B表现型个体．结论：类孟买血型符合隐性遗传规律,对于罕见的类孟买型个体的家系,尤其是同胞兄妹进行血型血清学调查,有发现新的相同表现型个体的可能,需输血时可互为供者．     

HLA—DR两种分型方法的比较

目的 探讨肾移植供受体HLA-DR血清学分型与PCR-SSP基因分型方法的优缺点。方法 对已作HLA-DR血清学分型的供受体标本,进行PCR-SSP基因分型法作HLA-DR抗原分型;并对4例血清学分型为HLA-DR一个位点,而PCR-SSP为两个位点的受者,重新抽血作HLA-DR血清学业分型。结果 血清学法耗时80min,PCR-SSP法耗时145min;血清学方法误差率（不包括重新血清学分型的例数）为11.3%(受者14.7%,供者8.0%).重新作血清学分型的4例中,有1例结果为两个们点,与PCR-SSP结果一致,其余与原结果相同.结论 改进的血清学方法暂时还适合我国尸体供肾快速配型的需要.PCR-SSP法分型具有准确、简便、快速的优点,随着其方法学的不断发展将逐步取代血清学方法在HLA-DR分型中的应用。     

罕见类孟买型OHm^B的鉴定

目的鉴定类孟买型OHm^B。方法检测患者ABO、H、Lewis血型。红细胞吸收放散试验，测定唾液中血型物质，PCR—SSP方法进行ABO基因分型。结果该患者为罕见的类盂买型OHm^B.血清中有抗-HI，基因定型为BO型。结论鉴定出罕见的类孟买型OHm^B，血清中有抗-HI。     

ABO疑难血型基因分型研究

目的:研究ABO血型基因分型的意义。方法:采用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)基因定型方法对ABO疑难血型进行检测。结果:本研究建立了稳定的PCR-SSP基因分型方法,对10例疑难标本准确进行了基因分型。结论:ABO型基因分型技术可以应用于ABO血型疑难样本检测。     

3例疑难ABO血型鉴定及分析

目的:鉴定并分析3例疑难ABO血型红细胞抗原及血清抗体的特异性。方法:运用PCR-SSP方法对3例患者ABO血型抗原进行基因分型;运用血型血清学技术对造成ABO血型正反定型不符的原因进行分析。结果:3例患者ABO血型基因分型分别为A/O、O/O、O/O。结合血型血清学技术为患者提供了安全的血液制品。结论:ABO血型基因分型技术弥补了血型血清学方法的一些不足,运用血型基因分型技术可以解决血清学方法难以鉴定的血型抗原。     

批量检测ABO血型错检原因分析

目的:分析批量检测ABO血型错检的原因,有利于医务人员及相关工作人员掌握情况,为ABO血型鉴定对策提供科学依据。方法:运用试管离心法对无偿献血者、参加健康体检的群众进行ABO血型鉴定,对可疑血液样本做盐水试管法的正反定型试验。结果:共检出错误血型75例,误判血型33例,试管标识错误15例,笔误16例等。结论:影响血型准确性的因素主要是人为因素。当发现血型鉴定出现可疑时,首先应重复做试验一次,严格执行操作规程,细心观察结果,按步骤排除错检的可能性。     

PCR-SSP对潜在输血需要住院患者ABO基因分型的检测效果与意义

【目的】 调查潜在输血需要住院患者的ABO血型基因,分析ABO表型相同输血中ABO基因型的错配输血几率。【方法】 对502例潜在输血需要的住院患者,采用血清学方法和聚合酶链反应-序列特异性扩增技术(PCR-SSP)检测ABO血型的表型及基因型。比较两种方法学对ABO血型表型的一致率;统计各ABO等位基因及各ABO基因型的频率;并分析潜在输血需要的住院患者在接受ABO血型表型相同的输血时,ABO基因错配输血几率。 【结果】 血清学与PCR-SSP对502例潜在输血需要的住院患者的ABO表型识别的一致率为100%。PCR-SSP技术检测出患者中常见ABO基因5个(O1、O2、A1、B1及A2)以及ABO基因型16个(O1O2、O1O1、B1O1、A1O1、A1O2、B1O2、O2O2、A1B1、A1A1、B1B1、A2O1、A2O2、A2B1和A1A2),而血清学仅能识别ABO表型。潜在输血需要住院的患者在接受ABO血型表型相同的随机输血中,与供者之间ABO基因型的错配率分别为:A型65.98%,B型57.39%,O型56.95%,AB型22.55%。 【结论】 PCR-SSP能识别ABO基因型,不仅可以作为血清学的有力补充,而且可能揭示输血治疗中不明原因的输血不良反应的临床原因,具有重要临床意义。     

血液病致ABO抗原减弱的血型基因定型研究

目的：探讨血清学定型出现ABO血型抗原减弱的血液病患者的基因分型,为临床输血提供血型依据。方法2012年7月至2013年6月对320例血液病患者,采用血型血清学方法进行ABO血型鉴定,并对ABO血型抗原减弱的标本采用聚合酶链反应-序列特异性引物法（PCR-SSP）进行基因分型。结果53例试管法正反定型相符,可确定ABO血型;210例反定型抗体减弱或异常;57例抗原减弱。57例抗原减弱患者中,急性髓细胞白血病（AML）35例,骨髓增生异常综合征（MDS）12例,再生障碍性贫血（AA）3例,慢性粒细胞白血病（CML）和急性淋巴细胞白血病（ALL）各2例,慢性淋巴细胞白血病（CLL）、淋巴瘤、特发性血小板减少性紫癜（ITP）各1例。经基因分型,57例患者中A抗原减弱23例,确定A型血,B抗原减弱26例,确定B型血,A、B抗原均减弱8例,确定AB型血。结论 ABO血型抗原减弱最多见于AML和MDS患者,进行血型基因检测可明确ABO血型。ABO抗原减弱时经基因分型确定血型后,输血时可同型输血。     

孕妇产前IgG抗A(B)检测预测新生儿溶血病

目的探讨产妇IgG抗A（B）效价与ABO新生儿溶血病的关系,了解产妇IgG抗A（B）效价〉64来预测新生儿ABO溶血病的情况。方法96例产妇为O型血型、丈夫为非O型,孕妇分娩时测定IgG抗A（B）效价,分娩后采集脐血进行ABO新生儿溶血病的检测。结果新生儿ABO溶血的发生率与母亲IgG抗A（B）效价呈正相关,效价越高,新生儿ABO溶血发生率越高（P〈0．05）。结论产妇IgG抗A（B）效价的检测是一个有用的血清学检测指标,可以用来预测新生儿ABO溶血病发生率。     

羊水细胞ABO血型PCR-SSCP法基因定型研究

目的分析以羊水细胞进行胎儿ABO血型基因分型及其可行性分析。方法妊娠16周孕妇抽取羊水,从羊水细胞中提取DNA,采用PCR-SSCP技术,通过PCR反应,特异性扩增ABO基因片段,用凝胶电泳检测PCR产物,SSCP硝酸银染色,PCR产物直接测序等分子生物学方法,直接鉴定ABO血型基因型。结果15例高抗体效价的O型孕妇中丈夫A型的9例,B型5例,AB型1例,胎儿羊水细胞基因定型血型与末梢血血型吻合。结论通过羊水细胞,采用PCR-SSCP技术,进行胎儿ABO血型基因定型的方法是可行的。     

重庆市20万献血者ABO、Rh血型调查分析

目的 了解重庆市无偿献血人群ABO血型及Rh血型分布情况,为制定采供血计划提供科学依据.方法 调查统计200 150名无偿献血者(排除重复献血影响,即重复献血者只计算1次)ABO、Rh血型,对其血型分布进行汇总分析.结果 ABO血型分布情况:A型为31.95%,B型为23.78%,O型为35.89%,AB型为8.38%.Rh(D)阴性血型占0.36%,其中O＞A＞B＞AB;表型分布情况:ccdee为46.99%,Ccdee为38.46%,Ccdee为6.71%,ccdEe为5.03%,CcdEe为2.10%,ccdEE为0.42%,CCdEe为0.28%.结论 重庆地区献血人群ABO血型分布特征为O＞A＞B＞AB,Rh(D)阴性血型占人群中的比率符合我国汉族人群Rh(D)阴性占0.2%～0.5%的特点.Rh(D)阴性中,各表型分布极不平衡,以ccdee多见.     

骨恶性肿瘤与ABO血型的关联性分析

目的:调查骨恶性肿瘤的血型分布特点并进行相关性分析。方法:对45例原发性骨恶性肿瘤患者(骨恶性肿瘤组)及26 306例正常健康人群(对照组)ABO血型分布进行分析,采用χ2检验和相对危险度R来估计相对危险性。结果:骨恶性肿瘤组与对照组ABO血型分布之间有统计学差异(χ2=21.463,P=0.000),骨恶性肿瘤组血型分布从高到低分别为A型(46.67%)、B型(44.44%)、AB型(8.89%)、O型(0.00%);对照组血型分布从高到低分别为O型(30.51%)、B型(30.05%)、A型(29.36%)、AB型(10.07%)。O型血的人不容易患骨恶性肿瘤(R=0.997,CI=0.996～0.998)。结论:骨恶性肿瘤的发生与ABO血型分布有关,O型血起保护因素。     

ABO血型基因分型诊断方法的建立

目的 在北京地区建立一套稳定的ABO血型系统基因分型的诊断方法,为临床疑难血型定型工作提供技术保证和输血安全保障.方法 通过Multiplex-PCR-RFLP技术和PCR-SSP技术建立起ABO血型基因分型方法.结果 所建立的分型方法具有良好的重复性和稳定性,在各种分型检测中均取得了理想的试验结果.结论 建立一套较为完善和实用的基因分型方法,为进一步研究中国人ABO亚型的分子基础提供参考依据.